人血清脂蛋白的超速离心分离——Ⅰ.人血清极低密度及低密度脂蛋白的大量分离

本文报道了用区带转头超速离心分离人血清两种低密度脂蛋白的新方法,该法先用硫酸右旋糖酐粗提,浓缩,得到人血清中VLDL和LDL混合液,然后再用溴化钠密度梯度区带超速离心法将VLDL、LDL及其中少量的杂蛋白分开,最后获得较大量纯净的VLDL及LDL制品。本法分离效果好,重复性佳,固定离心条件后,特别是离心速度和时间,可在相同的位置获得VLDL和LDL样品。又由于分离时样品已浓缩,区带超速离心后仍能保持较高的浓度,因而可直接观察VLDL和LDL所在的管数,简化了步骤、缩短了时间,不需浓缩即可使用,避免了在样品浓缩过程中可能产生的变化。本文为大量制备纯净的VLDL及LDL提供了一较大量分离的方法。     

人血清脂蛋白的超速离心分离 Ⅱ.人血清极低密度脂蛋白和低密度脂蛋白性质的鉴定

本文对硫酸右旋糖酐粗制的VLDL和LDL混合液,再以区带超离心分离提纯的VLDL和LDL的样品,进行纯度鉴定、理化性质、免疫活性和化学组成的分析。琼脂糖和聚丙烯酰胺电泳结果证明,经脂质和蛋白染色均呈现一条带;免疫双扩散和免疫电泳只呈现一条沉淀弧;超速离心分析LDL 只有一个单一面尖锐的峰,上浮速率为6.75,与直接由人血清分离者无明显差异。证实本实验方法所得VLDL 和LDL 为较纯的制品,但从VLDL 和LDL 各管的琼脂糖电泳行为、电子显微镜中的分子颗粒大小以及VLDL 在分析超速离心中的上浮速率均提示:二者有亚类的存在,特别是VLDL。VLDL 和LDL 的化学组成分析说明LDL 与文献上报道数据一致,但VLDL 有一定差异。本方法为大量制备纯净的VLDL 和LDL 提供了一个有效的方法。     

人血清脂蛋白的超速离心分离——Ⅱ.人血清极低密度脂蛋白和低密度脂蛋白性质的鉴定

本文对硫酸右旋糖酐粗制的VLDL和LDL混合液,再以区带超离心分离提纯的VLDL和LDL的样品,进行纯度鉴定、理化性质、免疫活性和化学组成的分析。琼脂糖和聚丙烯酰胺电泳结果证明,经脂质和蛋白染色均呈现一条带;免疫双扩散和免疫电泳只呈现一条沉淀弧;超速离心分析LDL只有一个单一面尖锐的峰,上浮速率为6.75,与直接由人血清分离者无明显差异。证实本实验方法所得VLDL和LDL为较纯的制品,但从VLDL和LDL各管的琼脂糖电泳行为、电子显微镜中的分子颗粒大小以及VLDL在分析超速离心中的上浮速率均提示:二者有亚类的存在,特别是VLDL。VLDL和LDL的化学组成分析说明LDL与文献上报道数据一致,但VLDL有一定差异。本方法为大量制备纯净的VLDL和LDL提供了一个有效的方法。     

人血浆载脂蛋白E的分离提纯

利用仅2.5h的不连续密度梯度超速离心,可自人血浆分离获得纯净的极低密度脂蛋白(VLDL)。VLDL脱脂后,其可溶成分经Heparin-Sepharose CL-6B亲和层析柱,可分为低盐洗脱峰Ⅰ和高盐洗脱峰Ⅱ。峰Ⅱ经SDS-PAGE鉴定为单一染色带,测定其分子量为33 900。此即为纯净的人血浆载脂蛋白E,载脂蛋白E的分离提纯为制备其羊克隆抗体和进行血浆浓度及表型测定提供了有利条件。     

一次密度梯度超速离心分离人血清四种主要脂蛋白的某些理化性质的研究

 本文对一次密度梯度超速离心获得的四种脂蛋白(VLDL、LDL、HDL_2、HDL_3)进行了理化性质的研究。超速离心分析LDL、HDL_2,HDL_3均呈现一个单一尖锐的上浮峰,上浮速率分别为S_1 6.9和F~0_(1.21) 5.7及2.6。等电点聚焦电泳显示,VLDL主要含载脂蛋白C族,E族和少量A-I,B。HDL_2、HDL_3二者载脂蛋白的种类很相似,但量上略有差异,均以载脂蛋白A-Ⅰ,A-Ⅱ为主,Apoc’s,E次之。VLDL、LDL、HDL_2和HDL_3的化学组分分析与文献报道相似。 作者用本法初步分析了不同性别的各脂蛋白分布图,获得有意义的结果。     

一次密度梯度超速离心分离人血清的VLDL、LDL、HDL_2、HDL_3及无脂血清

本文将密度梯度、离心力和离心时间作适当的组合和配比:即不连续密度梯度1.000—1,400g/mlNaBr溶液、离心力168,000g、22小时,10℃,在Beckman L8-80型、区带头Ti-14一次超速离心将血清中四种主要脂蛋白和无脂血清相互分开,获得五个明显的蛋白峰。前四个峰经琼脂糖电泳,聚丙烯酰胺电泳,免疫双扩散和分析超速离心鉴定分别为VLDL、LDL、HDL_2和HDL_3,不含清蛋白。峰五为无脂血清,仅含0.046mg/dl胆固醇和0.2mg/dl甘油三酯,本法重复性佳,分离样品多(50ml),效果好,操作简单,并可延长离心机头的使用期限。已用于研究各种因素对脂蛋白含量的影响及其代谢间的相互关系。     

一株奥奈达希瓦氏菌烈性噬菌体的分离、纯化及鉴定

【目的】从环境中分离获得希瓦氏菌烈性噬菌体,并对其性质进行研究。【方法】以4株希瓦氏菌为宿主菌,采用双层平板法从污水样品中分离得到奥奈达希瓦氏菌MR-1烈性噬菌体M1;观察噬菌斑特征;利用超速离心法浓缩M1颗粒,进一步用氯化铯密度梯度离心纯化;采用透射电子显微镜观察纯化的M1颗粒;提取M1核酸,通过核酸酶处理分析其核酸类型及结构;绘制一步生长曲线。【结果】噬菌体M1在双层平板上形成圆形的噬菌斑,清晰透明,边缘光滑,直径为2.3 mm-2.5 mm;经电镜观察,噬菌体M1头部呈二十面体,直径约为55 nm,尾长约为170 nm,尾部可收缩,属于肌尾噬菌体科(Myoviridae);通过酶切分析表明噬菌体M1核酸为线形双链DNA;一步生长曲线显示该噬菌体感染后完成一个复制循环所需要的时间约为15-20 min。【结论】噬菌体M1属肌尾噬菌体科,研究结果为后续研究病毒在地球微生物成岩过程中所起的作用提供了实验材料。     

一种用聚乙二醇制备微粒体的方法

介绍一种用聚乙二醇(PEG)制备微粒体的方法.大鼠肝匀浆经聚乙二醇-6000凝聚,及两次高速离心即可得到微粒体组分,与超速离心方法比较,可省去超速离心步骤,又缩短了分离制备的时间,是一种比较简单易行的方法．     

人血清极低密度脂蛋白体外代谢的研究

本文利用脂蛋白脂肪酶(LPL)在体外研究人血清极低密度脂蛋白(VLDL)的代谢变化,及其与其他脂蛋白的关系。发现在适宜条件下,LPL水解VLDL核中的甘油三酯(TG),释放游离脂肪酸(FFA),同时VLDL浊度变小,透光度增加。反应后产物通过密度梯度超速离心方法分离,发现分解代谢产物在密度为1.020～1.045g/ml之间有新生组分产生,其电泳迁移率增快,着色带增宽。电镜观察这些新组分的颗粒比天然VLDL为小,而比低密度脂蛋白(LDL)为大,并有空泡状不规则脂质体的单层形成,以及一些非球形、具有触角或尾巴状的构形,很可能是脂解后VLDL的过剩表面,是新生高密度脂蛋白(HDL)的前体。这些结果说明人血清VLDL经LPL分解代谢后,其结构,形态和组分均发生了明显的变化。     

分子筛分离不同年龄红细胞膜

制备红细胞膜,一般使细胞低渗溶血,然后低温超速离心分离。至于分离不同年龄的红细胞膜,则根据细胞比重的差异,先在适当介质中超速离心,然后将离心沉降的细胞分层取样,得到不同年龄的红细胞,再分别低渗溶血、低温超速离心以得到不同年龄的膜。最近,Froman,G等报道用分子筛琼脂糖凝胶成功地分离了红细胞膜。本实验对此法做了进一步研究,并利用此法分离了不同年龄的红细胞膜,我们证     

脂蛋白的研究 Ⅰ.人血清β脂蛋白的大量分离的新方法及其某些性质的研究

(1)本文利用大分子D.S.与β脂蛋白复合物的性质对血清β脂蛋白的大量分离及其某些性质进行了研究。(2)自制D.S.可以在中性pH与人血清β脂蛋白形成不溶的复合分子。该复合分子可以溶解于12%NaCl溶液中,并可用纯化学的方法分离,释放自由β脂蛋白。(3)该脂蛋白溶液经纸上电泳、琼脂凝胶电泳及琼脂免疫电泳的鉴定均证实为纯净的β脂蛋白,只有一种免疫性,不再含有可觉察出的D.S.。经超速离心分析,主要含有S,2—6的低密度脂蛋白及少量S_f值较高的β脂蛋白。(4)新鲜的β脂蛋白为草黄色液体,平均浓度为1克/100毫升,在可见光400—500mμ波长有三个明显的吸收峰,在紫外光275mμ波长有一吸收峰。于2℃冰箱保存二周或在4℃浓缩均不致产生沉淀。(5)本文对D.S.-β脂蛋白复合分子的性质进行了初步研究,并对其结合方式作了简单的讨论。(6)本文提供了一个简单、温和、不用长时间超速离心而可大量分离和浓缩血清β脂蛋白的化学方法。     

一个实用的制备EMBL4 DNA 的方法

以往人们通常用氯化铯梯度超速离心法、甘油梯度超速度离心法等方法纯化噬菌体。采用这些方法,虽然可以获得纯净的λ噬菌体颗粒。但需要昂贵的试剂和仪器。操作也冗长繁琐。我们采用并改进了Reddy的方法,首先用DE_(52)纤维素柱层析纯化λ噬菌体颗粒,然后用酚抽提,从提纯的噬菌体中分离DNA,这个方法简单快速,不需要氯化铯梯度超速离心,也不使用SDS、蛋白酶和核酸酶。     

Fluka的RNA分离盒

作为Sigma-Aldrich Co Ltd一部分的Fluka Chemicals研制出一种新的RNA分离盒,其Micro Selelct区具有快速、一步提取RNA的功能。这种盒使用guanidiam硫氰酸盐-酚-氯仿提取法,能获得纯RNA,不含DNA且污染蛋白含量低于用guanidium-CsC1法制备的样品。因为没有离心步骤,所以能同时加工大量样品。Fluka介绍说,这种盒可应用于小规模和大规模制备RNA,从各种培养细胞系     

鱼肝线粒体DNA的简易提纯方法

本文报道一种简易分离纯化线粒体DNA(mtDNA)的方法。即以差速离心或蔗糖梯度离心制得线粒体后,用RNase除去RNA,可得纯mtDNA,或用凝胶过滤、或低熔点琼脂糖法纯化之。所获纯mtDNA可用于限制性酶切图谱的组建和其片段的克隆。此法可避开冗长的昂贵的超速离心,故可为普通实验室所采用。文中还讨论了mtDNA纯化和得率的因素。     

鸡血清极低密度脂蛋白对鸡颗粒细胞孕酮合成的影响

用鸡的颗粒细胞(granulosa cell,G·C·)进行极低密度脂蛋白(VLDL)对于孕酮合成的研究。按序列超速离心法分离鸡血清脂蛋白。用放射免疫法测定孕酮的量。实验分组:G·C·加绵羊促黄体生成素(OLH),其浓度范围为1—50 ng/ml,此为OLH组;G·C·加VLDL(最终浓度400μg/ml)再加OLH,此为VLDL组;G·C未加VLDL和OLH则为对照组。实验结果:(1).OLH组能促进G·C·孕酮的合成而且孕酮的生成量随着OLH量的增加而增加。(2)VLDL组孕酮生成量较OLH组显著增高,两者之间有显著性差异(P<0.001)。(3)用3次实验结果合并计算VLDL组和OLH组的平均数相当于对照组平均数的百分数,发现VLDL组明显高于OLH组。实验结果说明VLDL是携带胆固醇的脂蛋白,从而在OLH作用下,使颗粒细胞合成孕酮的量增多。     

通过整体消化法分离具有集落形成能力的胰腺上皮样细胞

目的:胰腺上皮细胞能诱导成表达胰岛素的细胞,成为细胞替代疗法治疗糖尿病的重要来源。胰腺细胞的分离多采用机械剪切后胶原酶消化,本文在以往研究基础上,探索一种能分离得到更纯净的胰腺上皮样细胞的新方法。方法:本研究采用胰腺整体消化的方法,将成体小鼠整个胰腺取下,摘除系膜及大的血管,置于胶原酶中消化20min,用PBS吹打胰腺组织,得到的细胞悬液,离心后去除上清与细胞碎片,用培养基重悬实质细胞,接种于6 cm培养皿中,培养7-10天后得到单细胞集落。结果:整体消化法不剪碎胰腺组织,从而避免多种胰腺细胞的参与,得到较为纯净的胰腺上皮细胞悬液,细胞总体数量小于部分消化法,但是单细胞比率远远高于部分消化法,得到的细胞集落更纯净,不需要去除成纤维细胞,方便筛选及进一步扩大培养。结论:整体消化法能够分离纯化出一群在离体条件下具有强增殖能力、形成大的上皮样集落的细胞。该分离方法方便、快捷,为今后进一步研究成体胰腺干细胞增殖与分化调控机制等问题奠定基础。     

LDL亚组分研究进展

根据低密度脂蛋白（low density lipoprotein,LDL）颗粒的不均一性,可以利用密度梯度超速离心法和梯度凝胶电泳法将其分成若干亚组分。近年来,对于LDL亚组分分离方法的研究取得了显著进展。除对上述两种基本实验方法进行改进外,有实验室采用Western印迹法对LDL颗粒进行分离。LDL亚组分分离方法的进步,使对LDL亚组分的认识更加深入：LDL亚组分的高度不均一性、氧化易感性及电负性等不同特性与动脉粥样硬化（atherosclerosis,AS）关系密切。LDL亚组分的研究为认识动脉粥样硬化及其相关疾病提供了重要的理论依据。     

兔主动脉平滑肌细胞低密度脂蛋白受体相关蛋白(LRP)的诱导表达调节

在兔主动脉平滑肌细胞 ( SMC)培养基中分别加入正常低密度脂蛋白 ( N- LDL)、氧化低密度脂蛋白 ( ox- LDL)、正常极低密度脂蛋白 ( N- VLDL)、氧化极低密度脂蛋白 ( ox- VLDL)和 β-极低密度脂蛋白 (β- VLDL )培养 2 4 h后 ,用定量 RT- PCR和配体结合实验检测平滑肌细胞 LRP的m RNA和蛋白质水平的表达 .结果表明 :五种脂蛋白均能在转录和翻译水平诱导兔主动脉平滑肌细胞的 LRP表达 ,尤以富含胆固醇的 N- LDL ,ox- LDL和β- VLDL的刺激作用更明显 .用胆固醇单独或与脂蛋白共同温育 SMC后 ,发现胆固醇本身可促进 SMC的 LRP蛋白水平的表达 ,脂蛋白与胆固醇的共同刺激作用更为显著 .结果提示 :上述五种脂蛋白对 SMC上 LRP的表达有上调作用 ,其机制可能主要是通过其中的胆固醇来实现的 .     

褐藻裙带菜中PSII复合物及其亚复合物的分离和特性研究

用不连续梯度蔗糖密度超离心,从经TritonX-100增溶的褐藻裙带菜类囊体膜中分离到3种色素蛋白复合物条带,分别是捕光复合物、具有光氧化活性的PSII复合物颗粒(区带II)以及PSI(区带III)。PSII颗粒经毛地黄皂苷增溶后,再次超离心分离得到3条PSII的亚复合物条带。吸收和荧光激发谱显示其中的区带II-1为墨角藻黄素-Chla/c-蛋白复合物,区带II-2为Chla/c-蛋白复合物,两者都只含20kDa多肽;而鲜绿色的区带II-3为不含捕光复合物的活性PSII核心。     

应用重定向超速区带离心法纯化HBsAg的研究

采用重定向超速区带离心法进行了从乙肝阳性血清中提纯ＨＢｓＡｇ的研究，获得了一套最佳离心条件，可清除阳性血清中的各种杂蛋白，获得不含乙肝病毒（Ｄａｎｅ颗粒）的纯ＨＢｓＡｇ。此方法具有离心时间短、不漏液、故障少及成本低等优点。本试验结果为采用重定向超速区带离心法大规模纯化ＨＢｓＡｇ、基因工程表达产物及其它生物大分子蛋白提供了实验依据