利用复感儿T淋巴细胞作为外源性ADA基因表达效应细胞的实验探讨

对４１例健康儿童和１７例反复呼吸道感染患儿（复咸儿）的外周血淋巴细胞ＡＤＡ活性进行了检测．两例ＡＤＡ活性明显低下的复感儿的外周血Ｔ淋巴细胞被选作实验样品,经体外培养后,采用ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ介导的的方法导入外源性ＡＤＡ基因．结果表明：体外培养的两例复感儿淋巴细胞中ＡＤＡ活性较基因转移前升高;细胞免疫学特性也在一定程度上获得改善     

人血树突状细胞培养后的形态及抗肿瘤活性

观察新鲜分离和经体外培养３６小时的人外周血树突状细胞ＤＣ。和ＤＣ３６的形态学及其对淋巴因子与植物血凝素激活的杀伤细胞（ＬＰＡＫ细胞）体外诱导人肝癌细胞株ＢＥＬ┐７４０２的促进作用。形成学观察用免疫细胞化学法。抗肿瘤实验分为三大组：（１）Ｌ组（ＢＥＬ┐７４０２＋ＬＰＡＫ）,（２）ＬＤ３６组（ＢＥＬ┐７４０２＋ＬＰＡＫ＋ＤＣ３６）,（３）ＬＤ０组（ＢＥＬ┐７４０２＋ＬＰＡＫ＋ＤＣ０）。各组均采用ＬＰＡＫ与ＢＥＬ┐７４０２为５∶１和１０∶１两种效靶比。培养４８小时后用中性红摄入比色法检测ＬＰＡＫ细胞的杀伤活性。结果显示,ＤＣ３６的形态以具有细长突起者为多,与ＤＣ０主要为园形或具有短而钝突起的形态有明显差别。各组的细胞毒活性依次为：ＬＤ３６组＞ＬＤ０组＞Ｌ组（Ｐ＜０．０１）,并随效靶比增高而相应增强。这表明新鲜分离的人外周血ＤＣ在体外经３６ｈ培养后,不仅在形态上成熟,而且抗肿瘤活性也明显增强     

人外周血淋巴细胞酶超微结构定位与活性研究

应用电镜酶细胞化学方法研究了人外周血淋巴细胞ＡＴＰ酶、Ｇ６Ｐ酶、５′ＮＤ酶的超微结构定位与活性。结果：１ＡＴＰ酶主要定位在淋巴细胞膜下方,在内质网及线粒体等膜相结构也见到此酶的分布。Ｇ６Ｐ酶主要定位在内质网、线粒体等膜相结构。５′ＮＤ酶主要定位在细胞膜外表面。三种酶定位准确,颗粒清晰。２此结果与我们对人体淋巴结淋巴细胞酶超微结构定位结果相同。结果提示应用电镜酶细胞化学方法可以检测人外周血淋巴细胞酶活性变化,对于判定免疫细胞功能状态,具有一定意义。     

大剂量国产胸腺肽联合干扰素治疗慢性乙肝疗效及其机理初探

本文研究大剂量胸腺肽联合干扰素对慢性乙肝患者的治疗作用,发现胸腺肽联合干扰素治疗三个月后,患者的ＡＬＴ复常率、ＨＢｅＡｇ转阴率、ＨＢＶＤＮＡ阴转率和ＨＢＶＤＮＡ有效下降率分别为７６０％、４４０％、５６０％和９６０％。Ｔ淋巴细胞亚群分析结果表明,联合治疗后,患者外周血ＣＤ４＋淋巴细胞亚群上调,ＣＤ８＋亚群下调,二者比值趋于正常,说明国产胸腺肽联合干扰素治疗慢性乙肝的治疗机理与免疫调节作用有关。     

CD3ε和PMA对fas基因转录调控作用的研究

研究了ＣＤ３ε和ＰＭＡ对细胞凋亡基因ｆａｓ的转录调控作用．根据已知的人ｆａｓ基因５＇上游序列设计引物,用ＰＣＲ法从人胸腺细胞基因组ＤＮＡ中扩增出ｆａｓ５＇上游长为４４６ｂｐ的启动子片段．将此片段定向克隆到以虫荧光素酶为报告基因的真核细胞表达载体ｐＸＰ２中．经限制性内切酶酶切鉴定及序列测定分析表明此重组表达质粒ＤＮＡ的结构和序列正确．用此质粒（ｐＸＰ２－ｆａｓｕｐ）瞬时转染人ＪｕｒｋａｔＴ淋巴细胞,分析报告基因的表达水平．结果表明ｆａｓ基因上游－５０６到－６０的区域有弱启动子活性,约是阴性对照的１．５倍．抗ＣＤ３ε抗体和ＰＭＡ处理均可增强ｆａｓ启动子的活性,促进报告基因的表达,其虫荧光素酶活性分别是未经处理的ｐＸＰ２－ｆａｓｕｐ转染细胞的１．７倍和３．３倍,但二者没有协同作用．ＰＫＣ的抑制剂ｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅ和ＰＴＫ的抑制剂ｈｅｒｂｉｍｙｃｉｎＡ可抑制ＰＭＡ诱导的ｆａｓ基因转录,使虫荧光素酶基因的表达降至未用ＰＭＡ处理的水平．但ＰＴＫ的另一种抑制剂ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ可与ＰＭＡ发挥协同作用,上调ｆａｓ基因的转录,使虫荧光素酶活性增加到５倍．这些结果为阐明ＣＤ３ε及ＰＭＡ介导Ｔ淋巴细胞激活和凋亡的分子机制     

用于基因治疗的病毒载体

近几年来,基因治疗研究发展迅速,目的是将外源基因导入靶细胞,在体内产生疗效。早在１９９０年美国ＮＩＨ的研究人员就将腺苷脱氢酶（ａｄｅｎｏｓｉｎｅｄｅａｍｉｎａｓｅ,ＡＤＡ）基因导入病人的淋巴细胞,改善了由于ＡＤＡ基因缺损造成的免疫缺陷［１,２］。基因...     

蛇毒戒毒治疗中T淋巴细胞亚群的变化及意义

本文介绍运用蛇毒制剂（胶囊）治疗海洛英成瘾者１０例,通过用药及用药后对照观察,药瘾者外周血中Ｔ淋巴细胞亚群（ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ４／ＣＤ８）及体液免疫（ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ和Ｃ３）的变化,并分析临床意义。对照组１０例,采用口服美沙酮治疗,在用药前及用药后检测药瘾者外周血中Ｔ淋巴细胞亚群及体液免疫。观察结果,发现蛇毒组用药后药瘾者外周血中淋巴细胞总数增加明显,Ｔ淋巴细胞亚群中ＣＤ３及ＣＤ４均有增加,ＣＤ３有不同程度下降,ＣＤ４／ＣＯ比值有不同程度升高,提示蛇毒用于戒毒治疗有提高机体自身免疫功能的变化。对照组中（用美沙酮者）治疗后外周血中淋巴细胞总数增加不明显,Ｔ淋巴细胞亚群ＣＤ３及ＣＤ４亦有增加,但ＣＤ８也见增加,结果ＣＤ４／ＣＤ３比值增加不明显,原因不详,是否与用麻醉药品有关,有待今后进一步研究。     

磷酸肌酸对豚鼠心肌细胞缺氧复氧损伤膜电位的影响

本实验观察了缺氧复氧对豚鼠心肌细胞膜电位的影响及磷酸肌酸的保护作用。结果表明缺氧５－２０ｍｉｎ时ＲＰ、ＡＰＡ减小，Ｖｍａｘ减慢，ＡＰＤ１０、ＡＰＤ５０、ＡＰＤ９０缩短。复氧５－２０ｍｉｎ后，ＲＰ、ＡＰＡ和Ｖｍａｘ进一步减少，ＡＰＤ１０、ＡＰＤ５０、ＡＰＤ９０明显缩短。在灌流液中加入磷酸肌酸保持其浓度在１０－６ｍｏｌ时，ＲＰ、ＡＰＡ显著增加，Ｖｍａｘ增快，ＡＰＤ１０、ＡＰＤ５０、ＡＰＤ９０明显延长。复氧２０ｍｉｎ后膜电位各项参数趋向恢复正常。此结果提示，磷酸肌酸对缺氧复氧的心肌具有显著的保护作用。     

CD3AK细胞抗肿瘤作用的研究进展

抗ＣＤ３单克隆抗体激活的杀伤细胞ＣＤ３ＡＫ是一种新型抗肿瘤免疫活性细胞,具有体外扩增能力强,细胞毒活性高,体内抗肿瘤效果好,低依赖ＩＬ－２等特点。本文综述了ＣＤ３ＡＫ细胞的诱导和扩增、形态学和免疫学特性、体内外抗肿瘤作用和ＣＤ３ＡＫ细胞的活性增强物质,并讨论了ＣＤ３ＡＫ细胞的作用机制     

人重组GM－CSF／HAS－D3嵌合蛋白（GM－HSA）在大肠杆菌中的表达及其产物稳定性的研究

将人粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）和人血清白蛋白第三功能区（ＨＡＳ－Ｄ３）的基因串联后,在Ｅ．ｃｏｌｉ中获高效表达,表达量占菌体蛋白的３２．６％．利用ＴＦ－１体外细胞活性测定表明,ＧＭ－ＨＳＡ的活性单位为１．０４×１０~６Ｕ／ｍｇ,虽然其比活性低于ＧＭ－ＣＳＦ,但比后者具有更高的体外热稳定性和储藏稳定性．     

葡萄感霜霉病基因RAPD标记的序列分析

利用Ｗｉｚａｒｄ ＤＮＡ ｃｌｅａｎ－ｕｐ ｓｙｓｔｅｍ纯化葡萄感霜霉病基因ＲＡＰＤ遗传标记的ＤＮＡ片段,用细菌质粒ｐＧＥＭ Ｔ－ｅａｓｙ ｖｅｃｔｏｒ克隆该片段,采用自动荧光ＤＮＡ测序仪对片段的核苷酸组成进行双向测序。来自欧洲葡萄粉红玫瑰的葡萄感霜霉病基因ＲＡＰＤ标记由８３５对核苷酸及其特定序列组成。所获的感霜霉病基因ＲＡＰＤ标记可以作为合成探针的基础,用于葡萄抗病育种过程中的早期选择及品种对霜     

人重组GM—CSF／HSA—D3嵌合蛋白（GM—HSA）在大肠杆菌中的表达及其产…

将人粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）和人血清白蛋白第三功能区（ＨＳＡ－Ｄ３）的基因串联后,在Ｅ．ｃｏｌｉ中获高效表达,表达量占菌体蛋白的３２．６％。利用ＴＦ－１体外细胞活性测定表明,ＧＭ－ＨＳＡ的活性单位为１．０４×１０＾６Ｕ／ｍｇ,虽然其比活性低于ＧＭ－ＣＳＦ,但比后者具有更高的体外热稳定性和储藏稳定性。     

国产胸腺肽治疗慢性乙肝疗效及其机理初探

本文观察大剂量胸腺肽对慢性乙肝患者的治疗作用并研究其作用机理。用ＥＬＩＳＡ、ＰＣＲ 和免疫化学染色法等比较分析胸腺肽治疗三个月后,ＡＬＴ、ＨＢＶ－ Ｍ 和ＨＢＶ ＤＮＡ 等指标变化,发现患者ＡＬＴ 复常率、ＨＢｅＡｇ 转阴率、ＨＢＶ ＤＮＡ 阴转率和ＨＢＶ ＤＮＡ 有效下降率分别为５８．３３ ％ 、３３．３３ ％ 、４１．６７ ％ 和９１．６７ ％ ;同时患者外周血ＣＤ４ ＋淋巴细胞亚群上调,ＣＤ８ ＋ 亚群下调,二者比值趋于正常。说明国产胸腺肽治疗慢性乙肝有较好的应用前景,其治疗机理与免疫调节作用有关。     

登革病毒感染性转录体技术

登革病毒 (Ｄｅｎｇｕｅｖｉｒｕｓ)属黄病毒科黄病毒属 ,基因组结构为单股正链ＲＮＡ ,全长约 1 0～ 1 1ｋｂ。登革病毒在复制过程中不形成ＤＮＡ中间体 ,因此要在基因水平研究其特征存在一定困难 ,因为突变、重组、克隆等分子生物学技术都是在ＤＮＡ水平上的操作。体外转录制备感染性ＲＮＡ(感染性转录体 )技术提供了解决这一难题的新途径[1]。该技术是把病毒ＲＮＡ逆转录成ｃＤＮＡ ,并置于ＲＮＡ聚合酶启动子的下游 ,在ＲＮＡ聚合酶的作用下体外转录出全长正链ＲＮＡ ,经转染易感细胞后复制出子代病毒颗粒。由于这种子代病毒来自ｃＤＮ…     

乙醛磺酸对小鼠胚胎细胞遗传和胚胎发育影响的研究

本文报道乙醛磺酸（ＳＡＤ）不仅会降低小鼠胚胎细胞的ｒＲＮＡ基因转录活性,而且还明显提高了胚胎细胞姐妹染色单体互换（ＳＣＥ）频率,导致胚胎发育停滞和胎儿死亡,最终使幼鼠出生率明显下降。当ＳＡＤ浓度为１０－５ｍｏｌ／Ｌ时,小鼠胚胎细胞ｒＲＮＡ基因转录活性降低为正常值的１５％,并引起ＳＣＥ频率成倍增加,幼鼠出生率仅为正常值的５０％;当ＳＡＤ浓度增至１０－３ｍｏｌ／Ｌ时,此时ｒＲＮＡ基因转录活性完全被抑制,而且ＳＣＥ频率增加为正常值的４．８倍,幼鼠出生率从正常值１００％降为４％。ＳＡＤ对小鼠胚胎细胞这种细胞遗传学效应和对胚胎发育影响的程度与该药浓度成正相关。此外,我们还对ｒＲＮＡ基因转录活性和ＳＣＥ的改变与哺乳类胚胎发育之间的关系进行了初步的讨论。     

小麦锈病与活性氧代谢的关系(简报)

小麦抗锈病品种抽穗期叶片中ＳＯＤ和ＣＡＴ活性较低,Ｏ_２产生速率较高;但籽粒形成期之后能保持较高的ＳＯＤ、ＣＡＴ活性,（积累较少,细胞膜脂过氧化水平较低,叶绿素和脯氨酸含量较高。感病品种则相反。     

ICAM在着床期小鼠PBLC及EC/DC中表达的研究(英文)

细胞粘附分子（ＣＡＭ）可介导细胞间及细胞与间质之间的相互作用并传导信息,参与机体胚胎发育、免疫调节、炎症反应、组织修复及肿瘤转移等生理和病理过程。细胞间粘附分子１（ＩＣＡＭ１）是主要的ＣＡＭ分子之一,可表达于活化的细胞,内皮细胞等。人膜是母体与胚胎滋养层直接接触的特殊组织、已发现蜕膜细胞在着床过程中参与了局部免疫耐受的形成,但对着床期ＩＣＡＭ１在蜕膜细胞表达的动态研究鲜见报道。本研究采用免疫荧光、多参数流式细胞术,分别从整体和局部角度、着床过程中外周血淋巴细胞（ＰＢＬＣ）及子宫内膜／蜕膜（ＥＣ／ＤＣ）细胞ＩＣＡＭ１的不同表达特点进行了动态观察和对比性分析。结果发现,ＩＣＡＭ１在着床期ＰＢＬＣ及ＥＣ／ＤＣ中的表达均存在明显的动态变化（Ｔａｂ．１;Ｆｉｇｓ．１＆２）。ＩＣＡＭ１在ＰＢＬＣ中的表达于妊娠第一天（Ｄ１）即开始降低,Ｄ２降至最低;与此不同,ＩＣＡＭ１在ＥＣ／ＤＣ中的表达于Ｄ２开始降低,Ｄ４降至最低,Ｄ５开始恢复,但尚未恢复到对照水平。结果表明,ＩＣＡＭ１在蜕膜局部的表达调节方式不同于外周血;ＩＣＡＭ１表达阳性的外周血,淋巴细胞和蜕膜细胞均代表着活化的功能性细胞,这些细胞表面ＩＣＡＭ     

抗水稻条纹叶枯病毒核酶的设计,克隆及体外活性测定

为探索控制水稻条纹叶枯病毒（Ｒｉｃｅｓｔｒｉｐｅｖｉｒｕｓ,ＲＳＶ）设计合成了特异切割该病毒ＲＮＡ保守区及编码病害特异性蛋白（ＤｉｓｅａｓｅＳｐｅｃｉｆｉｃＰｒｏｔｅｉｎ,ＤＳＰ）基因的核酶,核酶基因的长度均为４０个碱基,用化学合成方法合成其正链及与其３＇－末端互补的１５个碱基引物,用ＴａｇＤＮＡ多聚酶合成其互补链。双链ＤＮＡ直接插入克隆载体ＰＧＥＭ３ｚｆ（＋）的Ｓｍａｌ位点。序列测定表明,克隆得到的核酶序列与设计的核酶序列完全一致。经ＳＰ６ＲＮＡ多聚酶体外转录得到核酶ＲＮＡ。当核酶ＲＮＡ与以同样方法转录得到的靶基因ＲＮＡ混合反应,可得到预期结果相同的切割片段,表明两种核酶在体外均具有特异性切割活性。     

大鼠肝tRNA^Ile基因的克隆与体外转录

采用ＰＣＲ扩增出大鼠肝ｔＲＮＡ＾Ｉｌｅ基因,构建了重组质粒ｐＧＷＩＷ,并用Ｔ７ＲＮＡ聚合酶／启动子系统对其进行了体外表达。经过对转录产物片段大小及运用Ｎｏｒｔｈｅｒｍｂｌｏｔ鉴定,证明了获得了不含修饰核苷酸的大鼠肝ｔＲＮＡ＾Ｉｌｅ。生物学活性检测显示：合成基因体外转录产物氨基酰经活性是天然ｔＲＮＡ的４０％,提示修饰核苷酸在哺乳动物Ｉｌｅ－ｔＲＮＡ合成酶的识别过程中起重要作用。     

化学修饰对反义寡核苷酸稳定性及抗流感病毒活性的影响

为了探讨 Ａ Ｓ Ｏ Ｄ Ｎ 化学修饰形式与 Ａ Ｓ Ｏ Ｄ Ｎ 稳定性,体外细胞毒性以及抗流感病毒活性之间的关系,合成了 ７ 种不同化学修饰形式的 Ａ Ｓ Ｏ Ｄ Ｎ：硫代 Ａ Ｓ Ｏ Ｄ Ｎ 及其 ３′端分别磷酸化和胆固醇修饰;３′与 ５′端硫代,中间为天然结构的混合骨架 Ａ Ｓ Ｏ Ｄ Ｎ;天然结构 Ａ Ｓ Ｏ Ｄ Ｎ 及其 ３′端分别磷酸化和胆固醇修饰等．测定了 ７ 种修饰体在小鼠血清, Ｍ Ｄ Ｃ Ｋ 细胞裂解液,含 ２％ 胎牛血清的 Ｄ Ｍ Ｅ Ｍ培养液以及水中的稳定性,体外细胞毒性和在细胞水平抗流感病毒活性．结果表明,混合骨架 Ａ Ｓ Ｏ Ｄ Ｎ,硫代 Ａ Ｓ Ｏ Ｄ Ｎ 及其 ３′端接磷酸和胆固醇的修饰形式在小鼠血清, Ｍ Ｄ Ｃ Ｋ 细胞裂解液与含２％ 胎牛血清的 Ｄ Ｍ Ｅ Ｍ 培养液中稳定性相对较高,作用 ２４～４８ ｈ 仅混合骨架 Ａ Ｓ Ｏ Ｄ Ｎ 与硫代 Ａ Ｓ Ｏ Ｄ Ｎ 发生部分降解;天然结构 Ａ Ｓ Ｏ Ｄ Ｎ 及其 ３′端接磷酸和胆固醇修饰体在 ２４ ｈ 内大部分降解．所有 Ａ Ｓ Ｏ Ｄ Ｎ 修饰体在水中具有很高稳定性,４８ ｈ 内未见降解作用．７ 种 Ａ Ｓ Ｏ Ｄ Ｎ 修饰形式在 Ｍ Ｄ Ｃ Ｋ 细胞中未表现明显的细胞毒性．硫代 Ａ Ｓ Ｏ Ｄ Ｎ 及其 ３′端接磷酸和胆