酸性同工铁蛋白、p53在大肠腺癌和大肠腺瘤组织中的表达及其意义的探讨

采用抗人胎盘酸性同工铁蛋白单克隆抗体、ｐ５３ 单克隆抗体和免疫组化方法,分别对３２ 例大肠腺癌、３０ 例大肠腺瘤和３０ 例非肿瘤性大肠粘膜组织进行检测。结果是酸性同工铁蛋白在５３．１％ 的大肠腺癌和１６．６７％ 的大肠腺瘤中为阳性表达, 二者阳性率比较存在显著性差异 （Ｐ＜ ０．０５）, 在非肿瘤性大肠粘膜组织中全部为阴性; ｐ５３ 在４３．８％ 的大肠腺癌和１３．３％ 的大肠腺瘤中为阳性表达; 在大肠腺癌组织中, 酸性同工铁蛋白与ｐ５３ 的表达符合率为７１．９％ （同为阳性者为３４．４％ , 同为阴性者为３７．５％ ）, 经统计学检验酸性同工铁蛋白的表达与ｐ５３ 的表达具有显著的相关性; 在３０ 例大肠腺瘤组织中, 酸性同工铁蛋白与ｐ５３ 同为阳性表达者３ 例, 该３ 例组织均可见非典型增生的病理变化。本研究结果表明大肠癌细胞内存在酸性铁蛋白抗原, 这些酸性铁蛋白若释放到血液中可能是造成患者血清铁蛋白水平升高的主要原因之一; 另外还提示对大肠腺瘤患者进行ｐ５３ 和酸性同工铁蛋白的检测可能作为判断其早期癌变的指标     

维生素D治疗大肠埃希菌所致肠道炎症相关抑郁症的作用

目的研究维生素D对肠道微生态紊乱造成的抑郁的治疗作用。方法通过灌胃给予大肠埃希菌建立肠道紊乱模型,并外源给予维生素D。检测小鼠肠黏膜炎性因子的分泌和小鼠的抑郁情况。结果灌胃给予大肠埃希菌明显促进了肠黏膜促炎性因子的分泌并促使小鼠出现抑郁症状。外源性给予维生素D则明显降低了肠黏膜促炎性因子的分泌,并且缓解了小鼠抑郁的症状。结论维生素D可通过调节肠道菌群降低炎症反应,并缓解抑郁症状。     

粪便中大肠埃希菌分离方法的筛选

比较了滤膜法、涂布法和纸片法对粪便中大肠埃希菌的分离效果。通过对分离粪便大肠埃希菌的数量可知,纸片法与m—TEC培养基上滤膜法分离的大肠埃希菌数量结果基本一致。m—TEC培养基滤膜法分离的大肠埃希菌平均数量分别是伊红美蓝培养基涂布法分离大肠埃希菌平均数量的1．4倍、伊红美蓝培养基滤膜法分离大肠埃希菌平均数量的2．8倍、m—TEC培养基涂布法分离大肠埃希菌平均数量的2．25倍。分离粪便样品中大肠埃希菌选择滤膜法用m—TEC培齐基进行分离为最佳分离方法。     

建立维生素K_1微生物限度测定方法

目的:根据计数培养基适用性检查和计数方法适用性试验结果,建立维生素K1微生物限度测定方法。方法:以聚山梨酯80作为乳化剂,使维生素K1在p H 7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液中充分乳化。取1:20供试液1 m L,按平皿法分别用营养琼脂培养基和玫瑰红钠琼脂培养基培养,以计数细菌、霉菌和酵母菌。结果:验证所用培养基的菌落平均数均大于对照培养基上的70%,且菌落形态大小一致。稀释液对照组和试验组培养基上菌落平均数的回收率均大于70%,且菌落形态大小一致。三批维生素K1及其加速和长期稳定性样品中均未见菌落。结论:所选培养基适宜大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠菌生长。且含聚山梨酯80的p H 7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液和维生素K1对所含大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠菌无抑菌性。     

应用实时荧光定量PCR定量检测溃疡性结肠炎肠道大肠埃希菌、乳酸杆菌及双歧杆菌属的变化

目的应用实时荧光定量PCR（RT—PCR）法对溃疡性结肠炎（ulcerative colitis,UC）患者粪便中大肠埃希菌、乳酸杆菌及双歧杆菌属的数量进行定量检测分析。方法根据细菌的16SrDNA基因序列设计大肠埃希菌、乳酸杆菌及双歧杆菌属的种属特异性引物。收集溃疡性结肠炎患者及正常对照者新鲜粪便标本各35例,从待测粪便标本中提取细菌基因组DNA,进行实时荧光定量PCR反应,定量分析不同细菌的数量。结果正常对照组与病例组粪便中细菌数量分别为大肠埃希菌（4．62±1．10;5．27±1．02）、乳酸杆菌属（4．99±0．75;4．65±0．95）、双歧杆菌属（5．07±0．95;4．93±0．99）,病例组大肠埃希菌数量明显增多（t=2．540,P=0．013）,而乳酸杆菌及双歧杆菌属数量与正常组比较差异无统计学意义（t1=0．488,P,=0．530;t2=-0．533,P：=0．596）。结论溃疡性结肠炎患者粪便中大肠埃希菌的数量较正常对照明显增多,而乳酸杆菌及双歧杆菌属的数量无明显变化,提示大肠埃希菌与溃疡性结肠炎的发病或复发有关系,而乳酸及双歧杆菌属与此病的关系有待进一步研究。     

大肠埃希菌临床分离株CTX—M型超广谱β-内酰胺酶基因型研究

目的了解我院临床分离大肠埃希菌产CTX-M型超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）的基因型分布情况。方法收集我院临床分离大肠埃希菌200株,按美国临床和实验室标准协会2006年制订的标准确定ESBLs表型。PCR扩增CTX—M耐药基因,扩增产物测序,测序结果与GenBank比对,确定CTX．M基因型。结果200株大肠埃希菌中有94株ESBLs阳性,其中92株CTX-M基因扩增阳性。测序结果表明,大肠埃希菌CTX．M基因型以CTX．M14为主,占67．4％,同时CTX—M3占27．2％,5株未分型。结论大肠埃希菌中产CTX．M型ESBLs的检出率较高,其基因型以CTX．M14和CTX．M3型为主。     

妇科肿瘤患者尿液主要致病菌分布及大肠埃希菌耐药性的分析

目的探讨妇科肿瘤患者尿路感染情况。方法对688份尿液标本中主要致病菌分布及主要菌大肠埃希菌的药敏进行了总结和分析。结果尿液中主要菌为大肠埃希菌(59．3％),粪肠球菌(11．1％),铜绿假单胞菌(6．3％)。大肠埃希菌中产ESNLs菌株占51．8％,大肠埃希菌对青霉素类、头孢类耐药率均大于50％,对喹诺酮类耐药率大于70％,产ESBLs大肠埃希菌对氨苄西林。舒巴坦、阿莫西林-棒酸、替卡西林-棒酸耐药率很高,不适合用于临床治疗,对哌拉西林-他唑巴坦和头孢哌酮-舒巴坦敏感率均在90％左右。结论     

大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌ESBLs检测及耐药性分析

由细菌超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）引起的细菌耐药性一直是临床相关感染性疾病治疗中的棘手问题。从不同病区患者标本中分离了96株大肠埃希菌和80株肺炎克雷伯菌,分剐采用双纸片协同试验和药物敏感试验检测了上述菌株产生ESBLs情况及对17种抗生素的耐药性。结果发现,27．1％（26／96）的大肠埃希菌株和22．5％（18／80）肺炎克雷伯菌株产ESBLs。ICU病房分离的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌株ESBLs总阳性率（46．0％）与介入科病房和烧伤科病房分离菌株ESBLs总阳性率（28．6％和25．0％）无显著性差异（P〉0．05）,但明显高于呼吸科、骨科、其他病房及门诊部分离菌株ESBLs总阳性率（6．3％～14．3％,P〈0．01）。不产ESBLs大肠埃希菌株和肺炎克雷伯菌株对17种抗生素耐药率明显低于产ESBLs菌株。产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对氨曲南均敏感,对氨苄西林／舒巴坦、阿莫西林／棒酸、阿米卡星耐药率仅为15．8％-23．4％。上述实验结果提示,大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌临床菌株中有较高的ESBLs阳性率,不同病区患者感染的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌ESBLs阳性率有很大差异,氨曲南、氨苄西林／舒巴坦、阿莫西林／棒酸、阿米卡星可作为治疗产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌感染性疾病的首选药物。     

大肠癌P21,P53蛋白表达和k—ras基因,P53基因突变研究

用免疫组化技术和ＰＣＲ－ＳＳＣＰ技术对高、中、低分化大肠腺癌、癌旁粘膜、正常粘膜及大肠腺癌型息肉的Ｐ２１、Ｐ５３蛋白表达和ｋ－ｒａｓ基因、Ｐ５３基因突变进行检测。结果,大肠腺癌Ｐ２１、Ｐ５３蛋白表达比大肠腺瘤增多,但增加不显著（Ｐ〉０．０５）,二组均比癌旁粘膜和正常粘膜Ｐ２１、Ｐ５３蛋白表达阳性率高（Ｐ〈０．０１）,大肠腺癌ｋ－ｒａｓ基因和Ｐ５３基因突变率比大肠腺瘤、癌旁粘膜和正常粘膜组显著增加     

血流感染患者大肠埃希菌产超广谱β-内酰胺酶及耐药性分析

目的分析血流感染患者大肠埃希菌产超广谱β-内酰胺酶（Extended—Spectrum Beta Lactamases,ESBLs）的现状及其耐药特征,为临床合理使用抗菌药物提供依据。方法对浙江省上虞市人民医院2011年1月至2012年12月住院患者血培养分离的96株大肠埃希菌,采用纸片扩散表型确证试验进行ESBLs检测,用K．B法做药敏试验。结果血培养的大肠埃希菌分离率2011年、2012年分别为19．48％、17．47％。大肠埃希菌产ESBLs的检出率2011年、2012年分别为60．00％、60．78％。产ESBLs菌株对多种抗菌药物的耐药率显著高于不产ESBLs菌株。无论大肠埃希菌是否产ESBLs,碳青霉烯类抗生素均具有很高的敏感率。结论血流感染患者分离的大肠埃希菌产ESBLs比率高,产ESBLs菌株对多种抗菌药物耐药性高。可经验性使用碳青霉烯类抗生素治疗大肠埃希菌所致的血流感染。     

氧化苦参碱体外抑菌活性的研究

目的评估氧化苦参碱对条件性致病菌——大肠埃希菌的抑菌活性。方法采用滤纸片法和96孔板法对氧化苦参碱的抑菌活性进行检测,根据不同浓度氧化苦参碱对大肠埃希菌的抑菌率,利用origin75拟合标准曲线计算氧化苦参碱对大肠埃希菌IC50。结果滤纸片法检测结果发现,256、128、64、32mg/mL的氧化苦参碱对大肠埃希菌的抑菌圈大小分别为7．75、7．25、6．50和6．00mm,而阳性对照5000IU／mL庆大霉素的抑菌圈大小为27．00mm。96孔板法检测结果发现,氧化苦参碱对大肠埃希菌的抑制率均随用药剂量的增加抑制率增大,呈“S”型曲线。用药后6、12、24、48和72h时氧化苦参碱的Ic,。值分别为27．27、26．81、24．75、20．29和17．01mg／mL。结论氧化苦参碱对大肠埃希菌生长有抑制作用,其抑菌作用随氧化苦参碱用药作用时间的延长而增强,但抑菌活性较低。     

大肠埃希菌耐药性及其基因同源性分析

目的 研究临床分离的大肠埃希菌对常用抗生索的耐药性及其基因分型,了解其耐药性趋势与传播流行情况,为临床合理治疗大肠埃希菌引起的感染提供参考依据。方法 采用常规鉴定技术鉴定细菌;采用K—B纸片扩散法测定77株大肠埃希菌对19种药物的耐药性;K—B法鉴定产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）;通过脉冲场凝胶电泳（PFGE）法对其进行基因分型以确定菌株之间的亲缘关系;FINGERPRINT Ⅱ软件进行细菌基因指纹图谱分析。结果 大肠埃希菌对青霉素类、喹诺酮类药物和氨曲南的耐药性明显增高,亚胺培南和美罗培南是大肠埃希菌感染患者的首选药物;经ESBLs确证试验,ESBLs阳性率为28．60％（22／77）;产ESBLs大肠埃希菌经PFGE指纹图谱分析,除第62株和第70株相似性系数为78．27％外,其余相似度均低于70．0％;ESBLs大肠埃希菌阴性株中除少数几对菌株相似性系数较高外,其余呈散在分布,且电泳带存有6条以上的不同条带,为流行病学无关的不同克隆。结论 大肠埃希菌对常用抗生索耐药性明显增高,且呈多重耐药趋势;该研究尚不能证明存在大肠埃希菌爆发性流行感染,提示可能存在院内感染大肠埃希菌的优势克隆;PFGE基因分型方法是耐药性与流行状况分析的有效手段。     

人母乳中分泌型免疫球蛋白A的抗体特异性分析

目的探讨人母乳中分泌型免疫球蛋白A（sIgA）的抗体特异性,了解母体所哺育的新生儿及婴儿对病原微生物的抵抗力,为预防新生儿及婴儿感染性疾病提供实验依据。方法制备轮状病毒、肠致病性大肠埃希菌。采用间接ELISA法检测81份配对初乳和成熟乳中针对轮状病毒、柯萨奇病毒、埃可病毒、腺病毒、呼吸道合胞病毒、幽门螺杆菌、空肠弯曲菌、肠致病性大肠埃希菌和沙门菌“O”9种病原微生物的特异性sIgA。Wester—blot鉴定9份初乳中抗肠致病性大肠埃希菌的特异性sIgA。结果81份初乳中均检出抗上述9种病原微生物的特异性sIgA,其阳性率按秩序分别为34．5％、6．2％、3．7％、18．5％、23．5％、8．6％、9。8％、11．1％和14．8％。81份成熟乳中仅检出抗轮状病毒、腺病毒、呼吸道合胞病毒、空肠弯曲菌、肠致病性大肠埃希菌和沙门菌O的sIgA,其阳性率分别为19．8％、7．4％、6．2％、2．5％、2．5％和3．7％。未检出抗柯萨奇病毒、埃可病毒和幽门螺杆菌的特异性sIgA。初乳中抗轮状病毒sIgA阳性率高于成熟乳（P〈0．05）,抗腺病毒和呼吸道合胞病毒sIgA的阳性率高于成熟乳（P〈0．05,P〈0．01）。Wester—blot鉴定9份初乳中含有3种对肠致病性大肠埃希菌的特异性sIgA。结论在母乳中含有抗多种病毒和细菌的特异性sIgA,其阳性率低于30％。初乳中特异性sIgA水平高于成熟乳。如何提高乳汁中的特异性sIgA水平,增强新生儿及婴儿的抗感染力,是儿童保健值得探讨的问题。     

嗜酸乳杆菌P302菌株产类细菌素最佳条件的研究

目的对产类细菌素嗜酸乳杆菌P302的发酵条件进行研究。方法采用琼脂扩散法测定发酵上清液对大肠埃希菌O139的抑菌活性。结果通过正交试验确定P302产类细菌素的最佳培养基组分为牛肉膏4％、胰蛋白胨0．2％、酵母粉0．8％、碳酸钙0．4％和蔗糖1％,0．4％复合维生素,0．3％Tween-80有利于类细菌素的产生。发酵工艺条件为最适初始pH7．0,最适温度37℃,最佳接种量0．3％,种龄14h,厌氧培养22h。结论通过优化发酵条件和发酵工艺,类细菌素的产量提高了35％。     

野猪RBP4基因的克隆、表达及变异初步研究

视黄醇结合蛋白是体内一类将维生素A从肝中转运至靶组织以实现维生素A的细胞内转运代谢的特异的运裁蛋白,在协助维生素A发挥生理功能中起着不可替代的作用.它既是一个影响猪的繁殖性状的候选基因,同时也是一个研究维生素A代谢障碍及肥胖症的候选基因.为了进一步揭示其群体遗传变异,寻找新的遗传标记,本研究对野猪(Sus scrofa ussuricus)RBP4基因进行了克隆、表达和序列分析,并对所发现的点突变进行了基于限制性内切酶Msp Ⅰ的PCR-RFLP分析.序列分析表明野猪与大白猪相比存在着4个SNPs;该基因在野猪的肝脏、肾脏、肺、大肠和肌肉中表达,在心脏、胃、脾、小肠和睾丸中不表达;对14头野猪的酶切多态性分析表明该突变位点是多态位点,并且3种基因型的分布符合Hardy-Weinberg定律.     

维生素E和微量元素Se对人肝癌细胞生长、分化及其癌基因表达的影响

本工作观察了体外环境中不同水平的维生素Ｅ和微量元素Ｓｅ对人肝癌细胞株（ＳＭＭＣ－７７２１）生长、分化和其癌基因（Ｎ－ｒａｓ、ｃ－ｍｙｃ）表达水平的影响。实验结果表明：高水平维生素Ｅ（２．４、９．２、２４．０ｎｍｏｌ／Ｌ）和Ｓｅ（０．１５、０．３０、０．６０ｎｍｏｌ／Ｌ）对肝癌细胞的集落形成率具有明显的抑制作用;生化分析显示高水平维生素Ｅ和微量元素Ｓｅ均可明显抑制环境中脂质过氧化的水平,Ｓｅ对癌细胞甲胎蛋白的分泌有明显的抑制作用,而维生素Ｅ作用不明显。细胞原位杂交发现维生素Ｅ浓度为２．４和９．２ｎｍｏ１／Ｌ时对细胞癌基因Ｎ－ｒａｓ的表达具有明显抑制作用;Ｓｅ浓度为０．１５和０．３０ｎｍｏｌ／Ｌ时对癌基因ｃ－ｍｙｃ的表达明显抑制。实验还观察了维生素Ｅ和Ｓｅ之间的叠加效应,结果显示除对环境中脂质过氧化的抑制作用具有叠加效果外,对其他指标没有明显作用。     

大肠埃希菌生物被膜体外模型的建立及黄连水提物对其抑制作用的初步研究

建立大肠埃希菌生物被膜（biofilm,BF）在Ф30培养皿和96孔板表面形成的体外模型,并开展黄连水煎液对BF抑制作用的初步研究。选取临床分离的大肠埃希菌菌株,在Ф30培养皿中采用LB（Luria-Bertani medium）培养基系统复制体外BF模型,经银染后利用显微摄影系统观察BF形态;在96孔板中采用LB培养基系统复制体外BF模型,采用MTT法利用酶标仪测定OD值。将黄连水煎液作用于大肠埃希菌生物被膜体外模型,分别采用MTT法和银染法考察黄连水提物对大肠埃希菌生物被膜的影响。Ф30培养皿表面可以观察到黑染呈棉絮状的膜样物而空白组没有此样物质;96孔板中,模型组的OD值为4．191,空白组的OD值为0．069;药物作用24h后黄连组的BF明显少于空白对照组;80mg／mL的黄连水煎液即开始对大肠埃希菌生物被膜有抑制作用,抑制率为20．8％,生药浓度达到180mg／mL时为最佳抑制浓度,抑制率为70．23％。Ф30培养皿和96孔板表面可以形成大肠埃希菌生物被膜,黄连水煎液可以抑制和破坏早期及成熟BF,且其抑制作用表现出了一定的量效关系,此方法对黄连水煎液作用于大肠埃希菌生物被膜是可行且稳定的,为应用于临床试验奠定基础。     

泌尿道感染大肠埃希菌耐药性分析

目的了解医院泌尿道感染大肠埃希菌产ESBLs的发生率和耐药情况。方法据NCCLS文件,产ESBLs细菌的检测用双纸片确认法。抗生素敏感测定采用K—B琼脂扩散法。结果在检出的176株大肠埃希菌中．ESBLs阳性的菌株有53例,ESBLs检出率为30．1％。检出的产ESBLs细菌对所有青霉素类抗生素产生耐药,产ESBLs对3代头孢类抗生紊头孢曲松、头孢噻肟的耐药率〉81％,对磺胺类、喹诺酮类也在71％以上。对亚胺培南全部敏感。结论医院泌尿道大肠埃希菌产ESBLs发生率较高,且对多种抗生素呈交叉耐药和多重耐药．应做好常规检测和监测．指导临床合理使用抗生素。     

运用微生物法测定保健食品中的维生素B6

介绍运用微生物法测定保健食品中维生素B6的含量。GB／T5009．154—2003将微生物法规定为测定食品中维生素B6的国家标准方法Ⅲ。其原理为卡尔斯伯酵母菌需在有维生素B6存在的条件下才能生长,在一定条件下维生素B6的量与其生长量成正比关系。用分光光度仪在550nm波长下测定该菌的生长．与标准曲线相比较,从而得出该样品中维生素B6的含量。通过对国标方法作较详细的注解,并对有些地方作适当的修改,以期对需要开展此项工作的实验室及其人员会有较大的帮助。     

维生素E和微量元素Se对人肝癌细胞生长,分化及其癌基因…

本工作观察了体外环境中不同水平的维生素Ｅ和微量元素Ｓｅ对人肝癌细胞株（ＳＭＭＣ－７７２１）生长,分经和其癌基因（Ｎ－ｒａｓ,ｃ－ｍｙｃ）表达水平的影响,实验结果表明：高水平维生素Ｅ（２．４、９．２、２４：０ｎｍｏｌ／Ｌ）和Ｓｅ（０．１５,０．３０,０．６０ｎｍｏｌ／Ｌ）对肝癌细胞的集落形成率具有明显的抑制作用;生化分析显示高水平维生素Ｅ微量元素Ｓｅ均可明显抑制环境中脂质过氧化的水平,Ｓｅ对癌细胞甲