细胞内钠NMR研究用Dy(PPP)的性能研究

应用核磁共振位移试剂原理制备了Dy(ppp)用于核磁共振~(23)Na谱,实现细胞内钠的测定.该方法具有非破环性,可进行细胞内钠变化的动态观察等优点.本文对Dy(ppp)的制备及性能,对生物系统可能产生的毒性或副作用等作了细致的研究.并对V_C、V_B、Hg对人血细胞内钠含量的影响作了动态研究.     

使葡萄汁颜色保持稳定的方法

科学工作者为了测定化学添加剂、抗坏血酸以及贮存时间对葡萄汁颜色的影响,进行了一系列实验,结果表明:加入低浓度的CaSO_4和SnCl_2可以延长颜色的保持时间,这是通过色差计量仪(Color Difference Meter)测量的。如不在葡萄汁中加入CaSO_4和Sncl_2,在贮存3个月之后,它的颜色就迅速发生变化。葡萄在机器收割、热处理、酶处理、挤压和巴氏杀菌过程中,色泽褪变较为严重,其汁     

钙对大麦幼苗盐胁迫的缓解效应

CaSO_4,Ca(NO_3)_2 ,CaCl_2三种钙盐缓解大麦幼苗的盐胁迫效应中,以Ca(NO_3)_2最为显著,Ca_(2 )/Na~ =1/10时最佳。钙提高盐胁迫下大麦种子α—淀粉酶活性是促进萌发的主要原因。     

云南小麦高分子量麦谷蛋白亚基基因1Dy12*的分离

通过SDS-PAGE分析,从云南小麦中鉴定出一个电泳迁移率比高分子量麦谷蛋白亚基1Dy12稍快的亚基1Dy12*.利用Glu-Dy位点特异引物对1Dy12*基因编码区进行了克隆和序列测定.1Dy12*基因全长为1980 bp,编码658个氨基酸.氨基酸序列比较结果表明:与亚基1Dy12相比有3个氨基酸的差异和1个二肽(GQ)的缺失,与亚基1Dy10相比有15个氨基酸的差异、2个六肽(IGQGQQ)的插入以及1个二肽(GQ)的缺失.这表明1Dy12*亚基是一个新型高分子麦谷蛋白亚基,其对小麦加工品质的影响正在评价中.     

云南小麦高分子量麦谷蛋白亚基基因1Dy12*的分离

通过SDS-PAGE分析,从云南小麦中鉴定出一个电泳迁移率比高分子量麦谷蛋白亚基1Dy12稍快的亚基1Dy12^*。利用Glu-Dy位点特异引物对1Dy12^*基因编码区进行了克隆和序列测定。1Dy12^*基因全长为1980bp,编码658个氨基酸。氨基酸序列比较结果表明:与亚基1Dy12相比有3个氨基酸的差异和1个二肽(GQ)的缺失,与亚基1Dy10相比有15个氨基酸的差异、2个六肽(IGQGQQ)的插入以及1个二肽(GQ)的缺失。这表明1Dy12^*亚基是一个新型高分子麦谷蛋白亚基,其对小麦加工品质的影响正在评价中。     

桤木根瘤共生固氮研究技术与观测

本文介绍光学显微镜和电子显微镜技术在研究桤木根瘤共生关系中的应用,并报道桤木的培养与有关结瘤的新技术。 寄主植物的培养 欧洲桤木种子经自来水冲洗后,用漂白粉溶液(NaOCl 5.25％v/v)表面消毒10—15分钟,再用无菌蒸馏水洗涤三次,移入S/P种子—包装生长袋(大小为16×18厘米,由高压聚酯薄膜制成),每袋放2—6粒种子,并加20毫升无氮Crone溶液。 无氮Crone溶液的母液制备如下:KCl,75;CaSO_4·2H_2O,50;MgSO_4·7H_2O,     

小麦离体根K~ 吸收能力的诱导提高与原生质膜-ATP酶活性及膜磷脂/膜蛋白比率变化的关系

小麦离体根在通气的去离子水中或0.1mM CaSO_4溶液中浸洗24小时,显著地增加K~ 的吸收速率。0.1mM CaSO_4溶液浸洗的增益效应大于去离子水。经0.1mM CHI,2mM FPA和0.01mM ABA浸洗24小时的小麦根,K~ 的吸收明显的降低,但它们对未经预处理的小麦根的K~ 吸收没有影响。小麦根匀浆经不连续梯度离心获得的34—45％蔗糖溶液介面处富含原生质膜部分和45％蔗糖浓度溶液中的沉降膜微囊(membrane vesicle),都有Mg~(2 ) K~ -ATP酶活性。从去离子水或0.1mM CaSO_4溶液浸洗过的小麦根获得的两部分膜制剂中,ATP酶的活性高于对照,而经CHI,FPA或ABA预处理过的小麦根的膜制剂内,ATP酶的活性低于对照。这些ATP酶活性的变动与K~ 吸收能力的增减呈正相关,与膜磷脂/膜蛋白的比率呈负的相关性。     

最新专利文摘

CN1712518:微生物转化异丁香酚制备香草醛的菌种和方法本发明涉及一株从土壤中筛选获得的纺锤芽孢杆菌CGMCC1347(SW-B9)及其培养发酵,并用于转化异丁香酚制备香草醛的方法。在优化条件下发酵培养,发酵液或游离细胞或其固定化细胞用于异丁香酚转化24~96 h,转化液中含香草酸2~4 g     

文摘

30 0 12用于寡核苷酸芯片制备载体的醛基载玻片的制备方法优化及性质研究〔中〕/邹宗亮… //生物工程学报 .- 2 0 0 1,17(5 ) .- 4 98～ 5 0 2优化了醛基载玻片的制备方法 ,探讨了醛基修饰载玻片固定寡核苷酸探针的性质。研究发现氨基硅烷试剂的浓度是影响载玻片荧光背景的主要     

解脂假丝酵母中神经酰胺的鉴别和定量分析

采用制备型薄层板分离解脂假丝酵母 (Yarrowialipolitica)中与神经酰胺标样近似的脂类成分 ,将其用于二级质谱分析 ,确认了其结构为脂肪酸碳链长度为 2 4的神经酰胺。结合高效液相色谱 蒸发光散射检测器 (HPLC ELSD)的检测方法 ,首次定量报道了解脂假丝酵母中神经酰胺的含量为 2 5‰。     

高冰草中一种新型高分子量麦谷蛋白亚基编码序列的研究

高冰草(Agropyron elongatun)是普通小麦(Triticum aestivum)的近缘禾草,SDS-PAGE显示其所编码的麦谷蛋白亚基的类型较普通小麦更加丰富,是普通小麦品质改良的重要亲本之一。利用基因组PCR的方法从高冰草中克隆到一个新的高分子量麦谷蛋白亚基(HMW-GS)基因(AgeloG2)全编码序列,同源性分析表明：与普通小麦的1Dy12基因比较在少数位点发生了碱基替换和一处6碱基序列的缺失,同源性为99％;与普通小麦的1Dy10基因比较,该基因亦只有少数碱基的替换和两处18碱基序列的增加及一处6碱基序列的缺失,同源性为98％。从推导的编码序列分析,AgeloG2编码y型HMW—GS。综上分析,AgeloG2是一个新的高分子量麦谷蛋白y-型亚基基因。聚类分析结果显示,无论在基因序列还是推导的氨基酸序列上,小麦1Dy亚基与AgeloG2的同源性都高于与粗山羊来源的y型亚基的同源性。     

电子探针X射线显微分析技术在生物学中的应用

电子探针X射线显微分析技术是X射线分析技术与电子光学成像技术结合起来的新技术。其优点:(1)形态观察与元素分析同时进行。(2)了解各元素在细胞内分布状况。(3)灵敏度高,可分析质量少于10~(-14)克的元素。制备标本的关键是既要保存其超微结构完整,又要维持其组成元素的原有分布。目前较理想的是采用冰冻薄切片法。这一技术可用于测定各种细胞器的元素分布;研究各种生理分泌液在组织内的形成和排泄;分析病变细胞内的元素以探讨发病机理;在卫生学中可用于测定空气中的污染成份和组织中有害元素的沉积。     

应用限制性显示技术制备HCV cDNA诊断基因芯片的初步研究

制备丙型肝炎病毒 (HCV)检测芯片并进行验证、初步检测质量评价。采用限制性显示 (Restrictiondisplay ,RD)技术制备芯片探针 ,从载体pCV_J4L6S中切出HCV全长cDNA ,Sau3AⅠ酶消化 ,所得的限制性片段进行RD_PCR扩增 ,经聚丙烯酰胺电泳 (PAGE)结合银染法进行分离。切胶回收后作 3次PCR ,得到较纯净的HCVcDNA限制性片段。扩增后的产物克隆至pMD18_T载体进行快速鉴定。将筛选出的限制性片段打印在氨基修饰的玻片上制备成检测芯片进行杂交验证分析 ,对芯片检测进行优化、初步的质量评估。运用RD技术 ,得到 2 4个 2 0 0～ 80 0bp、大小均一的基因片段 ,序列分析表明 ,均属于HCV特异基因 ,可以作为诊断芯片探针 ;杂交、测序结果显示 ,芯片检测的敏感性、特异性、准确度、重复性、线性等指标均佳。利用RD技术制备基因芯片探针是一种快速、简便的实用方法 ;制备的诊断芯片可以用于检测HCVRNA ,具有敏感、检测结果较为可靠的优点。     

抗牙龈卟啉单胞菌血凝素2单克隆抗体的制备

目的制备抗牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)血凝素2(hemagglutinin-2,HA-2)的单克隆抗体(monoclonal antibody,mAb)。方法用重组HA-2(recombinant HA-2,rHA-2)免疫BALB/C小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合,间接ELISA方法筛选杂交瘤细胞.用ELISA方法测效价。结果获得1株能够高效识别rHA-2的mAb,命名为4F11。此单克隆抗体的免疫球蛋白亚类为IgG1,效价达1?106。结论成功制备了重组牙龈卟啉单胞菌血凝素2的单克隆抗体mAb.将进一步用于牙龈卟啉单胞菌的诊断,并为牙周疾病的治疗研究奠定基础。     

有机磷降解酶在重组大肠杆菌中的表达及一步纯化固定化

【背景】有机磷化合物作为一类广谱杀虫剂,因其用量大、毒性强且不易降解,在自然界中的残留已对环境造成了严重污染。【目的】有机磷降解酶(organophosphohydrolase,OpdA)可降解多种有机磷化合物,探究其被固定到NiCo_2O_4载体上后用于有机磷化合物的降解效果。【方法】构建含组氨酸标签(histidine tag,His-tag)的OpdA,以pET-28a(+)为载体,Escherichia coli Rosetta(DE3)为宿主细胞,在终浓度为1.0 mmol/L的IPTG诱导下表达His-tagged OpdA。采用一步纯化固定化方法,实现固定化酶(OpdA@NiCo_2O_4)的制备。【结果】采用水热处理和煅烧制备了含过渡金属离子的NiCo_2O_4,利用过渡金属离子对酶分子表面组氨酸咪唑基的配位作用,实现了发酵粗酶液中His-taggedOpdA的一步纯化固定化,在优化条件下获得了高稳定性的OpdA@NiCo_2O_4;然后将其用于有机磷化合物的降解,在NaBH_4存在条件下,通过级联反应和降解条件优化,实现了有机磷化合物的高效降解。【结论】该研究不但实现了重组酶的一步分离纯化和固定化,也为有机磷化合物的降解提供了一条安全、高效、环保的新途径。     

维氏固氮菌γ1047诱变株产海藻酸条件的研究

维氏固氮菌(Azotobacter vinelandii)γ1047诱变株在培养温度为30℃,摇床转速200r/min情况下,产海藻酸的最佳培养基为(g/L):蔗糖25,酵母膏1.0,NaAc1.5,CaSO_40.1,Na_2MoO_4 0.002,K_2HPO_4 0.4,摇瓶装量150ml/500ml三角瓶,发酵液起始pH6.5—7.0.发酵周期2—3天,海藻酸产量和蔗糖转化率分别达到8.25g/L和413.6mg海藻酸/g消耗的蔗糖.     

利用荧光引物的DNA顺序自动分析法

继Maxam--Gilbert的化学分解法和Sanger的双脱氧法,最近人们又把荧光物质引入DNA链,进行DNA的顺序测定。其优点是:利用荧光物质代替了放射性同位素,分析结果自动化;灵敏度和神确度都很高。其基本步骤如下:首先制备5′-氨基-5′脱氧胸苷引物,然后用四种发射光谱不同的荧光试剂分别标记引物,它们是异硫氰基荧光素(FITC),氟化NBD(4-Nitrobenzo-2-oxa-1-diazole),异硫氰基四甲基诺丹明?。     

用一种新型的PCR方法快速制备人TNF-α缺失突变体

人肿瘤坏死因子 α(hTNF α)的 2个Loop区 2 9～ 36、141～ 146是受体的主要结合部位 .应用一种新型的PCR方法 ,快速制备了这 2个Loop区的缺失突变体 ,并对其活性进行了研究 .结果表明 :这种新型的PCR方法在制备缺失突变体中具有快速、简便、经济等优点 ,值得推广 ;缺失蛋白对L92 9细胞的毒性作用明显降低 ,表明这 2个区域为hTNF α发挥其生物作用所必需     

氮杂环卡宾二氧化碳加合物催化转酯反应制备生物柴油

为了开发一种无金属有机催化剂用于生物柴油的制备,合成了一系列咪唑(啉)类氮杂环卡宾的二氧化碳加合物(N-heterocyclic carbenes CO2adducts,NHC-CO2),通过加热使其释放游离卡宾,并催化转酯反应制备生物柴油。为了比较催化活性,不同结构的NHC—CO2被用于大豆油的转酯反应中。结果发现:当使用咪唑类催化剂时,产物中甲酯含量大于90%,而当使用咪唑啉型催化剂,甲酯含量不足20%,这说明咪唑类催化剂更适合本研究中的转酯反应。催化剂最佳用量为大豆油的2%(摩尔百分比),最佳醇油比为12∶1。本研究中催化剂前体释放游离卡宾进入反应介质,反应迅速,产品分离简单,是制备生物柴油的有效绿色方法。     

ORP4L 多克隆抗体的制备及其在蛋白质组学研究中的应用

目的:原核表达并纯化人氧化固醇结合蛋白相关蛋白4(ORP4L)肽段,制备兔抗人ORP4L多克隆抗体,并利用其进行蛋白质组学研究。方法:应用PCR技术扩增人ORP4L 382-485氨基酸(ORP4Lm)的基因序列并插入到PGEX-4T-1载体中,在大肠杆菌RosettaTM(DE3)中表达融合蛋白GST-ORP4Lm。利用所表达的融合蛋白中含有的GST标签进行亲和纯化。用所获得的纯化蛋白免疫新西兰大白兔,获得兔抗人ORP4L多克隆抗体。用Western blotting检测抗体免疫特异性。将亲和纯化后的抗体偶联到CNBr-actived sepharose beads上,利用免疫沉淀的方法,通过质谱仪分析鉴定可能与ORP4L存在相互作用的蛋白质。通过West-ern blotting进一步确证特异性的相互作用蛋白。结果:在大肠杆菌中表达并纯化了GST-ORP4Lm重组蛋白,用其免疫新西兰大兔,成功制备了相应兔源多克隆抗体,Western blotting证实该抗体可以特异识别内源性及外源性的ORP4L蛋白。质谱分析和Western blotting的结果表明所制备的多克隆抗体可以用于蛋白质组学研究。结论:利用重组的GST-ORP4Lm融合蛋白成功制备了有良好特异性的ORP4L多克隆抗体,并可将其用于ORP4L的蛋白组学研究。