致病性大肠埃希菌血清型分布及对抗生素的敏感性分析

目的了解临床病例中致病性大肠埃希菌的主要血清型和对抗生素的敏感性。方法致病性大肠埃希菌的鉴定使用血清学的方法,药敏试验采用纸片扩散法,WHONET 5.0软件分析药敏结果。结果致病性大肠埃希菌的检出率为5.93%,共分离到7种血清型。在分离到的菌株中,ESBLs的检出率达45%。结论致病性大肠埃希菌是引起小儿腹泻的一种重要致病菌,应开展对致病性大肠埃希菌的检测,根据药敏结果选用合适药物。     

大肠埃希菌基因组研究

大肠埃希菌是最早启动全基因组测序的细菌之一,但是对于大肠埃希菌作为共生菌存在于人类和动物肠内的生物学本质尚不清楚。目前,研究人员正在对大肠埃希菌基因组中每个必需基因的功能进行研究,以期能进一步了解大肠埃希菌的生物学特性。本文就大肠埃希菌基因组研究现状、研究方法及其后基因组研究等方面进行综述。     

大肠埃希菌泌尿系统感染患者临床分布及药物敏感性分析

摘要 目的：探讨大肠埃希菌引起泌尿系统感染患者的临床分布情况及其药物敏感性分析,为临床诊断及合理使用抗菌药物提供理论性依据。方法：选取2015年1月至2020年12月期间诊治的2052例大肠埃希菌泌尿系统感染患者为研究对象,使用MALDI-TOF MS全自动微生物鉴定质谱仪对细菌进行鉴定,应用VITEK 2 Compact全自动微生物鉴定及药敏分析仪进行药物敏感性分析。结果：2052例大肠埃希菌泌尿系统感染患者中泌尿外科患者占比最高,为17.50%,其次为肾病科患者,占12.87%。其中检出803株产ESBLs的大肠埃希菌,泌尿外科占比最高,为18.56%,其次是肾病科占13.95%,内分泌科占11.71%,重症医学科10.09%。2052株大肠埃希菌整体药敏分析结果显示,大肠埃希菌对美罗培南、亚胺培南、阿米卡星、哌拉西林/他唑巴坦、呋喃妥因、米诺环素、头孢西丁等药物敏感率高,均>90%,头孢唑啉、环丙沙星、左氧氟沙星、氨苄西林/舒巴坦、复方新诺明、氨苄西林敏感率低,均<50%,其中氨苄西林敏感率最低,只有28.17%。结论：大肠埃希菌泌尿系统感染主要发生在泌尿外科,产ESBLs大肠埃希菌整体检出率较高,临床应重视泌尿系统感染患者的尿细菌培养及药物敏感性分析,尽量避免仅凭经验性用药,根据药物敏感性结果合理选择抗菌药物。     

氧化苦参碱体外抑菌活性的研究

目的评估氧化苦参碱对条件性致病菌——大肠埃希菌的抑菌活性。方法采用滤纸片法和96孔板法对氧化苦参碱的抑菌活性进行检测,根据不同浓度氧化苦参碱对大肠埃希菌的抑菌率,利用origin75拟合标准曲线计算氧化苦参碱对大肠埃希菌IC50。结果滤纸片法检测结果发现,256、128、64、32mg/mL的氧化苦参碱对大肠埃希菌的抑菌圈大小分别为7．75、7．25、6．50和6．00mm,而阳性对照5000IU／mL庆大霉素的抑菌圈大小为27．00mm。96孔板法检测结果发现,氧化苦参碱对大肠埃希菌的抑制率均随用药剂量的增加抑制率增大,呈“S”型曲线。用药后6、12、24、48和72h时氧化苦参碱的Ic,。值分别为27．27、26．81、24．75、20．29和17．01mg／mL。结论氧化苦参碱对大肠埃希菌生长有抑制作用,其抑菌作用随氧化苦参碱用药作用时间的延长而增强,但抑菌活性较低。     

大肠埃希菌对22种抗生素耐药性分析

目的 :研究大肠埃希菌 (EC)对多种抗生素的耐药性。方法 :用 AMS法检测 173株 EC临床菌株的耐药性。结果 :EC对亚胺培南、头孢他啶、头胞噻肟、丁胺卡那霉素的耐药率为 1.2 %～ 3.5 % ,对氨曲南、头孢西丁、呋喃妥因的耐药率为 8.1%～ 10 .4% ,对头孢呋辛钠、头孢呋辛脂、妥布霉素、头孢噻吩的耐药率为 11.6 %～ 19.6 % ,对头孢唑啉、替卡西林 /克拉维酸、环丙沙星、头孢噻吩、庆大霉素、替卡西林和美洛西林的耐药率为 2 7.7%～ 5 9.0 % ,对哌拉西林、四环素、氨苄西林、羧苄西林的耐药率为 6 1.3%～ 76 .9%。在五类标本中 ,不同标本分离的 EC对 1～ 13种抗生素的耐药性差异有显著性 ,P<(0 .0 5 0～ 0 .0 0 5 )。在 2 2种抗生素中 ,15种抗生素对 2～ 6组配对标本分离 EC的敏感性差异有显著性 ,(P<(0 .0 5 0～ 0 .0 0 5 )。结论 :EC对亚胺培南、头孢他啶、头孢噻肟、丁氨卡那霉素的耐药率低 ,对羧苄西林、氨苄西林、四环素、哌拉西林的耐药率高 ,不同标本分离 EC对多种抗生素的耐药性差异有显著性。     

非致病性大肠埃希菌能增多大肠埃希菌O157:H7志贺毒素的产生

大肠埃希菌(简称大肠杆菌)O157：H7毒力因子为志贺毒素2(stx2),其基因由温和噬菌体编码,由晚期基因启动子调控表达。stx2的合成与释放需要诱导噬菌体溶菌周期,而且正常肠道大肠杆菌感染了毒素编码的噬菌体就能制造毒素和噬菌体,使毒素水平远远超过病原性菌株本身的产量,作者在体外以及鼠肠道验证了这一假设。     

乳酸杆菌体外对大肠埃希菌O-78拮抗作用试验

目的：研究乳酸杆菌体外对大肠埃希菌O-78的拮抗作用。方法：将乳酸杆菌与大肠埃希菌O-78体外共培养观察拮抗情况及用电镜观察形态变化。结果：等量同时间接种,24h内乳杆菌就将大肠埃氏菌O-78全部抑杀;乳酸杆菌早24h接种,4-8h内将大肠埃希菌O-78全部抑杀;大肠埃希菌O-78早24h接种,在12-24h内全部被抑杀。电镜观察发现,经乳酸杆菌培养液处理,大肠埃希菌O-78细胞膜形态发生变化。结论：本试验中所用乳酸杆菌体外具有抑制杀死大肠埃希菌O-78的作用。     

板蓝根多糖抑制致病性大肠埃希菌细胞黏附的试验研究

研究板蓝根多糖能否影响致病性大肠埃希菌对细胞的黏附。使用PK-15细胞进行了黏附试验及黏附抑制试验。在所选的4个浓度中,板蓝根多糖浓度为1.6mg/mL时,对细菌黏附细胞的抑制作用最好,黏附力由每个细胞黏附44.8个细菌降低到6.3个细菌。板蓝根多糖对致病性大肠埃希菌的细胞黏附具有抑制作用,提示该多糖具有调节肠道微生态的潜在应用价值。     

秦皮素对大肠埃希菌作用机制的初步研究

目的以大肠埃希菌ATCC 25922为供试菌,探讨秦皮素的抑菌活性及其作用机制。方法利用TTC法测定秦皮素对大肠埃希菌ATCC 25922的最低抑菌浓度;通过测定加药前后菌体培养液电导率和大分子的变化及观察扫描电镜和透射电镜电镜结果,分析秦皮素对其细胞膜的影响;通过SDS-PAGE测定秦皮素对供试菌株蛋白含量的影响;采用逐个检出法研究秦皮素对大肠埃希菌ATCC 25922质粒合成的抑制作用。结果秦皮素可抑制大肠埃希菌ATCC 25922的生长,其最低抑菌浓度为40μg/mL。秦皮素作用菌体5 h后,培养液中的电导率比对照组增加1.96%,但DNA和RNA大分子增加的不明显。秦皮素作用大肠埃希菌20 h后,菌体可溶性蛋白总量比对照组降低42%。秦皮素对大肠埃希菌的质粒有消除作用,药物作用48 h后,秦皮素对大肠埃希菌的质粒消除率为60.3%。结论秦皮素可抑制大肠埃希菌的生长,其抑菌作用机制与抑制菌体内蛋白质合成和消除菌体内的质粒有关,但对大肠埃希菌细胞膜的影响不大。     

大肠埃希菌的分型研究

目的分析上海某医院各科室分离大肠埃希菌的药敏状况和致病性,了解大肠埃希菌在该院流行情况。方法采用K-B琼脂法进行药敏试验,多重PCR技术进行基因分型。结果药敏结果显示该菌对多种常用抗生素具有耐药性,仅对阿米卡星等药物敏感。85株菌分为4个基因型,其中B2型25株,致病性最强;D型37株,致病性次之。菌株间亲缘关系表明可能存在院内流行。结论实验获得菌株具有较强耐药性和致病性,应当采取相应的措施预防院内感染的流行。     

Cell response of Escherichia coli to cisplatin-induced stress

Cisplatin is undoubtedly one of the most common and successful anticancer drugs worldwide. Though its DNA-based mechanism of action is well established, the contribution of the proteome to this process remains unclear. The possible impact of particular Escherichia coli proteins on the cytostatic activity of cisplatin was the subject of this study. Our main focus was not only the "bottom-up" identification of novel cisplatin protein targets through LC/LC-MS/MS analysis, but also a label-free quantification of their regulation profile by spectral-counting. The regulation of two proteins, aconitate hydratase 2 and 60 kDa chaperonin 1, could be linked to a platinated amino acid in the protein sequence, whereas in the cases of 30S ribosomal protein S1 and enolase, it could be shown that cisplatin fragments are coordinated to an essential site for the functionality of the protein. Nucleoside triphosphate pyrophosphohydrolase (MazG) regulates the programmed cell death and was found to be platinated on the protein surface, which probably correlates with the established mode of action. A possible new chapter in the understanding of cisplatin's mechanism of action and its severe side effects is opened, since evidence is provided that platinated proteins are not only involved in cellular stress response but also in energy metabolism through glycolysis and catabolic processes, in gene regulatory mechanisms and protein synthesis.     

捷安肽素高产突变株96孔板筛选方法的建立

建立了一种快速灵敏地筛选出捷安肽素(JAA)高产突变株的方法。主要利用96多孔板固体培养菌体,用50%乙醇为最佳浸提液浸提4h,滤纸片法检测JAA生物活性的点样量为100μL,筛选出5株高产突变株,经摇瓶复筛选出2株高产突变株,经一剂量法检测,其抑菌圈直径较出发菌株提高了14%左右。     

少量制备大肠杆菌感受态细胞条件探索

目的:为了获得重复性好、转化率高的少量制备感受态细胞的方法,利用不同生长时期的大肠杆菌感受态细胞,进行转化比较。方法:根据普通实验室的实验条件,常规方法提取质粒,氯化钙法转化不同生长时期的大肠杆菌感受态细胞,比较转化率。结果:大肠杆菌感受态细胞的转化率与OD值显著相关,在OD600nm为0.39和0.55时转化率最高,在OD600nm为0.28~0.55之间均可得到理想的转化效果。结论:少量制备感受态细胞方法操作中无需添加任何保护试剂和细胞复苏培养,操作简便、重复性好,实验成本低廉。     

质粒介导的大肠埃希菌对喹诺酮类抗菌药物耐药机制的研究

目的了解临床分离的耐环丙沙星的大肠埃希菌质粒介导的喹诺酮类耐药基因的携带情况,并进行相关耐药机制的分析。方法采用VITEK-2全自动微生物检测系统鉴定细菌,用K-B法检测细菌对16种常用抗生素的敏感性,采用聚合酶链反应检测喹诺酮类耐药基因qnrS、qnrA、qnrB、qepA和aac（6′）-Ib,并对阳性的aac（6′）-Ib结果进行测序分析。结果 30株耐环丙沙星的大肠埃希菌中,2株（6.67%）检出qepA基因,8株（26.67%）检出aac（6′）-Ib基因,经测序证实其中6株为aac（6）′-Ib-cr（20.0%）。未检出qnrS、qnrA和qnrB基因。结论对环丙沙星耐药的大肠埃希菌携带aac（6′）-Ib-cr和qepA基因,引起质粒介导的对喹诺酮类抗菌药物的低水平耐药。     

Impact of microbial diversity on rapid detection of enterohemorrhagic Escherichia coli in surface waters

Enterohemorrhagic Escherichia coli (EHEC) are a physiologically, immunologically and genetically diverse collection of strains that pose a serious water-borne threat to human health. Consequently, immunological and PCR assays have been developed for the rapid, sensitive detection of presumptive EHEC. However, the ability of these assays to consistently detect presumptive EHEC while excluding closely related non-EHEC strains has not been documented. We conducted a 30-month monitoring study of a major metropolitan watershed. Surface water samples were analyzed using an immunological assay for E. coli O157 (the predominant strain worldwide) and a multiplex PCR assay for the virulence genes stx(1), stx(2) and eae. The mean frequency of water samples positive for the presence of E. coli O157, stx(1) or stx(2) genes, or the eae gene was 50%, 26% and 96%, respectively. Quantitative analysis of selected enriched water samples indicated that even in samples positive for E. coli O157 cells, stx(1)/stx(2) genes, and the eae gene, the concentrations were rarely comparable. Seventeen E. coli O157 strains were isolated, however, none were EHEC. These data indicate the presence of multiple strains similar to EHEC but less pathogenic. These findings have important ramifications for the rapid detection of presumptive EHEC; namely, that current immunological or PCR assays cannot reliably identify water-borne EHEC strains.     

Ferrous iron transport mutants in Escherichia coli K12

A ferrous iron transport system in Escherichia coli is described. Mutants in this transport system were isolated using the antibiotic streptonigrin. The gene locus feo (for ferrous iron transport) was mapped near pncA at 38.5 min on the genetic map of E. coli K12. The transport of ferrous iron was regulated by fur as the siderophore transport systems.     

Modelling the vector pathway and infection of humans in an environmental outbreak of Escherichia coli O157

Quantifying the transfer of Escherichia coli O157 from the environment to humans is essential for understanding outbreaks, establishing the infectious dose of the organism and proposing safeguards. We modelled the pathogen loading shed onto a field by sheep immediately prior to a scout camp where 18 scouts and two adults were infected with E. coli O157. We estimated the dose ingested (4-24 organisms) which is in agreement with the low infective dose reported previously for this organism in food outbreaks. These data closely fit a surrogate Shigella dose-response model which can be used as a basis for risk assessment.     

重组人血小板生成素在大肠杆菌中表达的研究

采用化学法全合成了编码人血小板生成素（ｔｈｒｏｍｂｏｐｏｉｅｔｉｎ,ＴＰＯ）成熟肽Ｎ端１５３氨基酸的基因序列,构建基于该合成基因的表达质粒,结果以谷胱甘肽转硫酶－ＴＰＯ１５３（ＧＳＴ－ＴＰＯ１５３）融合蛋白的方式获得了占全菌蛋白４０％的高效表达．进一步采用ＰＣＲ方法分别对ＴＰＯ合成基因及ＴＰＯｃＤＮＡ的翻译起始区（ＴＩＲ）序列进行定点突变,以降低这一区域的Ｇ－Ｃ含量．将突变序列分别插入到ｐＢＶ２２０表达载体中,重组质粒在转化大肠杆菌ＪＭ１０９后,均获得了表达,其中ＴＩＲ区突变后的合成基因表达产物约占全菌蛋白的１５％．为研究基因下游结构对表达的影响,在不改变氨基酸组成的基础上,构建了ＴＰＯ合成基因与ＴＰＯｃＤＮＡ的杂合序列表达质粒．研究结果表明翻译起始效率是影响ｒｈ－ＴＰＯ在大肠杆菌中表达的重要因素之一,同时基因下游序列的组成对表达水平也会产生影响．