人外周型苯二氮卓受体及其突变受体cDNA克隆和序列分析

用ＲＴ－ＰＣＲ方法扩增并克隆了三种人外周型苯二氮卓受体ＰＢＲｃＤＮＡ,测序表明,４４２ｂｐ片段与文献报道相比缺失８４ｂｐ编码序列,其转录水平高于正常ＰＢＲ．该序列编码一个与ＰＢＲ结构相关但缺失了２８个氨基酸残基的突变受体蛋白．这一异常转录本可能是通过选择性剪接方式转录产生并只存在于中国人肝癌ＢＥＬ７４０２细胞系,表明ＰＢＲ基因表达具有细胞特异性和异质性．突变受体的发现为研究ＰＢＲ的结构和功能提供了理想的分子和细胞模型     

外周苯二氮(艹卓)受体激动剂Ro5-4864抑制大鼠心肌细胞线粒体通透性转换

线粒体通透性转换（mitochondrial permeability transition,MPT）导致线粒体氧化应激性损伤。近年研究认为,位于线粒体外膜的外周苯二氮节受体（peripheral benzodiazepine receptor,PBR）参与了线粒体的重要生理功能。本研究在心肌细胞线粒体水平探讨激动PBR能否抑制Ca^2＋诱发的MPT。分离Sprague—Dawley大鼠心肌细胞线粒体,将PBR激动剂Ro5-4864（50、100、200μmol／L）和线粒体孵育,利用150μmol／L Ca^2＋诱发MPT,部分线粒体在与100μmol／L Ro5-4864孵育前5min加入MPT孔道开放剂苍术苷（atractyloside,ATR）。采用分光光度法观察线粒体膨胀情况：Westernblot检测线粒体细胞色素C（cytochrome C,CytoC）释放;利用荧光探针JC-1在激光共聚集显微镜下观察线粒体膜电位的变化。50、100、200μmol／L Ro5-4864均显著抑制Ca^2＋诱发的520nm处线粒体吸光度的下降,而且抑制Ca^2＋引起的线粒体CytoC释放和线粒体膜电位下降,但ATR可阻断R05—4864的上述作用。结果提示,PBR激动剂可抑制大鼠心肌MPT,保持线粒体CytoC含量和稳定线粒体膜电位,减轻线粒体损伤。PBR的激活可能成为减轻心肌细胞应激性损伤及心肌保护的新方法。     

GABAA受体的神经药理学研究进展

配体闸门离子通道超家族成员之一的GABAA受体,是一种介导抗焦虑药物、镇静药物、抗惊厥药物、肌肉驰缓药物和失忆活动的多功能药物作用靶标。本文综述了近年来国外有关GABAA受体的神经药理学研究进展。     

人尿激酶受体cDNA的克隆及序列测定

以高转移性人肺巨细胞癌细胞系PG的总RNA为模板,用RT-PCR方法扩增人尿激酶受体(uPAR)的cDNA。将其亚克隆至pGEM-T载体后进行测序,结果表明,我们所克隆的uPAR cDNA片段与文献报道的人uPAR基因编码区cDNA序列高度同源(达99%),其中第705、746和755碱基分别由A、A和G替代了文献中的T、G和A,从而导致了第249和252位氨基酸由Gly和Glu变为Asp和Gly,我们已将此序列申请登录GenBank,登录号为AF257789。     

大鼠脑α1型甲状腺激素受体基因cDNA克隆及序列分析

使用ＲＴ－ＰＣＲ方法克隆了Ｗｉｓｔａｒ大鼠脑α１型甲状腺激素受体的ｃＤＮＡ,得到包含起始及终止密码子共１２３３ｂｐ、编码４０９个氨基酸的受体全长编码离列,酶切分析后,将此特异ＤＮＡ片段重组入质粒ｐＵＣ系统,得重组质料ｐＴＲＡ。双脱氧末端终止法测定了全部核苷酸顺序。     

狗肝脏苯甲二氮茸结合抑制因子的cDNA克隆及序列分析

在研究狗抗吗啡活性肽ＰＰＣ过程中,发现它与牛的ＤＢＩ（ｄｉａｚｅｐａｍｂｉｎｄｉｎｇｉｎｈｉｂｉｔｏｒ）的氨基酸序列有很高的同源性,但尚未见到有关狗的ＤＢＩ的文献报道,为了更好的探讨ＰＰＣ和ＤＢＩ相互间的关系,对狗的ＤＢＩ的ｃＤＮＡ进行了克隆和序列分析。本研究利用大鼠ＤＢＩ的基因片段为探针,从狗肝脏ｃＤＮＡ文库中,筛选得到了一阳性克隆,并进行了全自动和手工测序,得到了ＤＢＩ的全长基因。根据ＥＢＭＬｂａｎｋ序列检索,发现狗的ＤＢＩ核酸序列与牛的同源性为８１％,将其核酸序列翻译成氨基酸序列,进行同源序列比较,结果显示：狗的ＤＢＩ的氨基酸序列与猪、牛、人、酵母ＤＢＩ的同源性分别为８８．５％、８７．４％、８３．９％、４６．５％。研究还发现狗的ＤＢＩ序列与抗吗啡活性肽ＰＰＣＮ端６２个氨基酸只有两个不同,Ｃ端１７个氨基酸序列完全相同。只是ＰＰＣ比ＤＢＩ中间多了２３个氨基酸。     

A型γ氨基丁酸受体结构及其有关药物

A型γ氨基丁酸(GABAA)受体是中枢神经系统内最重要的抑制性神经递质GABA的受体,是配体门控离子通道超家族成员之一。本文对国内外有关GABAA受体的结构与功能的关系以及与其相互作用的有关药物进行了讨论。     

大熊猫生长激素受体(GHR)cDNA的克隆与序列分析

根据已报道的若干物种GHR 基因cDNA 序列设计引物, 利用RT- PCR 技术首次从大熊猫肝脏组织总RNA中扩增出GHR 基因编码区全长cDNA 序列, 克隆于pGEM®-T 载体后进行测序和序列分析。结果表明,大熊猫GHR 的ORF为1 917 bp , 编码638 个氨基酸的前体蛋白, 由18 个氨基酸的信号肽和620 个氨基酸的成熟肽组成,与人、狗、猪GHR 结构相似, 大熊猫GHR 成熟肽由246 个氨基酸的胞外区、24 个氨基酸的跨膜区和350 个氨基酸的胞内区组成, 并具GHR 的特征性结构。序列相似性比较显示, 大熊猫GHR 与哺乳类GHR 具有69 %～93 %的高序列相似性, 与爬行类和鸟类的序列相似性也达到60 % , 而与鱼类的序列相似性较低, 仅为30 %左右。与其它哺乳动物GHR 相比, 大熊猫GHR 在氨基酸序列上也存在明显的特异性。     

人血小板生成素氨基端功能区cDNA的克隆及其定点突变

以Nested－PCR方法从人肝cDNA基因文库中扩增出编码人血小板生成素（hTPO）前153个氨基酸的氨基端功能区cDNA;在扩增中,采用非连续多核甘酸定点突变的方法．将翻译起始的七个氨基酸的原核中不常用的密码子同又突变成使用频率较高的密码子,以便于其在大肠杆菌中表达。序列测定证实了预期的结果。     

玉米ST和ATPS部分cDNA序列克隆及分析

硫酸盐转运蛋白(ST)和ATP硫酸化酶(ATPS)是根系吸收硫酸盐和植物体内硫酸盐同化过程的关键蛋白和酶,在硫酸盐的生物转运过程中具有重要作用.以水培玉米农大108根系为材料,并根据已报道的玉米的硫酸盐转运蛋白和ATP硫酸化酶基因保守序列分别设计PCR引物对,采用RT-PCR方法克隆到783 bp和820 bp的部分硫酸盐转运蛋白和ATP硫酸化酶cDNA片段,分别命名为ST_ND108和ATPS_ND108.序列分析和比对结果显示,ST_ND108与已报道的玉米和水稻的高亲和型硫酸盐转运蛋白基因同源性分别为99%和85%;而ATPS_ND108与已报道的玉米ATP硫酸化酶基因同源性达到97%,进化树聚类分析和预测氨基酸的BLAST结果证实ST_ND108为高亲和性硫酸盐转运蛋白基因片段,ATPS_ND108为质体ATP硫酸化酶基因片段.     

人白细胞介素29的cDNA克隆和序列分析

目的 :克隆人白细胞介素 2 9的cDNA ,以进一步研究其结构与功能的关系。方法 :分离人的外周血单个核细胞 ,IMDM(含PHA和IL-2 )培养过夜后 ,Poly(I:C)诱导 2 4～ 48h ,收集细胞 ,Trizol法提取细胞总RNA ,RT-PCR扩增出全长 603bp的IL-2 9cDNA ,将其与表达载体pPROEXTMHTa连接 ,转入大肠杆菌BL21(DE3) ,建立了hIL-29的cDNA克隆。结果 :测序表明克隆的cDNA与Genebank报道的人IL-29cDNA序列完全一致。结论在国内成功获得hIL-29的cDNA克隆 。     

大鼠卵巢促黄体激素／人绒毛膜促性腺激素受体cDNA的克隆和在…

促黄体激素／人绒毛膜促性腺激素受体（ＬＨ／ｈＣＦ ｒｅｃｅｐｔｏｒ）是一种与蛋白偶联的糖蛋白。本文报道了从大鼠卵巢ｃＤＮＡ库中筛选ＬＨ／ｈＣＧ受体ｃＤＮＡ及其在昆虫细胞中的高效表达。ＬＨ／ｈＣＧ受体ｃＤＮＡ全长２４０３ｂｐ,编码受体信号肽和成熟受体６７４个氨基酸。用多角体病毒表达载体ｐＶＬ１３９３,ＬＨ／ｈＣＧ受体ｃＤＮＡ在昆虫细胞中得到高效表达。在非还原和还原条件下的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析显示,用     

狗肝脏苯甲二氮Zhuo结合抑制因子的cDNA克隆及序列分析

在研究狗抗吗啡活性肽ＰＰＣ过程中,发现它与牛的ＤＢＩ的氨基酸序列有很高的同源性,但尚未见到有关狗的ＤＢＩ的文献报道,为了更好的探讨ＰＰＣ和ＤＢＩ相互间的关系,对狗的ＤＢＩ的ｃＤＮＡ进行了克隆和序列分析。本研究利用大鼠ＤＢＩ的基因片段为探针,从狗肝脏ｃＤＮＡ文库中,筛选得到了一个阳性克隆,并进行了全自动和手工测序,得到了ＤＢＩ的全长基因。根据ＥＢＭＬ ｂａｎｋ序列检索,发现狗的ＤＢＩ核酸序列与牛的同     

麦长管蚜烟碱型乙酰胆碱受体基因的克隆和序列分析

昆虫烟碱型乙酰胆碱受体(nicotinic acetylcholine receptor, nAChR)是杀虫剂的重要作用靶标之一。本研究利用简并引物PCR和半巢式PCR技术从麦长管蚜Sitobion avenae (Fabricius)中克隆nAChR基因,成功地获得了5个α型nAChR亚基的cDNA片段。根据5个α亚基片段设计特异引物,结合快速扩增cDNA末端(RACE)技术,成功克隆了5个α型亚基的全长,并发现α5亚基有两种存在形式,它们仅在胞外区有一段175 bp的片段有差异。序列分析发现,这些基因均具有nAChR基因家族的典型特征,并与已报道的其他昆虫的烟碱型乙酰胆碱受体的相应亚基具有很高的同源性。该研究为进一步利用基因表达技术研究昆虫nAChR的天然亚基组成,以及分析麦长管蚜对新烟碱类杀虫剂的靶标抗性,奠定了基础。     

小菜蛾烟碱型乙酰胆碱受体α亚基cDNA的克隆、序列分析与不同发育阶段表达分析

烟碱型乙酰胆碱受体(nAChR)介导昆虫中枢神经系统中胆碱能突触兴奋性神经递质的快速传递,也是新烟碱类杀虫剂和多杀菌素的作用靶标。本研究利用RT-PCR和RACE技术,克隆了小菜蛾Plutella xylostella nAChR α亚基的一个新基因(Pxα8)的全长cDNA(GenBank登录号为EU914853)。Pxα8的cDNA序列全长1 744 bp,开放阅读框为1 602 bp,编码534个氨基酸,具有nAChR α亚基的典型特征,与其他昆虫nAChR α8亚基具有77%～96%的相似性,与果蝇nAChR β2亚基具有76%的相似性。Pxα8的开放阅读框存在单核苷酸多态性位点,导致多个位点氨基酸的替换。雌性4龄幼虫的多态性位点多于雄性4龄幼虫,而且雌、雄4龄幼虫的多态性位点均不相同。半定量RT-PCR研究结果表明,Pxα8 mRNA在成虫期表达量高于蛹期和4龄幼虫期。本研究结果为进一步研究小菜蛾nAChR 亚基的多样性和对多杀菌素的靶标抗性机制提供重要基础。