A组轮状病毒G4型地方株VP7基因在杆状病毒系统中的表达

Ａ组轮状病毒是导致婴幼儿重症腹泻的最主要病毒病原,位于病毒外壳上的ＶＰ４和ＶＰ７蛋白具有中和抗原活性,与病毒的毒力及免疫保护性有关。ＶＰ７是外壳上的主要糖蛋白,根据其抗原性的不同,可将Ａ组轮状病毒划分出不同的血清型（Ｇ１～Ｇ１４）［１］,而对疫苗的研...     

在昆虫细胞中表达G2型轮状病毒地方株VP7基因

Ａ组轮状病毒是导致婴幼儿重症腹泻的最主要病毒病原,ＶＰ７是病毒外壳上的主要糖蛋白,它具有中和抗原活性,与病毒的毒力及免疫保护性有关,也是划分病毒血清型的最主要标志之一〔１〕。ＶＰ７基因及其编码蛋白一直是人们研究的主要对象,很多研究工作和诊断试剂都需大...     

胶体金法与RT-PCR法测定A群轮状病毒及G血清型分型

目的了解婴幼儿A群轮状病毒腹泻的流行病学特征。方法收集浙江省苍南县人民医院2009年1-12月份的婴幼儿腹泻粪便标本,采用胶体金免疫层析法和逆转录-聚合酶链反应法进行轮状病毒抗原检测和血清型分型,分析G血清型分型。结果 828份婴幼儿腹泻粪便轮状病毒阳性率为33.45%。在轮状病毒腹泻患儿中,1岁以内占49.82%,2岁以内占89.89%。本地区轮状病毒腹泻呈现季节高峰,11月至次年1月为轮状病毒腹泻流行期。毒株分型显示G3型为流行优势株（51.6%）,其次是G1型（26.6%）;另有13.7%为混合感染,包括G1＋G3型（10.5%）、G2＋G3型（2.4%）和G1＋G9型（0.8%）。结论 2009年浙江省苍南县婴幼儿轮状病毒腹泻的主要血清型是G3和G1,G3为优势毒株。 更多还原     

五、轮状病毒的细胞培养

<正>近10年来发现的与人急性胃肠炎有关的病毒的共同特征之一就是难于在细胞培养或器官培养中生长。这些病毒包括轮状病毒、副轮状病毒、Norwalk病毒群、腺病毒、冠状病毒及其它小圆病毒如星状病毒、萼状病毒等。ECHO病毒和Coxsackie病毒虽较容易分离培养,但它们与急性腹泻关系不大。因此,细胞培养法在腹泻病毒研究方面没有发挥更大的作用。腹泻病毒的分类鉴定主要是靠电镜法。     

上海部分地区小于5岁儿童轮状病毒及星状病毒性腹泻的临床分析

目的 了解上海地区≤5岁的患急性稀水样便腹泻患儿中轮状病毒感染及星状病毒感染的流行情况及其临床特征。方法 留取2006年6月~2007年3月复旦大学附属儿科医院门诊、住院及医院内感染腹泻患儿的部分粪便标本,应用免疫层析胶体金法检测轮状病毒。排除轮状病毒感染后,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测星状病毒。本实验主要研究对象为年龄≤5岁,病程≤2周,大便培养无条件致病菌生长患儿。结果 共收集724例急性腹泻粪便标本,年龄≤5岁人群轮状病毒阳性检出率42.5%,约85%患儿年龄≤2岁;病例全年均有发生,发病高峰主要集中在2006年12月~2007年1月。共240例急性腹泻轮状病毒阴性粪便标本中,年龄≤5岁人群星状病毒阳性检出率11.6%,53.6%患儿年龄≤2岁;观测期间病例散发,发病高峰主要集中在2006年10月~2007年1月。结论 轮状病毒是上海地区婴幼儿病毒性腹泻的重要病原,部分患儿伴肠道外损伤。星状病毒是上海地区婴幼儿病毒性腹泻的又一重要病原。     

在我国患急性腹泻成人中发现一种新轮状病毒

从3例急性成人腹泻患者粪便中,经电镜观察,成人腹泻轮状病毒—酶联免疫吸附试验(ADRV-ELISA)、普通轮状病毒—酶联免疫吸附试验(Rota-ELISA),猪抗C型(组)轮状病毒和鸡抗D型(组)轮状病毒血清分别与本病毒的免疫电镜试验以及RNA电泳等实验结果,发现了一种新轮状病毒,该病毒的形态结构与普通轮状病毒(Rotavirus)、成人腹泻论状病毒(Adult Diarrhoea Rotavirus,简称ADRV)极为相似,但抗原性与普通轮状病毒(A组),成人腹泻轮状病毒(B组),C型轮状病毒(C组),D型轮状病毒(D组)显然无关。基因分析表明,该病毒基因组由11个双链RNA片段组成,但其RNA电泳图型具有独自的特点,与目前公认的A组、B组、C组、D组论状病毒韵RNA电泳图型均不同,免疫电镜证实,该病毒能被人恢复期血清所凝集,表明该病毒可能是腹泻病人的病因。     

苏浙闽地区婴幼儿急性腹泻患者病毒检测及 临床特征分析

目的分析苏浙闽地区婴幼儿急性腹泻患者常见病毒及患儿临床特征,为婴幼儿急性腹泻的流行病学研究和临床治疗提供参考。方法选取2010至2014年苏浙闽地区多家医院门诊就诊的急性腹泻患儿1 452例,采用ELISA法检测A组轮状病毒(HRV),多重PCR法检测诺如病毒(NoV)、肠道腺病毒(EAdV)和星状病毒(HAstV),并用RT-PCR法对A组轮状病毒阳性的样本进行G和P分型。结果 1 452例患儿中由常见病毒引起的急性腹泻患儿有707例,占总调查患者的48.69%。急性腹泻患儿常见病毒感染中单一病毒感染占90.10%(637/707),其感染病毒的构成以轮状病毒最多(47.52%,336/707),其次为诺如病毒(36.07%,255/707)以及星状病毒(2.40%,17/707)和肠道腺病毒(4.10%,29/707)。病毒感染腹泻患儿中多重感染者共70例,占9.90%(70/707),以A组轮状病毒合并诺如病毒感染最为常见,占多重感染者的68.57%(48/70)。226份A组轮状病毒阳性标本中,G分型以G1为优势分型,占33.19%;P分型中则以P [11]比例最高,占38.50%;G、P型组合以P [11]G11为主(38.50%)。结论 A组轮状病毒是引发婴幼儿急性腹泻的主要病毒,诺如病毒次之,且婴幼儿病毒性腹泻患者可合并多种病毒感染。不同地区腹泻患儿病毒感染阳性率有差异,轮状病毒基因型表现则具有多样性。     

长春地区冬季流行的轮状病毒核酸电泳型的比较

轮状病毒是婴幼儿腹泻的主要病原,在我国亦广泛流行,根据病毒基因组的电泳分析,可以研究其分子流行病学的规律。文献报道该病毒在流行区往往以一个电泳型感染为主,我们对长春地区1984～1985年和1985～1986年两个冬季流行的婴幼儿腹泻轮状病毒基因组PAGE分析的结果,也表明两个冬季都是以电泳长型感染为主,其中优势株与本室     

应用单克隆抗体鉴定延边地区婴幼儿腹泻轮状病毒的血清型和亚组

本文报道从延边地区婴幼儿腹泻病例的粪便所得到的14株轮状病毒,用单克隆抗体对其进行血清型和亚组鉴定的结果。1985年5株和1986年3株均属于血清型1型和亚组Ⅱ;1987年6株中3株属于血清型2型和亚组Ⅰ,3株属于血清型1型和亚组Ⅱ。     

仔猪副轮状病毒(C群)的检出

利用聚丙烯酰胺凝胶电泳法,从某猪场的20份仔猪腹泻标本中检出具有副轮状病毒(C群)RNA电泳图型者11份,其检出率高达55％。该病毒经口服接种未吮初乳的新生仔猪,可致急性水样腹泻,并排出大量病毒。经轮状病毒(A群)ELISA和副轮状病毒(B群)对流免疫电泳检测证明,它与轮状病毒(A群)和副轮状病毒(B群)均无血清学交叉。本文首次证实在我国猪群中存在有与国外报道的相同的猪副轮状病毒(C群),且可引起仔猪爆发流行,是仔猪腹泻不可忽视的病原之一。     

异源多角体蛋白对家蚕核型多角体病毒粒子的包装

利用PCR方法从AcMNPV基因组DNA中分离出多角体蛋白基因 ,将该扩增片段克隆到转移载体pBacPAK8中 ,得到重组转移载体pOAc。将该质粒DNA与线性化的Bm BacPAK6病毒基因组DNA共传染BmN细胞 ,得到了能形成多角体且不产生蓝色空斑的重组病毒hp BmNPV。纯化该重组病毒的多角体颗粒 ,并对多角体蛋白、病毒核酸及多角体病毒颗粒进行分析 ,发现AcMNPV的多角体蛋白能在家蚕细胞中大量表达且能在细胞内识别家蚕核型多角体病毒并组装成多角体颗粒 ;病毒基因组DNA因部分交换 ,其酶切行为发生了相应的变化 ;电镜观察发现经AcMNPV多角体蛋白包装的家蚕核型多角体病毒的多角体颗粒大小为1 2 μm～ 2 9μm ,明显小于野生型家蚕核型多角体病毒的多角体颗粒     

Development of baculovirus triple and quadruple expression vectors: co-expression of three or four bluetongue virus proteins and the synthesis of bluetongue virus-like particles in insect cells.

Baculovirus multiple gene transfer vectors pAcAB3 and pAcAB4 have been developed to facilitate the insertion of three or four foreign genes respectively into the Autographa californica nuclear polyhedrosis virus (AcNPV) genome by a single co-transfection experiment. The pAcAB3 vector contains a polyhedrin promoter and two p10 promoters on either side of the polyhedrin promoter but in opposite orientations. The pAcAB4 vector has an additional polyhedrin promoter in opposite orientation to the first copy that is in juxtaposition to the first p10 promoter. Each of these derived vectors (pAcAB3, pAcAB4) have been used for the simultaneous expression of three or four bluetongue virus (BTV) genes respectively. When Spodoptera frugiperda cells were infected with the recombinant virus (AcBT-3/2/7/5) expressing the four major structural genes of BTV, double-capsid, virus-like particles consisting of VP2, VP3, VP5 and VP7 of BTV were assembled.     

Human rotavirus K8 strain represents a new VP4 serotype.

The complete VP4 gene of the human rotavirus (HRV) K8 strain (G1 serotype) was cloned and inserted into the baculovirus transfer vector pVL941 under the control of the polyhedrin promoter. A K8VP4 recombinant baculovirus was obtained by cotransfection of Spodoptera frugiperda (Sf9) cells with transfer vector DNA containing the K8VP4 gene and wild-type baculovirus DNA. Infection of Sf9 cells with this VP4 recombinant baculovirus resulted in the production of a protein that is similar in size and antigenic activity to the authentic VP4 of the K8 strain. Guinea pigs immunized with the expressed VP4 developed antibodies that neutralized the infectivity of the K8 strain. This antiserum neutralized HRV strains belonging to VP4 serotypes 1A, 1B, and 2 with efficiency eightfold or lower than that of the homologous virus, indicating that the human rotavirus K8 strain represents a distinct VP4 serotype (P3). In addition, low levels of cross-immunoprecipitation of the K8VP4 and its VP5 and VP8 subunits with hyperimmune antisera to HRV strains representing different VP4 serotype specificities also suggested that the K8 strain possesses a unique VP4 with few epitopes in common with other P-serotype strains.     

轮状病毒VP7基因的克隆与表达

应用聚合酶链式反应技术(PCR)扩增轮状病毒VP7基因,并将其克隆到pMD18-T simple载体上,对重组子进行PCR检测和限制性内切酶分析,并测定DNA全序列。结果显示,克隆片段全长为981 bp。将轮状病毒VP7基因定向的克隆到原核表达载体pET-32a启动子下游,构建原核表达载体pET-32aVP7。将质粒pET-32aVP7转化Transetta表达菌株进行诱导表达,裂解菌体细胞抽提蛋白质进行SDS-PAGE。结果表明,轮状病毒壳蛋白VP7基因在Transetta表达菌株内得到成功表达。     

柯萨奇B3病毒基因在重组痘苗病毒中的表达

将编码柯萨奇Ｂ３病毒（ＣＶＢ３）衣壳蛋白ＶＰ１和ＶＰ２的基因,分别克隆到具有７．５ｋ启动子的痘苗病毒表达载体ｐＧＪＰ５上;将ＣＶＢ３衣壳蛋白全基因克隆到具有Ｔ７启动子的痘苗表达载体ｐＴＭ１上,并筛先到相应的重组痘苗病毒ＶＶＰ１、ＶＶＰ２和ＶＶＰ／４／２／３／１。ＶＶＰ１和ＶＶＰ２稳定表达产物为ＣＶＢ３衣壳蛋白ＶＰ１和ＶＰ２,而ＶＶＰ４／２／３／１为一无分泌性的多聚蛋白,且这三种表达产物均属无分泌性     

Distribution of conserved and specific epitopes on the VP8 subunit of rotavirus VP4.

Three cDNA clones comprising the VP8 subunit of the VP4 of human rotavirus strain KU (VP7 serotype G1; VP4 serotype P1A) G1 were constructed. The corresponding encoded peptides were designated according to their locations in the VP8 subunit as A (amino acids 1 to 102), B (amino acids 84 to 180), and C (amino acids 150 to 246 plus amino acids 247 to 251 from VP5). In addition, cDNA clones encoding peptide B of the VP8 subunit of the VP4 gene from human rotavirus strains DS-1 (G2; P1B) and 1076 (G2; P2) were also constructed. These DNA fragments were inserted into plasmid pGEMEX-1 and expressed in Escherichia coli. Western immunoblot analysis using antisera to rotavirus strains KU (P1A), Wa (P1A), DS-1 (P1B), 1076 (P2), and M37 (P2) demonstrated that peptides A and C cross-reacted with heterotypic human rotavirus VP4 antisera, suggesting that these two peptides represent conserved epitopes in the VP8 subunit. In contrast, peptide B appears to be involved in the VP4 serotype and subtype specificities, because it reacted only with the corresponding serotype- and subtype-specific antiserum. Antiserum raised against peptide A, B, or C of strain KU contained a lower level of neutralizing activity than did that induced by the entire VP8 subunit. In addition, the serotype-specific neutralizing activity of anti-KU VP8 serum was ablated after adsorption with the KU VP8 protein but not with a mixture of peptides A, B, and C of strain KU, suggesting that most of the serotype-specific epitopes in the VP8 subunit are conformational and are dependent on the entire amino acid sequence of VP8.