悬浮细胞再生表达外壳蛋白的转基因Indica水稻对水稻条纹病毒的抗病性(英文)

合成、克隆了水稻条纹病毒中国株的外壳蛋白基因并进行了序列分析,由Indica水稻成熟胚的愈伤组织形成胚性运浮细胞。用含有CP基因的pROK2表达载体的DNA包被1.09μm直径钨粉颗粒轰击培养细胞。被轰击的培养物在含有G418（40mg／mL,）的培养基中进行选择培养,由对G418抵抗的愈伤组织中获得10株再生株。用32P－dCTP标记的CP基因作为探针,以Southernblot测定其转化特性。由抗病的和对照的植株抽提基因组DNA用EcoRI和BamHI进行酶切,其中两个植株显示出0.6kh和0.7kb两条条交带．其大小与CP基因相对应。Westernblot和ELISA测定进步证明CP（32kDa）在转基因水稻中表达。16株转基因植株和100株对照植株用带毒的叶蝉接种,接种病毒后24d只有37.5％的CP转基因植株产生病毒症状,而对照植株为96％。进一步证明转基因水稻植株具有对RSV的抗病性。转基因植株T1代CP的表达分离比例为3.6:1。     

用一种新型基因枪将外源基因转入水稻细胞(简报)(英文)

本文介绍了一种设计上改进的基因枪,用这种新型基因枪将外源基因转移到水稻细胞获得了表达。用包有pBI 121质粒DNA的钨微弹轰击水稻悬浮细胞以及成熟种子胚后,在悬浮细胞中检测到了外源基因(GUS)的表达。胚诱导的愈伤组织在无抗生素选择的条件下扩增并分化、再生,共获得30株绿色小植株。经DNA斑点杂交测得其中两株的植物总DNA中存在GUS基因。Southern杂交分析证实GUS基因整合到了水稻基因组.     

籼稻蜡质基因5＇上游区与GUS基因编码区融合基因的构建和在水稻中的瞬间表达

为了鉴定水稻蜡质基因５＇上游区的顺式作用因子与研究它们在组织专一性表达中的作用,我们对籼稻品种２３２的蜡质基因５＇上游－１１５至－２１２０的区域进行了顺序测定,并将此基因的５＇上游区同报告基因ＧＵＳ构建成融合基因,用基因枪粒子轰击的方法将此融合基因导入水稻未成熟种子的幼胚和糊粉层细胞中,瞬间表达检测的结果表明,我们构建的融合基因中蜡质基因５＇上游区的长度已足以使ＧＵＳ基因在上述组织中表达。     

水稻体细胞培养中胚性细胞出现与IAA的关系

水稻体细胞培养中胚性细胞出现与ＩＡＡ的关系陈以峰１周燮２汤日圣２张金渝２梅传生１（南京农业大学农学系南京２１００９５）２（江苏省农业科学院农业生物遗传生理研究所南京２１００１４）关键词水稻,胚性细胞,ＩＡＡ,２,４二氯苯氧乙酸,２,３,５三碘...     

通过基因枪提高根癌土壤杆菌转化水稻的效率

携带普通双元载体的根癌土壤杆菌（Ａgrobacterium tumefaciens (Smith et Townnsend)Conn)EHA105菌株对粳稻（Oryza sativa L.ssp.japonica)中花８号不敏感,转化效率较.在因枪将根癌土壤菌细胞直接轰击到水稻愈伤组织中可以显提高其转化效率。Ｓouthern检测证明转基因植物含有单拷贝的外源基因插入片段,转基因植物后代的ＧＵＳ基因表达呈３：１分离。     

提高水稻基因枪转化效率的研究

在转化前将受体材料转移到高渗培养基上,即用含有一定浓度的甘露醇和山梨醇的培养基对受体材料进行处理。基因枪轰击后把受体材料转出,结果表明,这样做明显提高了瞬时表达（ＧＵＳ基因的表达）效果,用可筛选的标记基因（潮霉素磷酸转移酶基因,ＨＰＴ）试验表明,经高渗处理后,稳定转化的效率也有提高。用基因枪将带有ＨＴＰ基因的粒子轰击其盾片,经过筛选及植株再生,获得了转基因植株,ＰＣＲ扩增反应及Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交证明了外源基因已整合入水稻的基因组     

表达反义核酶RNA的转基因水稻对矮缩病毒复制和症状的抑制作用

用基因枪法将含有ＲＤＶ第五片段反义核酶序列基因的植物表达载体ｐＲＯＫＩＩ转化水稻幼胚,在Ｇ４１８存在的条件下,约２～３个月可筛选出抗性愈伤,转入分化培养基中培养可分化出幼苗。经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交法检测为阳性的水稻幼苗进行抗病性测定显示,转ＲＤＶ反义核酶基因的水稻植株对ＲＤＶ的复制和症状有显著抑制作用。转基因植株发病较轻,并能部分结实,而对照植株则明显矮化且大多不能抽穗。     

抗菌肽B基因导入水稻及转基因植株的鉴定

构建了一个适合在水稻中表达的含有抗菌肽B基因的转化载体(pCB1),应用基因枪转化法将其导入水稻未成熟胚,获得了一些转基因水和植株.Basta抗性鉴定,抗菌肽B基因PCR扩增分析,点渍印迹和Southern印迹分析结果表明,选择标记基因(bar)和抗菌肽B基因都已整合入转化水稻基因组中,Northern印迹分析证实了抗菌肽B基因在RNA水平上的表达.转基因水稻植株增强了对水稻白叶枯病和细条病的抗性.     

利用水稻启动子捕获系筛选水稻胚发育相关基因的初步研究

通过对2227个启动子捕获系中报道基因β-葡萄糖苷酸酶(β-glucuronidase,gus)表达活性检测,筛选到7个水稻胚中表达GUS活性的启动子捕获系,对其中编号为W9154的捕获系作了进一步分析。Southern杂交分析表明W9154是一个单拷贝T-DNA插入系,其T-DNA插入在水稻基因组第3号染色体上一个未知蛋白基因的第2个内含子中。对该未知蛋白基因上游调控序列生物信息学分析显示,其调控序列除含有TATA-box和CAAT-box等常见启动子元件外,还含有RY基序、E盒、G盒及AACA等种子特异性启动子的特征性元件。表达特征分析发现,编码上述未知蛋白的基因在野生型水稻的胚和茎中表达,这与捕获系W9154中GUS表达活性完全一致。这些表明启动子捕获系w9154捕获的候选基因可能是一个水稻胚发育相关基因。     

水稻花药特异启动子Osg6B的序列及功能分析

对水稻花药特异表达基因Ｏｓｇ６启动子简称Ｏｓｇ６Ｂ的全序列进行了测定,结果表明,Ｏｓｇ６Ｂ含有１．７３ｋｂ个核苷酸,与文献报道的该启动子相差仅８个核苷酸,两者核苷酸同源性为９９．５％。将Ｏｓｇ６Ｂ同ＧＵＳ基因编码区相连,将构建成的融合基因用基因抢轰击烟草的花药和幼叶,荧光分析结果为含Ｏｓｇ６Ｂ的ＧＵＳ融合基因在大于２ｍｍ烟草花药中的表达量比对照和幼叶均高出８倍,在小于或等于２ｍｍ的花药中,则高达到     

水稻bicoid反义基因转基因植株胚胎发育的形态变化

Bicoid是调控果蝇胚胎极性及以后分节发生过程的重要基因,这一基因编码的蛋白是一种转录调控因子,对一组早期胚胎发育过程中的多齿基因的表达具有调控作用,并被称为形态发生剂。在以前的工作中,从水稻cDNA文库中分离了一个同果蝇bicoid有相当同源性的克隆-Rb24基因（EMBL登录号：AJ2771380）。为进一步了解它在水稻中功能,将Rb的反义基因片段通过农杆菌的介导转入水稻中。通过Gus活性检测和PCR鉴定所获的抗性植株为转基因植株,转基因植株一个很明显的变化就是大约有50%的种子是败育的。通过石蜡切片观察了转基因水稻幼胚的发育情况,结果表明细胞的组织的分化在胚的发育过程中被阻断了。因此Rb基因同控制水稻胚的发育有关。     

水稻bicoid反义基因转基因植株胚胎发育的形态变化

Bicoid 是调控果蝇胚胎极性及以后分节发生过程的重要基因,这一基因编码的蛋白是一种转录调控因子,对一组早期胚胎发育过程中的多齿基因的表达具有调控作用,并被称为形态发生剂。在以前的工作中,从水稻cDNA文库中分离了一个同果蝇bicoid 有相当同源性的克隆—Rb24 基因（EMBL登录号：AJ2771380） 。为进一步了解它在水稻中功能,将Rb 的反义基因片段通过农杆菌的介导转入水稻中。通过Gus活性检测和PCR鉴定所获的抗性植株为转基因植株,转基因植株一个很明显的变化就是大约有50%的种子是败育的。通过石蜡切片观察了转基因水稻幼胚的发育情况,结果表明细胞和组织的分化在胚的发育过程中被阻断了。因此Rb基因同控制水稻胚的发育有关。     

水稻原生质体培养再生植株程序化的初步研究

从１２个品种水稻成熟种子诱发愈伤组织并继代培养,通过ＭＳ培养基中２,４－Ｄ浓度的变换,研究了２,４－Ｄ对水稻愈伤组织生长的影响。用ＡＡ培养基建立适合原生质体培养的胚性细胞悬浮系仅需３个月。由悬浮细胞系游离的原和一质体在改良的ＫＰＲ培养基中进行液体浅层培养,有１０个品种获得高植板率的细胞团。变换使用不同的分化培养基,从７个品种得到再生植株。实验重复性达到８０％,初步实现了水稻原生质体培养的程序化。     

植物抗毒素转化水稻和转基因植株的生物鉴定

用基因枪法转化了水稻（ＯｒｙｚａｓａｔｉｖａＬ．）６个材料的未成熟胚、成熟胚及胚性愈伤组织。质粒ｐＳＳＶｓｔ１和ｐＶＥ５＋是由葡萄中分离出的编码芪类合成酶的植物抗毒素基因与３５Ｓ或它自己的启动子组成。Ｇ４１８（１００～１５０ｍｇ／Ｌ）或潮霉素（５０ｍｇ／Ｌ）筛选后,经ＰＣＲ、Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ或Ｄｏｔｂｌｏｔ分析证明的转基因植株共５４株。对转基因植株及其后代进行了稻瘟病和白叶枯病的抗性鉴定。初步结果表明,芪类合成酶基因可以提高转基因植株及后代的抗性。     

基于TAC载体的水稻转化系统的建立

将含有大约50kb水稻基因组片段的TAC17克隆(NK15)通过电击转化到农杆菌LBA4404中,经多次继代培养,该克隆在农杆菌中是稳定的。用常规的农杆菌介导方法将该克隆转化粳稻品种农垦58S成熟胚的愈伤组织,对T0代进行PCR和Southern杂交分析表明,TAC17所携带的50kb外源DNA片段已完整地整合到水稻基因组上,整合方式多数为单位点插入,整合位点是随机的。经T1代分析表明,外源基因可以稳定地遗传,而且进一步确定外源大片段的整合方式为为单位点插入。     

多胚水稻品系SB—1的细胞胚胎学研究：助细胞无配子生殖

对多胚水稻（Ｏｒｙｚａ ｓａｔｉｖａ Ｌ．）品系ＳＢ－１ 自然群体中单倍体来源进行的细胞胚胎学研究表明,卵器中的一个或两个助细胞能在受精之前发育成胚,其发生率分别为观察子房数的２．２４％ 和１．７５％ 。在１ 个助细胞提前发育成胚的胚囊中观察到双受精作用。在开花后３—８ ｄ的颖果中观察到１．６２％ 的与合子胚迥异的异位瘦长单胚和０．８１％ 的有胚无胚乳子房,根据胚所处的位置认为其来源于助细胞无配子生殖。此外,还观察到极少数的中央细胞未经受精自发产生胚乳的现象。讨论了ＳＢ－１中发生的无配子生殖的意义     

影响水稻幼穗培养体细胞胚胎发生因素的研究

用水稻幼穗为外植体进行组织培养,研究了影响其体细胞胚胎发生的有关因素,建立了高频率体细胞胚胎发生的培养程序。结果表明不同基因型之间体细胞胚胎发生率的差异达到61．2％;生长素2,4－D对诱导水稻体细胞胚起重要的调控作用,细胞分裂素BA有一定的协同促进作用。干燥处理可提高愈伤组织体细胞胚胎发生率,愈伤组织含水量在60％～80％范围的培养效果较好;外源DNA溶液浸泡发育早期的心状体细胞胚．其进一步发育时异常胚的频率显著增加．成苗率降低。     

利用转基因生物技术防御水稻东格鲁病毒

《ＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｒｅｅｄｉｎｇ》１９９９年５卷２期１７７～１８５页报道：美国蒙大拿州立大学植物学与土壤和环境科学系的科学家Ｓｉｒａｍａｎｉ等利用粒子轰击法将水稻东格鲁球状病毒（ＲＴＳＶ）的衣壳蛋白（ＣＰ）基因ＣＰ１、ＣＰ２和ＣＰ３个别或共同引入籼稻和／或粳稻细胞。再通过ＲＴＳＶ的天然传播媒价二点黑尾叶蝉将ＲＴＳＶ接种于原始转化体的自交后代植株。ＲＮＡ印迹分析表明,在含有目标基因的１９个选育转基因水稻株系中的１６个株系及其Ｒ１、Ｒ２和／或Ｒ３后代中积累了嵌后ＣＰ基因的转录本。还发现,个别或共…     

水稻胚性悬浮细胞的包埋脱水法超低温保存

用包埋脱水法冷冻保存水稻胚性悬浮细胞。整个过程包括：胚性悬浮细胞预培养、细胞包埋、二次预培养、包埋细胞脱水、液氮冰冻,细胞解冻和冷冻细胞恢复培养。结果表明,在细胞水分含量为25．17％和蔗糖浓度依次递增以及第2次预培养34d的存活率最好。在培养基中加2．5g·L^-1活性炭有利于细胞的恢复生长。细胞恢复培养后,能再产生愈伤组织,但生长变慢,有约5d的滞后期。     

水稻sbe1启动子驱动的反义sbe-GUS融合基因在转基因水稻中的表达

为研究水稻基因启动子对外源基因在转基因水稻中表达的影响,构建了由sbe1启动子引导的反义sbe-GUS融合基因。经农杆菌介导,将不同的融合基因导入水稻中,定量测定转基因水稻植株不同组织中的GUS酶活力。结果表明,sbe1启动子可驱动反义sbe-GUS融合基因在转基因水稻植株的胚乳中高效表达,而在颖壳、胚和茎叶等组织中的表达活性较弱。证实sbe1启动子在驱动外源基因的表达上表现有明显的组织特异性。