沙打旺原生质体培养再生植株

用1%半纤维素酶,0.4%纤维素酶,0.1%果胶离析酶,CPW9M酶液分离沙打旺无菌苗下胚轴和子叶原生质体。K8P原生质体培养基悬滴培养。下胚轴原生质体形成小细胞团后用琼脂糖包埋培养,形成小块愈伤组织后转入增殖培养基M1、M2(改良MS培养基)上形成大块愈伤组织。经过两次诱导分化,在分化培养基M3(MS 0.7mg/L BA 0.2mg/L NAA),M4(MS 0.5mg/L BA 0.5mg/L KT 0.5mg/L ZT 0.2mg/L NAA)和M6(MS 3mg/L ZT 0.2mg/L IAA)上分化出苗,再生植株。由子叶分离的原生质体未能形成愈伤组织。     

陆地棉胚性愈伤组织原生质体的制备,培养及植株再生

以陆地棉栽培品种“鲁棉６号”下胚轴的胚性愈伤组织为材料,制备并培养原生质体。采用继代培养７￣９ｄ、活力旺盛的胚性愈伤组织,在１％纤维素酶、１％果胶酶、０．７ｍｍｏｌ／Ｌ ＫＨ２ＰＯ４、２．５ｍｍｏｌ／Ｌ Ｃａ＾２＋、０．５ｍｏｌ／Ｌ甘露醇、ｐＨ５．８、３０℃的条件下,具活力的原生质体得率最高。经分离纯化后,原生质体在含有０．４５ｍｏｌ／Ｌ葡萄糖的Ｋ３无机盐、ＮＴ有机物并附加０．１ｍｇ／Ｌ,２,４－     

沙打旺悬浮培养细胞原生质体的体细胞胚胎发生再生植株

Protoplasts from 4-day-old embryogenic cell suspension cultures of Astragalus adsurgens, when cultured in KM8P medium which ammonium concentration was reduced to 2.5 mmol/L and supplemented with 0.5 mg/L NAA, 1.0 mg/L 2, 4-D, 0.7 mg/L BA and 0.4 mol/L glucose, underwent cell sustained divisions and formed cell colonies at a frequency of 16%-20%. Preplasmolysis or low temperature treatment of suspension cells prior to enzyme incubation enhanced colony formation. Following proliferation on MS medium containing 1.0 mg/L 2, 4-D and 0.5 mg/L BA, cell colonies were cultured on MS medium containing 0.1 mg/L NAA and 1.0 mg/L BA, where approximately 40% of colonies produced somatic embryos ranging in number from 20 to 40 per colony. No significant decrease was found in the potential of somatic embryogenesis when protoplast colonies were obtained from long-term cell suspensions. On hormone-free 1/2 MS medium, somatic embryos developed into intact plants, which showed normal morphology and stable chromosome number.     

南蛇藤原生质体培养及植株再生

以4℃低温暗处理24 h的南蛇藤胚性愈伤组织为分离原生质体的原材料,用MS培养基进行液体浅层静置、固液双层以及琼脂糖包埋培养原生质体,获得再生愈伤组织并分化成苗,建立了原生质体培养体系。结果表明,低温暗处理利于高产率高质量原生质体的获得;0.5%纤维素酶+0.5%果胶酶+5 mmol.L-1MES为酶的最佳配方;12 h为最佳酶解时间;13%为甘露醇最佳浓度;静置12 h+振荡0.5 h为最佳酶解方式;液体浅层静置培养取得了较好的原生质体培养效果;MS+6-BA2.0 mg.L-1+IBA 0.1 mg.L-1为愈伤组织最佳分化培养基;1/2MS+NAA0.1 mg.L-1为最佳生根培养基。     

黄瓜胚性细胞悬浮培养及其原生质体的植株再生

黄瓜子叶原生质体来源的胚性愈伤组织,在液体培养中形成胚性悬浮细胞系,已继代两年,仍保持胚胎发生能力,不同的ABA和蔗糖浓度对胚状体的生长发育和同步化有明显影响。1mg/l的ABA和7－9％的蔗糖能显著地减少培养物的愈伤化,并同步地控制胚状体处于球形或球形后期,低浓度的蔗糖（1％）有利于胚状体的早期萌发,继代3－5天的胚性是浮细胞团酶解后,获得大量有活力的原生质体,原生质体在DPDK,液滴或浅层培养,或褐藻酸钠包埋培养中活跃分裂,形成细胞团和球形胚,转至固体培养基上或将包埋培养物直接转入液体振荡培养,胚状体可不断增殖,胚状体在大量元素减半,不加外源激素的MS培养基上发育成小植株。     

峨参原生质体的体细胞胚同步化发生及植株再生

用峨参茎节来源的胚性愈伤组织,在含1.5%纤维素酶Onozuka R-10+0.5%果胶酶Macerozyme R-10+0.5%蜗牛酶+5mmol/L CaCl_2+0.6mol/L甘露醇+0.3%葡聚糖硫酸钾,pH5.8的酶液中游离原生质体,培养在改良MS培养基中,内含激素1mg/L2,4-D+0.5mg/L玉米素,并附加0.3%琼脂糖。第10天分裂频率达40—50%。此后振荡培养1个月,细胞团移至含0.5mg/L 2,4-D及渗透压降低的MS培养基中大量繁殖,然后再移至无激素或含0.1mg/L玉米素的MS培养基中进行分化,得到大量的球形胚,并且同步化达90%,70%的球形胚在10—15天后同步发育为心形胚,以后继续发育为鱼雷胚及子叶胚,最后形成完整植株。并讨论了获得大量同步化发生的体细胞胚的原因。     

结球白菜下胚轴原生质体培养及其体细胞胚植株再生

结球白菜(Brassica campestris ssp. pekinensis)的原生质体培养由于基因型依赖性强, 细胞易褐化,愈伤组织的芽诱导率低等而难于再生植株。本实验以结球白菜的下胚轴原生质体为试材, 研究了影响其细胞分裂及愈伤组织形成的因素, 探索了经过体细胞胚发生途径获得再生植株的技术。结果表明, 试材的基因型及培养基组成影响细胞分裂及褐化; KM8P是结球白菜原生质体培养更适宜的培养基, 能显著减轻细胞的褐化; 液体培养基中一定浓度的活性炭能在一定程度上减轻细胞褐化进程, 并有利于星状细胞团的形成; 基因型Asko中, 愈伤组织形成体细胞胚的结构, 其发生的频率约为5%, 该类体细胞胚能全部顺利地发育成完整植株。本技术具有再生植株形成容易、频率较高且通过体细胞胚发生途径等优点。     

结球白菜下胚轴原生质体培养及其体细胞胚植株再生

结球白菜（Brassica campestris ssp．pekinensis）的原生质体培养由于基因型依赖性强,细胞易褐化,愈伤组织的芽诱导率低等而难于再生植株。本实验以结球白菜的下胚轴原生质体为试材,研究了影响其细胞分裂及愈伤组织形成的因素,探索了经过体细胞胚发生途径获得再生植株的技术。结果表明,试材的基因型及培养基组成影响细胞分裂及褐化;KM8P是结球白菜原生质体培养更适宜的培养基,能显著减轻细胞的褐化;液体培养基中一定浓度的活性炭能在一定程度上减轻细胞褐化进程,并有利于星状细胞团的形成;基因型Asko中,愈伤组织形成体细胞胚的结构,其发生的频率约为5％,该类体细胞胚能全部顺利地发育成完整植株。本技术具有再生植株形成容易、频率较高且通过体细胞胚发生途径等优点。     

沙打旺悬浮培养细胞原生质体的体细胞胚胎发生再生植株(英文)

以继代培养5—24代的沙打旺(Astra-galus adsurgens Pall.)胚性悬浮系为材料,从生长4d的细胞培养物中可游离出大量有活力的原生质体。细胞预质壁分离或低温预处理对原生质体得率和活力没有影响,但可提高原生质体培养的植板率。预处理的原生质体培养在NH_4NO_3浓度降至2.5mmol/L,并附加0.5mg/L NAA、1.0mg/L 2,4-D、0.7mg/L BA和0.4mol/L葡萄糖的KM8P培养基中,经持续分裂形成细胞克隆,植板率高达16%—20%。细胞克隆在附加1.0mg/L 2,4-D和0.5mg/L BA的MS培养基中增殖后,转至含0.1mg/L NAA和1.0mg/L BA的MS分化培养基中可形成体细胞胚,平均体细胞胚发生频率约为40%,每个克隆产生20—40个体细胞胚。在无激素的1/2MS培养基中,体细胞胚发育成形态正常和染色体数稳定的小植株。     

野牛草成熟胚离体培养及植株再生

1植物名称野牛草[Buchloe dactyloides(Nutt.)texoka]. 2材料类别成熟胚. 3培养条件(1)愈伤组织诱导培养基:MS 2,4-D1.5～6.0 mg·L-1(单位下同) 6-BA 0.1 脯氨酸1 000 水解酪蛋白(CH)500 谷氨酰胺500 α-酮戊二酸100 硫代硫酸银(STS)5;(2)愈伤组织继代培养基:MS 3/2MS(有机) 2,4-D 2.5 6-BA 0.1 CH1 000 聚乙烯吡咯烷酮(PVP)200或维生素C(vC)200;(3)再生培养基:不附加任何植物生长调节物质的MS基本培养基(MS0).所有培养基中均添加3%蔗糖、0.56%琼脂,pH 5.8.愈伤组织诱导及继代培养为暗培养,不定芽分化及植株再生过程中光照12 h·d-1,光照度为1 500lx,培养温度为(25±1)℃.     

大蕉(Musa paradisiaca ABB Linn.)花序愈伤组织的诱导及其体细胞胚发生

大蕉未成熟雄花接种到胚性愈伤组织诱导培养基中,4～5个月后可诱导出胚性愈伤组织,并可在继代培养基上增殖.胚性愈伤组织转移到体细胞胚诱导培养基中可诱导出体细胞胚.体细胞胚在成熟培养基上培养2个月后转移到含有0.2mg·L-1 6-BA的分化培养基上可以萌发,进而形成再生植株.组织学切片证明所诱导的愈伤组织是胚性组织,其所产生的体胚具有典型的单子叶植物体细胞胚的组织结构.     

胡桃楸胚性愈伤组织诱导与体细胞胚胎发生

胡桃楸是东北东部山地阔叶红松林的重要组成树种。因其被大量采伐,资源日趋枯竭。体细胞胚胎发生是快速繁殖和人工种子研制的基础,对遗传改良有重要意义。为探讨不同外植体、植物生长调节物质种类及配比对胡桃楸培养物的影响,建立了胡桃楸体胚发生及再生植株体系。结果表明:合子胚为外植体时最易形成胚性愈伤组织,外植体最佳取材时期为5～6月。胡桃楸胚性愈伤组织最适诱导为MS+1.0mg·mL-12,4-D+0.5mg·mL-16-BA;体细胞胚的诱导、发育和分化的适宜的培养基为附加蔗糖60g.L-1、水解酪蛋白700mg·mL-1时不添加任何生长调节物质的MS培养基。     

长白落叶松体胚发生再生体系优化

以长白落叶松(Larix olgensis)未成熟合子胚为外植体诱导胚性愈伤组织, 通过调节影响体胚发生的营养物质和植物生长调节剂配比, 进行愈伤组织的胚性恢复与保持以及体胚发生再生体系的优化。结果表明: 不同无性系之间胚性愈伤组织诱导率差异显著, 胚性愈伤组织在S+0.2 mg·L ^-1NAA+0.5 mg·L ^-1BA+0.5 mg·L ^-1KT+0.5 g·L ^-1谷氨酰胺+0.5 g·L ^-1水解酪蛋白+30 g·L ^-1蔗糖及3.0 g·L ^-1植物凝胶培养条件下, 可以恢复胚性并长久保持。在S+20 mg·L ^-1ABA+60 g·L ^-1PEG₄₀₀₀+60 g·L ^-1蔗糖及3.0 g·L ^-1植物凝胶条件下分化培养6周, 体胚发生率可达100%。将正常发育的体胚先在WPM+ 6 mg·L ^-1间苯三酚+1.0 g·L ^-1活性炭+3.0 mg·L ^-1VB₁+20 g·L ^-1蔗糖及3.0 g·L ^-1植物凝胶条件下培养2周, 再转接至B₅+ 0.4 mg·L ^-1NAA+1.0 mg·L ^-1IBA+0.5 mg·L ^-1GA₃+2.0 mg·L ^-1VB₁+1.0 g·L ^-1活性炭+20 g·L ^-1蔗糖及3.0 g·L ^-1植物凝胶条件下培养2周, 可见子叶舒展、下胚轴伸长且根系正常的体胚苗。该研究建立了长白落叶松胚性愈伤组织胚性恢复与保持方法, 并进一步优化了体胚发生的植株再生体系, 为林木资源快速繁育和遗传改良奠定了基础。     

花楸合子胚诱导体细胞胚胎发生研究

分别以完整成熟胚、切去一个子叶的成熟胚和切下的子叶为外植体,以MS为基本诱导培养基、1/2MS为基本分化培养基,进行了花楸体细胞胚胎发生研究。结果表明:以完整合子胚作为外植体的体胚诱导率最高,为100%,最佳植物生长调节剂组合为5 mg.L-1NAA+2 mg.L-16-BA;NAA和6-BA浓度及二者的交互作用对愈伤组织和体胚诱导率的影响极显著;光照配合延长继代间隔时间有利于体胚发生。实体观察结果表明,花楸体胚发生方式有直接发生和间接发生两种;体胚发育经历了球形期、心形期、鱼雷形期和子叶期。组织学观察结果表明,体胚具有两极性,子叶期体胚结构完整。     

百合体细胞胚胎发生和植株再生

以切花百合(Lilium)品种‘黄天霸’(‘Manissa’)花器官为外植体诱导体细胞胚胎发生与植株再生。结果表明,不同花器官、不同激素配比对愈伤组织形成均具有显著影响。花丝为最佳外植体,激素对愈伤组织诱导的影响效应为NAA>6-BA>2,4-D,最适培养基为MS+1.0 mg.L-1NAA+0.2 mg.L-16-BA;激素诱导体细胞胚胎发生的影响效应为2,4-D>KT>6-BA,最佳培养基配方为MS+1.0 mg.L-12,4-D+0.2 mg.L-1KT+1.0 mg.L-16-BA;MS培养基添加IBA可促进体细胞胚萌发成苗,体细胞胚芽成苗的最佳培养基为MS+0.2 mg.L-16-BA+1.0 mg.L-1IBA。     

Plant regeneration from callus protoplasts of the forage legume Astragalus adsurgens Pall.

A reproducible release of viable protoplasts was obtained from friable calli of Astragalus adsurgens. Protoplasts underwent sustained divisions and formed cell colonies when cultured in either liquid or agarose-solidified Kao and Michayluk (1975) protoplast medium (KM8P) supplemented with 1.5 mg/l 2,4-D, 0.5 mg/l BA and 0.5 M glucose. Compared to liquid culture, agarose bead culture improved division frequency effectively, the two culture systems showing a plating efficiency of 0.8±0.5% and 6.5±0.7%, respectively. Upon transfer to Murashige and Skoog (1962) medium (MS) with 1–2 mg/l BA, alone or in combination with NAA or 2,4-D at 0.1 mg/l, the protoplast-derived calli produced complete plantlets through somatic embryogenesis. The maximum percentage of calli producing somatic embryos (52.5± 2.2%) occurred on MS medium containing 0.1 mg/l NAA and 1 mg/l BA, whereas the maximum number of calli regenerating plantlets (64.7±6.2) was obtained on MS medium with 0.1 mg/l NAA and 2 mg/l BA. Received: 25 April 1997 / Revision received: August 1997 / Accepted: 2 September 1997     

粗枝云杉胚性愈伤组织增殖后期的体细胞胚发生方式转变

粗枝云杉愈伤组织在增殖后期体细胞胚的分化能力显著降低,转变愈伤组织增殖方式和体细胞胚分化培养方式有利于体细胞胚发生能力的提高。采用液体悬浮增殖取代半固体增殖更有利于胚性的保持。在增殖后期,首选的体细胞胚发生方式为＂液体增殖-滤纸分化＂,其次为＂块状增殖-块状分化＂,最后是＂块状增殖-滤纸分化＂。     

鱼腥草体细胞胚胎发生和植株再生

目的:利用鱼腥草的叶片和叶柄为材料,进行体细胞胚胎诱导及植株再生研究。方法:运用正交设计试验,考察在改良的MS固体培养基上添加不同种类、不同浓度的植物生长物质组合及其配比对鱼腥草愈伤组织诱导、体细胞胚胎发生及植株再生的影响。结果:鱼腥草无菌苗叶片在含有2,4-D 1.0 mg/L 6-BA 0.5 mg/L的改良MS培养基上能诱导出胚性愈伤组织;胚性愈伤组织在含有6-BA 1.0 mg/L的改良的MS培养基上诱导体细胞胚的发生;叶柄在含有6-BA 1.0 mg/L改良MS培养基上直接产生体细胞胚。体细胞胚在改良的MS NAA0.1 mg/L 6-BA 1.0 mg/L的培养基上能够快速繁殖,形成大量不定芽,在不加任何激素的MS培养基上就可以萌发出不定根,发育为成完整植株,在MS IBA 1.0 mg/L的固体培养基上能够形成大量的根。结论:建立了鱼腥草体细胞胚胎发生及植株再生的体系。     

Somatic Embryogenesis in Leguminous Plants

Abstract: This review examines recent advances in the induction and development of somatic embryos in leguminous plants. Emphasis has been given to identify the current trends and successful strategies for the establishment of somatic embryogenic systems, particularly in the economically important species. It appears that, in legumes, somatic embryogenesis can be realized relatively easily especially in young meristematic tissues such as immature embryos and developing leaves. In the majority of the species examined, chlorophenoxyacetic acids remained the most active inductive compounds; however, the new generation growth regulators such as thidiazuron are emerging as successful alternatives for high-frequency direct regeneration of somatic embryos, even from well differentiated explant tissues. Low-frequency embryo production, poor germination and conversion of somatic embryos into plantlets and somaclonal variation are the major impediments limiting the utility of somatic embryogenesis for biotechnological applications in legumes. These limitations, however, may be considerably reduced in the near future, as more newly developed growth regulators with specific morphogenic targets become available for experimentation. From the published data, it is apparent that more effort should be given to develop repetitive embryogenic systems with high frequency of germination and regeneration, since such systems will find immediate application in mass propagation and other crop improvement programmes. As our understanding of various morphogenic processes, including growth and differentiation of zygotic embryos, is fast expanding, it is conceivable that development of highly efficient somatic embryogenic systems with practical application can be anticipated, at least for the important leguminous crops, in the foreseeable future.