细胞外微RNA:一种新型的肺癌分子生物标志物

尽管癌症的早期诊断和治疗在不断发展和进步,但寻找一种敏感、准确和微创的分子生物标志物,用于肿瘤的诊断仍是一项艰巨任务。微RNA(miRNA)是一类长约21～24个核甘酸的内源性非编码小分子RNA。细胞外miRNA作为一种新型的分子生物标志物,在癌症诊断方面具有微创、高灵敏度和高特异性等许多潜在特征。近年来,细胞外miRNA研究成果颇丰。文章就细胞外miRNA的来源、功能、检测以及作为分子标志物在肺癌诊断中的作用和目前存在的一些问题进行了综述。     

CTAB法提取中草药材滇紫草细胞的总RNA

介绍一种适合富含次生产物的中草药材滇紫草细胞总RNA的提取方法——CTAB法。采用CTAB作为去污剂,分别用氨仿和水饱和酚反复抽提以及LiCl沉淀以去除蛋白质、碳水化合物和次生代谢物等杂质,最后用纯乙醇沉淀获得RNA。该方法不但能获得完整性好和纯度高的总RNA,而且操作简单、快速、成本低廉,对其它富含次生物质的植物特别是中草药材组织总RNA的提取具有借鉴意义。     

一种同时提取细胞总RNA和总蛋白的方法

应用TRIzol法分步提取总RNA和总蛋白,提取的总RNA亮度强、完整,提取的总蛋白与经常规RIPA裂解液提取的全蛋白的质量相当。验证了从同一批次处理的细胞中同时提取总RNA和总蛋白进行检测分析是可行的,而且确保了实验条件的一致性,缩短了实验周期。     

从荞麦中提取总RNA的有效方法

介绍了一种简单快速的从荞麦中提取总RNA的方法。经SDS、KAc和异丙醇等常规试剂提取高纯度的荞麦RNA,对产物进行琼脂糖凝胶电泳分析表明,其28S RNA与18S RNA的比值约为2：1,紫外吸收值A260/A290为1.91-2.06,产率为69.2-87.5μg RNA/g植物材料。用该法提取的总RNA可满足RT-PCR和cDNA文库构建等的需要,是一种高效的荞麦RNA提取法。     

从少量转染细胞中同时快速提取总RNA和基因组DNA

采用4mol / L LiCl将DNA和RNA分相,建立了同时从少量转染细胞中快速提取细胞总RNA和大分子基因组DNA的方法.与以前的方法相比,本法快速、简便、经济,尤其适合应用在哺乳动物细胞基因表达与调控的研究中．     

从矿化的骨组织中提取骨细胞的总RNA

描述了两个从以含大量羟基磷灰石（钙）和细胞密度、数量甚低为特点的矿化的成年骨组织（成年大鼠颅骨）提取总RNA的改进方法.紫外分光光度法（A₂₆₀、A₂₈₀和A₂₃₀）和1%甲醛变性琼脂糖凝胶电泳予以鉴定.进而以其逆转录的cDNA为模板扩增出β-actin和BMP-2基因,均表明所得总RNA完整和模板活性俱佳.每克骨组织中总RNA产量为560 μg.     

从矿化的骨组织中提取骨细胞的总RNA

描述了两个从以含大量羟基磷灰石（钙）和细胞密度、数量甚低为特点的矿化的成年骨组织（成年大鼠颅骨）提取总RNA的改进方法.紫外分光光度法（A260、A280和A230）和1%甲醛变性琼脂糖凝胶电泳予以鉴定.进而以其逆转录的cDNA为模板扩增出β-actin和BMP-2基因,均表明所得总RNA完整和模板活性俱佳.总RNA产量平均为560μg/g骨组织.     

一种适合从柑橘果皮提取总RNA的方法

柑橘果皮由于富含果胶、酚类物质等干扰RNA分离的物质,较难提取到纯度高的RNA。本试验建立了一种适于从柑橘果皮提取RNA的方法,从脐橙和蕉柑两种柑橘的果皮提取总RNA,经凝胶电泳、紫外分光光度法检测所提RNA的品质。研究结果表明,该法所提RNA条带清晰、无降解。OD260/OD280接近2.0,具有较高的纯度。RT-PCR试验结果进一步表明,该法提取的RNA纯度高,完全能够用于后续的分子生物学研究。     

一种用矽石快速提取总RNA的方法

根据矽石能与核酸结合的特性,建立了用矽石提取细胞和组织总RNA的方法,方法简便、快速,所得RNA适用于各种研究。     

马铃薯块茎中总RNA的快速提取

马铃薯块茎中由于含有大量的多糖和酚类物质,因此难以从中提取RNA。本实验采用CTAB法从马铃薯块茎中提取了总RNA,并进行了马铃薯病毒的检验。结果表明:得到的RNA完整性好,A260/A280在1.7～2.0范围内,纯度也比较高。用RT-PCR方法进行马铃薯Y病毒的检验,得到了一条与预计扩增长度相同的一条带,并检验出枣庄地区马铃薯Y病毒的感染率为75%。     

新型耐磨高分子人工关节材料生物相容性研究

新型耐磨高分子人工关节材料是用８０ＫｅＶ不同剂量Ｃ３Ｈ８＾＋和Ｎ２＾＋对超高分子聚乙烯样品表面进行离子注入后的材料,通过对该材料进行弹性反冲探测,显示其磨损性能增强。通过各项相容性试验,其均符合各项试验标准,并与对照样品在试验过程中出现的情况一致。因此,经离子注入的超高分子聚乙烯作为新型耐磨高分子人工关节材料可应用于临床。     

家蝇总RNA的提了方法及其改进

本文采取异硫氰酸胍：氯仿一步法,成功地从富含RNase的家蝇腹部提取出完整的总RNA,并针对家蝇腹部富含蛋白酶的特点,对一步法的某些细节做了适当的改进,检测结果表明,用这种方法提取的RNA质量高,可以用于地进一步的分子生物学实验。     

兔侧脑室注射胰高血糖素对血清总胆固醇和甘油三酯浓度的影响

我们最近曾报道,向兔侧脑室内注射胰高血糖素有明显降低血浆自由脂肪酸的作用。本工作又进一步观察了它对空腹血清总胆固醇和甘油三酯浓度的影响。结果发现:(1)对血清总胆固醇浓度无明显作用;(2)能引起血清甘油三酯浓度的下降,且与剂量有依赖关系,在注射后的 75min降低最显著,以后则逐渐恢复;(3)皮下注射阿托品(0.2mg/kg)或静脉注射心得安(5mg/kg)均不能消除侧脑室注射胰高血糖素降低血清甘油三酯的作用;(4)静脉注射酚妥拉明(5mg/kg)能阻断侧脑室注射胰高血糖素的降低血清甘油三酯的作用。这些结果表明脑内的胰高血糖素对血清甘油三酯的影响可能是通过肾上腺素α-受体起作用的。     

斯氏按蚊总RNA的提取与标本保存方法的研究

本研究利用Tripure试剂盒,成功地提取了斯氏按蚊总RNA,并对不同方法保存的标本所提RNA的质量进行了比较,结果显示新鲜标本所提RNA质量最高,将标本在Tripure提取液中匀浆后置于4℃保存的方法,较其它两种方法保存效果更好,此方法保存的标本5天内进行RNA提取,能够保证质量。     

RNA的二级结构在动物分子系统学研究中的应用

作为一类重要的信息和功能分子,RNA在分子系统学研究中有着特殊的重要作用。RNA除了其一级结构以外,其二级结构亦可用于同源性比较。由于高级结构与功能的关系更为密切,比较的结果可以揭示一些在一级结构比较中难以发现的现象。     

鲸类分子系统学研究进展

综述了近年来分子生物学标记技术在鲸类系统学研究中的进展。分子生物学证据支持鲸目与有蹄类之间有较近的亲缘关系,并支持鲸类的单系起源,但鲸类不同类群(须鲸类、抹香鲸类及不包括抹香鲸类的齿鲸类)之间的系统发生关系仍存在争议。抹香鲸类到底与须鲸类还是与其它齿鲸类有更近的亲缘关系,不同的分子生物学家所得到的结果并不一致。此外,分子生物学技术还被用于解决须鲸亚目和齿鲸亚目内科间以及科内种间的系统发生关系,特别是齿鲸亚目的海豚科、鼠豚科和淡水豚类。通过分子标记技术来研究鲸类种下的遗传结构是鲸类分子系统学研究中的一个新热点,使用的标记主要是mtDNA控制区、核DNA微卫星和主要组织相容性复合体(major histo-compatibilitv complex,MHC)等。     

7SRNA在癌细胞中含量改变及其对染色质转录活性的调节

7s RNA与哺乳动物基因组中有300,000重复拷贝的Alu DNA顺序高度互补。Alu DNA的功能是与结构基因的转座和表达调控密切有关。因此7s RNA对基因表达可能有调节作用。本文提供实验:1.肝癌细胞核内7s RNA含量比正常核少,意味着减弱了对癌细胞基因表达的控制。2.7s RNA比其他的核小分子量RNA更紧密与染色质结合。3.7sRNA对离体染色质的转录活性有促进和抑制的两相作用,这些结果直接和间接表明7s RNA对基因表达起一定的调节作用。由于Alu DNA在基因组中分布是广泛性的,因此认为7s RNA的调控作用也应是一般控制性质的。     

酪氨酸对hCG诱导兔离体卵泡蛋白质及RNA合成的影响

为了深入探讨酪氨酸抗hCG致孕酮生成作用的机制,本文利用~3H-亮氨酸和~3H-尿嘧啶掺和入兔离体卵泡的方法,观察了酪氨酸对蛋白质及RNA合成的影响。结果显示,酪氨酸对hCG诱导的蛋白质、RNA合成具有明显的抑制作用,但同剂量的多巴胺或苯丙氨酸却无效。酪氨酸还抑制cAMP的生成,并可拮抗外源cAMP诱导蛋白质及RNA的合成。上述结果表明,酪氨酸可通过使cAMP生成减少和进入细胞内直接发挥作用两种方式抑制hCG诱导的兔卵泡蛋白质及RNA的合成。酪氨酸的这一作用可能与其抑制孕酮生成有密切的关系。     

ISOLATION OF HIGH-QUALITY RNA FROM GRAINS OF DIFFERENT MAIZE VARIETIES

The study of gene expression in maize varieties represents a powerful tool aiming to increase vitamin A precursors. However, the isolation of RNA from different maize varieties is challenging because these varieties show different levels of polysaccharides, and most methods available for RNA isolation are inappropriate for grain samples. The polysaccharides co-purify and co-precipitate with RNA during isolation, resulting in low-quality RNA, compromising the use of RNA in subsequent applications. Thus, a cetyltrimethylammonium bromide (CTAB)-based method was adapted in this study and compared with six methods for RNA isolation, including commercial reagents and RNA and DNA isolation kits, in order to identify the most appropriate for maize grains from different varieties. Most of the methods evaluated were considered inadequate due to limitations in terms of purity and/or quantity of the isolated RNA, which affected the efficiency of subsequent RT-qPCR analysis, resulting in nonamplification of β-carotene hydroxylase gene (HYD3) or high deviation among replicates. However, the CTAB modified method allowed the study to obtain intact RNA, with high quality and quantity, from 25 maize varieties. Furthermore, this RNA was successfully used to evaluate the expression of HYD3 gene by real-time qualitative polymerase chain reaction (RT-qPCR), and thus represents a simple, efficient, and low-cost strategy.     

小鼠4.5S RNA逆转座子对Luc基因表达的影响

利用ＲＴ－ＰＣＲ方法,从小鼠肝脏组织总ＲＮＡ中扩增出４．５ＳＲＮＡ的ｃＤＮＡ。该ｃＤＮＡ被克隆到ｐＧＥＭ３Ｚｆ（＋）质粒上,酶切鉴定并测序。然后将该序列插入以Ｌｕｃ基因作为报道基因的表达载体ｐＳＶｌｕｃ２０的ＰｖｕⅡ位点,构建了含４．２ＳＲＮＡ逆转座子的表达载体ｐＳＶｌｕｃ２０－４．５Ｓ。脂质转染法将表达载体导入小鼠骨髓瘤细胞ＮＳ－１、ＳＰ２／０和人乳腺癌细胞Ｂｃａ６１。结果表明,小鼠４．５ＳＲＮ