一种改进的纯化和鉴定牛脑皮层Gs蛋白的方法

用１％胆酸钠和１５％孢和硫酸铵相结合的方法,从牛脑皮层细胞膜中抽提得到主要含激活型Ｇ－蛋白和腺苷酸环化酶两种蛋白组分的制剂,然后通过Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ６Ｂ柱将两者分开,将含Ｇｓ高活力的级分用庚胺－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ柱进一步分离,即可获得高活力的Ｇｓ,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示为分子量４５０００和３６０００的两条蛋白带,该法具简便,快速,重复性好、产率高等优点,且可同时获得无Ｇｓ污染的ＡＣ。用无Ｇｓ污     

青霉素酰化酶活性中心的定点突变

对Ｅ．ｃｏｌｅ ＡＴＣＣ １１１０５的青霉素酰化酶（ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｎ Ｇ ａｃｙｌａｓｅ,ＰＧＡ）活性中心的Ｓｅｒ２９０分别进行了定点突变和和化学修饰,将活性中心的Ｓｅｒ２９０改变成Ｃｙｓ或Ｓｅｃｙｓ,ＰＧＡ水解活力均大为下降,但仍保留部分活性。其对底物６－硝基（３－苯乙酰氨基）苯甲酸（６－ｎｉｔｒｏ－３－ｐｈｅｎｙｌａｃｅｔａｍｉｄｏ ｂｅｎｚｏｉｃ ａｃｉｄ,ＮＩＰＡＢ）的ｋｃａｔ分别从１     

甲基单胞菌Methylomonas sp.GYJ3中甲烷单加氧酶还原酶组分的纯化和性质

Ｍｅｔｙｌｏｍｏｎａｓｓｐ．ＧＹＪ３菌的甲烷单加氧酶（ＭＭＯ）粗酶提取液经ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－６Ｂ阴离子交换层析、ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００凝胶过滤层析和ＤＥＡＥ－ＴＳＫｇｅｌＨＰＬＣ分离纯化出ＭＭＯ还原酶组分．经ＨＰＬＣ分析,纯度大于９５％,纯化倍数为４．４,加入至ＭＭＯ羟基化酶和调节蛋白Ｂ的体系中表现比活为２２８ｎｍｏｌ环氧丙烷每分钟毫克蛋白．ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳表明还原酶由一种亚基组成,分子量４２ｋＤ．ＩＣＰ－ＡＥＳ测定还原酶的Ｆｅ含量为１．８３ｍｏｌＦｅ每ｍｏｌ蛋白．ＵＶ－Ｖｉｓ光谱表明还原酶除２８０ｎｍ蛋白质特征峰外在４６０ｎｍ有最大吸收峰,且Ａ２８０ｎｍ／Ａ４６０ｎｍ为２．５０,与其它黄素一铁硫蛋白相似,推测还原酶可能含一个ＦＡＤ辅基和Ｆｅ２Ｓ２中心．在厌氧条件下,还原酶能够和ＮＡＤＨ作用,ＵＶ－Ｖｉｓ光谱分析表明还原酶４６０ｎｍ处特征吸收峰消失,说明在ＭＭＯ催化过程中还原酶接受ＮＡＤＨ的电子．ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－６Ｂ阴离子交换层析分离出调节蛋白Ｂ,部分纯化的调节蛋白Ｂ的分子量大约在２０ｋＤ,它能够提高ＭＭＯ比活性４０倍,ＭＭＯ还原酶和调节蛋白Ｂ单独存在时不具有ＭＭＯ     

蛋白水解酶活力测定新方法

蛋白水解酶活力测定新方法周慧,鲁治斌,齐杰,李惟（吉林大学分子生学系．长春１３００２３）Ｇ．Ｆ．Ｂｉｃｋｅｒｓｔａｆｆ（Ｄｅｐｔ．ｏｆＢｉｏｌｏｇｙ,ＰａｉｓｌｅｙＵｎｉｖ,Ｓｃｏｔｌａｎｄ,Ｕ．Ｋ）本文研究了一种测定蛋白水解酶（Ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ...     

慈菇（Sagittaria safittifolia）α—半乳糖苷酶的纯化与性质

以对硝基苯糖苷基为底物,测定了慈菇的１２种糖苷酶,其中α－甘露糖苷酶,α－和β－半乳糖苷酶活力较高,经硫酸铵分级沉淀,ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１５０分子筛层析,ＣｏｎＡ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析,ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－６Ｂ离子交换层析,从慈菇抽提液纯化了α－半乳糖苷酶,纯化酶的比活提高１０７２倍,活力回收１５．６％,在圆盘聚丙烯酰胺凝胶电泳和ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上均显示了１条蛋白质带,在     

L—山梨糖脱氢酶的纯化及性质的研究

从５Ｌ罐发酵Ｌ－山梨糖的Ｇｌｕｃｏｎｉｂａｃｔｅｒ ｏｘｙｄａｎｓ ＳＣＢ３２９和Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ ＳＣＢ９３３混合菌株中差速离心收集ＳＣＢ３２９菌体,破碎,离心获得无细胞抽提液,硫酸铵分级沉淀蛋白后依次经ＤＥＡＥ Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ ５２和Ｑ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＦＦ柱层析分得到了Ｌ－册梨糖脱氢酶（ＳＤＨ）,它能将Ｌ－册梨糖脱氢氧化为Ｌ－册梨酮,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳测     

土壤微生物生物量周转的估算

土壤微生物生物量周转的估算高云超,朱文珊,陈文新（北京农业大学生物学院,１０００９４）ＥｓｔｉｍａｔｉｏｎｆｏｒＢｉｏｍａｓｓａｎｄＴｕｒｎｏｖｅｒｏｆＳｏｉｌＭｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ￥ＧａｏＹｕｎｃｈａｏ;ＺｈｕＷｅｎｓｈａｎ;ＣｈｅｎＷｅｎｘｉｎ（ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ,ＢｅｉｊｉｎｇＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ,Ｂｅｉｊｉｎｇ１０００９４）．ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒ－ｎａｌｏｆＥｃｏｌｏｇｙ,１９９３,１２（６）：６－１０。Ｔｏｏｂｔａｉｎｓｏｍｅｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎａｂｏｕｔｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｆｍｉｎｅｒａｌｎｕｔｒｉｅｎｔｓｂｙｓｏｉｌｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ,ｗｅｈａｖｅｍｅａｓｕｒｅｄｔｈｅａｍｏｕｎｔａｎｄｔｕｒｎｏｖｅｒｒａｔｅｏｆｓｏｉｌｒｎｉｃｒｏｂｉａｌｂｉｏｍａｓｓｉｎｎｏ－ｔｉｌｌａｇｅ,ｄｉｒｅｃｔｄｒｉｌｌｉｎｇａｎｄｐｌｏｗ－ｉｎｇｓｏｉｌｓ．Ｍｉｃｒｏｂｉａｌｂｉｏｒｎａｓｓｉｎｎｏ－ｔｉｌｌａｇｅｔｏｐｓｏｉｌｉｓ５１．７％ａｎｄ２６．０％ｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈｏｓｅｉｎｐｌｏｗｉｎｇａｎｄｄｉｒｅｃ     

芝田硫化叶菌麦芽寡糖基海藻糖合酶基因在大肠杆菌中的克隆和表达

用ＰＣＲ 方法从芝田硫化叶菌中扩增了编码一种新酶,即麦芽寡糖基海藻糖合酶（ ＭＴＳａｓｅ） 的基因,扩增的２－２ｋｂ ＤＮＡ 插入到原核表达载体ｐＢＶ２２０ 中,构建成重组质粒ｐＳＢＧＴ１ 。ｐＳＢＧＴ１ 中ＭＴＳａｓｅ 基因在大肠杆菌中得到表达。ＳＤＳＰＡＧＥ 分析表达产物ＭＴＳａｓｅ蛋白的分子量约为７４ｋＤａ ,同核苷酸序列测定所推导的值相符。表达产物占细胞总蛋白约４－４ ％ 。ｐＳＢＧＴ１ 产生的重组酶作用于淀粉部分水解物,使ＤＥ 值降低,得到非还原糖或低还原糖。     

慈菇（Sagittaria safittifolia）α－半乳糖苷酶的纯化与性质

以对硝基苯糖苷基为底物,测定了慈菇的１２种糖苷酶,其中α－甘露糖苷酶、α－和β－半乳糖苷酶活力较高;经硫酸铵分级沉淀,ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１５０分子筛层析,ＣｏｎＡＳｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析,ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－６Ｂ离子交换层析,从慈菇抽提液纯化了α－半乳糖苷酶。纯化酶的比活提高１０７２倍,活力回收１５．６％,在圆盘聚丙烯酰胺凝胶电泳和ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上均显示１条蛋白质带,在α－半乳糖苷酶浓度为１５０ｍＵ／ｍｌ的溶液中测不到其他糖苷酶的活力。慈菇α－半乳糖苷酶的分子量用ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００凝胶过滤柱测定或在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上测定均为６０ｋＤ,酶反应的最适ｐＨ在５．８附近,最适温度为６０℃。该酶分解对硝基苯基－α－半乳糖苷的Ｋ＿ｍ值为３．７×１０￣（－４）ｍｏｌ／Ｌ,Ｖ＿ｍ值为２．１×１０￣（－４）ｍｏｌ／Ｌ。银离子、汞离子显著抑制酶活力,Ｄ－半乳糖和密二糖均竞争性地抑制该酶水解对硝基苯基α－Ｄ－半乳糖苷的活力,根据Ｄｉｘｏｎ作图求得其Ｋ＿ｉ值分别为０．９２×１０￣（－３）ｍｏｌ／Ｌ和１．９８×１０￣（－３）ｍｏｌ／Ｌ。２－脱氧－Ｄ－半乳糖和Ｌ－岩藻糖为酶活力的非竞争性抑制剂。化学修饰     

条斑紫菜中一种琼胶多糖的分离纯化及鉴定

条斑紫菜（Ｐｏｒｐｈｙｒａ ｙｅｚｏｅｎｓｉｓ）的热水提取物,经ＤＥ－２３和Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－２００柱层析纯化,得到一种含微量硫酸基的琼胶精品（ＰＹ１）。此多糖经Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ６Ｂ柱层析鉴定为单一组分,分子量为２２０ｋＤ。紫外光谱显示它不含蛋白质、多肽及核酸。红外光谱揭示它含３,６－内醚－半乳糖的特征吸收以及微量的硫酸基。该多糖的水解产物经气相色谱分析,主要由半乳糖及其衍生物组成,有少量     

香椿的组织培养和玻璃苗的防止

１植物名称香椿（Ｔｏｏｎａｓｉｎｅｎｓｉｓ）。２材料类别（１）种子发芽３～５ｄ后的下胚轴及带少许下胚轴的子叶;（２）当年生半木质化的腋芽茎段。３培养条件芽诱导及增殖培养,以ＭＳ为基本培养基,蔗糖３０ｇ·Ｌ~（－１）,琼脂０．５％,附加激素（单位ｍｇ·Ｌ~（－１））：（１）６－ＢＡ０．２;（２）６－ＢＡ０．２、ＧＡ_３２．０;（３）ＩＡＡ０．１、６ＢＡ０．２;（４）ＺＴ０．２、ＧＡ_３２．０。诱导生根培养基为１／ＺＭＳ或仅含ＭＳ有机质（铁盐减半）,附加１．０ｍｇ·Ｌ~（－１）ＩＢＡ、１５ｇ·Ｌ~（－１）…     

Incorporation of Resistance Gene into Tomato using Binary Vector System

ＩｎｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎｏｆＲｅｓｉｓｔａｎｃｅＧｅｎｅｉｎｔｏＴｏｍａｔｏｕｓｉｎｇＢｉｎａｒｙＶｅｃｔｏｒ　ＳｙｓｔｅｍＺＨＡＯＳｈｕ－ｈｕｉ（赵淑慧）;ＸＵＥＧｕｏ－ｘｉｏｎｇ（薛国雄）（ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌＢｉｏ...     

雪花莲外源凝集素基因转化番茄

将含有雪花莲外源凝集素基因（ＧＮＡ）的质粒ｐＲＳＳＧＮＡ１通过冻融法转化到根癌土壤杆菌９Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ（Ｓｍｉｔｈ ｅｔ Ｔｏｗｎｓｅｎｄ）Ｃｏｎｎ）菌株ＬＢＡ４４０４中。采用叶盘法转化番茄（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ Ｍｉｌｌ．）栽培品种“Ｃ８”、“Ａ３９”和“Ａ５３”,获得了含ＧＮＡ基因的４３株转化植物株。通过卡那霉素抗性鉴定、ＮＰＴⅡ基     

L-山梨糖脱氢酶的纯化及性质的研究

从５Ｌ罐发酵Ｌ－山梨糖的Ｇｌｕｃｏｎｏｂａｃｔｅｒ　ＳＣＢ３２９和Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ　ＳＣＢ９３３混合菌株中差速离心收集ＳＣＢ３２９菌体,破碎,离心获得无细胞抽提液,硫酸铵分级沉淀蛋白后依次经ＤＥＡＥＣｅｌｌｕｌｏｓｅ ５２和Ｑ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＦＦ柱层析分离得到了Ｌ－山梨糖脱氢酶（ＳＤＨ）,它能将Ｌ－山梨糖脱氢氧化为Ｌ－山梨酮,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳测得分子量约为６０ＫＤ。动力学性研究表明它为一个典型的Ｍｉｃｈａｅｌｉｓ－Ｍｅｎｔｅｎ氏酶,对Ｌ－山     

鼎湖山土壤的微生物及其对酸度的适应特征

鼎湖山土壤的微生物及其对酸度的适应特征葛荣盛（广东省土壤研究所广州５１０６５０）ＳｏｉｌＭｉｃｒｏｂｃｓａｔＤｉｎｇｈｕｓｈａｎＮａｔｕｒａｌＲｅｓｅｒｖｅａｎｄＴｈｅｉｒＡｄａｐｔａｂｉｌｉｔｙｔｏＡｃｉｄｉｔｙ￥．ＧｅＲｏｎｇｓｈｅｎｇ（Ｇｕａｎｇ－ｄｏｎｇＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＳｏｉｌＳｃｉｅｎｃｅｓ,Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ５１０６５０）．ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＥｃｏｌｏｇｙ,１９９３,１２（３）：１１－１８．ＴｈｉｓｐａｐｅｒｄｉｓｃｕｓｓｅｓｔｈｅｍｉｃｒｏｆｌｏｒａｅｉｎｓｏｉｌｓｕｎｄｅｒｄｉｆｆｅｒｅｎｔｆｏｒｅｓｔｔｙｐｅｓａｔＤｉｎｇｈｕｓａｎｎａｔｕｒａｌｒｅｓｅｒｖｅａｎｄｔｈｅｉｒａｄａｐｔａｂｉｌｉｔｙｔｏａｃｉｄｉｔｙ：１．Ｕｎｄｅｒｍｉｘｅｄｆｏｒｅｓｔ,ａｍｍｏｎｉｆｙｉｎｇＢａｃｔｅｒｉａ,ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ－ｄｅｃｏｍｐｏｓｉｎｇｂａｃｔｅｒｉａａｎｄＯｌｉｇｏｎｉｔｒｏｐｈｉｌｅｓａｒｅｄｏｍｉｎａｎｔ;ｕｎｄｅｒｂｒｏａｄｌｅａｖｅｄｆｏｒｅｓｔ,ｃｅＩｌｕｌｏｓｅ－ｄｅｃｏｍｐｏｓｉｎｇｆｕｎｇｉａｒｅｍｏｒｅ;ａｎｄｌｉｔｔｌｅｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｃａｎｂ     

宫粉郁金的组织培养和快速繁殖

１植物名称宫粉郁金（Ｃｕｒｃｕｍａ　ｋｗａｎｇｓｉｅｎｓｉｓ）。２材料类别　块茎萌动芽。３培养条件　萌动芽生长培养基：（１）ＭＳ＋６－ＢＡ１ｍｇ·Ｌ－１（单位下同）＋ＮＡＡ０．２。不定芽增殖与愈伤组织诱导培养基：（２）ＭＳ＋６－ＢＡ１０＋ＫＴ５;（３）ＭＳ＋６．ＢＡ１０;（４）ＭＳ＋６－ＢＡ５＋ＫＴ２．５;（５）ＭＳ＋６－ＢＡ５;（６）ＭＳ＋６－ＢＡ２＋ＫＴ１。生根培养基：（７）ＭＳ＋ＮＡＡ０．５;（８）ＭＳ＋６－ＢＡ０．５＋ＮＡＡ０．５;（９）ＭＳ。以上培养基均加０．７％琼脂,３％蔗糖,ｐＨ５…     

地衣芽孢杆菌碱性蛋白酶的研究Ⅱ碱性蛋白酶的提纯和性质研究

地衣芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）Ｂ．Ｌ ＪＦ－１ｄ三级发酵的发酵液经离心去菌体,（ＮＨ４）２ＳＯ４分段盐析,透析后进行Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－１００柱层析得粗酶制剂。比活力从１８７８Ｕ／ｍｇ提高到６７９５Ｕ／ｍｇ,酶活力回收率为３５．３％。该酶水解酷蛋白的最适反应温度为５５℃,最适ｐＨ为１０．５,具有较高的热稳定性,对ＳＤＳ有较强的耐受性。     

Gi和Go的同时纯化及其性质研究

经ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｃｅｌ、ＵｌｔｒｏｇｅｌＡｃＡ ３４、Ｈｅｐｔｙｌａｍ ｉｎｅ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ 和Ｂｉｏ Ｓｃａｌｅ Ｑ２等四步层析从牛脑皮层膜中同时纯化出抑制型Ｇ 蛋白（ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ Ｇ ｐｒｏｔｅｉｎ, Ｇｉ）和Ｏ型Ｇ蛋白（ｏｔｈｅｒ Ｇ ｐｒｏ－ｔｅｉｎ, Ｇｏ）．对Ｇｏ 的选择性激活使Ｇｉ 和Ｇｏ 的分离大为简化,并使二者的大量制备成为可能．纯化的Ｇ 蛋白的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ银染显示单一蛋白带,其结合［３５Ｓ］ＧＴＰγＳ的活性分别提高６８倍和１２４倍．用圆二色光谱法（ＣＤ）测量了纯化的Ｇ蛋白的二级结构．     

湖南尖吻蝮蛇毒两个出血毒素的纯化和理化性质

经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－７５凝胶过滤,ＱＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ－５０和ＣＭ－ＳｅｐｈａｄｅｘＣ－２５离子交换层析的步骤,从湖南产尖吻蝮（Ｄｉｅｎａｇｋｉｓｔｒｏｄｏｎａｃｕｔｕｓ）蛇毒中纯化出两个出血毒素（ＤａＨＴ－１和ＤａＨＴ－２）．ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测得分子量均为２３．５ｋＤ,ＩＥＦ－ＰＡＧＥ测得等电点分别为５．６和５．２,两者具有相似的氨基酸组成,其中酸性氨基酸（Ａｓｘ,Ｇｌｘ）分别占２３％和２４％,ＤａＨＴ－１和ＤａＨＴ－２的最小出血剂量（ＭＨＤ）分别为０．５μｇ和０．８μｇ。都具蛋白水解酶活性,无对ＴＡＭＥ,ＢＡＥＥ的水解活性和ＰＬＡ２酶活性．两者的蛋白水解酶活力与出血活性并非正相关．ＤａＨＴ－１和ＤａＨＴ－２的最适温度分别为３５℃和４０℃,最适ｐＨ为６－９,对热均不稳定,温度高于６０℃活性完全丧失。金属离子的分析显示每摩尔毒素蛋白约含０．５ｍｏｌ的Ｚｎ,１ｍｏｌ的Ｃａ,较多的Ｎａ、Ｋ、Ｍｇ,不含Ｃｏ。     

兔阑尾中一种新的21kD的钙结合蛋白的纯化与鉴定

纯化与鉴定了Ｂ淋巴细胞中一种新的分子量为２１ｋＤ的钙结合蛋白（ＣａＢＰ２１）。兔阑尾淋巴细胞匀浆经热变性,Ｐｈｅｎｙｌ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ与ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ柱层析,自每１ｋｇ细胞沉积物中获得ＳＤＳ－ＰＡＧＥ均一的ＣａＢＰ２１５．３ｍｇ。ＨＣｌ水解后的酸性氨基酸（Ａｓｐ＋Ｇｌｕ）含量为２６％。如同大多数钙结合蛋白一样,Ｎ末端封闭阻止其进行Ｅｄｍａｎ降解。ＣａＢＰ２１中疏水性氨基酸（计Ｇｌｙ,不计Ｔｒｐ）约占４６％,碱性氨基酸１０％,酸性氨基酸与极性氨基酸约４４％。ＣａＢＰ２１有较高的Ｓｅｒ、Ｔｙｒ含量。肽谱分析等确证ＣａＢＰ２１为２个相同或相似亚基二聚体。以ＡｒｓｅｎａｚｏⅢ作Ｃａ２＋结合分析表明每分子ＣａＢＰ２１可结合４分子Ｃａ２＋,对Ｃａ２＋的结合常数约为１０－５ｍｏｌ／Ｌ。各种性质表明ＣａＢＰ２１是一种不同于其他已知钙结合蛋白的新钙结合蛋白。