金桔组织培养中愈伤组织和芽形成的组织细胞学观察

用金桔茎段为外植体,培养在附加1.0毫克/升BA和0.l毫克/升IBA的MS培养基上,诱导愈伤组织和芽形成。观察了愈伤组织和芽形成过程中的组织细胞学变化。培养一周后,在茎组织切口两端开始膨大,细胞增大和开始分裂。培养两周后,开始形成瘤状愈伤组织。在愈伤组织中有形成层状分生组织、维管组织结节和分生细胞团。培养四周后,表层的分生细胞团分化形成大量芽原基,同时愈伤组织深层也出现分生细胞团。带节茎段可从切口两端的愈伤组织分化形成芽,亦可从叶腋的潜伏芽直接形成芽。     

油橄榄(Olea europaea L.)组织培养的细胞组织学研究 Ⅱ.组织分化和器官发生

油橄榄愈伤组织转入分化培养基进行继代培养后,在它外围部分的局部表面可以由愈伤形成层发生周皮。同时在它内部有星散的管胞和维管束分化,这些维管组织并不构成维管系统,与器官发生无任何联系。此外,愈伤组织内有由薄壁细胞不规则地发生胚性细胞,它具有分生细胞的性质,以它不同的细胞分裂形式,产生两种分生组织的结构,即分生细胞团和分生组织结节。分生组织结节形成生长中心而无任何分化,但可分化为维管组织结节,它有以形成层状细胞围绕着许多管胞的结构,在它具有单向极性时,从它发育成根原基,而芽原基则由愈伤组织近表面的分生细胞团分化形成。并初步观察到在愈伤组织中有再次胱分化的过程。对维管组织结节在构造上的差异和根与芽的起源问题,根据观察结果作了简要的讨论。     

几种木本植物组织培养的愈伤组织形成和器官再生

愈伤组织形成过程中,各个发育时期以细胞形态和代谢状况的变化为其特征。在诱导期或起动期,外植体伤口表面逐步通过回复变化转变为分生组织状态,表现为细胞核和核仁增大以及 RNA 的积累,其结果导致细胞的脱分化。之后,继以分裂期,其特征为 RNA 的大量积累和活跃的细胞分裂。这样,外层组织已完成起动,并已变为分生组织,就不能把分裂期认为回复变化或脱分化的时期。木本植物外植体表面普遍地可发生瘤状愈伤组织,它起源于距外植体切口较远的各个部分,特别包括表皮和下皮。愈伤组织培养中普遍地有分生组织结节的存在,它起源于个别薄壁细胞经脱分化而来。分生组织结节可继续分化为内部是管胞,外围形成层状细胞的维管组织结节。分生组织结节或维管组织结节在具有单向极性生长时形成根原基。不定芽一般从外生或内生的分生细胞团分化而来,但有时芽原基的分化与分生组织结节或维管组织结节相关联。     

朝鲜白头翁(Pulsatilla Koreana Nakai)不同组织的解剖结构研究

以朝鲜白头翁的叶片、叶柄和诱导的分生结节为材料,进行组织解剖结构研究。结果显示,朝鲜白头翁木质部细胞呈"V"字型排列,维管束呈三角形排列,外包有维管束鞘。分生结节的结构表明,初期的分生结节细胞排列较紧密,没有明显的内部结构;进一步培养,内部分化形成多个维管组织中心,染色较深的中心由垂周分裂的小细胞组成,周围分布着大小不等的导管细胞或管胞成分;维管束进一步分化发生器官分化,分生结节脱分化形成胚性愈伤组织并形成体细胞胚。     

番茄叶组织培养中愈伤组织形成和器官发生的细胞学和微形态学研究

以番茄叶外植体为材料,研究了不同的生长素和细胞分裂素及其浓度配比对叶外植体培养行为的影响;同时,利用细胞学和扫描电子显微镜技术观察了愈伤组织形成和器官发生过程。结果表明,不同种类及浓度配比的生长素和细胞分裂素直接影响愈伤组织的物理状态、大小和形成的速度以及器官分化的频率和速度。叶外植体切口处的叶肉细胞,维管薄壁细胞和维管束上方的少数叶肉细胞首先启动脱分化而开始分裂,这些细胞的活跃分裂和分化导致在外植体表层形成由薄壁细胞、维管组织和无分化状态的表层分生细胞团组成的愈伤组织。而不定芽则通过愈伤组织的薄壁细胞再次脱分化和再分化活动而形成,为“外起源”。认为存在由植物激素决定的“无分化活性”和“有分化活性”二种性质的愈伤组织。     

硝酸银与脱落酸相配合影响菜心离体培养之植株再生方式的组织学研究

菜心带子叶的子叶柄在培养基中是否添加ＡｇＮＯ３与ＡＢＡ可导致两种不同的植株再生方式：添加ＡｇＮＯ３与ＡＢＡ时由外植体直接出芽,而不加ＡｇＮＯ３与ＡＢＡ则植株再生经过愈伤组织阶段再分化成芽。培养１—３ｄ,子叶柄切口端之皮层及维管束的薄壁细胞开始启动,细胞迅速分裂而形成分生细胞团和少量愈伤组织。第４天,在不含ＡｇＮＯ３与ＡＢＡ的培养基上,分生细胞团则形成根原基进而发育成根;或者去分化形成愈伤组织。在这种条件下,只有少数芽原基可由培养１５ｄ后的愈伤组织再分化产生．在含ＡｇＮＯ３与ＡＢＡ的培养基上,分生细胞旺盛增殖而形成大量分生细胞团,并由这种分生细胞团直接形成大量的芽原基．１０ｄ左右即可产生为数众多的丛生不定芽．ＡｇＮＯ３与ＡＢＡ相配合抑制了不定根及愈伤组织的形成和生长,促进大量增生的分生细胞团直接分化为不定芽的芽原基．     

黄槐叶片培养过程中器官发生的研究

以黄槐（ＣａｓｓｉａｓｕｒａｔｔｅｎｓｉｓＢｕｒｍ．ｆ．）幼嫩叶片为材料,接种于ＭＳ＋ＮＡＡ１ｐｐｍ＋２,４－Ｄ１ｐｐｍ＋６－ＢＡ２ｐｐｍ的培养基上,诱导形成两种形态的愈伤组织,即致密愈伤组织与雪花状愈伤组织．将愈伤组织转移到ＭＳ＋ＮＡＡ：１ｐｐｍ＋６－ＢＡ２ｐｐｍ的分化培养基上．仅致密型愈伤组织经过球状体至不定芽途径形成大量再生植株。扫描电镜及组织细胞学观察表明,致密愈伤组织表层细胞排列紧密,有许多分生细胞团,而雪花状愈伤组织表层细胞薄壁化,分裂能力很低。球状体起源于致密愈伤组织表层的分生细胞团,其细胞有极强的分生能力,顶端可以分化发育成不定芽原基,最后形成不定芽并发育成小植株。球状体可以看成是具有形成不定芽能力的繁殖单位．     

牡丹愈伤组织发生和分生结节形成的细胞组织学研究

以牡丹‘Golden era’叶柄薄层为外植体,结合外部形态,对愈伤组织发生,并分化为分生结节过程进行了细胞组织学研究,为进一步研究牡丹不定器官分化、实现离体微繁殖奠定基础。结果表明:愈伤组织的发生与发育经历了启动、分裂、形成和组织分化4个时期。启动期,外植体束中形成层最先去分化,表现为形态上变暗,内部细胞核变大,淀粉代谢增强。细胞旺盛增殖的分裂期,先后于外植体形成层和皮层薄壁细胞处产生了愈伤组织,形成了质地紧实的愈伤增殖团,愈伤细胞体积小、质浓、核位于中心,且具有绕核积累的淀粉粒。形成期,愈伤组织增殖速度减缓,只有接触培养基的周缘愈伤组织仍在增殖。组织分化期,愈伤组织内部分化出维管单元,可以作为生长中心,有的是以特化的薄壁细胞为生长中心,外围核大、质浓的薄壁细胞层形成了具有再生潜能的分生结节。     

细枝木麻黄离体培养过程中愈伤组织和再生芽的细胞组织学观察

为探讨细枝木麻黄(Casuarina cunninghamianaMiq.)愈伤组织分化过程的细胞组织学,对离体培养条件下的愈伤组织进行扫描电子显微镜和石蜡切片观察,分析愈伤组织的细胞分裂、分化以及芽再生的发生过程。结果表明,新鲜外植体培养于愈伤组织诱导培养基上,伤口处的薄壁细胞开始脱分化,培养1周后形成明显的愈伤组织;继续培养2周后,胚性愈伤组织形成,且表层细胞启动分化形成芽原基;培养4周,可肉眼观察到胚性芽原基,数量增多并逐渐分化形成不定芽;培养至第6周,生成不定芽,并大量增殖和分化。因此,细枝木麻黄是通过愈伤组织分化形成胚状体的途径进行植株再生的,为建立细枝木麻黄组织培养高效再生体系提供了理论依据。     

愈伤组织形成过程中钙离子与激素诱导效应的关系

实验研究了在胡萝卜、烟草愈伤组织形成过程中,激素诱导作用与钙离子的关系。结果表明:在含有正常浓度的激素和Ca~(2+)的培养基中,0.1—1mmol/L Ca~(2+)螯合剂EGTA抑制愈伤组织鲜重增长78.0%—88.4%; 10—50μmol/L尼群地平及10—60μmol/L异博定等细胞膜钙通道阻断剂分别抑制愈伤组织鲜重增长19.1%—81.9%及17.6%—70.3%。除去上述Ca~(2+)螯合剂及Ca~(2+)通道阻断剂后,受抑制的外植体基本上可恢复生长。在无激素培养基中,10—30μmol/L Ca~(2+)载体A_(23187)可使外植体膨大,使外植体脱分化细胞增多,并出现分生细胞团,初步说明A_(23187)诱导的Ca~(2+)内流可以部分地模拟激素的作用。以膜显示剂氯四环素探测胞内Ca~(2+)分布时发现分裂细胞、脱分化细胞、分生细胞团及愈伤组织区域的细胞荧光较强。以上事实说明在愈伤组织形成中激素诱导效应与细胞内Ca~(2+)有密切关系。     

亚洲百合花丝离体培养器官形成的细胞形态学研究

对亚洲百合的花丝进行离体培养,并利用常规石蜡制片技术对诱导效果最好的材料进行细胞形态学观察,研究花丝在离体培养过程中器官形成的细胞形态学变化。结果表明:花丝在MS+BA0.5 mg/L+NAA0.5 mg/L的培养基上诱导效果最好。离体培养后其形态学下端切口内方的1～3层细胞首先启动脱分化,然后是内方的10～12层细胞,而其他部位的细胞自始至终未启动脱分化。亚洲百合的再生方式为器官发生型,器官通过胚性愈伤组织间接产生,在胚性愈伤组织团表面附近形成芽原基,或在胚性愈伤组织团内部形成根原基,有时同时分别在内、外形成根原基和芽原基后再通过维管组织连接成完整的植株。本研究为亚洲百合的人工调控提供基础理论依据。     

朝鲜白头翁分生结节的诱导与组织解剖学观察

以朝鲜白头翁(Pulsatilla koreana)的叶柄为材料诱导分生结节, 利用常规石蜡切片法和树脂包埋切片法研究了朝鲜白头翁离体形态发生的解剖学特点。结果表明: 叶柄在MS+3 mg⋅L^–1玉米素(zeatin, ZEA)+0.5 mg⋅L^–1吲哚乙酸(IAA)的诱导培养基上培养42天后, 分生结节诱导率为82.5%; 培养56天后, 95%的分生结节转化成不定芽。组织解剖结构观察结果显示, 培养7、14、28和42天时分别观察到前分生结节结构、形成层和拟分生组织结构、顶端分生组织、叶原基结构。朝鲜白头翁的不定芽起源于分生结节内部的维管中心。新分化芽基部类似愈伤组织的细胞团的显微切片结果显示, 基部组织上分布着表皮细胞或下表皮细胞、维管束形成层和拟分生组织细胞, 它们在朝鲜白头翁器官分化中发挥重要作用。     

石刁柏愈伤组织形态发生能力及器官发生的研究

石刁柏愈伤组织可分为4种类型。淡绿色、紧实、块状的愈伤组织(A)为典型的器官发生型愈伤组织,根和芽分化率高;绿白色、紧实、瘤状的愈伤组织(B)形态发生能力低;淡黄色、松散、颗粒状的愈伤组织(C)为典型的胚胎发生型愈伤组织,胚状体分化率高;而黄褐色、较松散、团块状的愈伤组织(D)无形态发生能力。器官原基起源于愈伤组织中具单极性的分生细胞团。芽的发生多为外起源,亦有内起源;根的发生多为内起源,亦有外起源。     

甘蔗原生质体的体细胞胚胎发生

用甘蔗(台糖134)花粉植株叶外植体产生的愈伤组织,作为分离原生质体的材料。原生质体以液体浅层培养的方式培养在修改的 MS 培养基上,经培养后一周内,观察到第一次细胞分裂,约5—6周后,形成了愈伤组织。将胚性细胞团组成的愈伤组织转移到除去或降低2,4-D浓度,但含有 BA 的分化培养基上,约2—3周后,有的愈伤组织发育了胚芽鞘,另一些愈伤组织分化出胚根或根。系统观察了这些原生质体在分裂和愈伤组织形成过程中的体细胞胚胎发生。     

烟草叶组织培养中愈伤组织和芽形成的细胞学观察

用烟草叶组织切块,培养在附加2毫克/升 NAA 和0.5毫克/升 BA 的 MS 培养基上诱导愈伤组织形成,以及在加有2毫克/升 BA 的培养基上诱导形成芽,研究了愈伤组织和芽形成过程中的组织细胞学变化。培养3天后,叶肉细胞增大,核染色加深,细胞积累淀粉;在叶切口处的叶肉细胞,维管束上方的栅栏组织细胞以及维管薄壁细胞开始分裂。随后细胞分裂逐渐遍及整个培养材料,其中以切口处的细胞分裂最为活跃。在栅栏组织中,由于细胞多次横向分裂的结果,形成排列整齐的细胞。叶肉细胞中叶绿体也随之逐渐减少,以至消失。培养7天后,在叶组织中即形成大量的分生细胞团,这种分生组织起源于两类细胞,即叶肉细胞,以及维管组织中的韧皮部薄壁细胞和维管束鞘细胞。在加有 NAA 和 BA 的培养基上,活跃细胞分裂的结果即导致形成愈伤组织。而在附加 BA 的培养基上培养10天,即可见分生细胞团进一步分化形成大量芽原基。芽可以起源于表层的分生细胞团,也可由组织较深处的分生组织分化而成。在芽形成的过程中,细胞中积累的淀粉逐渐被利用而消失。     

油菜幼苗下胚轴、根和子叶愈伤组织器官分化的初步研究

器官分化是植物生理学上的一个重要问题。油菜幼苗子叶、下胚轴和根外植体,培养在附加适当浓度的一种生长素的培养基上,能诱导产生愈伤组织。愈伤组织转至除去生长素的基本培养基上,能从子叶和下胚轴愈伤组织分化出不定芽(苗),进而从不定芽(苗)形成的茎的基部长根而形成完整小植株,但频率不高。如果在附加一种生长素的诱导愈伤组织培养基中,再加入适当浓度的一种细胞分裂素,不仅能加速下胚轴和根愈伤组织的产生,而     

甜菊叶愈伤组织诱导过程中叶绿体的超微结构变化

观察了甜菊(Stevia rebaudiana Bertoni)叶外植体愈伤组织诱导过程中叶绿体的超微结构变化。结果表明,当叶外植体转移到培养基上培养后,叶绿体的片层结构逐渐退化。在叶绿体发生退化的过程中伴有叶绿体出芽和原质体的形成。推测新产生的原质体来自叶绿体产生的芽状体。而叶绿体本身最后完全解体消失。叶绿体超微结构的这种变化与高度液泡化的叶肉细胞脱分化至分生状态是平行的。随着培养的进行,分生状态的细胞发生液泡化变为薄壁细胞时,在愈伤组织表层的细胞中,质体重新形成片层结构,而内部细胞的质体则充满淀粉粒。     

椰子幼花序离体培养的器官发生

椰子幼花序在改良的ＭＳ附加高浓度的ＮＡＡ与２,４－Ｄ的培养基产生愈伤组织,在逐渐降离ＮＡＡ和２,４－Ｄ浓度的过程中,愈伤组织产生结构紧密的结节组织,结节组织有输导组织,分生细胞团,根原基及不同发育阶段的胚状体,有些进而发育成正常的根和绿色芽状物,同时,某些幼花枝的基部直接长出绿芽,经继续培养形成具有正常根,叶结构的完整植株,但茎尖无顶端分生组织,无叶原基,有的发育成花枝,甚至在顶部长出几朵发育不正     

铁炮百合组培中不定芽形成的细胞学观察

以铁炮百合鳞片诱导的无菌苗叶段作外植体,在MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L培养基上诱导不定芽,效果较好。诱导过程中定期取样进行石蜡制片,观察不定芽分化过程中的细胞组织学变化。结果表明,脱分化始于切口周围的细胞;形态发生的主要方式是由愈伤组织分化出不定芽,不定芽通常起源于愈伤组织团从外到内第2~7层细胞的分生细胞团。     

枸杞原生质体培养及高效成株体系的建立

由枸杞髓部组织诱导出胚性愈伤组织,并由此愈伤组织建立起稳定的细胞悬浮系。从悬浮细胞游离的原生质体在改良KM培养基(1.5 mg/L 6_BA,0.5 mg/L NAA和0.5 mg/L 2,4_D)中进行液体浅层培养,3～4 d后出现第一次分裂,第7 d统计分裂频率为50.3%,15 d左右可形成细胞团,3～4周后形成肉眼可见的愈伤组织,愈伤组织植板率为1.25%。将细胞团转移到液体分化培养基(MS+6_BA 1.5 mg/L+2,4_D 0.2 mg/L) 8～10 d可形成大量胚状体,及时将胚性愈伤组织块转移到固体分化培养基上(MS+6_BA 0.2 mg/L),可形成大量绿芽,分化率54.17%。绿芽在生根培养基（MS+NAA 0.2 mg/L）可形成完整植株,移栽后成活良好。