纳米氧化硅空心球负载光敏剂对肝癌体内外的杀伤作用研究

目的:探讨空心纳米粒子光敏剂与普通光敏剂在不同实验条件下对人HepG2肝癌细胞增殖的抑制作用及其作用机制。方法:应用体内外培养的HepG2肝癌细胞,以纳米化的photosan及photosan为光敏剂,半导体激光器(波长630 nm)为光源进行光照射,在不同的浓度光敏剂经不同剂量的光照后,用MTT法测定光动力治疗后肝癌细胞的残存率,并用流式细胞分析检测光动力治疗对肝癌细胞凋亡的影响,采取Western blot检测光动力治疗肝癌后凋亡相关蛋白caspase-3和caspase-9的表达情况,并建立裸鼠动物模型,比较纳米粒子光敏剂与普通光敏剂在动物体内对肝癌抑制作用。结果:纳米粒子光敏剂介导的光动力治疗对肝癌有明显的抑制作用,在一定范围条件下,随着光敏剂浓度的增加和激光剂量的的增大,肝癌细胞的的残存率明显下降,且纳米粒子光敏剂在同等条件下要优于普通光敏剂,流式细胞分析显示,空心纳米粒子光敏剂光动力治疗肝癌出现了明显的凋亡,且比普通光敏剂更显著。Western blot检测结果显示,两种光敏剂均引起凋亡蛋白caspase-3和caspase-9的表达,在空心纳米粒子光敏剂光动力作用组该两种蛋白的表达水平要明显高于普通光敏剂组。体内实验显示:用纳米粒子光敏剂与普通光敏剂分别对裸鼠肝癌模型干预,在生存期,瘤体的体积大小,纳米粒子光敏剂组显然优越于普通光敏剂组。结论:空心纳米粒子光敏剂对肝癌细胞在体内外具有明确的抑制作用,这种抑制作用可能通过引起凋亡相关蛋白高水平的表达,从而促发凋亡通路的开放,引起癌细胞发生凋亡。     

Notch1在胆管癌细胞光动力疗法中的作用研究

目的:1、研究Photosan介导光动力疗法(Photodynamic Therapy,PDT)对胆管癌细胞的杀伤作用。2、探讨Notch1在胆管癌发生中的表达情况以及Notch1在PDT治疗胆管癌细胞中的作用。方法:1、体外培养人胆管癌QBC939细胞株,在细胞对数生长期用不同浓度Photosan处理,并用半导体激光治疗仪不同强度光照后,采用MTT法检测PDT对QBC939细胞的杀伤作用。观察不同的光敏剂孵育时间、光敏剂浓度及光照剂量对PDT效果的影响。2、采用免疫细胞化学方法和蛋白印迹法检测胆管癌细胞Notch1表达,经Photosan介导光动力作用胆管癌细胞后,检测胆管癌细胞内Notch1表达变化。结果:1、MTT结果显示Photosan介导的PDT对胆管癌细胞有杀伤作用(P0.05),而且这种杀伤作用在一定范围内随着光敏剂浓度增加、光敏剂孵育时间、光照剂量呈正相关。2、免疫细胞学检查发现Notch1在胆管癌细胞中高表达,其表达主要位于细胞膜及胞浆,并且经PDT处理后Notch1表达量较前减少(P0.05)。结论:Notch1与胆管癌细胞生长、增殖密切相关,且Notch1在PDT对胆管癌细胞产生的抑制、促凋亡和杀伤作用中有重要作用。     

Photosan脂质立方液晶纳米光敏剂的制备及光动力杀伤效应研究

目的:制备Photosan脂质立方液晶纳米光敏剂,通过体外实验探讨其介导的光动力疗法(photodynamic therapy,PDT)特异性杀伤肿瘤细胞效果。方法:以单油酸甘油酯(glyceryl monooleate,GMO)和泊洛沙姆407(poloxamer 407,P407)为液晶材料,以光敏剂Photosan为模型药物,制备Photosan立方液晶纳米粒,通过Malvern粒径仪和扫描电子显微镜等考察其理化性质;通过MTS法考察Photosan立方液晶纳米粒对正常肝细胞株和肝癌细胞株的暗毒性及光动力杀伤效果。结果:成功制备Photosan脂质立方液晶纳米粒,该纳米粒对人肝L-02细胞和人肝癌Hep G2细胞均没有暗毒性,其介导的PDT对人肝L-02细胞增殖有一定抑制作用[细胞抑制率为(32.9±1.19)%],而对肝癌Hep G2细胞增殖具有更显著的抑制作用[细胞抑制率为(77.9±2.06)%];Photosan立方液晶介导的光动力作用对人正常肝细胞的增殖抑制作用低于Photosan,但对肝癌细胞的增殖抑制作用高于Photosan。结论:Photosan脂质立方液晶纳米粒对人正常肝细胞安全性较好,对肝癌细胞的光动力杀伤效应明显优于Photosan,为光动力治疗癌症提供了创新性方法。     

三氧化二砷对人胃腺癌细胞株SGC-7901细胞核及线粒体作用的实验研究

目的:研究三氧化二砷(As203)对人胃腺癌细胞株SGC-7901的生物效应及其对线粒体和半胱氨酸蛋白酶家族-3(caspase-3)的作用.方法:通过MTT比色实验检测不同浓度As2O3对该细胞株的生长抑制作用;经Hoechst 33258染色后用荧光显微镜观察细胞核的形态变化;经过细胞线粒体膜电位检测区分凋亡细胞与正常细胞,并经流式细胞仪分析;caspase-3吸光度检测法测定As2O3组caspase-3的活化程度.结果:As2O3明显抑制SGC-7901人胃腺癌细胞的生长,抑制作用的强度呈时间依赖性(方差分析,P<0.01);Hoechst 33258染色后荧光显微镜观察细胞核固缩碎裂边集呈强蓝色荧光;线粒体膜电位检测法,流式细胞仪检测法,caspase-3吸光度检测法均检测到胃腺癌细胞的凋亡.结论:As2O3破坏线粒体跨膜电位和激活caspase-3活性可能是As2O3诱导人胃腺癌SGC-7901细胞凋亡的重要机制.     

白藜芦醇诱导胃腺癌SGC7901细胞凋亡及下调血管生成拟态相关蛋白水平

目的探讨白藜芦醇(resveratrol,Res)诱导人胃腺癌SGGC7901细胞株凋亡及对血管生成拟态(vasculogenic mimicry,VM)的影响。方法 MTT法检测不同浓度Res对胃腺癌SGC7901细胞株活力的影响,Annexin V/PI双染法流式细胞术检测Res对胃腺癌细胞凋亡的影响,蛋白免疫印迹法检测不同浓度Res对VM相关蛋白VE-cadherin、MMP-2水平的影响。结果Res对胃腺癌SGC7901细胞株活力呈明显的浓度依赖性抑制作用,流式细胞仪检测显示Res处理组细胞凋亡率较对照组显著升高。免疫印迹法检测发现VE-cadherin、MMP-2水平随着RES处理浓度的增加逐渐下降。结论 Res可能通过抑制增殖、下调VM相关蛋白抑制VM,从而诱导胃癌细胞调亡。     

二甲基胂酸抑制胃癌细胞增殖的研究

目的:探讨二甲基胂酸(DMAA)对SGC7901胃癌细胞增殖的抑制作用及其可能的机制.方法:依次用5,10,15,20,25,30mmol/L二甲基胂酸处理培养的SGC7901胃癌细胞24 hrs,在5 mmol/L和10 mmol/L的浓度下分别处理6,12,18.24,30,36,42,48hrs,用MTT计数法测定DMAA对肿瘤细胞增殖的抑制率,用激光共聚焦显微镜检测细胞形态变化以及用DNA凝胶电泳检测细胞凋亡.结果:DMAA在不同浓度下对肿瘤细胞的抑制作用呈现典型的双曲线,即随着浓度的增加DMAA对胃癌细胞的抑制率不断增加并逐渐趋于稳定;在形态学上DMAA在低浓度下引起胃癌细胞的胞膜出泡、核固缩、染色体断裂和凋亡小体等典型的细胞凋亡的变化,而在高浓度下主要引起细胞坏死;DNA凝胶电泳结果显示,在低浓度DMAA作用下胃癌细胞DNA呈现细胞凋亡的梯状带型,而在高浓度下梯状带型则消失.结论:DMAA抑制胃癌细胞的增殖,其在低浓度时能有效诱导胃癌SGC 7901细胞凋亡,而在高浓度时使胃癌细胞坏死而死亡.     

光动力疗法对人肝癌细胞SSMC-7721凋亡及suivivin表达的影响

目的:探讨血卟啉衍生物(hematoporphyrin derivative,HPD)光动力作用(photodynamic therapy,PDT)诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡的作用及其机制.方法:采用MTT法测定PDT对人肝癌细胞的相对抑制率,并筛选最佳实验参数.应用流式细胞术检测PDT后细胞凋亡率.并用细胞免疫组化法检测survivin及caspase-3蛋白表达水平.结果:当HPD浓度为4mg/L,光照剂量为10J/cm2时,实验效果最佳,PDT光动力组人肝癌细胞SMMC-7721相对抑制率为(64.28±2.73)%,凋亡率达(35.28±1.52)%,与对照组相比,差异有显著意义(P＜0.01);PDT后survivin蛋白表达水平显著低于对照组(P＜0.05),而caspase-3却高于对照组.结论:血卟啉衍生物光动力作用具有诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡的生物学效应,其作用机制可能与光动力作用抑制凋亡调控蛋白survivin表达,并直接或间接促进caspase-3的表达,从而促进细胞凋亡.     

Ad-IL-24对SGC-7901胃癌细胞生长抑制的体外实验

旨在研究携带人IL-24基因的腺病毒表达载体(Ad-IL-24)对SGC-7901人胃癌细胞的生长抑制作用并分析其分子机制。以不同MOI(感染复数)的Ad空载体腺病毒感染SGC-7901人胃癌细胞,筛选出最佳感染剂量;Ad-IL-24以最佳感染剂量感染SGC-7901胃癌细胞,RT-PCR法和Western blotting法检测腺病毒介导的IL-24基因在SGC-7901胃癌细胞中的转录;MTT法检测Ad-IL-24对SGC-7901胃癌细胞的生长抑制作用,流式细胞仪检测其诱导SGC-7901人胃癌细胞凋亡和细胞周期改变的效应,Hoechst33258染色荧光显微镜检测其诱导胃癌细胞凋亡的核形态改变;RT-PCR半定量法进一步检测SGC-7901胃癌细胞中凋亡相关基因的转录。结果显示,100MOI为感染SGC-7901胃癌细胞的腺病毒最佳感染剂量;Ad-IL-24能成功介导IL-24基因在SGC-7901胃癌细胞中转录性表达;Ad-IL-24感染SGC-7901胃癌细胞后,能明显抑制胃癌细胞生长和诱导凋亡;Ad-IL-24能显著上调SGC-7901胃癌细胞中bax、caspase-3和p53的表达和下调bc...     

胃癌AGS细胞内pH值的测定及酸性环境对其增殖和凋亡的影响

目的:测定胃癌AGS细胞内pH(intracellular pH,pHi),探讨细胞外酸性环境对AGS细胞增殖和凋亡的影响。方法:采用离子成像分析系统测定AGS细胞的pHi,MTT及流式细胞术分别检测培养环境pH值为6.0时AGS细胞的活力、细胞周期和凋亡。结果:AGS细胞内pH明显碱化,在pH值为6.0的酸性环境培养时,细胞活力在12小时内明显抑制,细胞停滞在S和G2/M期,细胞凋亡不明显。结论:胃癌细胞AGS明显碱化,pH值为6.0的酸性环境使细胞数量减少和活力下降,其机制是使细胞出现增殖抑制而与凋亡无关。     

掺铁TiO2纳米颗粒与恒定磁场对HL60白血病肿瘤细胞的灭活效果

通过研究不同浓度、不同磁场作用下TiO2、掺铁TiO2纳米颗粒对HL60白血病细胞活性的影响,以及在接受光照和不接受光照条件下的细胞活性,探讨基于TiO2、掺铁TiO2纳米颗粒作为光敏剂的光动力疗法(PDT)灭活白血病肿瘤细胞的可行性.实验结果表明,纳米颗粒对细胞具有一定的抑制/毒性作用,纳米浓度越大,抑制/毒性作用越明显;磁场对细胞的毒性/抑制作用跟掺铁的浓度以及磁感应强度有关,掺铁纳米组在强磁场作用下对细胞抑制/毒性作用明显;此外,添加了纳米颗粒的PDT灭杀效率要比不添加纳米颗粒的PDT灭杀效率高.