昆虫对苏云金杆菌的抗性及防治策略

苏云金杆菌Bacillusthuringiensis（B.t.）因其毒力高,致病快,且对非靶标昆虫及人类无毒,对环境安全等优点,成为世界上应用最广泛的一类微生物杀虫剂。使用对年来,一直没有害虫对其产生抗性的报道。然而,肥年代以来,人们在不同的实验室分别发现,经人工选择多代以后,昆虫对B．t．产生了抗性,有的抗性水平还很高[1]。更为严重的是,80年代后期,在美国的夏威夷及菲律宾等长期使用B．t．制剂的地区,发现一种世界性蔬菜害虫小菜蛾PtoteyatwteHa（LinnaeuJ对B．t．产生了抗性［4,5］。这些事实说明,昆虫对微生物杀虫剂同样有可能…     

害虫对苏云金杆菌的抗性研究进展

本文主要针对害虫对苏云金芽孢杆菌（Bt）的抗性机理和防治对策方面进行综述.深入研究昆虫对Bt毒素的抗性机理,将有助于建立虫害综合防治体系,实现无公害Bt农药的广泛及持续利用.     

dlt操纵子赋予苏云金芽胞杆菌对阳离子抗菌肽的抗性和对昆虫的毒力

【目的】革兰氏阳性菌中的dlt操纵子编码细胞壁中磷壁酸发生D-丙氨酰化修饰所必需的酶。D-丙氨酰化使细胞表面产生正电荷,并因此排斥带正电的分子,例如阳离子抗菌肽,从而赋予对宿主的抗性。本文中,我们研究了dlt操纵子对苏云金芽胞杆菌表型性状的影响及在对昆虫毒力中发挥的作用。【方法】通过同源重组构建了Δdlt ABt基因缺失突变株,并对其进行形态学观察、表面电荷差异分析、抗逆性分析和毒力测定。【结果】结果表明,dlt A的失活显著降低了细胞表面的净负电荷,对阳离子抗菌肽(多粘菌素B和溶菌酶)的抗性和碱耐受性显著下降。同时,Δdlt ABt的生长曲线发生明显改变,细胞表面粗糙且形状不规则,生物膜形成减少和群游运动能力增强。此外,dlt A的失活降低了对昆虫中肠上皮细胞的粘附能力,并减弱了对家蚕的毒力。【结论】研究结果表明,dlt操纵子介导的磷壁酸发生D-丙氨酰化修饰与苏云金芽胞杆菌的许多表型性状密切相关,并且在苏云金芽胞杆菌对昆虫的致病性及抵抗昆虫体液免疫保护中具有重要作用。     

几个对鞘翅目昆虫有毒性的苏云金杆菌菌株

<正> 苏云金杆菌Bacillus thuringiensis Berliner是一种重要的昆虫病原芽孢杆菌。80年代以前注意力主要集中在对鳞翅目和双翅目昆虫有毒杀力的菌株上。进入80年代以后,Krieg等和Herrnstadt等先后分离出两株对鞘翅目昆虫敏感而对鳞翅目和双翅目不敏感的菌株。并把它们分别命名为B.thuringiensis var.tenebrionis和B.t.var.sandiego。由于     

dlt操纵子赋予苏云金芽胞杆菌对阳离子抗菌肽的抗性和对昆虫的毒力（英文）

【目的】革兰氏阳性菌中的dlt操纵子编码细胞壁中磷壁酸发生D-丙氨酰化修饰所必需的酶。D-丙氨酰化使细胞表面产生正电荷,并因此排斥带正电的分子,例如阳离子抗菌肽,从而赋予对宿主的抗性。本文中,我们研究了dlt操纵子对苏云金芽胞杆菌表型性状的影响及在对昆虫毒力中发挥的作用。【方法】通过同源重组构建了Δdlt ABt基因缺失突变株,并对其进行形态学观察、表面电荷差异分析、抗逆性分析和毒力测定。【结果】结果表明,dlt A的失活显著降低了细胞表面的净负电荷,对阳离子抗菌肽(多粘菌素B和溶菌酶)的抗性和碱耐受性显著下降。同时,Δdlt ABt的生长曲线发生明显改变,细胞表面粗糙且形状不规则,生物膜形成减少和群游运动能力增强。此外,dlt A的失活降低了对昆虫中肠上皮细胞的粘附能力,并减弱了对家蚕的毒力。【结论】研究结果表明,dlt操纵子介导的磷壁酸发生D-丙氨酰化修饰与苏云金芽胞杆菌的许多表型性状密切相关,并且在苏云金芽胞杆菌对昆虫的致病性及抵抗昆虫体液免疫保护中具有重要作用。     

小菜蛾对苏云金芽胞杆菌(Bt)的抗性研究进展

小菜蛾Plutella xylostella(L.)是为害十字花科蔬菜的一种重要的世界性害虫,由于其分布范围广、繁殖速度快、抗性水平高,已经成为最难防治的害虫之一。基于苏云金芽胞杆菌Bacillus thuringiensis(Bt)开发的杀虫剂在小菜蛾生物防治中发挥重要的作用,但小菜蛾作为在田间最早对Bt产生抗性的害虫,其抗性发展及抗性机理也引起了全世界的广泛关注。本文概述了小菜蛾的发生危害及其抗药性的研究动态、苏云金芽胞杆菌的起源、发展及应用,分析了小菜蛾对Bt杀虫毒素产生抗药性及其抗性机理,并从抗性发展风险、转基因油菜种植和进一步深入开展抗性机理的研究三个方面进行了展望,以期为优化小菜蛾抗药性的治理策略、提高生物农药和Bt作物的控害效能提供借鉴和参考。     

苏云金杆菌

项目简介苏云金杆菌一、简介：苏云金杆菌是生物农药,对人畜无毒,符合生产“绿色食品”方向,“绿色食品”是指无农药残毒污染、无环境污染食品。苏云金杆菌是最大规模用于生产的微生物杀虫剂,具有高效无毒、无污染、无公害等特点,可用于防治应翅目、精翅目、膜翅目,...     

苏云金芽孢杆菌Cry1C毒素对昆虫细胞的毒力研究

将携带ｃｒｙ1Ｃ基因的ｐＵＣ1 9质粒载体转到大肠杆菌ＢＬ2 1菌株中 ,经 37℃培养 48小时后可获得单基因的Ｃｒｙ1Ｃ杀虫晶体毒素蛋白提取物。将它溶于 5 0ｍｍｏｌ/ＬＮａ2 ＣＯ3/ＨＣｌ(ｐＨ9.5 )中 ,经胰酶消化后用于细胞的毒力测定。1 .测定方法接种对数期生长的细胞于 96孔板中 ,2 8℃培养过夜后 ,弃上清 ,加入系列梯度稀释的毒素蛋白作用液 ,30ｍｉｎ后 ,弃上清 ,加入ＭＴＴ液 ,反应 4ｈ后 ,弃上清 ,以ＳＤＳ 饱和异丙醇溶解 ,置ＥＬＩＳＡ仪 (λ =5 70ｎｍ)读数。2 .测定结果在所处理的九种昆虫细胞系中 ,甜菜夜蛾Ｓｅ细胞系和埃及…     

苏云金杆菌导致昆虫组织细胞病变及作用方式的研究进展

<正> 苏云金杆菌Bacillus thuringiensis Berl-iner(以下略为B.t.)是一种重要的昆虫病原细菌,它对多种农林和卫生害虫具有较好的杀虫效果,受到各国的重视。特别是近20年来对这种细菌进行了广泛深入的研究,这些包括新有效菌株的分离、分类鉴定、杀虫效果及范围、致病机理(组织和细胞的病理变化、毒素的产生、作用部位和作用方式)、遗传学和遗传育种等。本文就其组织病理和作用方式的研究进展作一介绍。     

昆虫中肠液性质对苏云金芽孢杆菌伴孢晶体毒力的影响

综述了昆虫中肠液性质对苏云金芽孢杆菌Bacillus thuringiensis伴孢晶体毒力的影响。中肠液的酸碱度和蛋白酶是影响伴孢晶体溶解与原毒素活化的两大因素。中肠液的酸碱度不仅影响到伴孢晶体的溶解速度,还影响到各种蛋白酶的活性表现;而蛋白酶则直接参与了原毒素的活化,其组成与活性影响着原毒素的活化速度和杀虫专一性。因中肠液蛋白水解能力过高而导致原毒素的过度降解是某些昆虫对苏云金芽孢杆菌低度敏感的主要原因,而中肠液对原毒素活化能力的降低则与昆虫抗性的形成有关。此外,中肠液的沉淀作用及其它生理生化特性也影响着原毒素毒力的正常发挥。     

苏云金杆菌毒素

苏云金杆菌产生的对昆虫有致病作用的毒素有７种,即α－外毒素、β－外毒素、γ－外毒素、δ－内毒素、不稳定外毒素、水溶性毒素、鼠因子外毒素。苏云金杆菌主要是经口感染昆虫,它杀死昆虫可由菌体本身的活动而引起,但是使害虫死亡的更主要的原因是菌体产生的毒素。毒...     

昆虫对有机磷杀虫剂的抗性

有机磷杀虫剂在害虫的防治中多年来一直被作为一种有效的化学农药来使用。随着杀虫剂的大量使用,大部分害虫对这些杀虫剂产生了不同程度的抗性,导致杀虫剂剂量不断加大、防治效果降低,同时也造成了严重的环境污染。近年来,对昆虫有机磷杀虫剂抗性机制的研究发现,害虫对有机磷杀虫剂产生抗性的主要原因是由于其作用靶标物乙酰胆碱酯酶(AchE)对杀虫剂敏感性下降、AchE或普通酯酶活性上升等。本文就近年来国内外关于昆虫对有机磷杀虫剂抗性机制的研究进行综述,以期对害虫的抗性监测及抗性治理提供有用的参考。     

黑龙江省苏云金杆菌的分离及对夜蛾科昆虫高毒力菌株的筛选

【目的】为了发掘新的苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis)的资源,在黑龙江省不同地区采集不同类型的土壤样品分离出对夜蛾科具有高毒力的菌株。【方法】采用醋酸钠选择性筛选法筛选Bt菌株,利用10对通用引物对分离株进行基因型分析,SDS-PAGE进行杀虫晶体蛋白分析,同时测定苏云金杆菌分离株对棉铃虫Helicoverpa armigera(Hübner)、甘蓝夜蛾Mamestra brassicae(Linnaeus)、斜纹夜蛾Spodoptera litura(Fabricius)的杀虫活性。【结果】从黑龙江省不同地区采集的352份不同类型的土壤样品中,共分离出46株苏云金芽孢杆菌野生菌株,出菌率为13.06%。油镜下可观察到伴孢晶体的形态有菱形、球形、镶嵌形及不规则形。结果表明产菱形晶体的菌株多含有cry1类基因,而同时产生菱形、球形及不规则形晶体的菌株则含有多种基因型。SDS-PAGE蛋白分析发现这些菌株主要表达130、90、60 ku蛋白。对其中的部分菌株进行毒力测定,结果表明有4株菌株对3种夜蛾科昆虫具有高毒力。【结论】黑龙江省苏云金芽孢杆菌分布广泛,类型多样,已获得对夜蛾科昆虫有高毒力的菌株,这对夜蛾科害虫的绿色防控及延缓其抗性具有重要意义。     

昆虫对Bt作物抗性监测技术

Bt棉花等转抗虫基因作物已在许多国家商业化种植 ,靶标昆虫的潜在抗性是广泛关注的重要问题。为了准确地监测昆虫的抗性动态 ,近年来在传统的基于标准生物测定确定抗性指数的基础上先后发展了诊断剂量、单对杂交、F2 代检测和分子生物学检测抗性等位基因等抗性监测方法。该文综述了相关的研究进展。     

苏云金杆菌遗传工程杀虫剂

苏云金芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ,简称 Ｂｔ）是一种对昆虫有致病作用的细菌。其杀虫活性物质主要是杀虫晶体蛋白质（Ｉｎｓｅｃｔｉｃｉｄｅ ｃｒｙｓｔａｌ ｐｒｏｔｅｉｎ,ＩＣＰ）。由于该杀虫剂对人、畜无害,无致癌和致畸作用,是一种有着广泛应用前景的微生物杀虫剂。 根据１９９８年最新的分类,把ＩＣＰ基因分为２５类ｃｒｙ基因和２类ｃｙｔ基因,每类ＩＣＰ基因产生针对不同昆虫的晶体蛋白质。例如,ｃｒｙ３Ａ基因产生杀鞘翅目昆虫的晶体蛋白质,而ｃｒｙ１基因所产生的活性物质主要用于防治鳞…     

抑制葡萄糖氧化酶基因降低黏虫幼虫对苏云金芽孢杆菌侵染的抗性(英文)

【目的】本研究旨在探讨葡萄糖氧化酶(glucose oxidase, GOX)在黏虫Mythimna separata发育、消化和免疫防御中的作用。【方法】采用转录组测序技术克隆了黏虫GOX基因的cDNA序列。qRT-PCR检测该GOX基因在黏虫不同发育阶段(1-6龄幼虫、蛹和1日龄成虫)和4龄第1天幼虫不同组织(前肠、中肠、后肠、下唇腺、马氏管、脂肪体和表皮)、以及取食用不同浓度(0.01%, 0.1%, 1%和10%)葡萄糖溶液浸泡10 s的玉米叶片及饥饿和再取食条件下的4龄第1天幼虫中的特异性表达模式。通过RNAi和生物测定研究该GOX基因在黏虫对苏云金芽孢杆菌Bacillus thuringiensis抗性中的功能。【结果】克隆获得了一条新的长2 187 bp的黏虫GOX基因MsGOX cDNA序列(GenBank登录号: KY348779),其开放阅读框长1 821 bp,编码606个氨基酸,预测分子量为66.4 kD。发育表达谱结果表明MsGOX在黏虫不同发育阶段表达量不同,在4龄幼虫期表达量最高;组织表达谱结果表明MsGOX在黏虫4龄第1天幼虫各组织中均有表达,在下唇腺中表达量最高。饲喂幼虫不同浓度葡萄糖对MsGOX转录的诱导效果不同,在葡萄糖浓度为10%时,该基因的表达水平达到最高。随着饥饿时间的延长,4龄第1天幼虫中MsGOX的表达水平逐渐升高,并在饥饿24 h时达到高峰,饥饿后再用玉米叶片饲喂幼虫,MsGOX的表达水平逐渐回升。注射dsMsGOX 48 h后,MsGOX的表达水平较对照(注射dsEGFP)降低了88.3%; 与同一时间点的对照相比,注射dsMsGOX后48和72 h幼虫 的体重、体长和消化系数均显著降低,苏云金芽孢杆菌侵染48和72 h提高了幼虫的校正死亡率。【结论】MsGOX可能参与了黏虫中肠的消化和抗菌,研究结果为进一步研究黏虫MsGOX的功能并提出新的黏虫防治策略提供了依据。     

苏云金杆菌毒力的生物测定

本文对苏云金杆菌(Bt)制剂的生物测定标准化及目前采用的生物测定方法作一较详细的介绍.其中对鳞翅目幼虫的生物测定包括混合饲食法、浸叶饲喂法、蜡洞法、液滴法;对双翅目幼虫的生物测定则有世界卫生组织提出的方法和美国国内标准方法;对鞘翅目幼虫目前还没有一个统一的标准方法.生化和免疫测定法比传统的生物测定方法快速、简便,但亦存在不足.     

一株对棉铃虫高效的苏云金杆菌

１９７９年从舍蝇（Ｍｕｓｃａｖｉｃｉｎａ）幼虫中分离出一株能够形成伴孢晶体的芽孢杆菌７９００７。该菌具有苏云金杆菌天门变种（７２１６）的典型特征。血清型属Ｈ_{３ａ－３ｂ},但培养特征,生化特征与知的Ｈ_{３ａ－３ｂ}的戈尔斯德变种（ＨＤ－１）、天门变种（７２１６）略有不同,特别是对棉铃虫的毒力大大高于巳知的菌株,预示着将成为我国防治棉铃虫的一株高效菌。