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地鼠肾细胞狂犬病疫苗原液经100 kD 膜浓缩 30 倍,分别选用(1)DEAE Sepharose CL-6B离子交换层析法;(2)Sephacry1 S-200 HR 分子筛选层析法;(3)二次蔗糖等密度区带离心法对其进行纯化。用此三种方法各试制3 批精制疫苗,结果表明,经DEAE Sepharose CL-6B离子交换层析纯化后疫苗总蛋白含量减少99% 以上,抗原比活性提高159 倍,抗原回收率达50% ,纯化疫苗以NIH 法效力测定平均为5.4 IU/2m l;经Sephacry1 S-200HR 分子筛层析纯化后疫苗总蛋白含量减少 98% 以上,抗原比活性提高41 倍,抗原回收率达63% ,纯化疫苗效力平均为6.25 IU/2m l;经一次蔗糖等密度区带离心法纯化后疫苗总蛋白含量减少98% 以上,抗原比活性提高321 倍,抗原回收率达43% ,纯化疫苗效力平均为6.18 IU/2m l,三种纯化疫苗均符合W HO 规程要求。 相似文献
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以Epstein-Barr病毒(EBV)DNA聚合酶为抗原,建立了简便、快速、敏感和特异的鼻咽癌诊断方法。构建原表达载体pRSET-DNA聚合酶及其亚克隆PRSET-A1和BL21(DE3)中表达的产物,经Western-blot检测其抗原性并用于检测鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)病人血清中的抗体。在DPC病人血清中存在抗EB病毒DNA聚合酶的IgG抗体,并证明 相似文献
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日本血吸虫26kD抗原基因在BCG中的表达 总被引:5,自引:0,他引:5
研究了外源基因日本血吸虫26kD抗原(Sj26GST)在卡介苗(bacilusCalmete-Guerin,BCG)、耻垢分枝杆菌(M.smegmatis)和大肠杆菌(E.coli)中的表达.运用重组DNA和聚合酶链反应(PCR)等分子生物学技术,以表达Sj26GST的E.colipGEX衍生质粒为模板,经PCR得到编码Sj26GST的全长cDNA片段.将其按正确的阅读框顺序,克隆到人结核杆菌热休克蛋白(heatshockprotein,HSP)70的启动子下游,再将HSP70启动子和Sj26GST基因一起亚克隆到E.coli-分枝杆菌穿梭质粒pBCG-2000中,得到E.coli-分枝杆菌穿梭表达质粒pBCG-Sj26.pBCG-Sj26电转化入BCG和M.smegmatismc2155中表达Sj26GST抗原,所表达的天然重组Sj26GST(rSj26GST)为可溶性蛋白,在SDS-PAGE上分子量为26kD处可见明显的表达蛋白带.其表达量分别占BCG和M.smegmatis菌体总蛋白的15%和10%.可见,Sj26GST基因能在BCG中高效表达. 相似文献
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对379例良、恶性肝组织进行的免疫组织化学研究显示,33%的慢性迁延性肝炎(6/18)、76%的慢性活动性肝炎(26/34)、92%的肝硬变(57/62)和97%的肝细胞性肝癌(HCC)(58/60)中有HBxAg表达,阳性率高于HBsAg或HBcAg。癌周肝中的HBxAg阳性率显著高于非癌周肝。与其它2种HBV抗原不同,HBxAg表达在细胞类型上有较明显的选择性,在肝小多角细胞(SPLC)、小细胞性不典型增生(SCD)及HCC中较强。与IGFⅡ、c-erbB-2、c-myc和EGF-R表达进行的对照研究表明HBxAg与IGFⅡ和c-erbB-2这2种HCC发生相关基因的表达关系密切。PCNA染色结果显示HBxAg阳性组织的细胞增殖活性显著高于HBxAg阴性组织。我们的结果还表明HBxAg表达与肝细胞不典型增生的发生和进展有关、提出HBVX基因可能通过其表达产物(HBxAg)首先激活IGFⅡ、c-erbB-2基因,继而引起显著的SPLC增生和SCD而参与HCC发生的. 相似文献
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采用HBsAg高表达细胞株(CHO-C28)试制的乙肝基因疫苗,对BALB/c小鼠进行免疫,四周后进行了血清效力评价。并同时与血源乙肝疫苗进行了比较。结果表明,乙肝基因疫苗能达到与乙肝血源疫苗相同的免疫效果。 相似文献
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丙型肝炎病毒基因组C区和NS3区基因cDNA的融合及其在大肠杆菌中的表达与初步应用 总被引:3,自引:0,他引:3
通过逆转录(RT)-聚合酶链式反应(PCR),从中国人丙型肝炎病毒(HCV)携带者的血清中扩增并克隆到2段cDNA片段,即HCV基因组C区抗原基因C831cDNA片断(约530bp)和NS3区抗原基因C33ccDNA片段(约860bp)。C33ccDNA片段同C831cDNA片段经连接 肽Ser-Pro-Gly-Ser连接成为基因嵌合体C33c-C831(约1400bp)。C33c-C831基因嵌合体同温控型原核表达载体pBV220重组,构建成表达质粒pBV/C33c-C831,并在大肠杆菌细胞中获得了重组嵌合抗原C33c-CL的表达。通过酶切分析和Western免疫印迹法,对约占菌体可溶性蛋白9%的表达产物做了鉴定。采用TritonX-100和盐析处理,获得粗提表达产物。粗提的表达产物经尿素裂解和离子交换层析纯化,得到可用于检测抗HCV核壳蛋白和抗NS3区抗体的重组嵌合抗原C33c-CL。对C33c-CL做抗原性分析发现,它同时具有完整的C33c抗原和C22抗原的免疫反应活性,完全能替代单纯的C33c和C22抗原。该嵌合抗原在血清学诊断中有重要的应用价值,可望成为新一代HCVEIA诊断试剂的优选抗原。 相似文献
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表达霍乱CT-B和LPS-O抗原的鼠伤寒菌苗株的构建 总被引:5,自引:0,他引:5
将编码霍乱CT-B和LPS-O抗原的基因与载体质粒pYA248重组后,转入△cya△crp△asd减毒鼠伤寒疫苗株x4072构建成无药物抗性,带双价抗原的工程菌株x4072(pMG306)。该菌株能分泌表达特异的霍乱CT-B抗原,并且在菌体表面同时表达霍乱和鼠伤寒的O抗原。小鼠腹腔免疫和攻击试验表明该菌株对霍乱毒株的攻击具有良好的保护作用。本研究为新型献计霍乱/鼠伤寒双价口服活疫苗的构建打下了基础 相似文献
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层粘连蛋白受体(LN-R)在癌细胞转移中具有重要作用。LN-R的单克隆抗体对于癌转移的基础研究及诊治应用都具有重要意义。本文旨在确定来自人肺巨细胞癌(PG)细胞LN-R的一种单克隆抗体(McB1)的抗原性质。经纯化的McB1能与完整细胞表面、细胞质膜提取物及纯化的LN-R制品特异性结合。实验证明经亲和层析纯化的LN-R制品中含有膜糖脂,用SDS-PAGE及转移电泳将其所复合的膜脂去除后,仍具有与McB1结合的活性,表明此McB1所针对的抗原与其复合的膜糖脂无关。将含LN-R的细胞膜提取物经PronaseE消化后,用SephadexG50分离出的糖肽具有与McB1结合的活性,而不含糖的肽则无此活性。含LN-R的细胞膜提取物经高碘酸氧化不同时间,其与McB1结合的活性随氧化时间的延长而逐渐减弱乃至完全丧失;而经还原性烷基化反应的LN-R仍保持了与McB1结合的活性。用衣霉素(TM)处理细胞,细胞则丧失了与McB1结合的能力。以上几方面的结果一致证明此McB1的抗原表位确为LN-R的糖链部分。 相似文献
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用细菌/杆状病毒系统在昆虫细胞中表达GFP与HCV抗原融合蛋白 总被引:2,自引:0,他引:2
用细菌/杆状病毒(Bac-to-Bac)系统在昆虫细胞中高效表达了绿色荧光蛋白(GFP)与HCV抗原的双功能融合蛋白,经ELISA测定和荧光显微镜观查证实,表达产物既能发射易于检测的绿色荧光,又具有HCV的抗原活性,实现了用绿色荧光蛋白等分子标记抗原,为免疫诊断新方法的建立打下了理论基础. 相似文献
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应用免疫组织化学和Northern杂交方法,对慢性缺氧大鼠肺组织(主要是肺血管壁)原癌基因c-myc和抗凋亡基因bcl-2表达进行了研究。免疫组织化学观察提示,正常对照组大鼠肺血壁C-myc和Bcl-2蛋白仅为弱阳性或不表达,慢性缺氧1、2周组大鼠肺血管壁这两种抗原表达比对照组显著增强,呈强阳性,Northern杂交结果表明:慢性缺氧1、2周组大鼠肺组织内c-myc和bcl-2的mRNA表达比对照组显著增加,以上结果提示,c-myc及bcl-2两种基因调节的细胞增殖与凋亡可能参与了慢性缺氧性肺动脉高压的发病进程。 相似文献
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通过基因工程操作,使乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)基因与绿色荧光蛋白基因(GFP)融合,用新型Bac-to-Bac杆状病毒表达系统在昆虫细胞中高效表达了HBeAg-GFP双功能融合蛋白。经ELISA法和荧光显微镜观察证实,表达产物既能发射易于检测的绿色荧光,又具有HBV的e抗原活性,为免疫诊断新方法的建立进行了有益的探索。 相似文献
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rHB-DTaP联合疫苗中抗-HBs抗体应答 总被引:3,自引:2,他引:1
在乙肝、白喉、破伤风、无细胞百日咳(rHB-DTaP)四联疫苗的研制过程中,我们采用基因工程乙肝疫苗(CHO),精制白喉、破伤风类毒素和无细胞百日咳菌苗原液,按不同的稀释液,不同的加入顺序以及不同的含量等制备四联疫苗,并以单价基因工程乙肝疫苗(rHB)做对照,进行小鼠试验,接种4周后采血检测抗-HBs水平。结果表明,不同配方的四联疫苗中rHB与DTaP均无干扰,相容性好;抗-HBs免疫应答水平与单价苗(rHB)无显著性差异(P>0.05),使用生理盐水制备的rHB-DTaP其抗-HBs免疫应答水平较醋酸盐缓冲液者高(P<0.05),rHB-DTaP中的抗-HBs免疫应答水平与rHB原液的加入顺序无关(P>0.05);rHB含量以20μg/ml为宜。 相似文献
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乙肝前S2(HBVPreS2)肽段由55个氨基酸组成,其N端肽段含Th和B细胞抗原决定簇。我们将化学合成的PreS2epitope(120-145)基因与HBcAg基因不同位点进行融合,融合基因在大肠杆菌中获得表达,并对融合蛋白进行了纯化。经ELISA和Western-blot实验表明,融合蛋白具有PreS2和HBcAg两者的抗原性。此外,研究还表明,强启动子能使表达水平有一定提高。 相似文献
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为探讨HCV/HBV 复合疫苗的可行性,将合成的丙型肝炎病毒(HCV)复合多表位抗原基因PCX与HBsAg 基因连接成PCXS基因,与β-半乳糖苷酶(GZ)基因融合后在大肠杆菌及减毒鼠伤寒沙门氏菌中获得表达.目的蛋白GZ-PCXS可被抗-HBs 及抗-HCV 抗体所特异识别.GZ-PCXS抗原皮下注射免疫ICR小鼠后,诱发了较高水平的抗-GZ-PCXSIgG反应.构建的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌SL3261(pWR/PCXS)口服免疫小鼠后,诱发了高水平的CD8+ T细胞增殖反应及抗GZ-PCXSIgG反应.所有免疫小鼠均未见明显的毒副作用.该研究揭示,HCV/HBV 复合抗原可诱发特异性体液免疫及细胞免疫应答,而活菌苗口服可能是理想的免疫途径,为HCV/HBV 双价疫苗研究提供了一定的理论及实验依据. 相似文献
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用单克隆抗体作芜菁花叶病毒不同分离物外壳蛋白抗原结构的比较研究 总被引:3,自引:0,他引:3
用芜菁花叶病毒辽宁分离物(TuMV-LN),山东分离物(TuMV-SD)和榨菜分离物(TuMV-ZC)作抗原,分别免疫BALB/c小鼠,经脾细胞与SP2/O-Ag14骨髓细胞融合,共获得7个单克隆抗体分泌细胞株,为研究3个分离物的抗原差异,用胰蛋白酶消化TuMV的外壳蛋白(CP)。分别形成4、2和1条降解带,经SDS-15%PAGE后,转移至硝酸纤维薄膜上,用3个分离物的抗血清和7种单隆抗体分别做 相似文献
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鸡马立克氏病病毒B抗原片段在大肠杆菌中表达 总被引:1,自引:0,他引:1
鸡马立克氏病病毒BamHI基因文库I3质粒中含有编码B抗原膜外Domain的DNA序列。经ScaI和SphI双酶酶解I3质粒,分离获得764bpDNA片段,并克隆进M13mp19中。DNA序列测定分析表明克隆片段为MDV-B抗原基因的494-1258bp部分序列。进一步分离NcoI-HindIII部分基因片(530bp),克隆于PLPromoter控制下的含有修饰型cIts857基因的表达载体中, 相似文献
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本研究报道从睡眠剥夺(SD)48—72h的灵长类原宗(primitivestock)Tupaiabelangerichinensis(TBC)提取内源性“睡眠因子”(sleepfactor)S2C和S4B。收集的尿液经超滤,清液冻干经SephadexG15分离得到FractionⅠ-Ⅴ。活性测定发现Fraction-Ⅲ(S2C)呈现显著δ-增强促眠效应。经SephadexG25和SephadexLH20进一步净化的S4B也呈现显著δ-增强促眠效应。 相似文献