分离植物原生质体的纤维素酶的制备及性质

EA_3-867纤维素酶是由绿色木霉变异株EA_3-867,用稻草粉发酵提取,经过饱和硫酸铵沉淀,分子筛脱盐,冰冻干燥制成的。酶制剂在水中溶解度高,酶活力较稳定,它含有纤维素酶(C_1,C_x)、果胶酶、半纤维素酶等组分,是一种比较理想的分离植物原生质体的复合酶。我们用EA_3-867酶制剂已从20多种植物材料中分离出大量完整的原生质体,并把烟草的叶肉组织或愈伤组织的原生质体培养分化成植株。EA_3-867纤维素酶制剂的成功制备为我国进一步开展植物原生质体和体细胞杂交等研究提供了有利条件。     

利用电场延长梨原生质体的存活力

据报道,置于电场下能促进原生质体的分裂、原生质体愈伤的生长和分化,及原生质体的再生成株.Hood学院和美农部的W.L.Hershberger和M.E.Hisniewski现已发现,电场处理能使通常分离后活力低的植物原生质体的存活力得以延长.     

薄层包埋法的改进

薄层包埋法是北京大学胡适宜教授的实验室最先将其应用到植物材料的制作中（胡适宜和徐丽云,１９９３）。它主要是针对一些植物样品如花粉、花粉管和细胞原生质体等在超薄切片制作中较难定位而设计的。由于该方法能准确定位,因而大大提高了这些样品的超薄切片效率和质量...     

植物原生质体的制备与活力检测研究进展

原生质体是进行植物遗传改良和细胞各种生理生化特性研究的平台.本文对近些年制备原生质体的材料选择、预处理、游离、纯化和活力检测等方面的研究进展进行了综述,分析了影响原生质体的分离和纯化的有关因素,并根据相关文献讨论了今后原生质体重点研究方向.     

几种植物原生质体的活力研究

酶法脱壁的成功为取得大量植物原生质体提供了一个很好的方法,从而为研究原生质体培养、细胞杂交及植物原生质膜等创造了有利的条件。然而,所制备的原生质体的活力与上述研究的成败至关重要。测定原生质体活力的方法有很多,其中以荧光素双醋酸酯染色法较好。     

粳稻杂交一代及其亲本的硝酸还原酶活力

本文以水稻4个杂交组合一代及其相应的亲本为材料,观察了杂交一代及其亲本的硝酸还原酶活力之间的关系。结果表明,杂交一代硝酸还原酶活力高低与其亲本硝酸还原酶活力高低有密切相关。即,亲本酶活力低与高或中与高的杂交一代酶活力同高亲,而中与中或低与中的杂交一代酶活力高于双亲,表现一定的杂种优势。     

我国商品糖化酶酶制剂中分解生淀粉糖化酶活力的比较

共收集国内有代表性酶制剂厂生产的糖化酶商品样２１份,测定其分解生淀粉糖化酶活力结果表明,万单位糖化酶含分解生淀粉糖化酶活力最高样品为１０８３８单位,最低为１０３９单位,平均为５４５０单位。取分解生淀粉糖化酶活力高、中、低的样品,进行了生淀粉吸附分离,并经凝胶电泳鉴定,其吸附的酶与测定的酶活力高低相符。     

菠菜原生质体游离与纯化的研究

以菠菜为实验材料进行原生质体分离、纯化、活力鉴定。结果表明:1.5%纤维素酶OnozukaR-10+1%果胶酶Pectolase+0.5mol/L甘露醇+CPW盐的酶液,酶解时间5h,菠菜原生质体的获得率高。纯化时,适当降低离心时间有利于原生质体纯化过程中产量及活力的保持,500r/min离心5min,效果较好。     

酿酒酵母原生质体的融合

原生质体融合技术开始于动植物细胞,特别是Willin等报道了PEG有助于高等植物细胞原生质体融合以后,这一技术广泛地应用于植物、微生物原生质体的融合和动物细胞的融合。原生质体的制备、培养、融合和发育为研究细胞分化、膜结构与功能、定向育种等生物学     

影响决明无菌苗子叶原生质体分离和培养因素的研究

以决明(Cassia obtusi folia)无菌苗子叶为材料,对酶组合、无菌苗日龄,植物激素组合和培养方法对其原生质体的分离和培养的影响进行了研究。结果表明:用3％的纤维素酶和0.2％Pectinase Y-23的酶组合处理决明无菌苗子叶块8小时可以高效分离出有活力的原生质体;约14日龄的决明无菌苗子叶比较适合于原生质体的分离;适当浓度的2,4-D 有利于原生质体的分离。促进原生质体分裂的理想的植物激素组合为0.4 mg/L 2,4-D,1.0 mg/L NAA and 0.1 mg/L KT;漂浮培养法最有利于原生质体的分裂和发育。找出了适合于决明无菌苗子叶原生质体的分离和培养的酶组合、植物激索组合、有效培养方法和决明无菌苗子叶日龄。这为有效地从决明无菌苗子叶原生质体再生植株奠定了基础。     

黄芪原生质体分离技术

以黄芪叶片和愈伤组织为材料,对黄芪原生质体的制备分离技术进行了研究。结果表明:采用黄芪叶片制备原生质体远远优于黄芪愈伤组织,能够获得大量高活力的原生质体;采用2%纤维素酶+0.5%半纤维素酶+0.5%果胶酶的混合酶水解12h就能达到较好的分离效果,获得高质量的黄芪原生质体,然后进行原生质体的培养。     

棉纤维细胞发育研究的进展

植物细胞壁的研究已有100多年的历史,最早人们研究的主要是植物细胞分裂过程中,两个子细胞间中胶层的新壁形成过程。直到60年代初,Cocking用酶法除去细胞壁获得有活力的原生质体后,开辟了细胞壁再生研究的新领域。棉纤维细胞、根毛细胞和花粉管等是供研究植物细胞壁用的特殊单细胞材料,具有许多优点。如棉纤     

植物原生质体的纯化

本文叙述了用改良离心管漂洗纯化原生质体中的细胞和亚细胞碎片的方法。在这方法中使用了一个通底的带有小细管的改良离心管。经过这种纯化,原生质体的产量是较高的。玉米(Zea mays L.)茎每克鲜重平均收获6.2×10~5个原生质体,矮牵牛(Petunia hybrida Vilm.)叶每克鲜重平均收获2.7×10~6个原生质体。纯化后植物原生质体的活力是较高的,当培养时,观察到玉米茎原生质体的细胞分裂;矮牵牛叶片原生质体进行了细胞分裂,并发育成愈伤组织,愈伤组织转移到分化培养基上长出了根。     

禾谷类原生质体培养研究及展望

禾谷类原生质体培养研究是植物生物技术的主要内容,也是重要基础之一。许多种遗传操作(体细胞杂交、细胞质重组、DNA直接摄入和转基因植株形成等)都依赖于原生质体的培养与再生。禾谷类植物是世界粮食作物的最主要来源,因而禾谷类原生质体培养也成为当今植物生物工程的主要目标之一。利用原生质体进行外源基因转移是禾谷类作物中少数几种能产生转基因植株的途径之一。遗憾的是,禾谷类原生质体特别难以培养,这方面进展很慢。最近三,四年来,通过利用胚性愈伤组织或胚性悬浮细胞系来分离原生质体这一方法,研究者们才相继在珍珠谷、羊草、紫狼尾草、水稻、玉米、小麦、大麦、甘蔗、谷子、高粱、小偃麦、鸭茅、羊茅、黑麦草和棒头草植物上获得了再生植株。但是,成功的培养方法仍是一     

火炬松胚性悬浮细胞原生质体的分离和培养

以火炬松成熟合子胚的胚性悬浮细胞为材料分离原生质体,研究了酶液组成,渗透压稳定剂和悬浮细胞生长对原生质体产量和原生质体活力的影响。     

基因组对芸苔属作物原生质体培养及植株再生的影响

本文以包心菜、芜菁油菜、浙油６０１的无菌苗叶肉原生质体为材料,经不同液体培养基浅层培养,细胞分裂并形成愈伤组织。愈伤组织经增殖后,转到分化培养基上诱导分化,均获得了再生植株。本文着重研究了植物基因组对原生质体分裂频率及植株再生的影响。研究结果表明：（１）植物基因组对原生质体分裂频率的影响随原生质体培养基的不同而异;（２）植物基因组对原生质体再生植株影响显著,芜菁油菜的Ａ基因组不利于原生质体再生植株     

香石竹原生质体再生的研究

香石竹(Dianthus caryophyllus L.)是一种受到世界性欢迎的观赏植物。香石竹的快速繁殖已有不少研究报告。为了寻找新颖的育种手段,培育新的品种,我们进行了该植物的原生质体培养。米益(Mii, et al., 1682)已对香石竹的原生质体培养作过报道,但他们所用的材料为叶肉原生质体。为期望得到更多变异的再生植株,我们选用愈伤组织做为游离原生质体的材料。     

不同冻存条件对甘蔗原生质体活力和再生能力的影响

为了获得活力高和再生能力强的甘蔗原生质体,该文对甘蔗原生质体的冻存液浓度、冻存温度和冻存部位进行了研究。结果表明:(1)不同的冻存液、不同的冻存温度和不同的取材部位原生质体冻存后复苏对甘蔗原生质体的活力影响有显著差异性,三个冻存液组合比较,在组合2(70%培养基+20%血清+10%DMSO),冻存30 d后复苏活力最强,高达72%;冻存90 d内复苏,-196℃液氮和-80℃冰箱冻存,甘蔗原生质体的活力差异不显著,活力均在75%以上,但90 d冻存后复苏,-196℃液氮冻存后复苏比-80℃冰箱冻存冻存后复苏原生质活力强;不同取材部位比较,幼叶冻存30 d后复苏所得原生质体活力较高(达79. 2%),茎尖冻存30 d后复苏所得原生质体活力仅为42.7%。(2)不同的冻存液和不同的冻存温度,细胞第一次启动分裂和形成细胞团的时间差异不显著,一般培养5～6 d,细胞壁基本形成完整,培养6 d后,细胞启动分裂,培养15 d后形成细胞团。不同的材料部位相比较,茎尖酶解所得原生质体再生能力最强,较幼叶酶解原生质体,形成细胞壁的时间早3 d,第一次分裂时间早2 d。     

霸王的原生质体培养的研究

目的：为利用原生质体融合技术转移霸王抗旱基因。方法：采用酶解法分离霸王原生质体,比较了霸王子叶和愈伤组织游离原生质体的产量和活力,不同渗透压和起始密度对原生质体分裂频率的影响。结果：愈伤组织游离的原生质体产量和活力均高于子叶,原生质体产率可达2.4×106个/g.FW,活力达89%。采用液体浅层培养,在附加2,4-D（2mg/L）、6-BA（1.0mg/L）、2%蔗糖和甘露醇（0.4mol/L）的DPD培养基中,原生质体分裂频率最高,达68.6%。转移到附加2-iP（3mg/L）、KT（1.0mg/L）、6-BA（1.0mg/L）的分化培养基上,获得2个再生苗。结论：采用酶解法游离霸王愈伤组织,可获得高活力和高分裂频率的霸王原生质体。     

拟南芥叶肉原生质体分离条件的优化研究

以野生型拟南芥(Arabidopsis thaliana,ecotype Columbia)无菌苗为材料,研究了叶肉原生质体分离过程中的预处理条件、酶解方式、酶解温度和离心力大小等因素对产量和活力的影响.结果表明,酶解方式和酶解温度对原生质体产量影响显著,28℃静置酶解14 h能够将原生质体产量提高6.32倍.低温预处理和离心力大小对原生质体活力影响显著,4℃低温预处理24 h能够将原生质体活力提高55%.适宜拟南芥原生质体叶肉细胞分离的最佳条件为:4℃低温预处理24 h,28℃静置酶解14 h,600 r·min-1离心3次,每次10 min,得到的原生质体产量为2.91×106个·g-1,活力为84.03%.