菹草类胡萝卜素提取物对人肝癌细胞QGY-7703凋亡的影响

Human hepatoma cell line QGY-7703 was treated with the medium containing 10, 20, 40 and 60 micromol/L carotenoids extracts from Potamogoton crispus L. (CEPC) for 48 h, 96 h and 144 h, respectively. The inhibition rates to hepatoma cells were determined by MTT assay. The results showed the average inhibition rates of the three treatments varied from 0.14%-23.07%, 39.59%-70.61% and 71.65%-87.01%, respectively. After hepatoma cells were treated with the medium containing 10, 20 and 40 micromol/L of CEPC for 24 h, 48 h and 72 h, respectively, many typical morphology features of apoptotic cells were observed by Laser Scanning Confocal Microscope (LSCM), such as the distinct decrease in number and volume of cells, the shrinkage and deformation of cells, the shape of cell nucleuses appearing like crescent even piece, the decrease in area of yellow DNA in cell nuclei. The percentage of hepatoma cells in every phase of cell cycle was analyzed by Flow Cytometer (FCM) after being treated with 10 micromol/L and 20 micromol/L CEPC for 48 h. Compared with the control group, the cells in G0/G1 phase increased 23.8% (P<0.01) and 35.6% (P<0.01) respectively, in S phase decreased relevantly, while the cells in G2/M phase had no significant change. The Ca2+ concentration (fluorescence intensity) in cytoplasm of hepatoma cells was determined by LSCM after being treated with 20 micromol/L CEPC for 48 h. The Ca2+ concentration increased significantly (P<0.01) and was 1.5 times that of control group. These results demonstrated that the CEPC inhibited the proliferation of hepatoma cells QGY-7703 significantly in a dose and time-dependent manner in vitro. The hepatoma cells treated with CEPC were evidently arrested at G0/G1 phase in the cell cycle. The concentration of Ca2+ in test group cells cytoplasm increased significantly, it might be the important cause that CEPC induced the apoptosis of hepatoma cells QGY-7703. This paper provided scientific basis for further studying and developing the function and value of carotenoids in Potamogoton crispus L.     

菹草红色类胡萝卜素的拉曼光谱特性研究

用MgO 硅藻土 (1∶2 ,w/w)柱层析和硅胶G薄层层析 (TLC)从菹草中分离纯化了三种红色素r1、r2和r3,其极性大小排序依次为 :虾青素 >r1>r2 >r3>角黄素 >β 胡萝卜素。以虾青素和 β 胡萝卜素为对照 ,运用显微拉曼技术对它们作了测试分析研究。在拉曼光谱的“指纹区”(<180 0cm-1) ,r1、r2和r3都在 15 2 7cm-1处有最强的特征谱线 ,对应的是c=c伸缩振动 (υc=c) ,r1在 116 2cm-1、r2和r3在 115 7cm-1有较强的特征谱线 ,对应的是c c伸缩振动(υc c) ,r1、r2和r3在 10 0 7cm-1有较强的特征谱线 ,对应的主要是甲基与碳链之间的摇摆振动 ;r1、r2和r3与虾青素及 β 胡萝卜素在 2 0 0 0— 4 0 0 0cm-1区也有很好的对应关系。实验结果充分证明菹草红色素r1、r2和r3属于类胡萝卜素化合物 ,r1、r2和r3之间及与虾青素和 β 胡萝卜素的拉曼光谱都存在差异 ,说明它们的细微结构不同 ,其具体结构有待进一步研究。     

细胞周期特异性细胞凋亡的形态学观察

目的观察喜树碱诱导Molt-4细胞凋亡形态的细胞周期时相性变化,建立一种新的细胞周期特异性细胞凋亡分析方法.方法以凋亡诱导剂喜树碱(终浓度为0.15μmol/L)影响下的Molt-4细胞为检测对象,应用流式细胞术分析细胞凋亡及细胞周期的变化;用琼脂糖凝胶电泳的方法探测断裂的DNA片段存在,进一步证实细胞凋亡的存在;碘化丙啶(PI)染色后,再应用流式分选术结合激光扫描共聚焦显微镜(laser scanning confocal microsope, LSCM)观察各期细胞形态从而对已凋亡细胞进行形态学确认.结果①琼脂糖凝胶电泳可见清晰的DNA梯形条带(DNA ladder); ②喜树碱导致Molt-4细胞周期的S期水平明显下降,并伴随有一明显的细胞凋亡峰; ③只在S期细胞中可见到已凋亡细胞.以上说明喜树碱可以诱导Molt-4细胞凋亡,并细胞凋亡发生在细胞周期中的S期,与传统的结论一致.结论通过DNA直方图分选后细胞凋亡形态学分析可以对细胞凋亡的细胞周期特异性进行检测.这种方法使细胞周期特异性凋亡的分析更加可靠全面.     

端粒酶RNA组分的反义寡核苷酸对BEL-7404人肝癌细胞端粒酶活性的抑制和细胞凋亡的诱导

端粒酶在四株人肝癌细胞中均有表达,而在正常人肝组织标本中却为阴性.在终浓度为1μmol/L时,针对端粒酶RNA组分的反义寡核苷酸对BEL7404人肝癌细胞端粒酶活性具明显抑制作用,而正义和错义寡聚物则对该细胞端粒酶活性几乎没有影响.随着反义物浓度的降低,抑制作用亦随之减弱.用终浓度为5μmol/L的反义物处理培养的BEL-7404人肝癌细胞96 h后,细胞形态发生变化.原位末端标记法(TLUNEL)显示阳性标记细胞,流式细胞仪分析表明反义物作用后细胞凋亡率达到42.58%.     

水深梯度对菹草生长的影响

用盆栽试验方法,将菹草石芽种植在水下30、60、90、120、150、180 cm的花盆内,研究了水深梯度对菹草生长的影响。结果表明：菹草株高与水深显著相关（P<0.01）,菹草生长的适宜水深范围为90～150 cm;5月7日前后,除水深180 cm组外,其他实验组虽然株高有所增加,但叶片数量反而减少,植株开始衰老腐烂;水深差异对菹草叶片光合色素含量影响不明显;水深30、60 cm组菹草的F_v/F_m、ETR值低于深水处其他处理组,表明在菹草生长的中后期,水面光照对水深浅于60 cm的菹草叶片光合电子传递效率有一定的阻碍作用;从快速光响应曲线可以看出,在菹草生长的中后期,水深<60 cm、>150 cm对菹草生长不利。     

马尾松树皮提取物体外诱导人肝癌细胞凋亡的一过性检测分析

目的研究马尾松树皮提取物(Pinus massoniana bark extract, PMBE)对人肝癌细胞BEL-7402的体外诱导凋亡作用.方法运用"一过性细胞处理法",从形态、生化和分子水平检测细胞凋亡与否.结果 160μg/ml PMBE处理BEL-7402细胞24h后,凝胶电泳呈现DNA ladder,荧光镜检发现"核皱缩、边集或碎裂",流式细胞分析可见明显"凋亡峰".结论 PMBE能明显诱导体外培养的BEL-7402细胞凋亡;"一过性细胞处理法"能快速鉴定"凋亡"并测定"凋亡率",实现了定性与定量的统一.     

自养小球藻多糖对人肝癌细胞SMMC-7721凋亡的诱导

应用超声破碎碱提法制备自养小球藻多糖。在体外培养条件下,用不同浓度的小球藻多糖处理肝癌细胞,并通过MTT,双苯并咪唑(Hoechst33258)染色,免疫细胞化学等方法检测。结果表明,1g/L的小球藻多糖作用肝癌细胞SMMC-77211 2h,对其增殖有显著抑制作用,且能通过下调抗凋亡蛋白Bcl-2及上调凋亡执行蛋白Capase-3的表达来诱导其发生凋亡。     

红车轴草提取物对胃癌BGC-823细胞凋亡的影响

探讨红车轴草(TrifoliumpratenseL)提取物对胃癌细胞株BGC-823的抑制增殖效应及诱导凋亡作用.我们采用不同浓度(50、100、250、500、1000mg/L)红车轴草提取物处理BGC-823细胞,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测药物对细胞的抑制作用,倒置显微镜观察细胞的形态学改变;AO/EB染色,荧光显微镜观察细胞凋亡形态;采用DNALadder观察DNA的降解;应用流式细胞仪观察细胞凋亡过程中的细胞周期的变化和细胞凋亡.结果显示在红车轴草提取物的作用下,BGC-823细胞呈凋亡改变,DNA琼脂糖凝胶电泳呈典型的凋亡特征.细胞凋亡的同时,细胞周期阻滞于G2/M期.实验结果表明红车轴草提取物能抑制胃癌BGC-823细胞增殖,能诱导胃癌细胞凋亡.     

双光子及共聚焦激光扫描显微术研究天花粉蛋白对人绒癌细胞的作用机制

天花粉蛋白(trichosanthin, TCS)是从中草药栝楼根中提取的一种核糖体失活蛋白,具有抗肿瘤和抗HIV功能.应用双光子及共聚焦激光扫描显微术结合特异性荧光探针Hoechst 33342、2′,7′-二氯荧光黄双乙酸酯 (DCFH-DA)、Indo-1和Fluo 3-AM,首次同时观察了TCS诱导人绒癌细胞（JAR细胞）凋亡过程中活性氧自由基（ROS）和细胞内钙离子浓度（［Ca²⁺］_i）的变化,实验结果表明TCS引起的［Ca²⁺］_i升高和ROS形成参与了TCS诱导的JAR细胞凋亡,并且ROS形成和［Ca²⁺］_i升高有关.共聚焦激光扫描显微术的研究结果表明,［Ca²⁺］_i升高不是导致ROS形成的主要原因,TCS诱导产生的ROS可能是通过TCS与JAR细胞膜表面受体作用介导的.     

绿茶提取物对人肝癌细胞株SMMC-7721体外凋亡的影响

从茶多酚中分离提纯表没食子儿茶素没食子酸酯(Epigallocatechin gallate,EGCG)单体。体外培养人肝癌SMMC-7721细胞,采用不同浓度的EGCG对其进行干预,用流式细胞仪检测其对肝癌细胞凋亡的影响;免疫细胞化学法和RT-PCR检测EGCG作用于SMMC-7721细胞后对Survivin、突变型P53 mRNA和蛋白表达的影响。结果显示在EGCG的作用下,SMMC-7721凋亡明显增加(P0.05);Survivin和突变型P53蛋白和mRNA表达水平均下调(P0.05)。表明EGCG可能通过下调人肝癌细胞株Survivin和突变型p53的表达,进而促进人肝癌细胞株SMMC-7721凋亡,以达到抗癌作用。     

氧胁迫对人肝癌细胞生长分化和凋亡的影响

采用不同浓度的抗坏血酸(50—800μmol/L)和硫酸亚铁(2.5—40μmol/L)系统生成以羟自由基为主的各种程度氧胁迫,使之作用于人肝癌细胞。本文所采用的不同程度的氧胁迫均能抑制癌细胞的生长。低水平氧胁迫可使肝癌细胞失去某些恶性特征,趋向分化,表现为细胞表面对Con-A的凝集力、甲胎蛋白含量、γ-谷氨酰转肽酶和酪氨酸-α-酮戊二酸转氨基酶活性都朝着分化方向变化,差异显著。分化后的细胞克隆形成能力显著降低。在分化过程中,出现一定量的凋亡细胞。随着氧胁迫程度的增高,凋亡细胞增多,表现为非贴壁细胞增多,细胞体积变小,染色质凝缩在核膜边缘,呈新月形,核碎裂,但质膜完整。细胞核中DNA降解成大约21.2kbp大小的大片段DNA。有望通过严格控制氧胁迫程度来减慢肝癌细胞增殖,促进分化和凋亡,使恶性细胞逆转成良性细胞。     

甲胎蛋白在体外对人肝癌细胞生长的影响

本文用MTT比色法观察了甲胎蛋白(AFP)在体外对人肝癌细胞生长的影响。结果表明,AFP能促进SMMC-7721人肝癌细胞的生长。当AFP与AFP抗体合用时,AFP抗体能减弱AFP对SMMC-7721细胞生长的促进作用;AFP抗体单用对此种细胞的生长亦有抑制作用。另一方面,在相同的实验条件下,AFP和AFP抗体对HL-60人白血病细胞的生长无明显影响;提示AFP的促生长作用具有一定的肿瘤细胞特异性,并非一种蛋白质对培养细胞的非特异性营养作用。此外,AFP亦能促进MCF-7人乳腺癌细胞的生长,AFP抗体对此种细胞的生长有抑制作用。由于MCF-7细胞存在功能性AFP受体,也能合成和分泌AFP。这就提示,人肝癌细胞中的AFP很可能与其受体特异性结合,产生促生长效应。确切机制尚待进一步阐明。     

人肝癌细胞系HHCC中CD147和MMP—2共存了的免疫组织化学研究

应用免疫组织化学ABC法结合激光共聚焦显微镜观察了CD147分子和MMP-2在人肝癌HHCC细胞系中的表达,结果表明在HHCC细胞中CD147分子和MMP-2均呈免疫反应阳性,CD147反应位于核膜和核周胞质,MMP-2反应位于胞浆。     

激光共聚焦显微镜研究大白鼠肝癌FSK7902细胞系的实体瘤中角蛋白和嗜铬颗粒素A的关系

应用免疫组织化学ＡＢＣ法和免疫荧光组织化学方法结合激光共聚焦显微镜观察了嗜铬颗粒素Ａ和角蛋白在大白鼠肝癌ＦＳＫ７９０２细胞系形成的实体瘤癌细胞中的表达,结果表明在ＦＳＫ７９０２实体瘤内,大多数癌细胞呈角蛋白和ＣｇＡ免疫反应阳性,反应产物位于核周胞质或核旁的某些区域。     

动情周期中大鼠输卵管与植物凝集素BS-1结合的糖蛋白的表达

目的初步鉴定大鼠输卵管中存在与植物凝集素BS-1结合的糖蛋白,并研究其在输卵管中的定位和不同动情周期中糖蛋白的表达变化.方法根据阴道涂片检查将大鼠分为:间情期(DE)组、动情前期(PE)组、动情期(E)组和动情后期(ME)组.用冰冻切片法、荧光组化技术和共聚焦显微镜技术观察大鼠输卵管中与BS-1结合糖蛋白的分布及表达变化.结果大鼠输卵管中存在与BS-1结合的糖蛋白,并呈节段性分布,即峡部＞壶腹部.动情周期中大鼠输卵管糖蛋白的表达:动情期＞动情前期＞动情后期＞间情期.结论大鼠输卵管与植物凝集素BS-1结合的糖蛋白在动情期(E)峡部上皮表达最明显,具有雌激素依赖性.     

小麦叶肉细胞原生质体中微管骨架的排列格局与[Ca2+]cyt的关系

以小麦叶肉细胞原生质体为材料,通过免疫荧光标记和Ca~(2 )荧光染料的装载并结合药物学试验,借助激光共聚焦扫描显微镜观察,探讨微管骨架和Ca~(2 )之间的内在联系。试验结果表明,[Ca~(2 )]_(cyt)的升高能够诱发微管骨架的解聚;而微管骨架的解聚也会促使胞外Ca~(2 )内流,进而造成[Ca~(2 )]_(cyt)的升高。     

氢化可的松诱导特发性血小板减少性紫癜淋巴细胞凋亡和增殖抑制

探讨氢化可的松对儿童急性特发性血小板减少性紫癜（AITP）外周血淋巴细胞增殖和凋亡的影响,对12例确诊的儿童AITP外周血淋巴细胞进行体外培养,用流式细胞术观察糖皮质激素处理后外周血淋巴细胞凋亡数量的变化,并用Wst-1（四氮唑盐）测定代表增殖的活细胞数。结果显示,激素处理组淋巴细胞凋亡率明显高于对照组,而活细胞数则明显低于对照组;激素处理后的外周血淋巴细胞凋亡率明显高于对照组,而活细胞数则明显低于对照组;激素处理后的外周血淋巴细胞凋亡率也明显高于处理前和正常对照组,均具有显性差异。结果表明,氢化可的松具有明显的诱导淋巴细胞凋亡和增殖抑制作用,说明糖皮质激素可通过诱导AITP外血淋巴细胞凋亡和增殖抑制发探治疗作用。     

EPO对缺血/再灌注损伤大鼠心肌细胞Mfn2蛋白表达及心肌细胞凋亡的影响

目的观察重组人促红细胞生成素（recombinant human erythropoietin,rhEPO）对缺血/再灌注损伤大鼠心肌细胞Mitofusin2（Mfn2）蛋白表达的影响及其抗心肌细胞凋亡的作用。方法选取成年SD大鼠35只,随机分为正常组（Normal）,假手术组（Sham）,缺血再灌注组（I/R）,缺血再灌注EPO治疗组（I/R＋EPO）。各组分别于再灌注3h和24h后,剪取心脏缺血/再灌注损伤区域,用脱氧核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法（TUNEL）检测心肌细胞凋亡,免疫组化法检测Mfn2蛋白的表达。结果再灌注3h和24h后,与正常组和假手术组相比,I/R组Mfn2蛋白的表达和心肌细胞凋亡均显著增加;与I/R组相比,I/R＋EPO组Mfn2蛋白的表达和心肌细胞凋亡均显著降低。结论EPO可以下调缺血再灌注损伤后心肌细胞Mfn2蛋白的表达,抑制心肌细胞的凋亡。     

维胺酸对体外转化人支气管上皮细胞及体内构建人支气管上皮组织的抑制作用

癌前改变是肿瘤演变过程中的关键阶段。许多研究显示维甲类化合物对动物肿瘤及体外恶性细胞系具有抑制作用,但尚未见其对肺癌前病变作用的实验室研究报道。人类肺癌的绝大部分起源于支气管上皮,为研究维胺酸对体外转化人支气管上皮M细胞系以及在大鼠气管构建后移植到裸鼠体内生长的具有癌前病变特点的人支气管上皮组织的抑制作用,采用上皮细胞无血清培养技术,人支气管上皮组织大鼠气管内构建／裸鼠皮下移植生长技术,流式细胞学分析,免疫组化、凋亡细胞原位末端标记以及病理学检查等研究方法发现,维胺酸可抑制体外培养的转化人支气管上皮细胞的增殖,使S期细胞比例下降,以及细胞增殖标志Ki-67、mpm-2阳性反应细胞比例下降;明显诱导细胞凋亡。裸鼠腹腔注射给予维胺酸也可使大鼠气管内构建后移植到裸鼠体内生长的癌前期人支气管上皮组织的生长率明显降低,病变程度明显减轻;同样可以诱导细胞凋亡。研究结果提示,维胺酸对体外培养的转化人支气管上皮细胞系及大鼠气管构建／裸鼠体内移植生长的人支气管上皮组织均有明显的抑制作用,是有希望的肺癌化学预防药物。