表达黄瓜花叶病毒卫星RNA的转基因烟草耐烟草花叶病毒

表达黄瓜花叶病毒(CMV)的卫星RNA的转基因烟草可以抗CMV的侵染.为了决定这些植物对其它病毒,如烟草花叶病毒(CMV)的安全性,我们对这些植物接种CMV.结果发现 卫星RNA可减弱TMV引起的症状,井降低病情指数,然而却对TMV在植物中的积累没有明显影响.这一发现有助于对卫星RNA抗病机制的理解,有助于含卫星RNA的生防制剂及表达病毒卫星RNA的转基因植物的应用.本文在国际上首次报道卫星RNA可减弱非相关病毒引起的症状.1 材料和方法1.1 病毒及植物烟草花叶病毒(TMV),烟草G140种子及枯班三生烟种子均为中国科学院微生物研究所病毒室保存;含黄瓜花叶病毒卫星RNA-R1基因的烟草G140(烟Sat-G140)为中国科学院微生物研究所病毒室培育,所用材料为第三代种子.     

烟草花叶病毒装配起始位点反义RNA表达型中间载体的构建

利用基因工程方法培育抗病毒植物新品种的途径之一,是在植株中建立一个产生病毒基因组功能片段的反义RNA的系统。本工作设计并合成了一段烟草花叶病毒(TMV)装配起始位点反义RNA的基因,再以pBR 325为基本质粒,构建了包含带有花椰菜花叶病毒(CaMV)35S启动子和PolyA信号的反义RNA表达单元,以及为筛选转基因植株所必须的NPT-Ⅱ表达单元的中间载体,为以后经土壤农杆菌而获得转基因烟草植株打下了基础。     

嘧肽霉素影响烟草花叶病毒RNA蓄积量的研究

嘧肽霉素是新报道的由土壤中分离筛选出来的不吸水链霉菌辽宁变种(Streptomyces achygroscopicus var.liaoningensis)产生的,其有效成分是胞嘧啶核苷肽类化合物,已获得农药临时登记,该药剂对烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)等多种病毒病害具有很好的防治效果。定量竞争PCR(Quantitative competitive PCR,QCPCR)是一种定量检测细胞因子较为精确的方法,其实质是待测核酸(DNA或RNA)与内参模板一起竞争参与PCR反应,并通过电泳将扩增产物在凝胶上明显的分开,从而进一步进行定性或定量分析。     

对烟草花叶病毒外壳蛋白亚基因组RNA生成机制的进一步研究

用原生质体瞬间表达的方法证明,在烟草细胞中ＴＭＶ外壳蛋白亚基因组ＲＮＡ的生成,不是通过核酸酶在基因组ＲＮＡ上直接切割,也不是通过在生成负链ＲＮＡ时预成性终止,再从这种负链ＲＮＡ终止部位起始产生的,ＴＭＶ外壳蛋白亚基因组ＲＮＡ,是ＴＭＶ识别利用负链ＲＮＡ中间的亚基因组启动子后产生的,这个启动子位于外壳蛋白读码框５′端２５６碱基范围之内,但大于４８个碱基,虽然ＴＭＶ能利用单链的负链ＲＮＡ上的亚基因组启     

从带烟草花叶病毒外壳蛋白亚基因组启动子的负链RNA产生正链RNA

克隆了能在植物中表达白喉毒素Ａ链基因（ＤＴＡ）负链ＲＮＡ的基因ＴＣＤＴＡＮ,这个基因的读码框５′端上游带有ＴＭＶ外壳蛋白基因５′端上游６３１个碱基,它的ＤＮＡ和ＴＭＶ－ＲＮＡ共转化烟草原生质体后,能抑制同时导入原生持体的堪因的表达,ＣＡＴ基因表达的抑制,是ＴＣＤＴＡＮ基因产生白喉毒素Ａ链蛋白的结果,ＴＣＤＴＮＡ基因上ＴＭＶ外壳蛋白基因５′端上游片段,是产生白喉毒素Ａ链ｍＲＮＡ的必要条件,只有用多量     

侵染蚕豆的烟草花叶病毒研究

１９９３年４月从杭州蚕豆田病株上分离获得病毒分离物Ｂ－９３５Ａ,汁液摩擦接种５科１９种植物,Ｂ－９３５Ａ能侵染３科１２种植物。被侵染的蚕豆产生黄斑、花叶,后期叶片黄化并有坏列;在菜豆上产生局部枯斑。Ｂ－９３５Ａ的钝化温度为８５－９０摄氏度,稀释限点为１０＾－８－１０＾－７。病毒粒体杆状,平均长度约３０ｎｍ,病毒的衣壳蛋白亚基只有一条多肽链,分子量约为１７．５ＫＤ,包裹的核酸为单链ＲＮＡ,长约６．４     

烟草花叶病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用TMV免疫的BALB/c鼠脾细胞与SP2/0鼠骨髓瘤细胞融合,获得10株能稳定传代並分泌抗烟草花叶病毒(TMV)单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株,其中T73McAb滴度最高,ELISA滴度高达1/655,360,能被TMV兔免疫血清所阻断,能中和TMV的感染性。但与其它植物病毒无交叉反应,与TMV不同毒株均有反应。     

用不同方法把烟草花叶病毒RNA基因导入植物原生质体的…

应用电激法和聚乙二醇法以及脂质体协调的上述两种方法对烟草和青菜原生质体进行烟草花叶病毒ＴＭＶ－ＲＮＡ的导入试验,并应用酶标免疫技术、电镜观察、半叶接种和十无烷基磺酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳等方法对在原生质体中增殖的ＴＭＶ进行鉴定。实验证明,虽然电激法和聚乙二醇法均能有较地将处源病毒基因导入植物原生质体,但经阳离子脂质体处理后的ＴＭＶ－ＲＮＡ,其转染效率可提高１０倍以上。ＴＭＶ在原生质体转染４８小时后     

表达黄瓜花叶病毒卫星RNA的转基因烟草耐烟草花叶病毒

表达黄瓜花叶病毒(CMV)的卫星RNA的转基因烟草可以抗CMV的侵染.为了决定这些植物对其它病毒,如烟草花叶病毒(CMV)的安全性,我们对这些植物接种CMV.结果发现 卫星RNA可减弱TMV引起的症状,井降低病情指数,然而却对TMV在植物中的积累没有明显影响.这一发现有助于对卫星RNA抗病机制的理解,有助于含卫星RNA的生防制剂及表达病毒卫星RNA的转基因植物的应用.本文在国际上首次报道卫星RNA可减弱非相关病毒引起的症状.1 材料和方法1.1 病毒及植物烟草花叶病毒(TMV),烟草G140种子及枯班三生烟种子均为中国科学院微生物研究所病毒室保存;含黄瓜花叶病毒卫星RNA-R1基因的烟草G140(烟Sat-G140)为中国科学院微生物研究所病毒室培育,所用材料为第三代种子.     

核酶在大肠杆菌内对烟草花叶病毒靶RNA的切割作用

把一段取自TMV RNA的靶cDNA序列连接在一个体内表达转录载体内的报道基因CAT起译密码子ATG的下游组成了读码框不改变的CAT融合基因,通过测定载体在大肠杆菌内表达的CAT活力变化,观察了与CAT同时表达的核酶在体内对靶序列的作用。当专一核酶RZ1、RZ1A或RZ1表达时,CAT的酶活力下降了30%,但非专一核酶RZ3的表达并不改变CAT活力。凝胶电泳和引物延伸结果表明CAT活力的下降是由于这些核酶对融合CAT mRNA在5’靶序列区发生了专一切割从而影响了蛋白的合成所致。     

原位杂交检测石蜡包埋组织中丙型肝炎病毒RNA

为了提高ＨＣＶＲＮＡ的原位杂交检出率,我们应用地高辛标记ＨＣＶ５＇非编码区ｃＤＮＡ作探针,采用原位分子杂交法对９６Ｎ肝硬变,１０２例肝细胞肝癌进行了ＨＣＶＲＮＡ检测,并结合不同年份标本中ＨＣＶＲＮＡ的检出率,探讨ＨＣＶＲＮＡ在肝脏的分布及其丢失问题．结果显示ＨＣＶＲＮＡ定位于肝细胞和肝癌细胞胞浆内,肝脏其它细胞未见明确阳性杂交信号。ＨＣＶＲＮＡ杂交阳性细胞呈灶状和弥漫分布,正常对照、替代、空白对照为阴性,在不同年份肝硬变及肝细胞肝癌中两两比较表明新近包埋蜡块组织较陈旧蜡块组织ＨＣＶ　ＲＮＡ检出率明显高。本文结果证实ＨＣＶＲＮＡ存在于肝细胞和癌细胞的胞浆内,未见肝内其它细胞阳性,还发现ＨＣＶＲＮＡ在肝硬变、肝细胞癌中的检出率随保存时间的延长,其阳性检出率明显降低,表明ＨＣＶＲＮＡ在蜡块中存在明显的降解,应尽可能选用近期标本、为临床分析ＨＣＶ感染,ＨＣＶ与肝硬变、肝细胞肝癌的关系提供更客观的数据。     

TOBACCO MOSAIC VIRUS IN CHLOROPLAST AND CYTOPLASM OF INFECTED TOBACCO LEAF

Chloroplasts containing Tobacco Mosaic Virus (TMV) were isolatedfrom TMV inoculated tobacco leaves, and TMV was extracted fromthem. The preparations from isolated chloroplasts of infectedleaves showed 30% increase in the optical density at 260 mµover those from healthy leaves. Most of infectivity was observedin chloroplast fraction 40 hr after inoculation. Thereafter,infectivity in the chloroplast fraction decreased and that ofcytoplasm increased with time. (Received April 6, 1964; )     

EFFECTS OF TOBACCO MOSAIC VIRUS ON EARLY LEAF DEVELOPMENT IN TOBACCO

Tepfer , Sanford S. (U. Oregon, Eugene.), and Meyer Chessin . Effects of tobacco mosaic virus on early leaf development in tobacco. Amer. Jour. Bot. 46(7): 496–509. Illus. 1959.—At certain stages of infection, tobacco mosaic virus causes the formation of highly abnormal tobacco leaves classified here as narrow-bladed leaves and “shoestring” leaves. The development and anatomy of these types are described. The “shoestring” leaf in its extreme form is entirely radial in symmetry, with no vestige of a lamina. This suppression of dorsiventrality is expressed to a lesser degree in narrow-bladed leaves and in transitional forms. The lack of or reduction of dorsiventrality results directly from the absence of or reduced activity of the marginal meristems of the leaf primordium. There is a general reduction in meristematic activity in the primordium that causes reduced length as well as reduced laminal development.     

烟草花叶病毒外壳蛋白嵌合基团的重组

普通烟草花叶病毒外壳蛋白基因已和花椰菜花叶病毒35S启动子及3′未端重组成嵌合基因。在连接了用于筛选在土壤杆菌中导入外源基因的新霉素磷酸转移酶Ⅰ(NPT Ⅰ)基因和用于筛选在植物细胞中导入外源基因的嵌合的新霉素磷酸转移酶Ⅱ(NPT Ⅱ)基因后,已导入一个去致瘤基因的Ti载体T-DNA区中。这种在Ti载体T-DNA区带嵌合的烟草花叶病毒外壳蛋白基因的土壤杆菌菌株,可以用来转化植物。观察在转化植物中表达的这种外壳蛋白能否延缓或减轻烟草花叶病毒对它们的危害。