EWS蛋白质抑制核因子κB的转录活性

目的:研究EWS蛋白质是否参与核因子κB(NF-κB)信号通路,以及EWS蛋白质对NF-κB转录活性的影响。方法:在真核细胞中表达Flag-EWS,利用Western印迹检测其表达;通过双萤光素酶光报告系统,研究EWS蛋白质对NF-κB转录活性的影响及其发挥作用的分子水平。结果:Western印迹检测到相对分子质量为95×103的Flag-EWS能够在真核细胞中正确表达,过表达EWS蛋白质能够抑制TNFα、IL-1β及poly(I:C)激活的NF-κB转录活性;EWS蛋白质能够抑制由过表达HA-TRAF2或HA-p65激活的NF-κB转录活性,其抑制NF-κB转录活性发生在p65转录因子水平。结论:过表达EWS能够抑制多种刺激激活的NF-κB转录活性,这种抑制作用发生在p65转录因子水平。     

核转录因子NF-κB/RelA的磷酸化、乙酰化和甲基化修饰与活性调控

RelA是NF-κB家族的重要成员。它通过对靶基因的调节,参与细胞的增殖与转化、凋亡、炎症以及免疫应答等重要的生命活动,同时这些功能受到磷酸化、乙酰化、甲基化等多种翻译后修饰的调控。本文就RelA的结构、功能及其活性调控做一综述,希望为人们认识RelA的网络调控机制提供新的认识。     

NF-κB对PPARδ基因的转录调控

过氧化物酶体增殖因子活化受体δ基因(PPARδ)与结直肠癌相关,但其转录调控机制尚不清楚.本研究构建了PPARδ基因的启动子荧光素酶报告基因载体,用删除法定位了启动子活性区域,并通过核酸重叠法和电泳迁移率变更实验,将该区域缩小到30 bp,预测该区域可能起作用的转录因子结合位点;通过启动子定点突变分析和核酸诱骗实验,发现真正起作用的是-156～-127区域内NF-κB的结合位点.电泳迁移率变更法和超迁移分析实验,证实NF-κB能够与该区域结合,并且在抑制NF-κB的DNA结合活性后,PPARδ mRNA的表达明显降低.这些实验表明,在Lovo细胞中,转录因子NF-κB参与了PPARδ的表达调控.     

COPD大鼠模型在不同时期细胞转录因子NF-κB变化及意义

目的：建立分别由吸烟以及气管内滴注脂多糖导致慢性阻塞性肺病小鼠模型,并研究核因子-κB在（COPD）的作用。方法：我们将50只wistar鼠随机分成2组,1组为正常对照组,2组为COPD进展组。COPD进展组又进一步分为暴露香烟烟雾及气管内滴注脂多糖1周、2周、3周、4周、5周。预备好的小鼠被解剖观察,肉眼观察小鼠外形及肺组织标本,显微镜下观察肺脏的病理改变。分析PH、氧分压、二氧化碳分压,NF-κB的活性被测量。结果：COPD小鼠模型肺组织的病理改变如同COPD患者,不同暴露组的实验小鼠细胞总数结果表明,实验小鼠COPD肺组织的病理改变和人类COPD的病理改变是一致的。动脉血气分析结果显示暴露与烟雾及气管内滴注脂多糖4周的小鼠与正常对照组比较血PH、氧分压是降低的,而二氧化碳分压是升高的。结论：NF-κB在促进肺部炎症反应中起着重要的作用,通过活化肿瘤坏死因子及肺泡巨噬细胞。     

NF-κB“圈套”抑制PC12细胞中NF-κB活性模型的建立

目的:观察NF-κB"圈套"(κB-decoy)寡核苷酸对LPS诱导PC12细胞中NF-κB活化的抑制过程,建立κB-de-coy抑制NF-κB活化的细胞模型。方法:将培养于6孔板的PC12细胞进行分组转染,实验组:LF2000+κB-decoy(6μg/well);对照组:LF2000+错配-decoy;正常组:LF2000。转染48h后,加入LPS(200ng/ml),作用0.5～4h。分别用免疫细胞化学染色和Westernblot方法检测PC12细胞内NF-κB的表达及活化。结果:与正常组相比较,转染错配-decoy的对照组细胞,随着LPS刺激时间的延长,NF-κB的表达和活化明显增加(P0.01),2～4h达到高峰;与对照组相比较,转染κB-decoy实验组的PC12细胞,随着LPS刺激时间的延长,NF-κB的表达处于较稳定水平,在LPS刺激的各时间点中明显低于对照组(P0.01)。结论:κB-decoy可以降低生理状态下PC12细胞内NF-κB的正常表达水平,抑制病理状态下NF-κB的活化。     

核转录因子-κB与疾病治疗

核转录因子－κB是一种广泛存在的核转录因子,实验证实NF－κB的过度活化与多种疾病相关。本文综述了近年研究获得的在疾病状态下抑制NF－κB过度活化从而缓解病症的几种方法。     

钙离子调节的转录因子NF-κB激活参与小鼠记忆功能与行为调控

NF κB是重要的核转录因子,最近,美国研究人员DavidBaltimore等惊奇地发现,NF κB在行为学中枢调控过程中亦起重要作用。他们发现,敲除NF κB分子P6 5基因的小鼠的海马细胞虽然存在NF κB的其他亚基,但突触刺激引发的NF κB核转运却被降低。行为学研究亦表明,虽然P6 5基因敲除小鼠具有正常发育的中枢神经系统和正常的日常行为,但在辐射臂状迷宫(radialarmmaze,RAM)实验中,P6 5基因敲除小鼠对场景的学习和记忆能力以及探寻食物的能力均明显低于野生型小鼠,尽管实验中它们表现出与野生型小鼠相同的探寻行为(exploratorybehavior)和…     

LRP16影响电离辐射诱导的NF-κB活性

目的:研究LRP16在电离辐射激活核转录因子NF-κB信号转导通路中的作用。方法:在HeLa细胞中,分别运用双萤光素酶分析和Western印迹检测LRP16对κB-Luc报告基因及NF-κB下游靶基因表达的影响。结果:双萤光素酶实验证实LRP16过表达促进电离辐射诱导的κB-Luc活性,而抑制LRP16则降低电离辐射诱导的κB-Luc活性;Western印迹结果显示,LRP16过表达促进电离辐射诱导NF-κB的下游抗凋亡基因XIAP的表达,与之相对应的是,抑制LRP16降低电离辐射诱导NF-κB下游抗凋亡基因XIAP的表达。结论:LRP16可以调节电离辐射诱导NF-κB的转录活性,并且调控NF-κB下游抗凋亡基因XIAP的表达,为进一步阐明电离辐射激活NF-κB转录活性的分子机制奠定了基础。     

NF-κB在胃癌中的检测及意义

目的探讨NF-κB胃癌中的表达量及与临床病理参数的关系。方法选取2013年7月2015年7月广西医科大学附属肿瘤医院收治的78例胃癌组织作为观察组,另选取同期26例正常组织作为对照组,观察两组患者NF-κB蛋白表达情况。结果胃癌组患者NF-κB蛋白阳性率高于正常组(P0.05);NF-κB的表达率与临床分期、分化程度、有无淋巴结转移有关(P0.05);结论 NF-κB蛋白在胃癌中的表达率高,对于判断肿瘤的恶性程度及预后重要的临床意义。     

RelA/p65的翻译后修饰及其对NF-κB转录活性的影响

RelA/p65是NF-κB的一个亚单位,其翻译后修饰能够精细地调控NF-κB的转录激活,并在炎症反应及炎症反应相关疾病的发生和发展过程中发挥重要的作用.RelA的翻译后修饰主要包括磷酸化、乙酰化、甲基化以及泛素化等.这些翻译后修饰不仅能在生理和病理的条件下有效地调控NF-κB的转录激活,彼此之间还存在着复杂的相互作用,一种翻译后修饰可以使另一种修饰增强或是抑制,从而综合而完善地调控NF-κB的转录活性.本文就近年来RelA的翻译后修饰及这些修饰之间的相互作用对NF-κB信号通路影响的最新研究进展进行综述.     

EB病毒LMP1在鼻咽癌细胞中调控核转录因子κB活性研究

为了探讨ＥＢ病毒潜伏膜蛋白１（ＬＭＰ１）的致瘤机制,对鼻咽癌细胞中ＬＭＰ１通过核转录因子ｋＢ（ＮＦｋＢ）介导的信号传导途径在鼻咽癌变中的意义进行了研究。利用ＬＭＰ１受四环素衍生物强力霉素诱导表达的鼻咽癌细胞Ｔｅｔ－ｏｎ－ＬＭＰ１ＨＮＥ２,通过ＮＦｋＢ报道基因分析法、凝胶迁移率分析（ＥＭＳＡ）及细胞集落形成率等方法,结合硫代磷酸反义寡核苷酸阻断技术,证实ＬＭＰ１增强鼻咽癌细胞ＮＦｋＢ的ＤＮＡ结合活性     

氧化应激对腺病毒E1A蛋白活化NF-κB转录活性的影响及其机制研究

目的:探讨腺病毒E1A蛋白对细胞内抗氧化物质谷胱甘肽(GSH)水平的影响及氧化应激对腺病毒E1A蛋白介导的核因子-κB(NF-κB)转录活化的影响。方法:构建稳定表达E1A蛋白的大鼠肺泡上皮细胞(E1A组)及对照质粒转染细胞(对照组),每组5×105个细胞,试验重复3次。采用H2O2刺激细胞,检测细胞内GSH水平。脂多糖(LPS)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)进行刺激,丁胱亚磺酰亚胺(BSO)进行干预,Western blot法检测NF-κB和AP-1蛋白的表达。结果:E1A+细胞内GSH基础水平与E1A-比较无显著差异,但在H2O2作用后没有诱导出GSH含量的上升,表现为下降而低平的趋势,去除氧化剂后,仍低于正常水平。E1A-细胞在氧化剂的作用后呈明显的上升趋势,去除氧化剂后仍高于基础水平。细胞内NF-κB蛋白表达(积分吸光度值):刺激前E1A+细胞分别为79.3±4.6和80.3±3.8,在LPS和TNF-α刺激后分别为81.8±3.9～89.9±1.6和94.1±1.9～99.8±1.6,均明显高于对照组(刺激前分别为68.3±3.8和69.4±4.3,刺激后分别为70.1±2.8～80.8±3.6和73.4±4.9～83.2±6.7)。给予BSO预处理后再用LPS和TNF-α刺激,E1A-细胞NF-κB蛋白表达的积分吸光度值(1.22±0.16和1.75±0.13)与LPS或TNF-α单独作用组(1.25±0.18和1.69±0.19)无明显差别;E1A+细胞NF-κB蛋白表达的积分吸光度值(1.75±0.10和2.26±0.21)明显高于LPS或TNF-α单独作用组(1.35±0.12和1.80±0.14)。结论:腺病毒潜伏感染持续表达E1A蛋白可以影响细胞GSH,降低细胞对氧化应激的耐受性,并可能通过此机制造成NF-κB异常转录活化,而GSH的降低又进一步放大了E1A介导的NF-κB转录活化作用。     

瘦素对血管平滑肌细胞核转录因子κB的影响

目的探讨瘦素(leptin)对血管平滑肌细胞(VSMCs)核转录因子(NF-κB)的影响。方法贴块法原代培养VSMCs;分别采用MTT法检测leptin对VSMCs增殖活性的影响,免疫荧光-共聚焦显微镜和蛋白印迹技术检测Lep-tin对VSMCs中NF?κB的细胞内定位和VSMCs核中NF?κB的蛋白含量。结果leptin对VSMCs具有促进细胞增殖的作用,这种促增殖活性具有剂量依赖性;Leptin能促进VSMCs中的NF?κB从胞质转移至细胞核,并且这种作用也具有剂量依赖性。结论Leptin能促进VSMCs增殖,能激活VSMCs中NF?κB,使其从胞质转位至胞核;同时,目前已有的研究已经证明NF?κB与平滑肌细胞的增殖和迁移关系密切,提示Leptin促进VSMCs的增殖作用中可能有NF?κB信号传导通路的参与。     

NF-κB的生物学功能

NF—κB因其广泛参与机体的免疫及其它应激反应而受到人们的关注,其常见的形式是由p50和p65组成的异源二聚体。细胞受到外部因素刺激后,NF-κB由细胞质转移到细胞核中,并发生磷酸化和乙酰化,启动相关基因的表达。目前研究表明受NF-κB调节的基因有200多种,其激活因子不少于150种,所以对NF-κB在各种条件下的激活过程及信号传导网络的研究具有重要的意义。本文综合了当前关于NF—κB研究的最新进展,着重阐述了由TNF-α、IL-Ⅰ及LPS刺激而引起NF—κB激活的信号传导通路,并进一步阐述了其在人类某些疾病当中的生物学功能。     

Non-canonical NF-κB signaling pathway

The non-canonical NF-κB pathway is an important arm of NF-κB signaling that predominantly targets activation of the p52/RelB NF-κB complex. This pathway depends on the inducible processing of p100, a molecule functioning as both the precursor of p52 and a RelB-specific inhibitor. A central signaling component of the non-canonical pathway is NF-κB-inducing kinase (NIK), which integrates signals from a subset of TNF receptor family members and activates a downstream kinase, IκB kinase-α (IKKα), for triggering p100 phosphorylation and processing. A unique mechanism of NIK regulation is through its fate control: the basal level of NIK is kept low by a TRAF-cIAP destruction complex and signal-induced non-canonical NF-κB signaling involves NIK stabilization. Tight control of the fate of NIK is important, since deregulated NIK accumulation is associated with lymphoid malignancies.     

转录因子NF-κB p50基因的克隆、表达及抗p50抗体的制备

利用ＤＮＡ重组技术,将转录因子ＮＦ－κＢｐ５０基因片段插入ｐＧＥＸ－２Ｔ质粒载体,经ＤＮＡ序列分析证明克隆的正确性．将重组的ｐＧＥＸ－２Ｔ／ｐ５０转化入大肠杆菌ＪＭ１０９,表达出ｐＧＥＸ－２Ｔ／ｐ５０融合蛋白．经ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ检测证实表达产物对抗ｐ５０ｃ的抗体呈特异性反应,表明克隆的正确性,并成功地应用纯化的ｐ５０蛋白制备了免疫血清．为进一步对ＮＦ－κＢ的功能进行研究打下了良好的基础     

乙肝病毒X蛋白结合蛋白(HBXIP)增强肝癌细胞NF-κB转录活性的实验研究

前期研究结果表明,乙型肝炎病毒X蛋白结合蛋白(hepatitis B virus X-interacting protein,HBXIP)具有促进细胞增殖的作用.为了进一步阐明其分子机制,观察了HBXIP对核因子κB(NF-κB)转录活性的影响.实验中通过基因共转染将NF-κB报告基因质粒pNF-κB-Luc和HBXIP真核表达载体pcDNA3-hbxip导入人肝癌H7402细胞系中,进行荧光素酶活性分析.结果显示:H7402细胞过表达HBXIP后NF-κB的转录活性明显增强;此外,基因转染后经免疫印迹检测显示,与NF-κB二聚体结合的抑制亚基IκBα的磷酸化水平明显增加;同时,提取H7402细胞的核蛋白,然后应用免疫印迹检测细胞核中p65/NF-κB的水平.结果显示,H7402细胞中HBXIP过表达后细胞核中p65/NF-κB的水平明显增加.当应用RNA干扰技术抑制了细胞内源性的HBXIP基因表达后,则出现与上述结果相反的效果.上述结果提示,HBXIP可增加核内p65/NF-κB蛋白水平,进而发挥NF-κB促转录调控的作用.因此,HBXIP可通过调控NF-κB信号途径而促进细胞增殖.     

双荧光素酶报告质粒检测小鼠巨噬细胞热休克转录因子1调控核转录因子kappa B活性的研究

目的：观察烧伤血清刺激后小鼠巨噬细胞NF-κB活性的变化,以及HSF1对NF-κB可能的调控作用.方法：制作15%TBSA Ⅲ°烧伤小鼠模型,提取烧伤血清.通过表达质粒与报告质粒共转染,检测烧伤血清诱导下NF-κB活性的变化以及过表达HSFI后NF-κB活性的变化规律.结果：对比正常血清,烧伤血清刺激后相对荧光素酶活性早期即明显增加（P〈0.05）,这种变化在诱导后2 h即达到高峰,12 h后逐渐下降;过表达HSF1可以显著抑制烧伤血清引起这种活性变化（P〈0.05）.结论：烧伤后NF-κB早期即活化,热休克反应可能通过HSF1途径抑制NF-κB的活性.