鸡胚原肠胚期原条细胞命运决定于其所处的局部微环境

在果蝇、斑马鱼、鸡等三胚层动物胚胎早期发育的原肠胚期,原条两侧的上胚层细胞进入原条经历上皮-间充质转化(EMT),迁移进入囊胚腔,形成松散的中胚层细胞,位于原条不同部位的细胞其迁移路线和分化命运不同,如前部原条细胞贡献于体节和心脏等,而后部原条细胞则迁移至胚外形成血岛。为了研究细胞的迁移途径及分化命运是否会随着细胞所处不同部位微环境的改变而改变,利用传统的移植技术,将宿主鸡胚原条前部的一部分细胞用GFP阳性的相同时期鸡胚原条组织替换,培养一段时间后,用荧光体视显微镜追踪GFP阳性细胞的迁移途径。结果发现,从供体原条后部移植到宿主原条前部的细胞遵循原条前部细胞迁移的路线,反之亦然;原位杂交结果显示移植后的GFP阳性细胞分化为所处部位的细胞类型。上述结果表明:鸡胚原肠胚期原条细胞迁移和分化的命运决定于细胞所处的微环境或者说局部基因表达的时空性。     

鸡X期胚盘细胞体外培养

为证实经遗传修饰的鸡X期胚盘细胞具有参与受体胚胎发育和形成嵌合体的能力,本研究将由鸡X期胚盘制成的细胞悬液与经脂质体包埋的抗鸡传染性支气管炎病毒基因重组质粒PGS1共孵育后,直接显微注入同期受体胚盘（140枚）;或对转染后供体细胞进行G418抗性筛选性后显微注入同期受体鸡胚盘（140枚）;或将供体细胞体外培养48h,再与脂质体-P^GSI复合物共孵育后显微注入同期受体鸡胚盘（190枚）,制备转基因嵌合体鸡,并应用PCR和RAPD方法,对鸡胚和雏鸡不同组织或血液中的DNA进行检测。结果表明：直接注射组孵化率（5.7%)显著（P＜0.01)高于G418筛选处理组（1.4%)和培养48h处理组（2.1%);G418筛选处理组不同胚龄鸡胚组织、器官中外源DNA的PCR检测阳性率均高于其它二个组。实验结果证明,体外培养48h并经遗传修饰的胚盘细胞仍然具有形成嵌合体的能力,利用早期胚盘细胞途径制备转基因鸡是可行的。     

鸡Ⅹ期胚盘细胞体外培养

为证实经遗传修饰的鸡X期胚盘细胞具有参与受体胚胎发育和形成嵌合体的能力 ,本研究将由鸡X期胚盘制成的细胞悬液与经脂质体包埋的抗鸡传染性支气管炎病毒基因重组质粒PGS1共孵育后 ,直接显微注入同期受体胚盘 (14 0枚 ) ;或对转染后供体细胞进行G418抗性筛选后显微注入同期受体鸡胚盘 (14 0枚 ) ;或将供体细胞体外培养 4 8h ,再与脂质体 PGS1复合物共孵育后显微注入同期受体鸡胚盘 (190枚 ) ,制备转基因嵌合体鸡 ,并应用PCR和RAPD方法 ,对鸡胚和雏鸡不同组织或血液中的DNA进行检测。结果表明 :直接注射组孵化率(5 7% )显著 (P <0 0 1)高于G418筛选处理组 (1 4 % )和培养 4 8h处理组 (2 1% ) ;G418筛选处理组不同胚龄鸡胚组织、器官中外源DNA的PCR检测阳性率均高于其它二个组。实验结果证明 ,体外培养 4 8h并经遗传修饰的胚盘细胞仍然具有形成嵌合体的能力 ,利用早期胚盘细胞途径制备转基因鸡是可行的。     

我国台湾省植物组织培养工作的概况(三)

本文是我国台湾省植物组织培养工作情况前几次报道的继续,主要介绍1980年台湾省植物组织和细胞培养讨论会的专题内容,现分述于后。一、形态发生赖光隆等在水稻幼胚起源的愈伤组织与器官再分化的研究中,以粳型台中65号与台南5号为材料,结果显示,未成熟的水稻种子幼胚接种于含有2,4-D的培养基内,较容易诱导盾片(胚盘)形成愈伤组织,若采用开     

胚胎的人为致畸实验

切割胚盘实验为了探讨鸟类的发育机理,有目的地进行人工切割胚胎实验。早在三、四十年代,很多学者将鸡或鸭胚用切割或移植组织块的方法,研究早期鸟胚发育的情况。如将胚盘前端纵切,     

大草蛉胚胎发育的研究（Ⅰ）——胚带、胚层、体腔的形成和部分器官的发育

详细研究了大草岭Chrysopa septem punctata Wesmael胚胎发育的卵裂、胚盘、胚带、胎膜、胚层的发生,以及由胚层分化形成体壁、体腔、循环系统、呼吸系统、生殖系统和肌肉、脂肪体、血细胞的过程。     

鸡胚的多原条

鸡是多精受精的动物,通常孵一个鸡蛋发育出一只雏鸡。在鸡胚发育过程中有时会出现二个或三个原条,曾经有人报导过,这样的鸡卵如能顺利地继续发育下去,可能会孵出2只或3只雏鸡来。但是发生3个以上原条的情况则不多见了。我们在制作鸡胚标本时,曾获得一个有9个原条的标本,它们均匀分布于卵黄的表面,打开卵壳之后,先将整个卵黄     

粘虫的胚胎发育

粘虫(Mythimna separata)胚胎发育经过卵裂及胚盘形成、胚带及原肠发生、胚带分节及附肢形成、体壁形成及背向闭合、胚胎反转和器官发生与形成6个时期。粘虫卵在25℃,胚胎发育至12h,胚带呈新月形或“C”字形。随着原肠发生,首先出现口陷与肛陷,与此同时,胚带逐渐伸长并开始分节。胚胎发育至32h,胚带头尾相接并呈波浪形弯曲,在胚胎反转前,胚胎发育至42h,前肠、后肠及马氏管已经形成。胚胎发育至54h时,胚动完成之 后,中肠才明显可见。同时将大量卵黄包围起来。神经系统的发生与气管形成始于原肠发生之后,至胚胎反转之前,神经节索才出现,随着胚动发生,神经节体积不断增大,腹神经索逐渐形成,纵走气管明显可见。     

从木薯嫩叶直接诱导初生体细胞胚胎发生和芽的形成

以木薯（ＭａｎｉｈｏｔｅｓｃｕｌｅｎｔａＣｒａｎｔｚ）品种“南植１８８”的嫩叶为外植体,用１０～８０ｍｇ／ＬＮＡＡ能直接诱导初生体细胞胚胎发生和芽的形成。与用４ｍｇ／Ｌ２,４Ｄ诱导木薯嫩叶产生初生体细胞胚及其植株再生相比,ＮＡＡ具有以下特点：它不仅能直接诱导初生体细胞胚发生,而且能直接诱导芽的形成;而２,４Ｄ只能诱导体细胞胚胎发生而不能诱导芽的形成。ＮＡＡ诱导初生体细胞胚较快,在培养９～１３ｄ后就能见到初生体细胞胚的形成,在培养１０～１４ｄ就能见到芽的形成;而２,４Ｄ所诱导的体细胞胚至少在培养１５ｄ后才能见到。ＮＡＡ诱导的初生体细胞胚的植株再生频率可高达４８％;而２,４Ｄ所诱导的体细胞胚的再生频率只有４．１％。实验结果还证实,在供试的另外１６个木薯品种中,有１２个品种能够直接从嫩叶诱导初生体细胞胚胎发生或芽的形成。     

温度对枳椇次生胚发生和植株再生的影响

在含有2,4-D的培养基上所诱导和增殖的枳棋体细胞胚只能形成无再生能力的畸形胚。通过次生胚发生途径可以在不加植物生长调节物质的培养基诱导出发育正常的体细胞胚,子叶期胚的次生胚诱导能力高于早期体胚。相对高的温度(30℃)有利于次生胚的诱导,相对低的温度(20℃)更有利于次生胚的发育、植株再生和移栽成活。     

鸡蛋开窗法导入供体胚盘细胞对家鸡胚胎发育的影响研究

通过4批孵化实验,研究鸡蛋开窗法注射供体胚盘细胞对受体鸡胚发育及孵化率的影响。GLM方差分析表明,开窗处理极显著降低整个孵化期（21d)的活胚比例（P＜0．01）,至21日龄出壳时,处理组的孵化率为.8%-6.0%。导入供体胚盘细胞对受体鸡胚的发育仅为阶段性影响,表现在显著性孵化第8日龄左右的活胚比例（P＜0.05)。而对后期发育的影响不显著（P＞0．05）。因经,鸡蛋开窗处理是降低受体胚胎成活率和孵化率的主要原因,如何降低开窗处理对受体胚胎的应激和不利影响则是今后研究的一个课题。     

从未授粉烟草子房诱导单倍体植株的细胞学和胚胎学研究

由未授粉的子房培养出的单培体植株来自两条途径:1.来自大孢子,直接进行多次分裂,经胚状体各阶段,发育形成;2.来自成熟卵细胞,经胚状体各阶段发育而成。此外,从上述途径产生的芽的基部和顶端形成愈伤组织,在同样培养基上分化形成胚状体,最后发育成植株。外源激素对未授粉子房高频率地诱导形成胚状体足必需的,而对诱导胚性愈伤组织形成胚状体以及进一步分化成植株并非必需。培养基中增加维生素 B_1,B_6,烟酸,叶酸和肌醇等的使用量时,未授粉离体子房和胚性愈伤组织诱导胚状体的频率显著提高。     

大蕉(Musa paradisiaca ABB Linn.)花序愈伤组织的诱导及其体细胞胚发生

大蕉未成熟雄花接种到胚性愈伤组织诱导培养基中,4～5个月后可诱导出胚性愈伤组织,并可在继代培养基上增殖.胚性愈伤组织转移到体细胞胚诱导培养基中可诱导出体细胞胚.体细胞胚在成熟培养基上培养2个月后转移到含有0.2mg·L-1 6-BA的分化培养基上可以萌发,进而形成再生植株.组织学切片证明所诱导的愈伤组织是胚性组织,其所产生的体胚具有典型的单子叶植物体细胞胚的组织结构.     

川硬皮肿腿蜂的胚胎发育

在 2 6℃恒温和 70 %相对湿度条件下 ,川硬皮肿腿蜂胚胎发育全历期为 60～ 70h。卵黄少 ,原足期 (protopod)孵化。根据其胚胎形态变化特征可分 4个发育阶段 :早期发育阶段 ,卵产后 1～ 1 2h,包括卵割期、胚盘期和胚带期 ;胚胎伸长及器官发育阶段 ,卵后 1 2～ 5 0h,包括胚带分节、原头原躯分化、胚带再伸长、消化道和口器形成 ;胚胎背合阶段 ,卵产后 5 0～ 60h和胚胎成熟阶段 ,卵产后 60～ 70h。     

原生殖细胞与转基因家禽

鸟类的原生殖细胞来自于上胚层胚盘透明区的中央盘处,分离出的PGCs可以被转至受体胚中,可以获得由供体胚PGCs和受体胚PGCs组成的生殖系嵌合体。在这一过程中,如果将外源基因转入供体PGCs,受体胚后代则成为转基因鸟类。利用禽类PGCs作为转基因的载体,来生产嵌合体胚胎和子代为目前研究禽类转基因的一种较为理想的方法。     

高粱长蝽卵的胚胎发育分级及其在测报上的应用

高粱长蝽卵的胚胎发育可分为胚盘期、胚带期、眼点期、反转期、胸节期、腹节期和胚熟期,并测定了在18℃和23℃下各期的历期。1990年用卵的胚胎发育历期推算第一代若虫孵化高峰,与实测值一致。     

白鹤芋体细胞胚胎发生及组织学研究

本研究以白鹤芋品种‘Mojo’的根茎为外植体,研究不同外源激素配比对体细胞胚胎发生的影响,筛选出最佳胚性愈伤及体胚的诱导配方。其后采用体式显微镜和石蜡切片技术对体胚发生途径中的典型时期进行形态学和组织学观察。结果表明,4 mg/L 2,4-D与0.5 mg/L KT作用时,白鹤芋胚性愈伤组织诱导效果最佳,诱导率达87.44%;体细胞胚胎诱导的最佳配方为1.0 mg/L6-BA+0.2 mg/L TDZ+0.2 mg/L NAA。白鹤芋是单子叶植物,其体细胞胚胎的形态形成过程与单子叶植物胚的形态形成过程类似。研究结果表明,白鹤芋体细胞胚胎的形态形成主要分为以下几个阶段:胚性细胞、胚胎、球形胚、椭圆形胚、盾形胚、子叶型胚、成熟体细胞胚。     

甘蓝花药培养胚状体诱导形成影响因子研究

用甘蓝F1、F2和自交系S33个世代6种基因型材料进行甘蓝花药培养诱导胚状体形成影响因子研究。结果显示:(1)高浓度蔗糖对甘蓝胚状体形成具有显著的诱导作用,6%蔗糖浓度是甘蓝花药培养的最适浓度,其胚状体的诱导率最高达12.2%;(2)材料基因型是影响花药培养的主要因素,F2和F1代材料胚状体诱导效果好,且胚状体诱导率F2代(F2P192和F2P194)18.9%比F1代(F1S17和F1S13)17.1%较高,但差异不显著,自交系S3代材料很难诱导出胚状体;(3)B5培养基比MS培养基更适合甘蓝花药胚状体的诱导培养。结果表明,甘蓝F2代是其花药诱导培养胚状体的最佳基因型材料,B5 2.0 mg/L 2,4-D 2.0 mg/L KT 6%Suc是甘蓝花药诱导培养胚状体的最适培养基。     

何首乌体细胞胚的诱导及植株再生研究

以何首乌茎尖、茎段为外植体,经体细胞胚发生途径,进行胚性愈伤组织诱导、体细胞胚的诱导、植株再生的研究.并采用临时压片法对体细胞胚的发育过程进行观察.结果表明愈伤组织诱导最适培养基为Ms＋6-BA 2.0 mg/L＋NAA 0.5 mg/L,体细胞胚诱导最适培养基为MS＋6-BA 1.0 mg/L＋NAA 0.2 mg/L.将产生的体细胞胚首先接种于MS基本培养基使其充分发育后转入MS＋6-BA 2.0 mg/L培养基中诱导出芽,出芽率高于直接采用Ms＋6-BA 2.0 mg/L培养基诱导.体细胞胚的发育过程是首先在愈伤组织表面形成许多瘤状突起即胚性细胞团,胚性细胞团继续发育成球形胚、盾形胚,球形胚、盾形胚成熟后发育成植株.     

东亚飞蝗hunchback基因在卵子形成和胚胎发育过程中的原位表达

hb（hunchback）基因是昆虫胚胎前后轴模式形成的关键基因．对东亚飞蝗（Locusta migratoria manilensis,Meyen）hb基因的功能已有报道,但其表达模式还不清楚．为了研究胁基因在东亚飞蝗卵子形成和胚胎发育过程中的时空表达情况,本研究采用免疫组化方法在蛋白质水平上检测了hb基因的时空表达模式．在卵子形成过程中,hb基因局限在卵细胞核区中表达,随着卵子的发育逐渐移至卵细胞的后端;卵受精后,核区里的Hb蛋白向外扩散,在卵后端形成浓度梯度;胚盘期,hb基因在胚盘中央呈带状表达;胚盘分化为原头和原躯干后,表达条带变宽,并呈现出梯度表达,该表达区域将形成颌、胸部的部分体节;随着腹节开始形成,hb基因在颌胸部的表达逐渐减弱,而在腹部后端的“生长区”表达,并呈现出不连续性．经比较,hb易基因在昆虫颌胸部的表达较为保守,而在卵子形成过程中和腹部的表达具有较大的变异性．与黑腹果蝇等长胚带昆虫相比,东亚飞蝗hb基因在体节形成的基因级联调控中具有更重要、更直接的调控作用．