培养基组成对树状多节孢(Nodulisporium sylviforme)紫杉醇产量的影响

采用正交试验法 ,研究了醋酸钠、苯丙氨酸、酪氨酸、亮氨酸对紫杉醇产生菌HQD3 3 产生紫杉醇的影响。结果表明 ,它们之间的协同作用对提高紫杉醇产量有显著影响。在改良的S - 7培养基基础上 ,再加入醋酸钠 1 0g/L、苯丙氨酸 5 0mg/L、酪氨酸 1 5mg/L、亮氨酸 6 0mg/L ,可以使紫杉醇产生菌HQD3 3 产生紫杉醇产量提高到 2 0 3 6 5 6 μg/L。     

紫杉醇产生菌HQD33的鉴定

通过对紫杉醇产生菌HQD33的群体形态和菌丝、分生孢子梗、产孢细胞、分生孢子等个体形态的研究,确定了HQD33的分类地位,为树状多节孢.     

产紫杉醇菌株原生质体诱变育种的研究

对紫杉醇产生菌NCEU-1的原生质体进行了紫外线和氯化锂复合诱变,筛选制霉菌素抗性突变株,共筛选出了4株正突变株。经发酵筛选试验,获得了一株遗传性状稳定、高产紫杉醇的原生质体诱变菌株——UL_04-5,其紫杉醇产量从出发菌株的314.07μg/L提高至418.24μg/L。     

氦氖激光、紫外复合诱变天麻素产生菌华根霉LN-A的原生质体

本文通过研究酶组合、酶浓度、酶作用时间和菌龄等因素对天麻素产生菌华根霉(Rhizopus chinensis) LN-A原生质体制备和再生的影响, 总结出了原生质体制备和再生的最佳条件: 选用对数生长期的菌株, 以蜗牛酶5 mg/mL + 纤维素酶5 mg/mL + 溶菌酶2 mg/mL 30°C保温处理2 h, 原生质体形成率达5.8×107, 原生质体再生率为5.7%。在此基础上首次利用He-Ne激光、紫外线复合诱变天麻素合成菌的原生质体, 当选用15 mW的He-Ne激光辐射原生质体20 min, 再用紫外辐照150 s时获得了转化率及天麻素得率都明显提高的突变株, 其天麻素得率比出发菌株提高20%以上。     

紫杉醇高产菌株的原生质体诱变选育及其遗传变异初探

以紫杉醇产生菌NCEU_1为出发菌株,分别采用紫外线和紫外线与氯化锂复合诱变方法对其原生质体进行诱变,获得了两株高产紫杉醇的突变株———UV4 0 - 1 9和UL50 - 6 ,其紫杉醇产量从出发菌株的314 0 7μg L分别提高至376 38μg L和392 6 3μg L ;同时,又采用RAPD和同工酶技术对出发菌株NCEU_1与两高产株UV4 0 - 1 9和UL50 - 6 间的遗传差异进行了研究。结果表明,出发菌株与诱变菌株之间以及两诱变菌株之间都存在明显差异,为进一步研究与紫杉醇合成相关基因及诱变株产量提高的分子机制奠定了基础     

γ-亚麻酸产生菌的原生质体诱变育种

为了提高深黄被抱霉产生γ－亚麻酸的量,对原生质体进行了紫外线诱变,实验表明采用紫外线（UV）照射45s,可获得高产突变株,突变株MH₂₃、MH₁₈和MX₂₆分别比对照株M_6－22的γ－亚麻酸产量提高了70．7％、54．1％和53．6％．表明用原生质体进行诱变处理是较好的方法．     

碱性普鲁兰酶产生菌的原生质体制备与诱变选育

研究报道了Bacillus sp SX—12原生质体制备与再生最佳条件。实验表明,在液体完全培养基中加入2％的甘氨酸培养10h,原生质体制备最佳条件为：溶菌酶浓度0．5mg／mL,酶解温度37℃,酶解时间1．5h时原生质体形成率为93．8％。原生质体形成最佳高渗稳定剂为甘露醇,再生率26．4％。在原生质体制备的最佳条件下,用紫外线诱变技术选育产碱性普鲁兰酶的高产菌株。筛选到1株高产菌株SX—12C87,酶活由出发菌株的2．42μ／mL提高到6．87μ／mL,提高了约1．8倍。     

面包酵母原生质体的制备、再生及紫外线诱变的初步研究

对面包酵母原生质体制备、再生的适宜条件进行了研究,并对原生质体进行了扫描电镜紫外线诱变。结果表明：对数生长早期的细胞的形成原生质体用１％蜗牛酶＋０．１％β－疏基乙醇酶解６０ｍｉｎ、９０ｍｉｎ,原生质体的形成率地生率分别为４．３１％和０．４％,用０．６ｍｏｌ／Ｌ甘露醇作渗稳地,原生质体的于生效果最佳,０．５ｍｏｌ／Ｌ蔗糖次之。电镜观察表明酵母菌的细胞壁是逐步被降解的。通过紫外线诱变原生质体获得了１株     

紫杉醇产生菌的细胞总核酸提取

树状多节孢（Nodulisporium sylviforme)为中国新记录属种,首次发现它可产生特效抗癌药物紫杉醇,国内外尚未见其DNA提取等方面的研究报道。为了获得高质量的DNA,利用单因素试验对其细胞总核酸的提取方法进行了探索。找到了一套适合紫杉醇产生菌DNA的提取较为简便易行可靠的方法。用此法直接从紫杉醇产生菌中提取DNA,并将所提取DNA进行随机引物扩增（RAPD）,得到了较清晰的扩增图谱。     

树状多节孢酸性磷酸酶的分离纯化与性质研究

树状多节孢Nodulisporium sylviforme是从东北红豆杉Taxus cuspidata分离、可产生紫杉醇的内生真菌。研究以树状多节孢为材料,利用液体发酵手段获得菌丝体,通过CM-cellulose阴离子交换柱层析、Q-Sepharose阳离子交换柱层析和FPLC凝胶过滤层析（Superdex 75）,获得纯化的树状多节孢酸性磷酸酶蛋白（Nod-ACP）。结合FPLC和SDS-PAGE分析,判定该磷酸酶为分子量44kDa单亚基蛋白。酶学性质研究表明,其最适pH值为3.0,最适温度为58℃。6     

香菇多糖产生菌的原生质体诱变选育

对香菇原生质体进行不同时间紫外线照射诱变,实验结果表明：采用紫外线照射120S,可获得高产突变株,该突变株BM－43的多糖产量由出发菌株B15的235mg/100ml提高到278.75mg/100ml,产多糖能力提高了18.62%,经连续传代3次,产多糖能力仍保持稳定。说明原生质体诱变5技术用于大型真菌多糖高产菌株的选育是一条行之有效的途径。     

原生质体诱变选育无孢平菇

用紫外线照射紫孢侧耳(Pleurotus sapidus)双核菌丝原生质体,再生后筛选生长势好的菌株, 通过出菇试验得到了生产性状与紫孢侧耳一致的无孢和少孢平菇新品种。Abstract: This paper reported isolation and regeneration of the dikaryocyte protoplasts from Pleurotus sapidus, and the protoplasts were treated by U.V-irradiation for selection spore less mutants.     

不同因素对两株细菌原生质体制备的影响

为了获得较多的原生质体用于原生质体融合,进行了酶解时间与浓度、稳定剂、菌龄、pH值等因素对革兰氏阳性菌株芽胞杆菌KR和革兰氏阴性菌株假单胞菌B13的原生质体制备影响的研究,结果表明:在以0.6mol/L蔗糖为稳定剂,pH8.0,溶菌酶浓度8mg/ml,37℃,酶解80min的条件下,芽胞杆菌KR原生质体得率为31.6%;在以.0.6mol/L NaCl为稳定剂,pH7.0,溶菌酶浓度6mg/ml,37℃,酶解45min假单胞菌B13原生质体得率最高,为95.2%。     

树状多节孢诱变株与出发株间同工酶差异初探

为了探索紫杉醇产生菌发酵产生紫杉醇的机理,对紫杉醇产生菌树状多节孢HQD33和经LiCl、紫外线诱变产生的紫杉醇产量正突变的HQD33诱变菌株(P50-2、P1-6、P5-8、L30-2、L50-4)的同工酶和蛋白质(如:过氧化物酶同工酶、脂酶同工酶、淀粉酶同工酶、过氧化氢酶同工酶以及可溶性蛋白和游离组蛋白)的电泳图谱进行了分析,结果显示:除过氧化氢酶同工酶以外其它酶和蛋白质的电泳图谱都有不同程度的改变。可初步推断,诱变使紫杉醇产生菌的分子生物学背景发生了变化,由于遗传背景的改变导致了产生菌细胞内部蛋白质和同工酶的变化,可进一步认为紫杉醇的产生与试验所选的同工酶和蛋白质有一定的相关性。     

猴头菌原生质体分离条件研究

系统地探讨了猴头菌原生质体分离的条件,结果表明:用0.6 mol/L氯化钾配制成含1%纤维素酶和0.5%蜗牛酶的复合酶,在30℃,pH 5.5时酶解3 h,可得到最多的原生质体,为以后进行猴头菌的原生质体诱变及融合打下了基础。     

温莪术内生真菌Gibberella moniliformis EZG0807诱变及其诱变株遗传稳定性研究

利用大梯度超导磁体(JMT-16T50F)模拟失重和超重环境对温莪术内生真菌Gibberella moniliformis EZG0807进行诱变,以期得到代谢产物活性高、遗传稳定性好的菌株。诱变24 h、48 h和72 h后,通过稀释涂布平板法得到139株诱变菌株;经滤纸片抑菌法初筛和MTT法抗肿瘤细胞活性实验复筛,筛选出高活性诱变菌株M7226。采用群体传代的方法考察菌株M7226十代以内菌株的生长状况和次级代谢产物抗菌抗肿瘤活性的能力。结果显示活性内生真菌EZG0807经大梯度超导磁体诱变,筛选得到一株代谢产物活性高、遗传稳定性好的诱变菌株M7226,为后续次级代谢产物的分离纯化奠定基础,同时此法为真菌诱变育种提供了一种新的可供选择的方法。     

水稻原生质体制备条件的优化及其细胞壁变化的快速检测

以疣粒野生稻和栽培稻02428的成熟种子为材料,对愈伤组织的诱导和继代、胚性悬浮细胞系建立、原生质体制备、再生细胞团分化及植株再生进行研究。结果表明：（1）水稻愈伤组织诱导的最佳2,4-D浓度为0.014 mmol/L;（2）胚性悬浮细胞系建立的最佳条件为AA 悬浮培养基+ 0.009 mmol/L 2,4-D ,每25 mL液体培养基加入0.4 g愈伤组织的初始接种量,7 d的继代周期;（3）原生质体制备的最佳条件为20 g/L纤维素酶+ 1 g/L果胶酶,酶解5 h,800 r/min离心5 min;（4）用荧光增白剂（VBL）细胞壁染色液可以快速、准确的检测原生质体制备及培养过程中细胞壁的变化情况。