重组蛋白质纯化技术

90年代以来 ,基因重组技术得到很大的发展 ,基因工程产品的分离纯化的成本约占其全部成本的 6 0 %～ 80 %,因此重组蛋白的分离纯化技术越来越重要。着重介绍了扩张柱床吸附层析技术 ,径向膜层析技术 ,灌注层析技术 ,液液萃取技术 ,置换层析技术和金属螯合亲和层析技术近年来进展情况以及它们的优缺点和应用范围。     

双水相体系逆流色谱技术在蛋白质分离中的应用

双水相体系逆流色谱技术结合了逆流色谱的高效率、高制备量以及双水相体系适于蛋白质分离的特点,因此在蛋白质的分离方面具有独特的应用价值。本文综述了近年来基于正交轴逆流色谱仪器的双水相体系逆流色谱技术在多种蛋白质分离中的应用。并对一些新兴的蛋白质逆流色谱分离技术及新型逆流色谱柱分离系统进行了介绍。     

蛋白质分离纯化方法的研究进展

蛋白质作为生命物质基础之一,存在于自然界中复杂的混合体系中。蛋白质在细胞中的含量极低,将其从复杂体系中分离出来并保持其活性,难度较大,因此分离纯化蛋白质的方法受到生命科学领域广泛关注。本文首先阐述了蛋白质的预处理,其次阐述了蛋白质分离纯化的各种方法如沉淀、层析、离心等,重点阐述了蛋白质新纯化的各种原理,以及每种方法的适用范围。有助大家更全面、更彻底的了解蛋白纯化技术的发展,以期为今后开展蛋白质的制备及应用提供一定理论依据和实验指导。     

大鼠附睾蛋白质组的提取和二维液相色谱分离

背景与目的：提取犬鼠附睾液蛋白并建立一种利用二维液相色谱法分离附睾蛋白组的方法。方法：分离提取犬鼠附睾液蛋白。样品利用起始缓冲液置换后,进行一维色谱聚焦分离,然后收集pH8．5—4．0之间的组份进行二维反相离压液相色谱分离,最后将获得的二维UV图通过ProteoVue软件转换成PI／UV图谱。结果：成功提取了附睾液蛋白,并通过二维液相色谱成功建立了大鼠头体尾部附睾液蛋白的二维PI／UV图谱,收集了一维色谱聚焦分离的pH8．5—4．0区间的20个组份,并将每个组份进行二维色谱分离后转换为PI/UV图谱。结论：为进一步全面研究附睾蛋白功能和体液差异蛋白质组研究打下了基础。     

分离纯化对蛋白质活性的影响

在分离纯化中,蛋白质或多或少的受到与生理条件极不相同的溶液环境的有害影响。此影响也是蛋白质纯化过程中的一个最大问题之一。因而,在蛋白质的具体纯化过程中分析其活性受影响的主要因素以及采取一些相应的措施来对蛋白质的活性进行保护,只有这样才能提高蛋白质的纯度和活性回收率,降低生产成本,保证产品质量。     

分离纯化中蛋白质的不稳定性及其对策

分离纯化出高纯度有生物活性的蛋白质一直是一项艰巨的工作,在基因工程药物蛋白质的生产中,收率低和纯度低是亟待解决的关键问题。这里除了生物组份复杂、难以分离外,许多目标蛋白质自身活性的丧失也是一个重要原因。由于药物蛋白质昂贵的市场价格,回收率稍有提高就有可能带来巨大的经济效益,所以,有关蛋白质在分离纯化中的失活及其对策在近来受到了极大的关注。１９９７年第十届欧洲生物技术大会上,蛋白质的稳定被单称列为一     

高效亲和膜色谱快速分析及小量制备蛋白质

以甲基丙烯酸缩水甘油酯纤维素复合膜为基质,分别以蛋白A(Protein A)、人免疫球蛋白G(HIgG)、三嗪染料(Cibacron blue F3GA)、亚胺二乙酸铜离子为配基,用不同方法制备了适合于分析及小量制备的高效亲和膜色谱介质,并对高效亲和柱的基本性能及其应用于各种相应蛋白的定量测定情况进行了考察。利用这种方法可以针对不同的目标蛋白及所存在的环境采用不同的配基,对各种蛋白的定量测定及小量制备可达到较为满意的结果。     

生物色谱分离技术在生物技术产业化中的作用

色谱分离技术是生物产品的分离纯化的核心技术。目前,95％以上的生物制品、75％以上的天然产物和80％以上的海洋药物是通过色谱分离技术完成的．该技术决定着生物制品和中药现代化产品的生产成本。因此．色谱分离技术就成了生物技术产业化和中药现代中的关键和核心技术．多年的实践也证明这是我国通过开放市场换不来的技术。     

蛋白质纯化技术研究进展

蛋白质组学研究的基础就是蛋白质的分离。对于天然蛋白来说,可能需要一系列的纯化步骤才能获得纯度满足研究要求的蛋白质,但是蛋白质在分离过程中常常由于溶液环境变化或外力作用造成构象变化而引起失活。本文首先介绍了常用的蛋白质分离纯化技术及其研究进展,包括膜分离技术、沉淀分离技术、电泳分离技术以及层析分离技术等常用的蛋白质纯化技术,总结了现有技术存在的问题,并对近年来发展的新型蛋白质分离技术--非对称流场流分离技术进行了介绍和展望。     

分离纯化中蛋白质的不稳定性及其对策

分离纯化出高纯度有生物活性的蛋白质一直是一项艰巨的工作。在基因工程药物蛋白质的生产中,收率低和纯度低是亟待解决的关键问题。这里除了生物组份复杂、难以分离外,许多目标蛋白质自身活性的丧失也是一个重要原因。由于药物蛋白质昂贵的市场价格,回收率稍有提高就有可能带来巨大的经济效益,所以,有关蛋白质在分离纯化中的失活及其对策在近年来受到了极大的关注。1997年第十届欧洲生物技术大会上,蛋白质的稳定被单独列为一个专题。1999年在加拿大召开的第九届生物产品回收技术会议也对蛋白质的稳定性进行讨论。目前重点探索的是蛋白质失活的机制,采取相应的对策以保护活性,并在分离纯化中采用高效的分离纯化技术缩短操作周期,提高产物的活性回收率。     

蛋白质的染料亲和色谱分离纯化

介绍了三嗪染料配基亲和色谱(包括高效亲和色谱)分离纯化蛋白质的基本原理和方法,并介绍了染料亲和色谱固定相制备方法及应用的最新发展。     

内含肽介导的新型蛋白质纯化技术

内含肽（intein）的自切割功能在蛋白质工程领域有着广泛的应用,尤其是在蛋白质纯化方面,将内含肽与亲和纯化技术联合应用,使得传统的亲和纯化方式有了重大的突破。近年来,随着内含肽的研究不断深入,一批内含肽介导的新型蛋白质纯化技术不断出现。新技术依靠内含肽的自切割功能去除亲和标签,避免了传统工艺中因外加蛋白酶而带来的诸多麻烦;新的聚合材料的引入又成功地避开了亲和树脂柱的使用,不仅优化了工艺,也大大降低了纯化的成本,为在工业化大生产中的应用奠定了基础。     

高效离子交换色谱测定蛋白质的微不均一性生物经济

本文展示了使用生物兼容色谱系统和高分辨离子交换模式分离蛋白质变异体的例子,使用专门设计用于蛋白质分离的阴阳离子交换色谱柱来分离OVA．合成的BSA．酪蛋白的磷酸化蛋白变异体？核糖核酸酶A和单克隆抗体的脱氮基化变异体？以及单克隆抗体的C-末端赖氨酸．酸性和碱性变异体,与早期那些通过优化洗脱液和或分离程序的工作相比,从这些例子可以看到现在的分离状况有显著改进。     

高速逆流色谱结合制备液相色谱分离纯化桂枝中化学成分

本文首次采用高速逆流色谱结合高效液相色谱的方法对桂枝正丁醇相进行分离纯化。首先,以石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水(8∶2∶6∶4,v/v)为高速逆流色谱溶剂系统,将桂枝正丁醇萃取相分为两个馏分,然后结合制备高效液相,共分离得到4个高纯度化合物。通过核磁共振波谱鉴定其化学结构,分别为香豆素(1)、反式-邻甲氧基桂皮酸(2)、桂皮酸(3)、反式-桂皮醛(4),这四种化合物纯度经高效液相检测均大于95%。该方法简便、快速、节省溶剂,可以对桂枝正丁醇相进行快速有效的分离纯化,具有较好的实用价值,为桂枝资源的进一步开发应用提供了技术和物质支持。     

内含肽介导的新型蛋白质纯化技术

内含肽(intein)的自切剖功能在蛋白质工程领域有着广泛的应用,尤其是在蛋白质纯化方面,将内含肽与亲和纯化技术联合应用,使得传统的亲和纯化方式有了重大的突破.近年来,随着内含肽的研究不断深入,一批内含肽介导的新型蛋白质纯化技术不断出现.新技术依靠内含肽的自切割功能去除亲和标签,避免了传统工艺中因外加蛋白酶而带来的诸多麻烦;新的聚合材料的引入又成功地避开了亲和树脂柱的使用,不仅优化了工艺,也大大降低了纯化的成本,为在工业化大生产中的应用奠定了基础.     

一种黑豆蚜储存蛋白质的分离纯化及其亚基的性质

从黑豆蚜 (AphiscraccivoraKoch)血淋巴中经DE5 2纤维素离子交换层析、SephadexG 15 0凝胶过滤以及在FPLC上QSepharose分离出一种蛋白质。该蛋白质经SDS PAGE测定在非还原和还原条件下分子量均为 6 0kD左右 ,等电聚焦电泳测得其等电点约为 5 .0 ,为糖蛋白。若蚜期间该蛋白质在蚜虫体内积累 ,羽化至成蚜时含量明显减少 ,为蚜虫提供发育所需氨基酸 ,在成蚜期间仍以低浓度存在。根据其分子量和氨基酸组成与含量变化动态应属不完全变态昆虫的一种持续性储存蛋白质。     

高速逆流色谱技术在生物大分子分离纯化中的应用

高速逆流色谱是一种连续液-液色谱技术,具有无固相载体、样品无需严格预处理等优点。近10年来,在设备结构和溶剂体系等方面进行了大量的研究开发,已推广应用于生物技术、医药、天然产物、环境监测、食品等领域。为适应生物大分子和活性细胞的分离,采用条件温和的双水相体系,研究开发相应的高速逆流色谱设备已成为热点。针对双水相体系的特点,已经开发出了多种具有较高固定相保留率的新型高速逆流色谱设备,通过优化实验条件,成功地进行了多种蛋白质的分离纯化。本对该领域的最新进展进行了综述与评价。     

蛋白的色谱复性及同时纯化

对近年来新发展的用液相色谱(LC)进行蛋白质复性及同时纯化的方法做了评述,详细介绍了蛋白质在4种液相色谱上的复性及同时纯化的方法、设备和影响因素,并对各自的优缺点进行了比较,为色谱法作为研究蛋白质折叠及用于基因工程生产治疗蛋白质的复性及同时纯化技术的进一步应用提供依据。     

蛋白质复性技术

重组蛋白质的过表达常导致其在胞内发生错误折叠和聚集,形成被称为包含体的聚集体。因此,蛋白质复性是许多基因重组蛋白质药物生产过程的重要步骤。本文简要介绍包含体提取、纯化和溶解工艺,重点阐述蛋白质复性技术,包括稀释复性、稀释添加剂、人工分子伴侣、柱色谱复性和反胶团溶解复性等。最后展望蛋白质复性技术的发展和应用,特别是荷电介质对同电荷蛋白质复性的促进作用。