聚球藻类金属硫蛋白的纯化及部分性质的研究

单细胞蓝藻（Ｓｙｎｅｃｈｏｃｏｃｕｓｓｐ．ＰＣＣ７９４２）以５０μｍｏｌ／ＬＺｎ２＋诱导８ｄ后收集,破碎取上清液经凝胶过滤、离子交换层析及反相ＨＰＬＣ纯化得到类金属硫蛋白,产率为每升培养液收集１．５ｇ鲜藻,得２．５ｍｇ纯品．其单体分子量为８７５０,Ｎ未端测定为缬氨酸,氨基酸组成分析得每分子（５６个氨基酸）含１０个半胱氨酸,疏水氨酸较多,且含有芳香族氨基酸,原子吸收光谱测得每分子蛋白结合４个二价金属．以上表明,该种类金属硫蛋白与哺乳动物金属硫蛋白结构差异很大,可能只是一种进化上的趋同．     

斑头雁脱氧血红蛋白的晶体生长及X射线晶体学的初步研究

报导了以Ｎａ２Ｓ２Ｏ４为还原剂制备脱氧血红蛋白,并以聚乙二醇溶液为沉淀剂,在ｐＨ７．２,蛋白浓度２０ｍｇ／ｍｌ条件下培养出适合于Ｘ射线分析用的斑头雁脱氧血红蛋白晶体,经Ｘ射线平面探测仪收集衍射强度数据和处理。确定晶体属三斜晶系,空间群Ｐ１,晶胞参数α＝７．０９ｎｍ,ｂ＝９．５４ｎｍ,ｃ＝５．８７ｎｍ,α＝７２．８°,β＝６５．９°,γ＝８２．０°,ｖ－３４６．１ｎｍ３,每个不对称单位包含２个四聚体分子,共收集２．８分辨率的独立衍射点３０６５４个,Ｒｍ因子为５．１４％。     

蛹虫草金属硫蛋白分离纯化及性质研究

研究探讨锌离子胁迫下蛹虫草Cordyceps militaris金属硫蛋白的产生及性质。蛹虫草菌丝体以15g/L Zn2+在10L发酵罐中诱导培养56h后收集,产率为每升发酵液收集12.021g菌丝体（干重）,细胞破碎取上清液通过两次凝胶柱层析,冷冻干燥得到蛹虫草金属硫蛋白纯品。利用Bradford法进行蛋白质含量测定,用银饱和分析法结合原子吸收光谱（AAS）测定MT含量,发酵终点处金属硫蛋白含量为12.876mg/g菌丝体（湿重）。用电喷雾质谱法测得金属硫蛋白的分子量为7 390Da,用Ellman’s方法和火焰原子吸收法分别测得每分子蛋白质含有14个巯基、结合5个Zn原子。氨基酸组成分析结果显示,每分子蛋白质共含57个氨基酸,其中含有13个半胱氨酸,疏水氨基酸占29.8%,且含有组氨酸。以上表明,研究中的蛹虫草金属硫蛋白与哺乳动物金属硫蛋白结构差异较大,但与酵母菌金属硫蛋白结构组成类似。     

亚香棒虫草菌丝体金属硫蛋白的提纯及性质

【目的】探讨锌离子诱导亚香棒虫草(Cordyceps hawkesii)菌丝体金属硫蛋白的产生及性质。【方法】亚香棒虫草菌丝体以18 g/L Zn2+在10 L发酵罐中诱导培养64 h后收集菌丝体,产率为每升发酵液收集12.2 g菌丝体(干重),细胞破碎取上清液通过2次凝胶柱层析,冷冻干燥得到亚香棒虫草菌丝体金属硫蛋白纯品。利用考马斯亮蓝法(Bradford法)进行含量测定,用银饱和分析法结合原子吸收光谱(AAS)测定MT含量,用Ellman’s方法和火焰原子吸收法分别测得巯基含量和结合锌原子数,用电喷雾质谱仪测得分子量,全自动氨基酸分析仪测氨基酸组成。通过对羟基自由基、DPPH自由基和超氧阴离子自由基的清除率试验探讨亚香棒虫草金属硫蛋白的抗氧化活性。【结果】发酵终点金属硫蛋白产量为15.3 mg/g菌丝体湿重。金属硫蛋白的分子量为7 680 Da,每分子蛋白质含有18个巯基、结合4个Zn原子。氨基酸组成分析结果显示,每分子蛋白质共含60个氨基酸,其中含有15个半胱氨酸,且含有组氨酸和芳香族氨基酸。亚香棒虫草金属硫蛋白的抗氧化活性稍强于谷胱甘肽,弱于动物金属硫蛋白。【结论】亚香棒虫草在Zn2+胁迫下能够大量合成金属硫蛋白,且其金属硫蛋白的性质与哺乳动物金属硫蛋白有相似性。     

尿素对钼铁蛋白的活性和金属原子簇稳定性的影响

当尿素浓度高于０．５ ｍ ｏＬ／Ｌ时,棕色固氮菌（Ａｚｏｔｏｂａｃｔｅｒｖｉｎｅｌａｎｄｉｉ）固氮酶钼铁蛋白的乙炔还原活性呈指数下降;而经厌氧缓冲系统稀释并保温后,又可得到明显恢复。尿素对邻菲口罗啉从还原的或部分缺失Ｐ－ｃｌｕｓｔｅｒ 的ＭｏＦｅ 蛋白中螯合金属原子簇的Ｆｅ 原子均有较大的促进作用。还原ＭｏＦｅ 蛋白在尿素梯度凝胶电泳中的迁移率：在０～１．５ ｍ ｏｌ／Ｌ内,无明显变化;在１．５～５．０ ｍ ｏｌ／Ｌ内,线性变小;在５．０～８．０ ｍ ｏｌ／Ｌ内,则呈平缓状态。结果表明：（１）尿素对不同状态的ＭｏＦｅ 蛋白金属原子簇的影响程度不尽相同,而对蛋白质的变构作用是尿素影响ＭｏＦｅ 蛋白的活性和金属原子簇稳定性的主要原因;（２）ＭｏＦｅ 蛋白的构象与金属原子簇密切相关;（３）ＭｏＦｅ 蛋白在变性过程中,活性下降可能先于分子整体构象的变化     

酿酒酵母BD101诱导产生的金属硫蛋白的分离纯化及鉴定

从酵母菌中分离出拮抗重金属、经铜诱导产生金属硫蛋白的酿酒酵母（Saccharo－mycescerevisiae）BD101。无细胞抽提液经SephadexG－50、DEAESepharoseCL－4B、SephadexG-25三次凝胶及阴离子交换柱层析分离纯化得到两个金属硫蛋白亚型。Mr约为7kD,由60个氨基酸组成,其中半胱氨酸含量占10％,每分子金属硫蛋白（Cu-MT）含6个分子Cys,可结合4个铜原子。     

集胞藻类金属硫蛋白的纯化,性质和溶液构象的研究

集胞藻Synechocysitissp.PCC6803光照培养,加入100μmol/LZnCl2诱导藻内类金属硫蛋白（MT-like）的表达。离心收集鲜藻,超声波破碎细胞,离心除沉淀。上清液72℃加热3min去杂蛋白,离心,上清液依次经过分子筛层析柱,阴离子交换柱和脱盐柱,可得蓝藻类金属硫蛋白。5L培养液收集鲜藻7.6g,一次上样1．52g鲜藻的裂解物,冻干后得15mg纯化的蛋白样,为鲜藻重的0．1％．经分析其等电点为pH4．5,分子量为6．986kD,由58个氨基酸残基组成。其序列中含有较多疏水氨基酸残基（36％）,但其半胱氨酸含量仅为5％。CD（圆二色性）图谱表明其二级结构主要为无规卷曲,不含α－helix和β-sheet,无哺乳动物的金属硫蛋白所具有的典型双结构域结构。紫外吸收光谱表明Zn结合的类金属硫蛋白在220nm也有较高的吸收值。红外光谱分析的结果表明,此类金属硫蛋白的吸收光谱与高等动物的金属硫蛋白的吸收光谱类似。     

钙亲和层析分离纯化光系统Ⅱ中的钙结合蛋白（Ⅰ）

Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ６Ｂ经环氧氯丙烷活化后,与亚氨基二乙酸钠偶联。用钙离子作配体从光系统Ⅱ中分离纯化得到一种钙结合蛋白,在ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶上此蛋白呈现单一电泳谱带,分子量约为３０ｋＤａ。根据Ａｒｎｏｎ和Ｂｒａｄｆｏｒｄ方法测定的结果表明该蛋白质是叶绿素ａ／ｂ结合蛋白,每分子蛋白约结合有５分子叶绿素ａ,２分子叶绿素ｂ和一定数量的胡萝卜素分子。     

雪松聚球藻金属硫蛋白的纯化及其性质的研究

在雪松聚球藻的培养基中逐渐增加氯化镉的浓度以诱导藻细胞内金属硫蛋白的合成,经Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－５０,ＤＥＡＥ－ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ和Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－２５柱层析,获得的ＭＴ没有亚型,经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析是高度均一的。每个蛋白分子约含５个Ｃｄ原子,１０个巯基,分子量约为７．６ＫＤ,等电位ｐＨ４．５左右,半胱氨酸含量约占总氨基酸量的１５．５％,还含有少量的芳香族氨基酸,ＭＴ的最大紫外吸收在２５     

缺失nifZ的棕色固氮菌突变种钼铁蛋白的特性和结晶

从棕色固氮菌（Ａｚｏｔｏｂａｃｔｅｒ　ｖｉｎｅｌａｎｄｉｉ）缺失ｎｉｆＺ突变种中提纯得到的Δｎｉｆ　ＺＭｏＦｅ蛋白达到ＳＤＳ凝胶电泳纯。每个△ｎｆｉ　ＺＭｏＦｅ蛋白分子含１．５个Ｍｏ和１５．９个Ｆｅ原子,它的Ｆｅ和Ｍｏ比值低于野生型固氮菌ＭｏＦｅ蛋白的Ｆｅ和Ｍｏ比值,而它的Ｃ２Ｈ２、Ｈ＋还原活性及其比率（Ｃ２Ｈ４／Ｈ２（Ａｒ））分别为野生型ＭｏＦｅ蛋白的１６．６％、２１．７％和７７．２％。在与野生型ＭｏＦｅ蛋白结晶条件略有不同的情况下,所得的Δｎｉｆ　Ｚ　ＭｏＦｅ蛋白晶体为深棕色的斜四棱柱体晶体。表明ｎｉｆＺ的缺失可能使突变种ＭｏＦｅ蛋白中的Ｐ－ｃｌｕｓｔｅｒ或数目减少或结构发生变化,从而引起该蛋白的结构和功能发生明显改变。     

兔阑尾中一种新的21kD的钙结合蛋白的纯化与鉴定

纯化与鉴定了Ｂ淋巴细胞中一种新的分子量为２１ｋＤ的钙结合蛋白（ＣａＢＰ２１）。兔阑尾淋巴细胞匀浆经热变性,Ｐｈｅｎｙｌ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ与ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ柱层析,自每１ｋｇ细胞沉积物中获得ＳＤＳ－ＰＡＧＥ均一的ＣａＢＰ２１５．３ｍｇ。ＨＣｌ水解后的酸性氨基酸（Ａｓｐ＋Ｇｌｕ）含量为２６％。如同大多数钙结合蛋白一样,Ｎ末端封闭阻止其进行Ｅｄｍａｎ降解。ＣａＢＰ２１中疏水性氨基酸（计Ｇｌｙ,不计Ｔｒｐ）约占４６％,碱性氨基酸１０％,酸性氨基酸与极性氨基酸约４４％。ＣａＢＰ２１有较高的Ｓｅｒ、Ｔｙｒ含量。肽谱分析等确证ＣａＢＰ２１为２个相同或相似亚基二聚体。以ＡｒｓｅｎａｚｏⅢ作Ｃａ２＋结合分析表明每分子ＣａＢＰ２１可结合４分子Ｃａ２＋,对Ｃａ２＋的结合常数约为１０－５ｍｏｌ／Ｌ。各种性质表明ＣａＢＰ２１是一种不同于其他已知钙结合蛋白的新钙结合蛋白。     

湖南尖吻蝮蛇毒两个出血毒素的纯化和理化性质

经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－７５凝胶过滤,ＱＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ－５０和ＣＭ－ＳｅｐｈａｄｅｘＣ－２５离子交换层析的步骤,从湖南产尖吻蝮（Ｄｉｅｎａｇｋｉｓｔｒｏｄｏｎａｃｕｔｕｓ）蛇毒中纯化出两个出血毒素（ＤａＨＴ－１和ＤａＨＴ－２）．ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测得分子量均为２３．５ｋＤ,ＩＥＦ－ＰＡＧＥ测得等电点分别为５．６和５．２,两者具有相似的氨基酸组成,其中酸性氨基酸（Ａｓｘ,Ｇｌｘ）分别占２３％和２４％,ＤａＨＴ－１和ＤａＨＴ－２的最小出血剂量（ＭＨＤ）分别为０．５μｇ和０．８μｇ。都具蛋白水解酶活性,无对ＴＡＭＥ,ＢＡＥＥ的水解活性和ＰＬＡ２酶活性．两者的蛋白水解酶活力与出血活性并非正相关．ＤａＨＴ－１和ＤａＨＴ－２的最适温度分别为３５℃和４０℃,最适ｐＨ为６－９,对热均不稳定,温度高于６０℃活性完全丧失。金属离子的分析显示每摩尔毒素蛋白约含０．５ｍｏｌ的Ｚｎ,１ｍｏｌ的Ｃａ,较多的Ｎａ、Ｋ、Ｍｇ,不含Ｃｏ。     

何首乌叶铜锌超氧物歧化酶纯化及性质

何首乌（ＰｏｌｙｇｏｎｕｍｍｕｌｔｉｆｌｏｒｕｍＴｈｕｎｂ．）叶Ｃｕ·ＺｎＳＯＤ经硫酸铵盐析、离子交换柱层析及葡聚糖凝胶过滤等步骤,被分离成两组ＳＯＤ同工酶（ＳＯＤ１,ＳＯＤ２）,它们被纯化到均一程度。ＳＯＤ１分子量为３２．４ｋＤ,亚基分子量为１６．２ｋＤ,最适ｐＨ值为５０,在６０℃和６５℃时的半衰期分别为１４ｍｉｎ和８ｍｉｎ;ＳＯＤ２分子量为３０５ｋＤ,亚基分子量为１５９ｋＤ,最适ｐＨ值为６０,在６０℃和６５℃时半衰期分别为３２ｍｉｎ和１６ｍｉｎ,它由２７４个氨基酸残基组成,不含Ｃｙｓ、Ｔｙｒ和Ｔｒｙ。ＳＯＤ１和ＳＯＤ２每ｍｏｌ酶都含有２ｍｏｌＣｕ和２ｍｏｌＺｎ,它们在紫外区最大吸收波长均为２７５ｎｍ。     

淡水鱼内脏蛋白质的营养评价

淡水鱼内脏蛋白质占干物质的２３％以上。其赖氨酸含量高（７．６％）,含硫氨基酸为第一限制氨基酸,氨基酸组成模式较平衡。鱼内脏蛋白的蛋白质功效比（ＰＥＲ）为２．０,净蛋白质比（ＮＰＲ）为２．２７．鱼内脏蛋白与羽毛粉蛋白、血粉蛋白以５：３：２混合,对大鼠生长有较好的增重作用,混合蛋白的ＰＥＲ和ＮＰＲ分别为２．２７和２．６５,较鱼内脏蛋白有所提高。     

金属硫蛋白导向血栓单抗化学偶联体的制备及性质研究

金属硫蛋白（ｍｅｔａｌｏｔｈｉｏｎｅｉｎ,简称ＭＴ）是一类低分子量、富含半胱氨酸的蛋白质,由于１个ＭＴ分子可结合７个金属离子,因此ＭＴ分子具有很强的金属结合特性［１,２］．本文一方面利用ＭＴ分子的高金属结合性能,另一方面利用苏州医学院血液研究所研制成...     

小鼠金属硫收白基因在线状体蓝藻中的表达及对重金属抗生的提高

应用蓝藻金属硫蛋白启动子的金属诱导性,在丝状体蓝藻鱼腥藻中表达具有更高金属结合能力对Ｃｄ＾２＋有选择特异性的小鼠金属硫蛋白基因。构建窗梭表达载体ｐＫＴ－ＭＲＥ并在大肠相菌ＨＢ１０１中扩增,经三亲接全转移,链霉素筛选、ＤＮＡ和蛋白质印迹等方法鉴定得到稳定的转基因工程蓝藻。转基因蓝藻对金属离子吸附能力和较高重金属浓度下放氧活性测定表明,外源基因的表达提高了蓝藻对重金属离子的抗生,是野生蓝藻的１．５－２     

小鼠金属硫蛋白基因在丝状体蓝藻中的表达及对重金属抗性的提高

应用蓝藻类金属硫蛋白启动子（ｓｍｔＯＰ）的金属诱导性,在丝状体蓝藻鱼腥藻（Ａｎａｂａｅｎａｓｐ．ＰＣＣ７１２０）中表达具有更高金属结合能力和对Ｃｄ２＋有选择特异性的小鼠金属硫蛋白基因（ｍＭＴⅠｃＤＮＡ）。构建穿梭表达载体ｐＫＴＭＲＥ并在大肠杆菌ＨＢ１０１中扩增,经三亲接合转移、链霉素筛选、ＤＮＡ和蛋白质印迹等方法鉴定得到稳定的转基因工程蓝藻。转基因蓝藻对金属离子吸附能力和较高重金属浓度下放氧活性测定表明,外源基因的表达提高了蓝藻对重金属离子的抗性,是野生蓝藻的１．５～２．０倍。     

酵母菌SH2发酵产物增强干扰素抗病毒活性及其有效成分的初步研究

酵母菌 Ｓ Ｈ２ 发酵产物（ 简称 Ｆ Ｓ Ｈ２） ,用 Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ７５ 凝胶层析和 Ｈ Ｐ Ｌ Ｃ 色谱层析分离纯化,收集到一组蛋白。该组蛋白在 Ｐ Ａ Ｇ Ｅ 和 Ｓ Ｄ Ｓ Ｐ Ａ Ｇ Ｅ 电泳上带型一致,无蛋白亚基,分子量范围为５２ ～７２ ｋ Ｄ。凝胶上糖蛋白的特异性染色——— Ｓｃｈｉｆｆ’ｓ 染色显示阳性染色带;用 Ｌｏｗｒｙ’ｓ 法测蛋白和硫酸酚法测糖,显示蛋白与糖的比例约为３∶１ 。该组蛋白与人α干扰素作用,增强干扰素生物学效价分别为１ ．６ ～２ ．８ 倍和１ ．４ ～４ ．０ 倍;经 Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ７５ 凝胶层析的 Ｆ Ｓ Ｈ２ 蛋白洗脱峰增效２ ．０１ ～５ ．６８ 倍;发酵液增效１ ．６４ ～６ ．８６ 倍。并证实酵母菌 Ｓ Ｈ２ 增效干扰素的活性成分为５２ ～７２ｋ Ｄ 分子量范围的胞外糖蛋白（ 简称 Ｙ Ｅ Ｇ Ｐｓ） 。     

豌豆5SrRNA的cDNA克隆、全序列及结构特征分析

以赤霉素（ＧＡ）处理后的Ｇ２豌豆为材料,构建了一个２．０×１０６的ｃＤＮＡ文库,用随机筛选法从该ｃＤＮＡ文库中得到一个完整的ｃＤＮＡ．其中１１１５ｂｐ全序列分析表明,它编码了豌豆５Ｓ核糖体ＲＮＡ（５ＳｒｉｂｏｓｏｍａｌＲＮＡ,５ＳｒＲＮＡ）,基因内部存在着与核糖体蛋白Ｌ５及５ＳｒＲＮＡ结合蛋白（５ＳｒＲＮＡＢｉｎｄｉｎｇＰｒｏｔｅｉｎ）同源的区段,这些同源区段是蛋白与ＲＮＡ结合的位点．基因内部还存在着大量的重复序列．     

戊二醛浓度对免疫电镜胶体金标记密度影响的定量分析

经４％多聚甲醛＋０或０．５％戊二醛固定（１小时）大豆子叶细胞,大部分细胞器和蛋白体发生较大程度的变形,甚至解体,随着固定剂中戊二醛浓度升高对１．５、２．５％。细胞超微结构保存效果提高,蛋白体内反映７Ｓ蛋白质存在的胶体金颗粒密度分别为１９．７％和１１．４个／μｍ＾２。