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用1%胆酸钠和15%孢和硫酸铵相结合的方法,从牛脑皮层细胞膜中抽提得到主要含激活型G-蛋白和腺苷酸环化酶两种蛋白组分的制剂,然后通过Sepharose6B柱将两者分开,将含Gs高活力的级分用庚胺-Sepharose4B柱进一步分离,即可获得高活力的Gs,SDS-PAGE显示为分子量45000和36000的两条蛋白带,该法具简便,快速,重复性好、产率高等优点,且可同时获得无Gs污染的AC。用无Gs污 相似文献
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青霉素酰化酶活性中心的定点突变 总被引:7,自引:1,他引:6
对E.cole ATCC 11105的青霉素酰化酶(penicillin G acylase,PGA)活性中心的Ser290分别进行了定点突变和和化学修饰,将活性中心的Ser290改变成Cys或Secys,PGA水解活力均大为下降,但仍保留部分活性。其对底物6-硝基(3-苯乙酰氨基)苯甲酸(6-nitro-3-phenylacetamido benzoic acid,NIPAB)的kcat分别从1 相似文献
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Metylomonassp.GYJ3菌的甲烷单加氧酶(MMO)粗酶提取液经DEAE-SepharoseCL-6B阴离子交换层析、SephadexG-100凝胶过滤层析和DEAE-TSKgelHPLC分离纯化出MMO还原酶组分.经HPLC分析,纯度大于95%,纯化倍数为4.4,加入至MMO羟基化酶和调节蛋白B的体系中表现比活为228nmol环氧丙烷每分钟毫克蛋白.SDS-PAGE电泳表明还原酶由一种亚基组成,分子量42kD.ICP-AES测定还原酶的Fe含量为1.83molFe每mol蛋白.UV-Vis光谱表明还原酶除280nm蛋白质特征峰外在460nm有最大吸收峰,且A280nm/A460nm为2.50,与其它黄素一铁硫蛋白相似,推测还原酶可能含一个FAD辅基和Fe2S2中心.在厌氧条件下,还原酶能够和NADH作用,UV-Vis光谱分析表明还原酶460nm处特征吸收峰消失,说明在MMO催化过程中还原酶接受NADH的电子.DEAE-SepharoseCL-6B阴离子交换层析分离出调节蛋白B,部分纯化的调节蛋白B的分子量大约在20kD,它能够提高MMO比活性40倍,MMO还原酶和调节蛋白B单独存在时不具有MMO 相似文献
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蛋白水解酶活力测定新方法 总被引:1,自引:0,他引:1
蛋白水解酶活力测定新方法周慧,鲁治斌,齐杰,李惟(吉林大学分子生学系.长春130023)G.F.Bickerstaff(Dept.ofBiology,PaisleyUniv,Scotland,U.K)本文研究了一种测定蛋白水解酶(Proteinase... 相似文献
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慈菇(Sagittaria safittifolia)α—半乳糖苷酶的纯化与性质 总被引:1,自引:0,他引:1
以对硝基苯糖苷基为底物,测定了慈菇的12种糖苷酶,其中α-甘露糖苷酶,α-和β-半乳糖苷酶活力较高,经硫酸铵分级沉淀,SephadexG-150分子筛层析,ConA-Sepharose4B亲和层析,DEAE-SepharoseCL-6B离子交换层析,从慈菇抽提液纯化了α-半乳糖苷酶,纯化酶的比活提高1072倍,活力回收15.6%,在圆盘聚丙烯酰胺凝胶电泳和SDS-PAGE上均显示了1条蛋白质带,在 相似文献
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L—山梨糖脱氢酶的纯化及性质的研究 总被引:12,自引:2,他引:10
从5L罐发酵L-山梨糖的Gluconibacter oxydans SCB329和Bacillus thuringiensis SCB933混合菌株中差速离心收集SCB329菌体,破碎,离心获得无细胞抽提液,硫酸铵分级沉淀蛋白后依次经DEAE Cellulose 52和Q Sepharose FF柱层析分得到了L-册梨糖脱氢酶(SDH),它能将L-册梨糖脱氢氧化为L-册梨酮,SDS-PAGE电泳测 相似文献
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土壤微生物生物量周转的估算 总被引:44,自引:5,他引:39
土壤微生物生物量周转的估算高云超,朱文珊,陈文新(北京农业大学生物学院,100094)EstimationforBiomassandTurnoverofSoilMicroorganisms¥GaoYunchao;ZhuWenshan;ChenWenxin(CollegeofBiologicalSciences,BeijingAgriculturalUniversity,Beijing100094).ChineseJour-nalofEcology,1993,12(6):6-10。Toobtainsomeinformationabouttransformationofmineralnutrientsbysoilmicroorganisms,wehavemeasuredtheamountandturnoverrateofsoilrnicrobialbiomassinno-tillage,directdrillingandplow-ingsoils.Microbialbiornassinno-tillagetopsoilis51.7%and26.0%higherthanthoseinplowinganddirec 相似文献
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芝田硫化叶菌麦芽寡糖基海藻糖合酶基因在大肠杆菌中的克隆和表达 总被引:6,自引:0,他引:6
用PCR 方法从芝田硫化叶菌中扩增了编码一种新酶,即麦芽寡糖基海藻糖合酶( MTSase) 的基因,扩增的2-2kb DNA 插入到原核表达载体pBV220 中,构建成重组质粒pSBGT1 。pSBGT1 中MTSase 基因在大肠杆菌中得到表达。SDSPAGE 分析表达产物MTSase蛋白的分子量约为74kDa ,同核苷酸序列测定所推导的值相符。表达产物占细胞总蛋白约4-4 % 。pSBGT1 产生的重组酶作用于淀粉部分水解物,使DE 值降低,得到非还原糖或低还原糖。 相似文献
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以对硝基苯糖苷基为底物,测定了慈菇的12种糖苷酶,其中α-甘露糖苷酶、α-和β-半乳糖苷酶活力较高;经硫酸铵分级沉淀,SephadexG-150分子筛层析,ConASepharose4B亲和层析,DEAE-SepharoseCL-6B离子交换层析,从慈菇抽提液纯化了α-半乳糖苷酶。纯化酶的比活提高1072倍,活力回收15.6%,在圆盘聚丙烯酰胺凝胶电泳和SDS-PAGE上均显示1条蛋白质带,在α-半乳糖苷酶浓度为150mU/ml的溶液中测不到其他糖苷酶的活力。慈菇α-半乳糖苷酶的分子量用SephadexG-100凝胶过滤柱测定或在SDS-PAGE上测定均为60kD,酶反应的最适pH在5.8附近,最适温度为60℃。该酶分解对硝基苯基-α-半乳糖苷的K_m值为3.7×10 ̄(-4)mol/L,V_m值为2.1×10 ̄(-4)mol/L。银离子、汞离子显著抑制酶活力,D-半乳糖和密二糖均竞争性地抑制该酶水解对硝基苯基α-D-半乳糖苷的活力,根据Dixon作图求得其K_i值分别为0.92×10 ̄(-3)mol/L和1.98×10 ̄(-3)mol/L。2-脱氧-D-半乳糖和L-岩藻糖为酶活力的非竞争性抑制剂。化学修饰 相似文献
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香椿的组织培养和玻璃苗的防止 总被引:2,自引:0,他引:2
1植物名称香椿(Toonasinensis)。2材料类别(1)种子发芽3~5d后的下胚轴及带少许下胚轴的子叶;(2)当年生半木质化的腋芽茎段。3培养条件芽诱导及增殖培养,以MS为基本培养基,蔗糖30g·L~(-1),琼脂0.5%,附加激素(单位mg·L~(-1)):(1)6-BA0.2;(2)6-BA0.2、GA_32.0;(3)IAA0.1、6BA0.2;(4)ZT0.2、GA_32.0。诱导生根培养基为1/ZMS或仅含MS有机质(铁盐减半),附加1.0mg·L~(-1)IBA、15g·L~(-1)… 相似文献
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IncorporationofResistanceGeneintoTomatousingBinaryVector SystemZHAOShu-hui(赵淑慧);XUEGuo-xiong(薛国雄)(InstituteofDevelopmentalBio... 相似文献
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雪花莲外源凝集素基因转化番茄 总被引:20,自引:0,他引:20
将含有雪花莲外源凝集素基因(GNA)的质粒pRSSGNA1通过冻融法转化到根癌土壤杆菌9Agrobacterium tumefaciens(Smith et Townsend)Conn)菌株LBA4404中。采用叶盘法转化番茄(Lycopersicon esculentum Mill.)栽培品种“C8”、“A39”和“A53”,获得了含GNA基因的43株转化植物株。通过卡那霉素抗性鉴定、NPTⅡ基 相似文献
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L-山梨糖脱氢酶的纯化及性质的研究 总被引:2,自引:0,他引:2
从5L罐发酵L-山梨糖的Gluconobacter SCB329和Bacillus thuringiensis SCB933混合菌株中差速离心收集SCB329菌体,破碎,离心获得无细胞抽提液,硫酸铵分级沉淀蛋白后依次经DEAECellulose 52和Q Sepharose FF柱层析分离得到了L-山梨糖脱氢酶(SDH),它能将L-山梨糖脱氢氧化为L-山梨酮,SDS-PAGE电泳测得分子量约为60KD。动力学性研究表明它为一个典型的Michaelis-Menten氏酶,对L-山 相似文献
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鼎湖山土壤的微生物及其对酸度的适应特征 总被引:2,自引:0,他引:2
鼎湖山土壤的微生物及其对酸度的适应特征葛荣盛(广东省土壤研究所广州510650)SoilMicrobcsatDinghushanNaturalReserveandTheirAdaptabilitytoAcidity¥.GeRongsheng(Guang-dongInstituteofSoilSciences,Guangzhou510650).ChineseJournalofEcology,1993,12(3):11-18.ThispaperdiscussesthemicrofloraeinsoilsunderdifferentforesttypesatDinghusannaturalreserveandtheiradaptabilitytoacidity:1.Undermixedforest,ammonifyingBacteria,cellulose-decomposingbacteriaandOligonitrophilesaredominant;underbroadleavedforest,ceIlulose-decomposingfungiaremore;andlittledifferencecanb 相似文献
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宫粉郁金的组织培养和快速繁殖 总被引:7,自引:1,他引:7
1植物名称宫粉郁金(Curcuma kwangsiensis)。2材料类别 块茎萌动芽。3培养条件 萌动芽生长培养基:(1)MS+6-BA1mg·L-1(单位下同)+NAA0.2。不定芽增殖与愈伤组织诱导培养基:(2)MS+6-BA10+KT5;(3)MS+6.BA10;(4)MS+6-BA5+KT2.5;(5)MS+6-BA5;(6)MS+6-BA2+KT1。生根培养基:(7)MS+NAA0.5;(8)MS+6-BA0.5+NAA0.5;(9)MS。以上培养基均加0.7%琼脂,3%蔗糖,pH5… 相似文献
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经DEAE-Sephacel、UltrogelAcA 34、Heptylam ine-Sepharose 和Bio Scale Q2等四步层析从牛脑皮层膜中同时纯化出抑制型G 蛋白(inhibitory G protein, Gi)和O型G蛋白(other G pro-tein, Go).对Go 的选择性激活使Gi 和Go 的分离大为简化,并使二者的大量制备成为可能.纯化的G 蛋白的SDS-PAGE银染显示单一蛋白带,其结合[35S]GTPγS的活性分别提高68倍和124倍.用圆二色光谱法(CD)测量了纯化的G蛋白的二级结构. 相似文献
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经SephadexG-75凝胶过滤,QAE-SephadexA-50和CM-SephadexC-25离子交换层析的步骤,从湖南产尖吻蝮(Dienagkistrodonacutus)蛇毒中纯化出两个出血毒素(DaHT-1和DaHT-2).SDS-PAGE测得分子量均为23.5kD,IEF-PAGE测得等电点分别为5.6和5.2,两者具有相似的氨基酸组成,其中酸性氨基酸(Asx,Glx)分别占23%和24%,DaHT-1和DaHT-2的最小出血剂量(MHD)分别为0.5μg和0.8μg。都具蛋白水解酶活性,无对TAME,BAEE的水解活性和PLA2酶活性.两者的蛋白水解酶活力与出血活性并非正相关.DaHT-1和DaHT-2的最适温度分别为35℃和40℃,最适pH为6-9,对热均不稳定,温度高于60℃活性完全丧失。金属离子的分析显示每摩尔毒素蛋白约含0.5mol的Zn,1mol的Ca,较多的Na、K、Mg,不含Co。 相似文献
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兔阑尾中一种新的21kD的钙结合蛋白的纯化与鉴定 总被引:3,自引:0,他引:3
纯化与鉴定了B淋巴细胞中一种新的分子量为21kD的钙结合蛋白(CaBP21)。兔阑尾淋巴细胞匀浆经热变性,Phenyl-Sepharose与DEAE-Sepharose柱层析,自每1kg细胞沉积物中获得SDS-PAGE均一的CaBP215.3mg。HCl水解后的酸性氨基酸(Asp+Glu)含量为26%。如同大多数钙结合蛋白一样,N末端封闭阻止其进行Edman降解。CaBP21中疏水性氨基酸(计Gly,不计Trp)约占46%,碱性氨基酸10%,酸性氨基酸与极性氨基酸约44%。CaBP21有较高的Ser、Tyr含量。肽谱分析等确证CaBP21为2个相同或相似亚基二聚体。以ArsenazoⅢ作Ca2+结合分析表明每分子CaBP21可结合4分子Ca2+,对Ca2+的结合常数约为10-5mol/L。各种性质表明CaBP21是一种不同于其他已知钙结合蛋白的新钙结合蛋白。 相似文献