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鸡Zong凝集素的分离纯化与性质研究 总被引:1,自引:0,他引:1
鸡Zong菌丝体浸取液依次经硫酸铵分级沉淀,DEAE-Sepharose CL-6B离子交换层析和Sephadex G-100分子筛层析3个主要步骤纯化得到一种凝集素(TAL)。纯化的TAL在聚丙烯酰胺凝胶电泳上显示一条蛋白质着色带。TAL的分子量为89.4kD,亚基分子量为38kD和51kD,提示TAL分子由两个不同亚基组成。TAL具有供血动物种属专一性,使Wistar大鼠红细胞凝集所需TAL最 相似文献
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本文以GST-UVS.2抗体和卵黄膜为检测手段,采用凝胶过滤和离子交换等方法将非洲爪蟾(Xenopuslaevis)孵化酶纯化了90倍以上,并研究了其酶活性和生化特性。实验发现,孵化酶分子量为60kD,有很强的蛋白酶活性和卵黄膜溶解活性;它很不稳定,在纯化时极易降解为40kD分子,40kD分子没有卵黄膜溶解活性,但仍有很强的蛋白酶活性。40kD分子很可能只代表60kD分子中的蛋白酶功能区,而丢失了两个CUB重复区。孵化酶对EDTA和金属离子非常敏感、又为p-APMSF等胰蛋白酶抑制剂所强烈抑制,表明它是属于胰蛋白酶类型的一种金属蛋白酶。其特异性MCA-底物为Boc-Leu-Gly-Arg-MCA。 相似文献
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蓖麻蚕卵天冬氨酸蛋白酶纯化及性质 总被引:2,自引:0,他引:2
采用硫酸铵沉淀,离子交换层析和离子交换凝胶过滤法,从蓖麻蚕卵母细胞中纯化出一种蛋白酸疼。该蛋白酶活性能被天冬氨酸蛋白酶特性异性抑制剂胃肽抑制,初步鉴定该酶为天冬氨酸蛋白酶,经SDS-聚丙烯配角安凝胶电泳测得电泳测得分子量为90kD,由凝胶过滤估计分子量在360kD,推测该酶由四亚基组成。 相似文献
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菜豆幼苗EPSP合成酶的分离纯化和它的部分性质 总被引:3,自引:0,他引:3
利用硫酸铵分级沉淀,Sephedex G-50凝胶柱层析,FPLC Mono-Q和磷酸纤维素离子层析法从菜豆幼苗中分离提纯了EPSP合成酶。该酶被纯化2961.6倍,比活性达到6219.4nmolmg^-1蛋白min^-1。该酶分子量经SDS-PAGE检测为51kD,等电点为pH5.7,酶促反应最适pH7.5,最适温度45℃。6.2μmol/L的除草剂草甘膦能抑制EPSP合成酶活性的50%。 相似文献
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耐热邻苯二酚2,3—双加氧酶的高表达,纯化及性质 总被引:7,自引:0,他引:7
来自嗜热脂肪芽孢杆菌中的邻苯二酚2,3-双加氧酶显示出较高的热稳定性。为了获得足够量的酶以研究其理化性质并分析热稳定性的分子基础,从克有编码该蛋白质的pheB基因的E.coli中获取它的高表达产物,经热变性处理,硫酸铵分级沉淀,DEAE-52离子交换层析,phenyl-Sepharose CL-4B疏水层析,得到电泳呈单一条带的酶蛋白,得率16%以上。该酶是由4个分子量为36.4kD的相同亚基组成 相似文献
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非洲爪蟾孵化酶的纯化及其部分化特性研究 总被引:1,自引:0,他引:1
本文以GST-VUS.2抗体和卵黄膜为检测手段,采用凝胶过滤和离子交换等方面将非洲爪蟾(Xenopus laevis)孵化酶纯化了90倍以上,并研究了其酶活性和生化特性。实现发现,孵化酶分子量为60kD,有很强的蛋白酶活性和卵黄膜溶解活性;它很不稳定,在纯化时极易降解为40kD分子,40kD分子没有卵黄膜溶解活性,但仍有很强的蛋白酶活性。40kD分子中能只代表60kD分子中的蛋白酶功能区,而丢失了 相似文献
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枯草芽孢杆菌中性β-甘露聚糖酶的纯化及性质研究 总被引:8,自引:0,他引:8
经硫酸铵分级沉淀、超滤浓缩、阴离子交换层析和凝胶过滤层析,由枯草芽孢杆菌(Bacilussubtilis)BM9602培养滤液得到了常规凝胶电泳一条带的中性β-甘露聚糖酶.该酶具有与其它已知同类酶相类似的性质,但用SDS-PAGE测得该酶分子量为37kD;用聚丙烯酰胺等电聚焦电泳测得等电点pI为4.9. 相似文献
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黑曲霉木聚糖酶的纯化与性质 总被引:15,自引:0,他引:15
由凝胶电泳酶谱检测到黑曲霉149发本酵液中存在两型木聚糖酶,依次为X-Ⅰ和X-Ⅱ。通过硫酸铵分级沉淀及DEAE-Sephadex A50柱层析分别将X-Ⅰ、X-Ⅱ纯化到凝胶电泳均一。由SDS-凝胶电泳和浓度梯度凝胶电泳测得X-Ⅰ和X-Ⅱ的分子量分别为37kDa,24kDa和23kDa,X-Ⅰ具有亚基。二者的含糖量分别为27.6%和7.3%。X-Ⅰ和X-Ⅱ最适返应温度分别为50℃和55℃,pH为4. 相似文献
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3-氰基吡啶水合酶的纯化及性质 总被引:1,自引:0,他引:1
马红球菌SHB-121胞内3-氰基吡啶水合酶经硫酸铵分级沉淀、DEAE-cellulose DE52和羟基磷灰石柱层析并经过Sephadex G-25处理,得到了聚丙烯酰胺凝胶电泳均一的3-氰基吡啶水合酶,纯化了31倍。该酶由一条肽链组成,棋 分子量为30kD,等电点4.1,3-氰基吡啶水合酶能催化3-氰基吡啶水合生成尼克酰胺。酶反应最适PH为8.0,最适温度为30℃,Ag^+、Hg^2+、Cu^ 相似文献
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系统感染TMV (tobacco m osaic virus)的番茄(Lycopersicon esculentum Mill.)叶胞外蛋白提取液经冰冻干燥浓缩、- 20℃丙酮沉淀、CM-Sephadex C-25离子交换层析、DEAE-Sephadex A-25离子交换层析和Sephadex G-75凝胶层析纯化,获得PAGE均一的β-1,3-葡聚糖酶.SDS-PAGE证明,它包含分子量为36 kD 和27 kD的两个同工酶.以昆布多糖为底物,酶的最适pH 在4.8—5.2之间,在pH 4—8稳定;酶的最适温度在30—40℃之间,在40℃保温1h 后酶活性不变;Km 值为9.2 m g/m L.在系统感染TMV 的番茄叶胞外蛋白提取液中,有分子量为22 kD、27 kD和36 kD的3个β-1,3-葡聚糖酶同工酶 相似文献
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利用PEG分级,DEAE离子交换层析,Bhue Sepharose拟亲和层析,MonoQ离子交换层析等手段,分离纯化直二氏藻甘油三磷酸(G-3-P)脱氢酶(EC1.1.1.8)得到比活为12.6u/mg的电泳纯的酶,并对此酶的生化特性进行了研究。4-20%非变性聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳测得全酶分子量约为270kD,SDS-PAGE表明该酶只有一种分子量约为65kD的亚基,据此推测该酶应为同四聚体。酶 相似文献
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人胃腺苷脱氨酶的分离纯化及性质研究 总被引:2,自引:0,他引:2
用硫酸铵分级沉淀、DEAE-纤维素离子交换层析、免疫亲和层析、SephadexG-100凝胶柱层析从人胃组织中提取出腺苷脱氨酶。酶纯化19324倍,比活力为5797U/mg蛋白。提取酶液经PAGE、SDS-PAGE和等电聚焦只呈现一条区带。测得该酶的分子量为41.2kD,等电点为pH4.8,氨基酸组成分析表明该酶由388个氨基酸残基组成,N端氨基酸为精氨酸。酶的最适pH为6.5,pH小于5.0或大 相似文献
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贻贝(Perna viridis)超氧化物歧化酶的纯化及部分性质研究 总被引:3,自引:0,他引:3
采用55-60℃热处理,硫酸铵分级深沉和DEAE-SepharoseFF柱层析将贻贝Cu,Zn-SOD纯化到均一程度。每100g鲜贻贝肉可得到SOD制品,总活力3689u,比活力782u/mg,回收率为21%。测得该酶分子量为32kD,亚基分子量约为16.4kD,最大紫外吸收波长为268nm,,贻贝Cu,Zn-SOD具有一定的耐热性,较强的抗酸、抗碱及抗脲性。 相似文献
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花生根瘤菌类菌体经超声波破碎,TritonX-100溶解,正已烷-硫酸铵处理后,再经DEAE-纤维素和Sephacryl凝胶柱层析等纯化步骤,获得凝胶电泳纯的膜结合态氢酶,比活为71.4μmolH2mg-1Protmin-1,为类菌体吸H2活性的211倍。纯化的氢酶分子量为110kD。经SDS-PAGE后,呈现两个蛋白带,分子量分利为65kD和35kD。纯酶的Ni含量为0.62molNi/mol氢酶。在磷酸缓冲液中其活性的最适pH为6.5。DCIP、亚甲蓝、铁氰化钾、细胞色素C均可作为氢酶的电子受体,其中以DCIP为最适。 相似文献
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枸杞果实铁型超氧物歧化酶的纯化及性质 总被引:7,自引:1,他引:6
枸杞果实Fe-SOD粗提液经硫酶铵盐析、离子交换柱层析及凝胶过滤,纯化到电泳单班点均一程度。纯化的Fe-SOD分子量为44.6kD,亚基分子量为22.0kD。金属元素分析表明,每分子酶含1个Fe原子。该酶在紫外区最大吸收值为278nm。H2O2明显抑制该酶活性,KCN对酶活性无影响。该酶氨基酸组成与高等植物和蓝绿藻的Fe-SOD相似,但它具有较高甘氨酸,酸性氨基酸与碱性氨基酸比值高于等植物而与低等 相似文献
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圆弧青霉碱性脂肪酶的分离纯化的特性 总被引:1,自引:0,他引:1
圆弧青霉突变株PG37发酵液经离心、硫酸铵盐析、疏水层析、阴离子交换层析和凝胶过滤分离纯化得到了比活性为每毫克蛋白质5200u的碱性脂肪酶,纯化倍数16.5,得率33.2%,在聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电脉(SDS-PAGE)上均呈现单一 白质条带。SDS-PAGE和凝胶过滤分别测得酶的分子量为27.5kD和29.kD,表明该酶以单体形式存在。N末端10个氨基酸的序列测 相似文献
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菠菜叶片提取液经PEG-6000沉淀、DE-52离子交换柱层析及分子筛SephectylS-300凝胶过滤得到两种分子量不同的依赖ATP的磷酸果糖激酶(PFK)。一为大分子酸型,分子量大于2000kD,其活力可被Pi、3-PGA、柠檬酸激活,被PEP强烈抑制,Pi能减缓此抑制作用,Mg2+为必需金属离子,但其浓度高于0.5mmol/L时酶活力降低;一为小分子酸型,分子量为300kD,其活性受Pi、3-PGA、柠檬酸和PEP抑制,Mg2+亦为必需金属离子,Hill系数为0.67,表现负协同效应。实验证明小分子酸型可能存在叶绿体中,大分子酸型属于胞质酶。 相似文献
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固氮粪产碱菌谷氨酰胺合成酶的分离纯化及其特性 总被引:1,自引:0,他引:1
联合固氮细菌粪产碱菌A1501菌体经超声破碎后,无细胞粗提液以PEG-6000分级沉淀,丙酮沉淀,再经蓝球脂糖亲和层析分离、纯化。获得的纯谷氨酰胺合成酶(GS)在SDS-PAGE和4-30%梯度PAGE上均呈均一的一条带。GS亚基及整酶分子量分别为55KD和645kD,亚基由456个氨基酸残基组成。GS的Km值。在以Glu为源的介质中培养时分别为20mmol/L(Glu),50mmol/L(ATP 相似文献