人胎盘滋养层细胞原代的体外培养与改进

目的:建立与改进纯度较高的适于实验研究的人绒毛膜滋养层细胞。方法:采用胰蛋白酶消化法消化人正常妊娠6～8周胎盘组织,以35%、45%2个Percoll密度梯度进行分离纯化,并用免疫组化及透射电镜等技术对其生物学特性、细胞内部结构进行观察。结果:胎盘组织中滋养层细胞角蛋白染色阳性,血管内皮细胞及基质成分波形蛋白染色阳性,经该法分离纯化的细胞角蛋白染色阳性者(滋养层细胞)占90%以上,透射电镜观察示所获细胞有典型滋养层细胞结构。结论:该法简便易行,可获得合乎实验要求的人滋养层细胞,可供后续实验研究。     

人早孕胎盘滋养层细胞的原代培养

众所周知,滋养层细胞在人胚胎的植入及胎儿的形成中起着至关重要的作用,滋养层细胞功能、状态的任何改变都与妊娠的疾病密切相关,甚至影响到胎儿的正常发育。滋养层     

人早孕胎盘绒毛膜滋养层细胞体外培养模型的建立

目的通过对早孕胎盘绒毛膜滋养层细胞的分离,纯化和培养,寻找一种稳定、简便可获得较高纯度滋养层细胞的培养方法。方法通过胰酶/DNA酶联合消化法对妊娠6-10周绒毛组织进行消化,获得单细胞悬液,比较Per-coll密度梯度离心和淋巴细胞分离液对滋养层细胞的分离纯化效果。含10?S的DMEM/F12培养基培养,并比较是否应用鼠尾胶原对细胞贴壁和生长的影响。通过免疫荧光方法对滋养层细胞进行鉴定。结果经简化Percoll密度梯度离心分离纯化的滋养层细胞纯度高,明显优于淋巴细胞分离液的分离效果(P<0.001);细胞生长表面预先经鼠尾胶原处理后,细胞贴壁良好,分裂生长旺盛。结论利用简化Percoll密度梯度离心法分离细胞,并在应用鼠尾胶原的条件下进行培养,可以获得满意的人绒毛膜滋养层细胞的体外培养模型。     

改良的高纯度人早孕绒毛膜滋养层细胞培养方法

目的培养纯度较高的人早孕绒毛膜滋养层细胞,为研究胎盘绒毛在妊娠期间的作用及其机制提供细胞学基础。方法胰蛋白酶-DNA酶消化法分离培养绒毛膜滋养层细胞,再运用流式细胞仪细胞分选获得高表达HLA-G的人早孕绒毛膜滋养层细胞。流式细胞术检测分选前后原代培养细胞HLA-G的表达率,相差显微镜观察滋养层细胞形态学特点,免疫荧光显微镜鉴定细胞来源,台盼蓝染色检测细胞活力。结果通过流式细胞检测,分选前的原代培养细胞体系中HLA-G的表达率为86.5%,经过分选带有PE荧光/HLA-G阳性表达的原代培养细胞后,其纯度可达98.0%。倒置相差显微镜下,可见细胞为上皮样细胞形态,呈片状铺展生长。细胞角蛋白染色阳性,波形蛋白染色阴性,表明细胞性质为上皮来源的绒毛膜滋养层细胞。台盼兰排斥试验检测细胞活力,细胞活力良好,存活率超过92%。结论该方法可以有效获得高纯度的,具有生物学活性的人早孕绒毛膜层细胞,为在体外研究生理妊娠及病理妊娠中滋养细胞的作用提供了一种改良的技术手段。     

促肾上腺皮质激素释放激素对人早期胎盘组织绒毛膜促性腺激素释放 …

为探讨人早期胎盘组织产生的促肾上腺皮质激素释放激素（ＣＲＨ）的生物学作用及其绒毛膜促性腺激素（ｈＣＧ）合成和释放的调控机制,在人早期胎盘组织体外孵育模型上研究了ＣＲＨ及其拮抗剂（α－ＨｅｌｉｃａｌＣＲＦ９－４１）对ｈＣＧ基础分泌和由ＧｎＲＨ刺激的ｈＣＧ分泌的影响。结果表明,１０＾－１０￣１０＾－７ｍｏｌ／Ｌ的外源性ＣＲＨ可明显抑制ｈＣＧ的基础释放,而以１０＾－７ｍｏｌ／Ｌ作用最显著;加入１０＾＝－     

肿瘤坏死因子对人滋养层干扰素α分泌的影响

目的和方法：本文采用人妊娠６～８周胎盘组织块的体外培养方法,通过检测干扰素免疫活性和抗病毒活性研究肿瘤坏死因子α（ＴＮＦα）对人滋养层干扰素（ＩＦＮ）分泌的影响。结果：ＴＮＦα可显著促进人滋养层ＩＦＮα的分泌,并呈剂量和时间依赖关系。同时各浓度的ＴＮＦα还可促进βＨＣＧ的分泌,并呈一定的剂量依赖关系。此外,我们还证明ＩＮＦα可显著抑制人滋养层细胞的生长,而ＴＮＦα则无明显作用。结论：ＴＮＦα可通过促进人滋养层干素α和βＨＣＧ的分泌,从而影响人胎盘的功能活动     

MMP-26 在人正常胎盘滋养层细胞中的表达及激活素 A 对其表达的调节

胚胎植入和胎盘形成涉及细胞外基质的降解和重建,以及细胞的增殖、凋亡、迁移和分化,基质金属蛋白酶 (MMPs) 是参与这些事件的主要蛋白水解酶系统 . MMP-26 是近年来发现的 MMPs 家族的新成员,但其功能所知甚少 . 通过半定量 RT-PCR 、免疫组织化学、荧光免疫细胞化学等手段,发现人胎盘中 MMP-26 主要定位于绒毛滋养层细胞,在绒毛间质细胞中也有少量表达 . 妊娠早期,胎盘中 MMP-26 表达水平较高,至妊娠中期降至最低,但在足月胎盘中其表达又有显著提高,提示 MMP-26 可能参与妊娠早期滋养层细胞的侵润和分娩时的胎盘剥离 . 体外培养的妊娠早期人细胞滋养层细胞能产生一定水平的 MMP-26 ,而其表达受到激活素 A 的剂量依赖性刺激,表明滋养层细胞中存在 MMP-26 表达的自分泌 / 旁分泌调节 .     

胎盘间充质干细胞的体外培养及其生物学特性研究

目的：探讨胎盘间充质干细胞（PMSCs）的体外分离和培养方法,建立稳定的PMSCs体外培养扩增体系。方法：将胎盘组织经胶原酶消化、密度梯度离心、贴壁筛选法分离,获得并培养人PMSCs,观察细胞形态及其超微结构;应用流式细胞术测定细胞周期及CD14、CD29、CD34、CD44、CD45的表达,研究其增殖和生长特性。结果：在体外培养条件下,人PMSCs贴壁生长,为成纤维细胞样,与骨髓间充质干细胞相似;CD14/CD34/CD45阴性,CD29/CD44阳性,核浆比大,细胞周期检测G0/G1期约占95%,具有原始细胞的特征。结论：体外获得的PMSCs形态单一、生长稳定、增殖能力较强,具有与骨髓间充质干细胞相似的细胞形态、表面标志。由于其来源方便、丰富,无伦理学限制,因此可进一步用于细胞治疗的研究。     

表皮生长因子，生长抑素对人早孕胎盘hCG分泌及基因表达的影响

观察了表皮生长因子（ＥＧＦ）,生长抑素（ＳＳ）对体外培养的人早孕绒毛膜促性腺激素（ｈＣＧ）分泌及ｈＣＧβ－ｍＲＮＡ含量的影响。发现ＥＧＦ可明显刺激绒毛分泌ｈＣＧ,显著增加ｈＣＧβ－ｍＲＮＡ含量,生长抑素虽然对绒毛ｈＣＧ分泌及ｈＣＧ　β－ｍＲＮＡ含量无明显影响,但可抑制ＥＧＦ,ＧｎＲＨ刺激的ｈＣＧ分泌及ｈＣＧβ－ｍＲＮＡ水平。提示ＥＧＦ,ＳＳ在妊娠早期参与了ｈＣＧ分泌的调节。     

胎盘屏障建立与维持的机制

胎盘是妊娠期维持胎儿正常生长发育和母亲健康的临时性器官,直接介导了母胎之间的对话。胎盘防御屏障功能的建立与维持是正常妊娠维持的重要基础,一方面,胎盘发挥了抑制母体对胎儿免疫排斥的作用,同时,胎盘需要抵抗致病微生物的感染。本文从胎盘发育的角度出发,从细胞学、免疫学等多重领域探讨了胎盘防御屏障建立及功能维持的细胞和分子机制,重点介绍了胎盘合体滋养层细胞抗感染的作用方式,包括细胞自噬、外泌体途径、细胞连接及细胞骨架等;同时介绍了胎盘屏障功能异常与子宫内感染尤其是TORCH致病微生物感染的致病关联。     

体外培养恶性滋养细胞P53蛋白表达与细胞生物学特性的研究

本文对23例恶性滋养细胞和19例正常早孕绒毛滋养细胞进行了原代培养。分别采用免疫组化、反转录PCR、放免法和酶联免疫吸附法,检测了体外培养滋养细胞P53蛋白和β-hCGmRNA的表达、β-hCG、hPL和IL-6含量的变化。体外培养的恶性滋养细胞中,细胞滋养细胞增生异常活跃,细胞核呈明显异型。恶性滋养细胞P53蛋白阳性表达,且阳性强度与正常早孕绒毛滋养细胞比较均有显著差异(P<0．01)。体外分泌β-hCG和IL-6的含量均显著高于正常滋养细胞(P<0．05)。P53蛋白的表达以及IL-6的分泌可能与恶性滋养细胞的异常增殖和低分化有关。     

南美香瓜梨离体培养快速复壮繁殖的研究

南美香瓜梨茎段被移植在ＭＳ基本培养基上,其中添加有ＢＡ６．０（ｍｇ／Ｌ以下单位相同）、ＩＢＡ０．２培养４周后增殖到３．８倍。用其嫩叶切块,在含有２,４—Ｄ０．５,ＢＡ０．２５的ＭＳ培养基上先诱导形成绿色愈伤组织,然后转入含ＢＡ６．０和ＩＢＡ０．２的ＭＳ培养基上,产生丛生不定芽。将２．５～３．０ｃｍ的不定芽切下移入含ＩＢＡ０．５与０．２％活性炭,１／２ＭＳ无机盐的培养基上,２５天后诱导生根,移栽成活率达９０％以上。     

促肾上腺皮质激素释放激素对人早期胎盘组织绒毛膜促性腺激素释放的调节作用

为探讨人早期胎盘组织产生的促肾上腺皮质激素释放激素（CRH）的生物学作用及其绒毛膜促性腺激素（hCG）合成和释放的调控机制,在人早期胎盘组织体外孵育模型上研究了CRH及其拮抗剂（α－HelicalCRF9-41）对hCG基础分泌和由GnRH刺激的hCG分泌的影响。结果表明,10-10～10-7mol／L的外源性CRH可明显抑制hCG的基础释放（P＜0.05）,而以10-7mol／L作用最显著（P＜0．001）;加入10-7mol／L的CRH4小时后,hCG释放量开始有所下降,但尚无统计学差异,到加药后8小时,CRH组已明显低于相应的对照组（P＜0．05）,以加药后16小时抑制作用最明显（P＜0．001）,到24小时抑制作用趋于减弱,但与同期对照相比仍有显著差异（P＜0．05）;10-7mol／L和10-5mol／L的α-HelicalCRF9-41可明显刺激hCG的分泌（P＜0.001）;2×10-7mol／L和2×10-6mol／L的α－HelicalCRF9-41可完全逆转CRH对hCG释放的抑制作用;2×10-9～2×10-7mol／L的CRH对由GnRH诱导的hCG释放有明显的抑制作用。这些结果提示,由胎盘的合体滋养层产生的CRH,通过受体介导机制,不仅对hCG基础分泌,且对由GnRH诱导的hCG分泌都有明显的抑制作用,且这种作用具有特定的时间依赖性和剂量依赖性．CRH可能是参与hCG分泌调控的生理性负调节团子之一.     

内毒素对人血小板聚集,释放的体外作用

大肠杆菌 O55B5内毒素在体外可抑制人血小板自发性聚集,并使血小板内 cAMP、钙调素明显增高,但对肾上腺素诱发的血小板聚集无作用,也不能引起血小板致密颗粒和α-颗粒的释放。此外还观察到内毒素组无血小板上清液中5-HT 含量减少。     

体外培养牛白细胞中环形泰勒焦虫(Theileria annulata)的增殖、释放与感染

在体外培养的牛外周血白细胞中,环形泰勒焦虫裂殖子与裂殖体寄生于宿主细胞的细胞质中,并且随着宿主细胞的分裂而分到两个子细胞中。焦虫染色质粒的分裂方式为二分裂,随着焦虫颗粒的不断增殖,逐渐发育为成熟的裂殖体。体外培养感染焦虫的牛白细胞可通过伪足与细胞裂解两种途径向培养液中释放焦虫颗粒。释放到培养液中的焦虫颗粒对体外培养的健康牛外周血白细胞具有感染能力,感染细胞能在体外连续传代培养。     

不同日龄小鼠的超排、体外授精及二细胞胚胎移植的比较研究(简报)

小鼠是现代生物医学中应用最为广泛的实验动物,特别是随着基因工程动物的大量开发,对小鼠卵母细胞和小鼠胚胎的需求量将日趋增多。但是如果单纯依靠动物的自然排卵,一方面所得到的卵母细胞数或胚胎数较少,一方面又消耗大量的时间和浪费较多的动物。因此,研究者期望使用较少的动物但仍能得到较多的、正常的卵母细胞或胚胎来满足生命科学研究的需要。Onadera,M等的研究表明,小鼠卵母细胞的发育与年龄有关,同一品系小鼠不同日龄间的自然排卵数差异不显著,出现异常卵的比例有显著性差异。但对不同日龄、不同品系小鼠的超排的效果尚     

体外诱发抗体生成过程中淋巴细胞的变化

为了了解体外抗体应答中T、B淋巴细胞的变化,以进一步阐明体外抗体应答的细胞学过程,并为完善体外免疫实验系统提供方向和依据,利用荧光激活细胞分选仪(FACS),在本实验室建立的人淋巴细胞体外免疫实验系统的基础上,对体外诱发抗体应答中淋巴细胞的变化进行了分析和研究,得到以下初步结果。一、T细胞所占比例的变化与设置培养物时细胞浓度相关,如果T细胞一开始占比例较大时,其变化为下降,否则其变化为上升。但最终都维持在30%上下。二、CD4~+(T辅助)细胞和CD8~+(T抑制)细胞的变化在扁桃体细胞和脾细胞中有所不同。在两周的培养过程中,前者无论加或不加C.M.(T细胞条件培液)或MTG(混合丝裂原),CD4~+细胞的比例均高于CD8~+细胞;而后者在加了C.M.或MTG后,CD8~+细胞的比例明显上升,但CD4~+细胞却有下降趋势。论文讨论了上述变化与免疫应答强度的可能关系。此外,亮氨酸甲酯(Leu-O-Me)的加入对CD8~+细胞没有影响。三、B淋巴细胞的变化,在培养两周过程中,无论扁桃体还是脾脏来源的细胞,B细胞富集的程度没有发生明显的变化,直至培养结束时,B细胞的比例仍维持在60%左右。T、B细胞间的比例也无明显变化,这表明所建立的体外免疫实验系统对B细胞的存活及其应答的诱发是适宜的。CD19~+B细胞的变化较为明显,其意义目前尚难推测。此外,一般认为CD5~+B细胞是一类分泌自身抗体的细胞,在培养过程中一直处于少数,未见增多。四、对于本实验中设置“框界”(“gating”)的合理性进行了讨论。     

8—MOP对体外培养人癌细胞的光敏灭活作用

本文根据MTT只能被活的增殖细胞中线粒体切断形成紫色甲(?)的原理,测定了8—甲氧基补骨脂素(8—MOP)对体外培养人癌细胞系HCT、KB和BEL细胞的光敏灭活作用。结果表明,8—MOP和UVA光照对这几种人癌细胞有肯定的灭活作用,该作用与8—MOP剂量和光照时间以及细胞种类有关;MTT法可以作为光敏剂活性检测的一种快捷方法。     

结球甘蓝离体下胚轴愈伤组织的维管组织及管状分子

结球甘蓝离体下胚轴培养初期,在切口较深层发现的维管组织结节,是由外植体维管组织衍化的。愈伤维管组织既可由愈伤薄壁细胞分化,也可由愈伤形成层分化。愈伤形成层向内分化导管分子,向外没有发现筛分子的分化。愈伤维管组织有不同的形态,起初常各不相连,后和外植体维管组织衔接。芽的再生起初和愈伤维管组织没有直接的联系,后原形成层自上而下分化,逐渐与愈伤维管组织相连接。不定根发生于维管组织结节的单向极性分化,始终