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1.
介绍了从健康牛骨髓中分离到一种具有抑制肿瘤活性的糖蛋白,并对该糖蛋白进行了纯化,获得了电泳纯和层析纯的纯品.测得该糖蛋白N末端为两氨酸残基.用SDS-PAGE法测得该溏蛋白的表现分子量为65kD.氨基酸组成分析显示其为一种富含丝氨酸的蛋白质.生物活性测定表明,该糖蛋白纯品对小白鼠白血病P388细胞和人慢粒白血病HL-60细胞株的增殖均有抑制作用.有关该糖蛋白的糖含量的定量测定及蛋白质一级结构分析正在进一步的研究中. 相似文献
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以牛血球为材料,经溶血等处理和丙酮沉淀,获得牛血球超氧化物歧化酶粗品。此粗酶可以通过DEAE-Sepharose和CM-Sepharose快速柱层析,获得超氧化物歧化酶纯品。纯化的酶比活可达13500u/mg,经PAGE、SDS-PAGE和快速蛋白液相色谱(FPLC)检测,结果表明,纯化酶是均一的Sephadex G-100凝胶过滤测得该酶分子量为31,800,SDS-PAGE测得亚基分子量为15 相似文献
3.
为探讨肿瘤转移与细胞表面的糖结构的关系,对小鼠肝癌细胞的高、低淋巴道转移株Hca-F和Hca-P进行了蛋白质电泳及经蛋白质印迹术后的5种凝集素(ConA、WGA、UEA、SBA、PNA)结合糖蛋白谱的对比分析.结果表明:高、低转移两株细胞的SDS-PAGE谱基本相同;ConA特异结合糖蛋白共有5种(~72,80~90,~104,~150,~200kD);其中较明显的差异为~72kDConA特异结合糖蛋白,它在Hca-P细胞的表达明显高于Hca-F细胞.WGA特异结合糖蛋白1种(~150kD),在Hca-P细胞的表达略高于Hca-F细胞.此外,实验发现两种性质未明的蛋白质(~79,~130kD),后者在Hca-P细胞的含量明显高于Hca-P细胞.结果提示Hca-F和Hca-P细胞不同的转移表型可能与其糖蛋白的表达有一定的关联. 相似文献
4.
以痘苗病毒天坛株为载体的表达单纯疱疹病毒Ⅰ型糖蛋白D的重组活疫苗的建立 总被引:2,自引:0,他引:2
从我国分离到的一株单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1-168株)病毒基因组中,分离出含有糖蛋白D(gD)基因的1.2kb片段,插入带有痘苗病毒天坛株TK区的质粒pJSB1175P7.5k启动子下游,转染无白血病鸡胚原代细胞,获得带有HSV-1-168gD基因的重组痘苗病毒。此株重组病毒在感染细胞膜上表达HSV-1-168gD糖蛋白抗原,能与特异性单克隆抗体反应。在感染细胞中表达的膜抗原经SDS-PAGE分析,表达分子量为54kD糖蛋白。用Southern杂交分析了重组病毒DNA中特异的gD基因,对作为活疫苗的重组痘苗病毒株进行了一些微生物学活性、免疫原性和毒力等方面的研究。 相似文献
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亲和素结合蛋白性质的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
前曾发现在日本血吸虫虫卵中,存在一种新的能与亲和素专一性结合的蛋白质,称为亲和素结合蛋白,在分离纯化ABP的基础上,用SDS-PAGE及ephadex G-150分别测定了ABP的分子量,并做了糖蛋白染色及等电点测定,实验结果表明ABP是一个分子量为65kD的碱性糖蛋白,由数个相同的分子量为12.7kD的亚单位组成。SDS、β-硫基乙醇处理的DDBP仍能与亲和素结合,提示ABP的亚单位能与亲和素结 相似文献
6.
地衣芽孢杆菌1Baciuus Licheniformis)BL-306产生的胞外β-甘露聚糖酶经硫酸铵分级盐析,DEAE-纤维素柱层析。Sephadex-G100柱凝胶过滤和DEAE-纤维素柱再层析分离纯化,得到SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)均一样品。用SDS-PAGE测得纯化后β-甘露聚糖酶分子量为26000道尔顿。用凝胶等电聚焦电泳(PAGEIEF)测得等电点PI为5.0。该酶 相似文献
7.
研究了植物凤凰木种子中的蛋白质成分,试图分离出新的核糖体失活蛋白,凤凰木种子经磷酸盐缓冲液抽提,硫酸铵分级盐析,分子筛和阴离子交换剂等多次柱层析,分离出三种组分DrI,DrⅡ和DrⅢ.SDS-PAGE和IEF实验表明这三种蛋白质均达到单一纯,而HPLC实验则表明它们的纯度不低于90%,它们的分子量据SDS-PAGE和HPLC实验分别约23500、26000、285蛋0.IEF实验测得三者的等电点均 相似文献
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为探讨肿瘤转移与细胞表面的糖结构的关系,对小鼠肝癌细胞的高、低淋巴道转移株HCa-F和HCa-P进行了蛋白质电泳及经蛋白质印迹术后的5种凝集素(ConA、WGA、UEA、SBA、PNA)结合糖蛋白谱的对比分析。结果表明:高、低转移两株细胞的SDS-PAGE谱基本相同;Con A特异结合糖蛋白共有5种( ̄72,80 ̄90, ̄104, ̄150, ̄200kD);其中较明显的差异为 ̄72kD ConA特异 相似文献
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云南溪菜多糖的分离纯化及其性质研究 总被引:8,自引:0,他引:8
从云南溪菜中提取的水溶性胞外粗相糖(EPS),用Sevag法脱蛋白后,经DEAE-纤维素柱层析和葡萄糖凝胶G-200柱层析可得到纯品。溪菜多糖复合物经碘试验证明含有少量淀粉,Bacl2试验检测出含有SO4^2-,琼脂糖凝胶电泳显示含有糖类及蛋白南,且其组成不均一。用Lowry法测得蛋白质含量为13.54%,苯酚-硫酸法测得糖含量为78%,经薄层层析和纸层析鉴定,溪菜多糖复合物的酸水解物中含有大量D 相似文献
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研究了植物凤凰木种子中的蛋白质成分,试图分离出新的核糖体失活蛋白凤凰木种子经磷酸盐缓冲液抽提,硫酸铵分级盐析,分子筛和阴离子交换剂等多次柱层析,分离出三种组分DrⅠ、DrⅡ和DrⅢ.SDS-PAGE和IEF实验表明这三种蛋白质均达到单一纯,而HPLC实验则表明它们的纯度不低于90%。它们的分子量据SDS-PAGE和HPLC实验分别约23500、26000、28500.IEF实验测得三者的等电点均为5.2左右。测定了组分DrⅠ的蛙卵泡裂解活性,其毒性约为天花粉蛋白的1/40.分析了它们的氨基酸组成。估算了三种蛋白质的二级结构含量,结果表明三者均富含β折叠结构。已有的实验事实表明这三种蛋白质的生化行为明显异于核糖体失活蛋白,因而很可能不属于这一蛋白质家族。 相似文献
11.
前曾发现在日本血吸虫虫卵中,存在一种新的能与亲和素专一性结合的蛋白质,称为亲和素结合蛋白(ABP)。在分离纯化ABP的基础上,用SDS-PAGE及SephadexG-150分别测定了ABP的分子量,并做了糖蛋白染色及等电,大测定。实验结果表明ABP是一个分子量为65kD的碱性糖蛋白,由数个相同的分子量为12.7kD的亚单位组成。SDS、β-巯基乙醇处理的ABP仍能与亲和素结合,提示ABP的亚单位能与亲和素结合。氨基酸修饰剂NAI、DTNB、NEM及NBS对ABP与亲和素的结合有不同程度的影响,而HNBB、TNBS及IAA对ABP与亲和素的结合无影响,提示ABP分子中氨基酸残基Tyr、Cyr是ABP与亲和素结合所必需的,可能参与结合位点的形成。另外,测得ABP与亲和素结合的结合常数为1.4×10~(-7)mol/L。 相似文献
12.
利用PEG分级,DEAE离子交换层析,Bhue Sepharose拟亲和层析,MonoQ离子交换层析等手段,分离纯化直二氏藻甘油三磷酸(G-3-P)脱氢酶(EC1.1.1.8)得到比活为12.6u/mg的电泳纯的酶,并对此酶的生化特性进行了研究。4-20%非变性聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳测得全酶分子量约为270kD,SDS-PAGE表明该酶只有一种分子量约为65kD的亚基,据此推测该酶应为同四聚体。酶 相似文献
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圆弧青霉碱性脂肪酶的分离纯化的特性 总被引:1,自引:0,他引:1
圆弧青霉突变株PG37发酵液经离心、硫酸铵盐析、疏水层析、阴离子交换层析和凝胶过滤分离纯化得到了比活性为每毫克蛋白质5200u的碱性脂肪酶,纯化倍数16.5,得率33.2%,在聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电脉(SDS-PAGE)上均呈现单一 白质条带。SDS-PAGE和凝胶过滤分别测得酶的分子量为27.5kD和29.kD,表明该酶以单体形式存在。N末端10个氨基酸的序列测 相似文献
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我们针对肝细胞特异的ASGP(去唾液酸糖蛋白)受体,构建了一种具有肝细胞特异导向性的基因转移载体系统,该载体包括两种共价结合的功能成分:一种为ASGP,作为配体,与肝细胞表面特异的ASGP受体结合;另一种为多聚左旋赖氨酸(poly-L-lysine),与DNA以强静电作用相结合。小鼠尾静脉注射32P-DNA-poly-L-lysine-ASOR(去唾液酸al酸性糖蛋白)或等量的32P-DNA、ASOR、poly-DL-lysine单体混合物,20小时后,小鼠肝、脾、肾各组织的放射性计数结果表明该载体系统具有较强的肝组织特异性。 相似文献
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与光系统Ⅱ颗粒结合的对DTT敏感的蛋白酶的纯化和性质 总被引:1,自引:0,他引:1
菠菜光系统Ⅱ颗粒的1mol/LNaCl抽提液经butyl-Toyopearl650M疏水层析和DEAE-SephadexA-50柱层析分离得一种对DTT敏感的蛋白酶。用SDS-PAGE和Superose12凝胶过滤测得该酶的分子量为37kD,其为单体酶。该酶可降解18kD和24kD水溶性蛋白质,分别产生13.2kD、12kD、10.5kD和23kD、22kD、20kD片段,最适pH为8.0,对NaCl不敏感,对DTT和β-Me敏感。抑制实验表明该酶不属丝氨酸类蛋白酶。 相似文献
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报道了一种新的具有抗吗啡镇痛活性的肽的分离纯化,并进行部分一级结构测定.狗脑先经醋酸提取,冷冻成干粉,然后上SephadexG-50和S-SepharoseF.F柱,最后经RP-HPLC纯化,鉴定纯度后,测定其抗吗啡镇痛活性,通过SDS-PAGE法测得其分子量为8.9kD.氨基酸序列分析测得该肽的N端序列为:V-I-S-V-A-D-W-T-Q-I-F-T-M-R-Y-F-I-T-G-Y-H-Q-D-Y-X-G-L-H-I-G.经部分一级结构同源序列检索,未见与此有同源的蛋白质的报道,暂命名该肽为CC4肽 相似文献
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用Bacillussphaericus63菌为材料,经DNA-Sepharose和CibacronBlueF3GA-Sepharose两步亲和层析,将Bsp63Ⅰ纯化到均一程度。酶比活力达61400U/mg蛋白。用凝胶过滤法测得该酶分子量为113800。该酶样品在SDS-PAGE中呈现为一条蛋白带,并测得其亚基分子量为56800。用DNS-Cl法测得该酶N-末端氨基酸为丙氨酸。上述结果表明该酶分子是由两个相同亚基组成。 相似文献
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SDS—PAPGE法测定His—tag融合蛋白分子量产生偏差的原因 总被引:5,自引:0,他引:5
His-tag/Ni-NTA系统是新发展起来的一个亲和纯化重组蛋白有用工具,现常用于基因编码产物的特性研究中。SDS-PAGE是实验室测定蛋白质分子量通常采用的方法,而许多实验室用此方法检测His-tag融合蛋白时却常发现测得的分子量偏大,产生偏差的原因尚未阐明。为弄清这一问题,本实验室在研究一个His-tag融合蛋白P73-His时,首先用SDS-PAGE法测得其分子量确实比理论计算值大,然后对 相似文献
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高分子量和低分子量尿激酶的分离纯化及动力学性质研究 总被引:1,自引:0,他引:1
人尿激酶粗品经苯甲脒亲和柱纯化和Protein-PakSP柱分离后,得到两种分子量的尿激酶(UK),即高分子量尿激酶(HUK)和低分子量尿激酶(LUK),采用民斯亮蓝法测定蛋白质浓度,纤维蛋白板法测定活力,测得HUK比活为2.9×10^5IU/mg蛋白,LUK为3.510^5IU/mg蛋白,活力回收为70%以上,经SDS-PAGE鉴定,HUK和LUK均呈单一条带,分子量分别为54kD和33kD,H 相似文献