抗癌药物奥沙利铂与DNA分子相互作用的研究

奥沙利铂被称为第三代铂类药物,特别对胃肠道肿瘤具有较好的疗效.目前大多数的研究表明奥沙利铂的主要作用靶点是DNA分子,但它与DNA分子形成的关键结构和作用机制仍处在探索阶段.本研究运用紫外可见吸收光谱和原子力显微镜观察探索奥沙利铂与DNA在活体外的相互作用过程,从而揭示奥沙利铂产生抗癌作用的主要分子结构基础.首先使用紫外光谱研究了较高浓度奥沙利铂与DNA的作用过程.在此基础上,进一步采用原子力显微镜在高定向热解石墨表面观察了不同浓度奥沙利铂与质粒DNA在37℃条件下作用不同时间后的结构形貌变化,分析了奥沙利铂与DNA相互作用的过程.高分辨原子力显微观察结果表明奥沙利铂与DNA作用后可导致质粒DNA的结构发生显著的变化.随着作用时间的增加,DNA分子逐渐由伸展的链状变化为相互缠绕并带有许多结点的紧密结构,最终变化为更紧密的球状结构.本研究结果表明奥沙利铂可通过化学键合作用和静电作用使质粒DNA逐渐凝集为紧密的球状结构,这种结构可能对奥沙利铂的抗癌活性和毒性产生重要影响.     

奥沙利铂或5-FU对人肝癌HepG2细胞低氧低血清损伤后的增殖的影响

目的：探讨奥沙利铂或5．Fu单药对经低氧低血清损伤的人肝癌HepG2细胞增值的抑制作用。方法：体外培养HepG2细胞,建立低氧低血清细胞模型,分组选用奥沙利铂、5．F1J、奥沙利铂＋低氧、5-FU＋低氧、奥沙利铂＋低血清、5-FU＋低血清、奥沙利铂＋低氧低血清、5．Fu＋低氧低血清,48h后MTT法检测不同浓度的奥沙利铂或5-Fu对低氧、低血清和低氧低血清组的细胞增殖情况。结果：奥沙利铂或5．Fu对HepG2细胞的抑制作用呈明显的剂量依赖关系（P〈0．05）,细胞低氧低血清损伤同时奥沙利铂或5．Fu处理后的抑制率明显高于单独用药组（P〈0．01）。结论：奥沙利铂或5-Fu可抑制HepG2细胞的增殖,低氧低血清处理后,抑制作用更强。     

PD-L1基因多态性与结直肠癌患者奥沙利铂化疗疗效和安全性的相关性研究

目的:研究PD-L1/3'-UTR上单核苷酸多态性rs4143815与结直肠癌患者奥沙利铂化疗疗效及安全性的相关性。方法:首先,测定262例接受奥沙利铂化疗的结直肠癌患者rs4143815的基因型;然后,统计分析基因型与奥沙利铂化疗疗效、不良反应发生情况及临床病理参数的相关性。结果:PD-L1/3'-UTR上单核苷酸多态性rs4143815与奥沙利铂治疗的疗效显著相关(P=0.028);与C/C型相比,C/G型患者的化疗疗效更好(OR=2.10),而G/G型患者的疗效却更差(OR=0.49)。然而,G/G型患者的不良反应发生率更低(OR=0.46)。此外,PD-L1/3'-UTR上单核苷酸多态性rs4143815与结直肠癌的肿瘤大小显著相关,G/G型患者的肿瘤体积比C/C型患者更小(R=0.08)。结论:rs4143815与奥沙利铂治疗结直肠癌患者的疗效、安全性和肿瘤大小显著相关,可能成为预测结直肠癌患者奥沙利铂治疗的疗效和安全性的参考分子标志物。     

PLGA-奥沙利铂缓释微球急性毒性实验

目的了解PLGA-奥沙利铂缓释微球和奥沙利铂小鼠皮下给药的急性毒性。方法采用Bliss法分别测定PLGA-奥沙利铂缓释微球和奥沙利铂小鼠皮下给药对动物的半数致死量（LD50）。结果PLGA-奥沙利铂缓释微球小鼠皮下给药时的LD50为660.90 mg/kg,奥沙利铂小鼠皮下给药时的LD50为15.24 mg/kg,相差达43.37倍。结论PLGA-奥沙利铂缓释微球能够显著降低药物对动物的急性毒性。     

奥沙利铂对子宫内膜癌HEC-1A侵袭转移的影响

目的研究奥沙利铂对人子宫内膜癌细胞HEC-1A侵袭转移的影响。方法体外稳定培养HEC-1A细胞株系,用不同浓度奥沙利铂(40、80、160μg/ml)给药72h后,采用Transwell法测定奥沙利铂对HEC-1A侵袭能力的影响,重组基底膜试验测定奥沙利铂对HEC-1A粘附能力的影响,划痕试验检测奥沙利铂对HEC-1A迁移能力的影响。结果与未处理对照组比较,奥沙利铂(40、80、160μg/ml)明显抑制HEC-1A侵袭性,提高侵袭抑制率(P0.01),显著降低肿瘤细胞的迁移能力(P0.01),降低HEC-1A粘附程度(P0.01)。结论奥沙利铂有效抑制子宫内膜癌细胞继发性侵袭及转移,从而发挥抗癌作用。     

重组人类生长激素对胃癌细胞的体外增殖研究

目的：通过体外实验,研究重组人类生长激素对胃癌细胞的增殖的影响。方法：实验分为空白组,重组人类生长激素组,奥沙利铂组和重组人类生长激素＋奥沙利铂组。用不同浓度的重组人类生长激素处理SGC．7901细胞,采用MTT法和流式细胞仪检测人胃癌细胞株的细胞抑制率,细胞周期和DNA抑制率。结果：体外实验结果表明,重组人类生长激素对SGC．7901细胞株增殖没有明显的促进作用,重组人类生长激素组和空白组以及重组人类生长激素＋奥沙利铂组和奥沙利铂组之间没有统计显著性（P〉0．05）,细胞抑制率和停止生长的细胞在G0-G1期明显增加（P〈0．01）,同时重组人类生长激素＋奥沙利铂组和空白组以及奥沙利铂组在S期,细胞数依次下降,DNA抑制率依次增加。重组人类生长激素＋奥沙利铂组与奥沙利铂组相比,细胞抑制率有明显上升趋势。结论：体外实验表明,重组人类生长激素并不加快人类胃癌细胞的增殖,与抗癌药物一同使用时,有增加治疗功效的作用。     

重组人类生长激素对胃癌细胞的体外增殖研究

目的:通过体外实验,研究重组人类生长激素对胃癌细胞的增殖的影响。方法:实验分为空白组,重组人类生长激素组,奥沙利铂组和重组人类生长激素+奥沙利铂组。用不同浓度的重组人类生长激素处理SGC-7901细胞,采用MTT法和流式细胞仪检测人胃癌细胞株的细胞抑制率,细胞周期和DNA抑制率。结果:体外实验结果表明,重组人类生长激素对SGC-7901细胞株增殖没有明显的促进作用,重组人类生长激素组和空白组以及重组人类生长激素+奥沙利铂组和奥沙利铂组之间没有统计显著性(P>0.05),细胞抑制率和停止生长的细胞在G0-G1期明显增加(P<0.01),同时重组人类生长激素+奥沙利铂组和空白组以及奥沙利铂组在S期,细胞数依次下降,DNA抑制率依次增加。重组人类生长激素+奥沙利铂组与奥沙利铂组相比,细胞抑制率有明显上升趋势。结论:体外实验表明,重组人类生长激素并不加快人类胃癌细胞的增殖,与抗癌药物一同使用时,有增加治疗功效的作用。     

伊立替康联合奥沙利铂治疗可降低晚期结直肠癌的近期不良反应发生率

观察伊立替康联合奥沙利铂在治疗晚期结直肠癌中的近期不良反应发生率。收集2009年4月至2015年10月在我院住院接受治疗的晚期结肠癌患者42例。随机分成两组,每组21例,观察组为伊立替康联合奥沙利铂,对照组为奥沙利铂联合亚叶酸钙、5-氟尿嘧啶。主要观察指标为治疗效果及近期不良反应事件。结果显示,伊立替康联合奥沙利铂在治疗晚期结直肠癌的总体疗效上与对照组无统计学差异;近期总体不良反应发生率23.8%,显著低于对照组总体不良反应发生率57.1%,其中以消化系统和血液系统不良反应为主。伊立替康联合奥沙利铂治疗晚期结直肠癌的近期总体不良反应发生率相对较低,在临床上应用过程中需要注意消化系统和血液系统相关的不良反应的发生。     

miR-93通过靶定PTEN基因增加肝癌细胞对奥沙利铂的耐药性

微小RNA（miRNA）参与了肿瘤的耐药过程.本研究通过建立对奥沙利铂 (oxaliplatin,Oxa)耐药的肝癌细胞系BEL-7402/Oxa和Hep-3B/Oxa,利用miRNA芯片结合实时荧光定量PCR的方法,筛选得到数个参与肝癌细胞对奥沙利铂耐药的miRNA 分子,其中miR-93表达增加最为明显.MTT实验发现,增加肝癌细胞株中miR-93的表达可以增强其对奥沙利铂的耐药性.进一步结合生物信息学、荧光报告载体及免疫印迹实验,证实miR-93通过靶定抑癌基因PTEN增加肝癌细胞对奥沙利铂的耐药性.总之,肝癌耐药细胞系的建立及其miRNA差异表达谱的分析,以及miRNA分子对肝癌细胞发生奥沙利铂耐药的具体作用及其分子机制的研究,不仅有助于理解肝癌细胞发生耐药的分子机制,而且为探索克服肝癌对奥沙利铂耐药性的有效途径提供可靠依据.     

注射用奥沙利铂制剂安全性评价

目的:评价注射用奥沙利铂冻干粉针制剂的安全性。方法:血管刺激性实验:主要观察家兔耳缘静脉注射注射用奥沙利铂后48 h和2周的耳局部血管变化;溶血性实验:观察本品在4h内有无溶血和聚集现象;全身过敏性实验:四组豚鼠隔日腹腔注射注射用奥沙利铂、5%卵蛋白或5%葡萄糖溶液,每大组随机分成二小组,第一组于首次注射后第14天,第二组于首次注射后第21天,静脉注射本品,观察30 min内动物的变化。结果:注射用奥沙利铂对家兔血管无刺激作用,家兔红细胞无溶血现象,豚鼠未见过敏反应。结论:实验结果表明注射用奥沙利铂安全可靠。     

二甲双胍联合奥沙利铂抑制胃癌细胞SGC-7901的增殖和诱导凋亡

探讨体外培养的人胃癌细胞株SGC-7901经由二甲双胍与奥沙利铂联合处理后增殖和凋亡的响应及药物作用机制。采用CCK-8增殖检测法检测药物处理下对细胞的增殖影响并计算出两种药物的IC50值。采用RT-PCR、Western blotting以及流式细胞术检测药物作用下SGC-7901细胞周期相关和凋亡相关蛋白的mRNA水平、蛋白水平和凋亡水平。实验结果显示,二甲双胍和奥沙利铂单独作用都能够抑制SGC-7901细胞的增殖,联合用药组较单独用药组对细胞的抑制率更高。二甲双胍和奥沙利铂单独作用都能够抑制SGC-7901细胞cyclin D1的mRNA和蛋白水平,药物联用后,对细胞cyclin D1的抑制表达效果更明显。与对照组相比较,二甲双胍和奥沙利铂单独作用均能显著诱导SGC-7901细胞发生凋亡(p0.01),联合用药组亡率((50.13±10.75)%)明显高于单独用药的二甲双胍组((35.06±9.17)%)和奥沙利铂组((42.59±11.98)%)。二甲双胍和奥沙利铂单独都能够抑制SGC-7901细胞中抗凋亡蛋白Bcl-2的mRNA和蛋白表达水平,并增加促凋亡蛋白Bax以及凋亡执行caspase3的mRNA和蛋白表达水平,而联合用药组中这种调控效果更加显著。二甲双胍与奥沙利铂能够抑制胃癌细胞的增殖并诱导细胞发生凋亡,可能是通过促进Bax和caspase3的表达,抑制cyclin D1和Bcl-2表达来实现的。     

ASPP2增强结肠癌HCT116细胞对奥沙利铂的化疗敏感性

为研究ASPP2对奥沙利铂诱导的结肠癌细胞系HCT116 p53+/+(野生型)凋亡及周期的影响.利用ASPP2（rAd-ASPP2）及p53腺病毒（rAd-p53）感染HCT116 p53+/+细胞,经奥沙利铂50 μmol/L诱导细胞凋亡及周期改变.Western印迹检测ASPP2及p53的表达水平;MTT法检测ASPP2腺病毒对奥沙利铂诱导的HCT116细胞活性的影响;Calcein/PI吸收试验检测细胞凋亡情况;流式细胞术分析细胞周期分布. 结果显示,ASPP2、p53共同过表达,或者ASPP2单独过表达均能增强奥沙利铂诱导的HCT116 p53+/+细胞增殖抑制,以及S期抑制并伴有细胞凋亡水平的升高;而无奥沙利铂诱导时,ASPP2对HCT116 p53+/+细胞的活性、细胞周期及细胞凋亡水平的影响无统计学意义. 上述结果表明,ASPP2能够增强奥沙利铂诱导HCT116 p53+/+细胞的增殖抑制、细胞周期抑制和细胞凋亡.     

耐奥沙利铂人胃癌SGC-7901细胞具有高侵袭转移性及上皮间质转化特征

目的探究耐奥沙利铂人胃癌SGC-7901细胞株生物学特性与上皮问质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)之间的关系。方法采用体外奥沙利铂低浓度逐渐递增法间断作用人胃癌SGC-7901细胞株,建立耐药细胞株;通过形态学、MTT法、Transwell实验分别检测SGC-7901细胞株和耐药细胞株的形态特征、增殖能力、药物敏感性和侵袭转移能力;通过免疫荧光染色检测波形蛋白、上皮钙粘附分子在两组细胞株之间的表达差异。结果与原代SGC-7901细胞株相比,耐奥沙利铂细胞株呈间质样细胞表型,增殖能力减弱,对奥沙利铂敏感性明显降低;转移侵袭能力增强;波形蛋白水平上调,上皮钙粘附分子水平下降。结论耐奥沙利铂人胃癌SGC-7901细胞株增殖能力减弱,但具有高侵袭性及EMT特征。     

奥沙利铂联合卡培他滨治疗中老年晚期结肠癌的临床效果

目的探讨奥沙利铂联合卡培他滨治疗中老年晚期结肠癌的临床效果。方法将我院2016年11月～2017年11月收治的104例中老年晚期结肠癌患者按照入院先后顺序分为对照组和观察组,每组各52例。对照组给予奥沙利铂治疗,观察组给予奥沙利铂联合卡培他滨治疗,对比两组患者治疗后不良反应发生情况,治疗效果以及治疗前后功能状态评分情况。结果观察组患者治疗后不良情况发生率明显低于对照组(P0.05),观察组患者治疗后的疾病控制率及治疗有效率明显高于对照组(P0.05)。两组患者治疗前的功能状态评分比较,差异无统计学意义(P0.05);治疗后,观察组患者的功能状态评分情况明显高于对照组(P0.05)。结论奥沙利铂联合卡培他滨治疗中老年晚期结肠癌的效果良好,不良反应低,值得临床应用。     

替吉奥联合奥沙利铂及多西紫杉醇治疗晚期胃癌的临床疗效和安全性评估

目的:观察替吉奥联合奥沙利铂及多西紫杉醇治疗晚期胃癌的近期疗效,并对其用药安全性进行评估。方法:选取2010年8月—2012年8月在我院接受治疗的晚期胃癌患者68例,随机分为对照组和观察组,每组34例。对照组患者采取5-FU+奥沙利铂+多西紫杉醇进行治疗,而观察组患者给予替吉奥+奥沙利铂+多西紫杉醇进行治疗,比较两组患者接受不同药物治疗所得到的近期疗效及不良反应的发生情况。结果:观察组治疗的总有效率为58.82%,而对照组治疗的总有效率为32.35%,观察组明显高于对照组,差异显著,具有统计学意义(P0.05);观察组患者治疗后的不良反应发生率为8.82%,而对照组患者治疗后的不良反应发生率为32.35%,观察组明显低于对照组,差异显著,具有统计学意义(P0.05)。结论:替吉奥联合奥沙利铂及多西紫杉醇治疗晚期胃癌疗效显著,不良反应少,患者耐受良好,值得进一步推广和应用。     

血清TAP、TFF3与晚期胃癌患者含奥沙利铂化疗方案敏感性和预后的关系

摘要 目的：探讨血清肿瘤异常蛋白（TAP）、三叶因子3（TFF3）与晚期胃癌患者应用含奥沙利铂化疗方案敏感性和预后的关系。方法：选择2017年1月至2020年1月河北大学附属医院收治的115例晚期胃癌患者,所有患者接受含奥沙利铂化疗方案治疗,根据疗效分为敏感组（47例）和耐药组（68例）。化疗前检测血清TAP、TFF3水平,受试者工作特征（ROC）曲线分析TAP、TFF3预测晚期胃癌患者接受含奥沙利铂化疗疗效的价值。治疗后随访,Wilcoxon检验不同血清TAP、TFF3表达下晚期胃癌患者中位OS时间差异。结果：耐药组血清TAP、TFF3水平高于敏感组（P＜0.05）。TAP、TFF3预测晚期胃癌患者含奥沙利铂化疗耐药的曲线下面积分别为0.717、0.690,联合TAP和TFF3预测晚期胃癌患者含奥沙利铂化疗耐药的曲线下面积为0.801,高于单独TAP、TFF3单独检测。随访期间失访2例,死亡54例,高水平TAP、高水平TFF3晚期胃癌患者中位OS时间短于低水平TAP、低水平TFF3晚期胃癌患者（P＜0.05）。结论：对含奥沙利铂化疗耐药的晚期胃癌患者血清TAP、TFF3水平显著增高,高水平TAP、TFF3晚期胃癌患者中位OS时间较短,联合检测血清TAP和TFF3可预测晚期胃癌患者化疗反应性和预后。     

结直肠癌奥沙利铂化疗耐药机制的研究进展

结直肠癌是临床最常见的肿瘤之一。目前国内外对中晚期结直肠癌的患者仍以手术为主,化疗为辅的综合治疗方案。2017年NCCN指南推荐含有奥沙利铂的FOLFOX、Cape OX方案是一线化疗方案,但近一半患者因化疗耐药而致生存率降低。因此,寻找肿瘤细胞对化疗的耐药靶点进而提高化疗疗效,成为结直肠癌化疗亟待解决的关键性问题。同时在精准医学时代,寻找特异性的分子标志物也将成为研究热点。本文将对有关奥沙利铂化疗耐药机制、逆转及精准医学应用的新进展进行综述。     

XPG基因多态性与奥沙利铂治疗晚期胃癌疗效相关性的研究

目的:研究人着色性干皮病G组(XPG)C46T与奥沙利铂治疗晚期胃癌敏感性的关系.方法:用REAL-TIMEPCR技术检测92例晚期胃癌患者外周静脉血DNA的XPG基因的单核苷多态性(SNP)分型.比较三种基因型与奥沙利铂化疗后患者的2周期化疗临床疗效、中位疾病进展时间(TTP)的关系.结果:92例患者的C/C、T/T、C/T基因型分别为51.09%(47/92)、38.04%(35/92)、10.87%(10/92),C/C与T/T+C/T基因型2周期临床获益率和中位TTP分别为76.59%、6个月和53.33%、4个月,C/C基因型的临床获益率和中位TTP均优于T/T+C/T基因型.结论:XPG基因多态性与奥沙利铂疗效之间存在相关性,其检测结果可以指导胃癌选择奥沙利铂化疗.     

奥沙利铂联合替吉奥胶囊治疗晚期大肠癌患者的临床疗效

目的:探讨奥沙利铂联合替吉奥胶囊治疗晚期大肠癌患者的临床疗效。方法:非盲法随机对照方法将患者分成试验组和对照组,各27例。试验组患者使用奥沙利铂联合替吉奥胶囊治疗,对照组患者使用奥沙利铂治疗,均为4个周期。评价两组治疗后的临床疗效和不良反应。结果:试验组:CR 1例,PR 11例,SD 10例,PD 5例。(CR+PR)RR 44.4%。中位疾病进展时间(TTP)9.5个月,中位生存期(MST)19.1个月。对照组:CR 0例,PR 5例,SD 8例,PD 15例。(CR+PR)RR 18.5%。中位疾病进展时间(TTP)8.6个月,中位生存期(MST)16.9个月。主要不良反应为血液毒性、胃肠道反应、外周神经炎及肝功能异常。试验组白细胞下降15例,对照组12例,试验组贫血发生为13例,对照组的为21例,试验组恶心、呕吐发生为18例,对照组为24例,试验组便秘发生为8例,对照组为15例,差异有统计学意义(P0.05)。结论:奥沙利铂联合替吉奥胶囊治疗晚期大肠癌患者相比单独使用奥沙利铂更加有效,更具优越性,不良反应更少,患者的生存质量得以改善,值得临床上推广应用。     

热疗联合奥沙利铂对SW480细胞增殖和凋亡的影响

目的:观察奥沙利铂联合热疗对人结肠癌细胞SW480增殖及凋亡的影响,确定联合用药的效果,为临床方案提供参考。方法:采用MTT(四唑盐)法检测热疗、奥沙利铂及联合用药对细胞增殖的影响;瑞士吉姆萨染色法观察细胞形态;流式细胞仪检测细胞凋亡和周期;Western blot检测Bax、Bcl-2以及Caspase8蛋白表达量变化;q PCR检测Bax、Bcl-2以及Caspase8 m RNA的积累。结果:热疗联合奥沙利铂可以显著抑制细胞增殖,与对照组相比,热疗组、化疗组、联合组细胞凋亡率分别为16.2%、20.5%和36.1%,具有显著性差异(P0.01);细胞学形态中,热疗组细胞发生皱缩,化疗组细胞膜破裂;化疗将细胞阻滞在G2/M期,热疗和联合组将细胞阻滞S期;Western blot和qPCR显示Bax/Bcl-2比值上升,Caspase8表达量增加,联合组三种蛋白的表达量均与对照组具有显著性差异(P0.01)。结论:热疗联合奥沙利铂可以显著促进细胞凋亡,提高治疗效果,为结肠癌的治疗提供参考。