miR-205调控HMGB1减轻LPS诱导的小鼠急性肾损伤

目的探讨miR-205对脓毒症小鼠急性肾损伤(acute kidney injury, AKI)的影响及可能的作用机制。方法 40只健康雄性C57BL/6小鼠随机分为空白对照组(control)、模型组(LPS)、阴性对照组(LPS+miR-scramble)、干预组(LPS+miR-205 mimics),每组10只。造模后24h取小鼠全血测定血肌酐(serum creatinine, SCr)和尿素氮(urea nitrogen,BUN)水平,造模后5d处死小鼠取肾组织,苏木素-伊红(HE)染色评估肾脏组织病理损伤,实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测肾组织中miR-205的表达,Western blot检测肾组织中高迁移率族蛋白B1(high-mobility group box 1 protein, HMGB1)的表达,酶联免疫吸附法(ELISA)检测肾组织中白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)等炎性相关因子水平。双荧光素酶报告基因实验验证miR-205对HMGB1的靶向调控关系。结果与空白对照组比较,LPS处理组小鼠血清SCr和BUN水平均升高,肾脏组织病理损伤评分升高,miR-205表达降低,HMGB1蛋白表达升高,IL-1β、TNF-α、IL-6水平均升高;与LPS处理组和阴性对照组比较,干预组小鼠血清SCr和BUN水平均明显降低,肾脏组织病理损伤评分下降,miR-205表达升高,HMGB1蛋白表达降低,IL-1β、TNF-α、IL-6水平均明显降低。双荧光素酶报告基因实验显示HMGB1是miR-205的靶基因。结论 miR-205通过调控HMGB1改善LPS诱导的急性肾损伤,为脓毒症性AKI的治疗提供了新的方向。     

注射罗格列酮对多发性骨髓瘤小鼠细胞免疫功能与Caspase-3表达的影响

摘要 目的：探讨注射罗格列酮对多发性骨髓瘤小鼠细胞免疫功能与Caspase-3表达的影响。方法：多发性骨髓瘤小鼠随机平分为三组-模型组、红细胞组与罗格列酮组,红细胞组与罗格列酮组分别给予经尾静脉注射重组鼠源促红细胞生成素5.0 mg/kg与罗格列酮5 mg/kg 100 μL,模型组给予尾静脉注射等体积生理盐水,每天给药1次,检测细胞免疫功能与Caspase-3表达变化情况。结果：三组治疗第7 d与治疗第14 d的肿瘤体积高于治疗第1 d(P<0.05),红细胞组与罗格列酮组低于模型组(P<0.05),罗格列酮组低于红细胞组(P<0.05)。红细胞组与罗格列酮组治疗第7 d与治疗第14 d的血清白介素(Interleukin,IL)-6与肿瘤坏死因子(Tumor necrosis factor,TNF)-α水含量低于模型组(P<0.05),罗格列酮组低于红细胞组(P<0.05)。红细胞组与罗格列酮组治疗第14 d与治疗第28 d的脾脏B淋巴细胞、T淋巴细胞比例对比高于模型组(P<0.05),罗格列酮组高于红细胞组(P<0.05)。红细胞组与罗格列酮组治疗第14 d与治疗第28 d的脑黑质Caspase-3蛋白表达水平低于模型组(P<0.05),罗格列酮组低于红细胞组(P<0.05)。结论：注射罗格列酮在多发性骨髓瘤小鼠的应用能改善细胞免疫功能,抑制脑黑质Caspase-3的表达,同时也能促进小鼠体重恢复,抑制炎症因子的表达。     

罗格列酮对血脂异常大鼠氧化应激及炎症反应的影响

目的:探讨罗格列酮对血脂异常大鼠的氧化应激和炎症反应损伤的保护作用。方法:2月龄健康成年雄性大鼠30只,随机分成3组,每组10只,分别为对照组(普通饲料饲养)、高脂组(高脂饲料饲养)和罗格列酮组(高脂饲料饲养后5 mg·kg-1罗格列酮灌胃),其中血脂异常模型构建时间为5周,罗格列酮的干预时间为1周。第6周实验结束后对各组大鼠进行准确称重,采血,离心留取上清,全自动生化分析仪用于检测待测血清中甘油三脂(TG)、总胆固醇(TC)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平,酶联免疫吸附法(ELISA)用于检测过氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、C-反应蛋白(CRP)、不对称二甲基精氨酸(ADMA)及一氧化氮(NO)产生量。在无菌条件下分别分离各组大鼠肾周、附睾和腹膜后的脂肪组织并准确称量,即为大鼠的内脏脂肪重量,并对上述10项指标进行两两相关性分析。结果:与对照组相比,高脂组的大鼠体重和内脏脂肪重量均显著增加(P0.05),血清TG、TC和LDL-C水平均显著增加(P0.05);NO产生量和血清SOD水平均显著减少(P0.05);血清MDA、CRP和ADMA水平均显著增加(P0.05)。与高脂组相比,罗格列酮组的大鼠体重和内脏脂肪重量均显著降低(P0.05),TG、TC和LDL-C水平略有改善,但差异并不显著(P0.05);NO产生量和血清SOD水平均显著增加(P0.05);血清MDA、CRP、ADMA水平均显著减少(P0.05),血清TG水平和SOD水平呈负相关(Y=-0.014X+2.967,P=0.001)。结论:罗格列酮对血脂异常的大鼠具有氧化应激和炎症反应损伤的保护作用。     

脓毒症患者血清HMGB1、IGF-1水平变化及与T淋巴细胞亚群、预后的关系研究

目的:探讨脓毒症患者血清高迁移率族蛋白1(HMGB1)、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)水平变化及与T淋巴细胞亚群、预后的关系。方法:选取2016年2月～2018年12月期间我院收治的脓毒症患者139例,根据Sepsis 3.0定义,将脓毒症患者分成一般脓毒症组(n=73)及脓毒症休克组(n=66),根据患者进入重症监护室28d后的转归资料,将其分为存活组和死亡组。比较不同预后、不同病情严重程度的脓毒症患者血清IGF-1、HMGB1水平、急性病生理与慢性健康评价系统Ⅱ(APACHEⅡ)评分以及T淋巴细胞亚群;采用Pearson相关分析血清HMGB1、IGF-1水平与T淋巴细胞亚群、APACHEⅡ评分的关系。结果:一般脓毒症组CD3~+、CD4~+、CD4~+/CD8~+高于脓毒症休克组,CD8~+低于脓毒症休克组(P0.05)。脓毒症休克组血清HMGB1水平、APACHEⅡ评分均高于一般脓毒症组,血清IGF-1水平则低于一般脓毒症组(P0.05)。存活组CD8~+低于死亡组,CD3~+、CD4~+、CD4~+/CD8~+高于死亡组(P0.05)。存活组血清HMGB1水平、APACHEⅡ评分低于死亡组,血清IGF-1水平高于死亡组(P0.05)。Pearson相关分析显示,脓毒症患者血清HMGB1水平与CD8~+、APACHEⅡ评分呈正相关,与CD3~+、CD4~+、CD4~+/CD8~+呈负相关(P0.05);血清IGF-1水平与CD8~+、APACHEⅡ评分呈负相关,与CD3~+、CD4~+、CD4~+/CD8~+呈正相关(P0.05)。结论:脓毒症血清HMGB1、T淋巴细胞亚群、IGF-1均存在异常变化,可用于评估脓毒症患者的病情和预后。     

脂联素在应激状态下对小鼠卵泡发育的影响

目的:利用饥饿刺激探讨应激状态下脂联素缺失对小鼠卵泡发育的影响。方法:C57BL/6、脂联素半缺失(APN+/-)、脂联素全缺失(APN-/-)三种基因型小鼠以正常进食量的一半给予饥饿刺激,建立应激模型,30天后处死小鼠取卵巢,计数三种基因型小鼠各级卵泡数目。结果:1经过30天饥饿后饥饿组小鼠体重下降与初始体重比较有统计学意义(P0.001),应激模型建立。2应激状态下三种基因型小鼠卵巢重量未见统计学差异(P0.05)。3正常饮食组三种基因型小鼠各级卵泡比例未有统计学差异(P0.05)。饥饿后C57BL/6小鼠原始卵泡比例为(47±2.966)%,APN+/-原始卵泡比例为(36.5±1.555)%(P0.05),APN-/-原始卵泡比例为(36.8±2.200)%(P0.05);C57BL/6闭锁卵泡比例为(12±1.225)%,APN+/-闭锁卵泡比例为(19.75±1.887)%(P0.01),APN-/-闭锁卵泡比例为(20±0.8367)%(P0.001),与野生型闭锁卵泡比例比较差异有统计学意义。结论:饥饿刺激下脂联素缺失小鼠原始卵泡消耗增加,而闭锁卵泡的发生增加,处于生长状态的卵泡减少,提示在应激状态下脂联素水平的下降可导致卵泡成熟的过程受阻。     

复合感染脓毒症模型大鼠的炎症与凝血功能紊乱进程

目的 探讨脓毒症病程中凝血功能和炎症水平的改变。方法 通过改良盲肠结扎穿刺术(cecal ligation and puncture, CLP)构建复合感染脓毒症大鼠模型(multiple infection sepsis model, MIM),将48只雄性SD大鼠随机分为空白组(Control组,n=8)、假手术组(Sham组,n=8)、复合感染脓毒症模型4 h(4 h组,n=8)、8 h(8 h组,n=8)、12 h(12 h组,n=8)、16 h(16 h组,n=8)组,检测炎症指标和凝血相关指标。结果 (1)所有脓毒症模型大鼠脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)及白介素-6(interleukin-6,IL-6)含量较Sham组均显著升高(P<0.001),且术后随时间延长,LPS及IL-6含量逐渐升高,12 h后LPS无明显变化;(2)脓毒症模型病程中后期组(8 h及以后)凝血酶原时间(prothrombin time, PT)较Sham组明显延长(P<0.01);(3)与Sham组相比,8 h组、12 h组、16 h组活化部分凝血酶原时间(...     

罗格列酮联合地塞米松上调GR减缓博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化

目的:探讨PPARγ配体罗格列酮联合糖皮质激素对博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化的干预作用和对糖皮质激素受体(GR)表达的影响,为治疗肺纤维化提供新方向.方法:30只健康雄性SD大鼠随机分为对照组(C组)、模型组(M组)、罗格列酮干预组(R组)、地塞米松干预组(D组)、罗格列酮+地塞米松干预组(R+D组),每组动物6只.气管内注入博莱霉素(5mg/kg)的方法构建大鼠肺纤维化模型,C组气管内注入同等量生理盐水作为对照;各组于造模24小时后分别给各组大鼠生理盐水、地塞米松、罗格列酮、罗格列酮+地塞米松灌胃干预;第21天以心腔抽血法处死,左肺做病理切片行HE及Masson染色观察肺纤维化情况、免疫组化测GR表达情况,右肺用比色法测羟脯氨酸(Hyp)含量.结果:(1)造模后第21天M组和R组体重均小于C组(P＜0.01)但大于D组(P＜0.01).(2)M组肺组织Hyp含量较C组增高(P＜0.01);R组和D组肺组织Hyp含量较M组减低(P＜0.01),但高于R+D组(P＜0.05).(3)Masson染色示M组肺组织纤维化程度较C组增高(P＜0.01),R组和D组肺纤维化评分较M组减低(P＜0.01),但高于R+D组(P＜0.05).(4)M组GR表达较C组下降(P＜0.01);R组和D组GR表达较M组增强(P＜0.01),但低于R+D组(P＜0.01).结论:罗格列酮和小剂量地塞米松均可上调大鼠肺组织GR的表达减轻博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化,罗格列酮对体重的影响明显小于地塞米松,二者联合使用有协同效应,提示罗格列酮和地塞米松联合有望成为治疗肺纤维化的新方法.     

高迁移率族蛋白1拮抗剂BoxA对细菌性脑膜炎大鼠的治疗作用

目的:探究高迁移率族蛋白1(HMGB1)拮抗剂BoxA尾静脉注射对细菌性脑膜炎(BM)大鼠模型的临床体征改善和炎症抑制作用。方法:除外正常对照的雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠设为对照组(n=20),另取60只大鼠行脑室立体定向注射20μL大肠杆菌Escherichia coli (DH5α1×10~7CFU/m L)建立BM模型,之后随机分为两组(各组n=30),一组尾静脉注射HMGB1拮抗剂BoxA,即BoxA组;一组麻醉后进行尾静脉注射无菌磷酸盐(PBS),即Vehicle组。造模3 d后,对各组大鼠的临床指标以及病理生理参数(颅内压和脑脊液白细胞(WBC)计数)进行评估,使用酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测血清中HMGB1的相对含量,使用伊文思蓝染色观察血脑屏障(BBB)通透性,使用免疫荧光染色检测大脑皮层炎症因子(IL-1β和TNF-α)的表达水平。结果:相比Control组,Vehicle组临床指标,颅内压,WBC计数以及血清HMGB1含量明显提升(P0.05);而BoxA组相比Vehicle组,以上改变有部分减少(P0.05)。另外,Vehicle组较Control组EB渗漏增加且炎症因子(IL-1β和TNF-α)表达水平增高(P0.05)。与Vehicle组相比,BoxA组的这些变化亦被部分调节(P0.05)。结论:HMGB1抑制剂BoxA尾静脉注射能够下调HMGB1表达水平并同时缓解细菌性脑膜炎大鼠的临床症状和炎症反应。     

罗格列酮对AD样小鼠学习记忆减退的影响及机制

研究了罗格列酮对链脲佐菌素(streptozotocin, STZ)脑室内注射的阿尔茨海默病(AD)模型小鼠学习记忆减退的影响及机制．在小鼠脑室内注射STZ建立AD模型,治疗组小鼠采用罗格列酮灌胃给药30天．Morris水迷宫实验检测小鼠学习记忆能力,免疫印迹和免疫荧光检测Tau蛋白的磷酸化、神经丝(NFs)蛋白的磷酸化及糖基化、JNK和ERK蛋白的表达,微管结合实验检测Tau蛋白与微管的组装功能,荧光染料Fluoro-Jade B检测小鼠脑内退变神经元．结果显示,相比对照组,模型组小鼠平均逃避潜伏期和路径长度明显增加、穿越隐匿平台次数明显减少、Tau和NFs蛋白表达过度磷酸化、NFs蛋白糖基化减弱,而用罗格列酮干预的小鼠学习记忆改善并且Tau和NFs蛋白的磷酸化水平降低、NFs蛋白糖基化水平增加,Tau蛋白与微管结合能力改善,模型组JNK的磷酸化高于对照组和治疗组、模型组ERK1的磷酸化低于对照组和治疗组、各组在ERK2磷酸化无明显差异,模型组小鼠脑中FJB标记的退化神经元明显多于对照组和治疗组．结果说明,罗格列酮能改善STZ脑室内注射引起的小鼠学习记忆减退,其机制可能与改善胰岛素信号通路、降低Tau和NFs蛋白的过度磷酸化、减少神经退行性变有关．     

罗格列酮对2型糖尿病合并急性冠脉综合征患者血清TGF-β1及IL-1β 的影响

目的:观察罗格列酮对2型糖尿病合并急性冠脉综合征患者血清转化生长因子-β1(TGF-β1)及白细胞介素-1β(IL-1β)的影响。方法:116例2型糖尿病合并急性冠脉综合征患者,随机分为罗格列酮治疗组(n=58)和常规治疗组(n=58)。检测两组患者治疗前后空腹血糖、血脂及血清TGF-β1、IL-1β的变化。结果:治疗前两组患者空腹血糖、血脂及血清TGF-β1、IL-1β的水平无显著差异(P>0.05);治疗4月后,两组患者空腹血糖、血脂无显著差异,血清IL-1β较治疗前下降(P<0.01),罗格列酮组较常规治疗组下降明显,两组间差异显著(P<0.05);治疗后血清TGF-β1较治疗前上升(P<0.05),罗格列酮组与常规治疗组比较,差异显著(P<0.05)。结论:罗格列酮能调控糖尿病合并急性冠脉综合征患者炎症介质和抗炎因子的分泌,可能具有改善动脉粥样硬化的作用。