肾茶多酚提取工艺及其抗氧化活性研究

采用回流提取法,进行单因素试验和L9(34)正交试验,确定肾茶多酚最佳提取工艺;并通过测定1,1-二联苯基-2-苦肼自由基(DPPH·)和羟自由基(·OH)清除率评价其抗氧化活性。得到的肾茶多酚的优化提取工艺为液料比10∶1(m L/g),50%乙醇回流3次,每次提取2 h,肾茶多酚提取率为3.60%,优选的提取工艺稳定可靠,重现性好。体外抗氧化活性实验结果显示:肾茶多酚的抗氧化能力随质量浓度的增大而增强,在1~10μg/m L浓度范围内和100~1250μg/m L浓度范围内,其清除DPPH自由基和羟基自由基的能力略强于抗坏血酸,两者的对DPPH自由基半数抑制浓度分别为5.78和6.31μg/m L;对羟基自由基的半数抑制浓度为851.1和940.1μg/m L。     

GSTM潜抑制剂双依他尼酰乙二胺对人耐顺铂卵巢癌细胞COC1/DDP的抗肿瘤活性

为探讨双依他尼酰乙二胺(EDEA)对人耐顺铂卵巢癌细胞(COC1/DDP)的抗肿瘤活性,本实验用CCK-8细胞增殖实验检测顺铂(DDP)及双依他尼酰乙二胺对细胞生长的抑制作用,用流式细胞术检测细胞凋亡率,Western Blot检测细胞内Bcl-2家族凋亡相关蛋白表达,瑞氏染色观察细胞形态。结果显示,EDEA对人正常细胞HEK293、LO2的低毒剂量接近1.2μmol/L,DDP对上述细胞低毒剂量约1.0μmol/L。分别作用COC1/DDP细胞24 h、48 h、72 h后,EDEA的半抑制浓度IC_(50)均为0.67μmol/L,但DDP对应IC_(50)分别为52.9μmol/L、18.1μmol/L和15.2μmol/L。在浓度均为1.0μmol/L时,EDEA作用COC1/DDP细胞48 h后其凋亡率接近44%,而DDP作用此细胞48h后凋亡率仅约4%。与单用1.0μmol/L DDP处理相比,1.0μmol/L EDEA作用48 h后Bcl-2等抗凋亡蛋白下调,Bax等促凋亡蛋白上调,且p-Akt表达被抑制,细胞形态发生凋亡样改变。结论,EDEA对人正常细胞低毒剂量与DDP相当但对COC1/DDP有显著生长抑制作用,且药效远强于相同浓度DDP;EDEA对耐顺铂卵巢癌细胞COC1的生长抑制作用与p-Akt表达抑制和细胞凋亡增强相关。     

敌敌畏对肾细胞系293T增殖的影响

为了研究敌敌畏(dichlorvos,DDVP)对人肾细胞的毒性效应。应用MTT比色法检测敌敌畏对人肾细胞系293T细胞增殖的影响,流式细胞仪检测293T细胞的凋亡情况,荧光二氯荧光素二乙酸(DCF-DA)测定细胞内的活性氧(reactive oxidative species,ROS)水平。结果表明:用浓度为0.5 mmol/L、1 mmol/L、5 mmol/L、10 mmol/L、15 mmol/L和20 mmol/L的敌敌畏分别处理293T细胞1 h后发现敌敌畏对293T的生长抑制具有剂量效应,计算得到1 h的IC_(50)值为10.406 mmol/L;不同浓度敌敌畏(0.5 mmol/L,5 mmol/L,10 mmol/L)处理1 h 293T细胞发现细胞产生明显的凋亡现象,随着处理浓度的增加,细胞的凋亡率升高,检测细胞内活性氧水平发现细胞内活性氧水平也随之升高。结果提示敌敌畏能够通过凋亡途径抑制293T细胞的增殖,其作用机制可能是通过增加293T细胞内活性氧水平,促进细胞凋亡,进而抑制细胞增殖。     

三种卷柏属植物对人单核细胞白血病U937细胞的增殖抑制作用

为了观察中华卷柏、鹿角卷柏、卷柏等三种卷柏属植物的甲醇总提物、乙酸乙酯部位、石油醚部位样品对体外培养的人单核细胞白血病细胞U937细胞的增殖抑制作用。通过常规传代培养人单核白血病U937细胞,再用噻唑兰比色法(MTT)检测不同浓度样品作用于U937细胞12、24 h和48 h后的细胞增殖情况。中华卷柏和卷柏对U937细胞的增值抑制呈时间和剂量依赖性。鹿角卷柏对U937细胞的增值抑制呈剂量依赖性。药物作用24 h时,三种卷柏属植物对U937细胞均有显著抑制作用,其半数抑制浓度(IC50)分别为中华卷柏甲醇总提物102.54μg/m L、乙酸乙酯部位87.95μg/m L、石油醚部位91.63μg/m L;鹿角卷柏甲醇总提物118.69μg/m L、乙酸乙酯部位126.03μg/m L、石油醚部位135.8μg/m L;卷柏甲醇总提物103.92μg/m L、乙酸乙酯174.75μg/m L、石油醚102.64μg/m L。证明了三种卷柏均能有效抑制U937细胞的增殖,为后续对卷柏属植物抗癌机制的研究提供了方向。     

羟基丹参酮ⅡA的合成及体外抗肿瘤作用

对丹参酮ⅡA进行结构修饰,合成了羟基丹参酮ⅡA。采用MTT法考察了羟基丹参酮ⅡA对人宫颈癌细胞株Hela细胞,人肝癌细胞株HepG-2细胞、人胃癌细胞株SGC-7901细胞的增殖抑制作用。结果表明:羟基丹参酮ⅡA对三种肿瘤细胞增殖都有很好的抑制作用,抑制作用呈剂量依赖性。羟基丹参酮ⅡA对SGC-7901细胞抑制作用最强,其IC_(50)为4.18μM;对HeLa细胞的抑制作用次之,其IC_(50)为6.08μM;对HepG-2细胞抑制作用较弱,其IC_(50)为10.20μM。而丹参酮ⅡA对SGC-7901细胞、HeLa细胞和HepG-2细胞的IC_(50)分别是17.15μM、27.28μM和46.34μM。羟基丹参酮ⅡA抑制肿瘤细胞增殖作用明显强于丹参酮ⅡA(P0.05)。     

胡桃楸提取液对肿瘤细胞增殖的抑制作用

目的考察胡桃楸提取液对肿瘤细胞Hela、K562的抑制作用和相关机制。方法用MTT方法分析胡桃楸提取液对Hela、K562细胞增殖的影响。采用端粒酶PCR ELISA试剂盒分析胡桃楸提取液对Hela、K562细胞端粒酶的影响。结果 Hela细胞24、48和72 h的LD50分别为406.18μg/mL、319.48μg/mL和112.84μg/mL。K562细胞24 h LD50为154.50μg/mL。HLF细胞LD50为918.69μg/mL。胡桃楸提取液可抑制Hela细胞和K562细胞的端粒酶活性,而对HLF细胞端粒酶活性影响不大。结论胡桃楸提取液对Hela细胞、K562细胞有抑制作用,在低浓度下对HLF细胞杀伤不大。对肿瘤细胞抑制作用可能与抑制端粒酶活性相关。     

沙棘黄酮制备及体外抑制人前列腺癌PC-3细胞作用研究

采用AB-8大孔树脂纯化沙棘黄酮初提物,用10%、30%、50%乙醇溶液梯度洗脱,以总黄酮含量和黄酮苷元含量为指标,筛选纯化样品;采用MTT法、实时无标记细胞分析技术检测沙棘黄酮样品体外对人前列腺癌PC-3细胞的增殖抑制作用,流式细胞技术检测细胞凋亡和细胞周期情况,Western blot检测Bax和Bcl-2蛋白表达情况。实验结果表明50%乙醇梯度洗脱样品(S50)中,总黄酮含量达到25.42%;水解后得到SH50样品,其槲皮素、异鼠李素含量分别达到5.03%、18.64%;25μg/m L的SH50样品对PC-3细胞即有增殖抑制作用,且呈剂量和时间依赖性;同时25μg/m L的SH50样品作用48 h即可显著诱导细胞凋亡(P0.01),并将细胞周期阻滞在G2/M期,此外,样品可提高Bax蛋白和降低Bcl-2蛋白的表达。说明沙棘黄酮SH50样品对体外人前列腺癌PC-3细胞具有抑制增殖并诱导细胞凋亡作用,其机制可能与阻滞细胞周期,调节Bax和Bcl-2蛋白的表达有关。     

长根静灰球活性物质提取及体外抗肿瘤作用研究

以长根静灰球为原料,石油醚为溶媒,进行索氏提取,抽滤、干燥后得到石油醚提取物;滤渣干燥后,同样的方法依次加入乙酸乙酯、正丁醇、乙醇、蒸馏水进行提取,分别得到乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物、乙醇提取物和水提取物。采用MTT法检测不同溶剂提取物对MDA-MB-231(人乳腺癌细胞)、Hela(子宫颈癌细胞)细胞的细胞活力的抑制作用,对正丁醇提取物处理过的MDA-MB-231细胞进行胞内活性氧(ROS)测定、线粒体膜电位检测和DAPI检测细胞凋亡,用倒置荧光显微镜观察。结果发现长根静灰球提取物可以诱导MDA-MB-231、Hela细胞活力降低,特别是正丁醇提取物,对MDA-MB-231和Hela细胞的细胞活力有明显的抑制作用,正丁醇提取物的浓度在200μg/m L时,细胞活力被显著抑制。相比Hela,MDA-MB-21对于提取物的作用较为敏感。长根静灰球正丁醇提取物,能使MDA-MB-231细胞活力明显下降,线粒体膜电位显著下降,胞内活性氧显著增加,通过产生ROS调节线粒体途径引发细胞凋亡。     

滇重楼茎叶总皂苷抗肝癌HepG2细胞活性

探究滇重楼茎叶总皂苷对肝癌HepG2细胞增殖的抑制、细胞周期阻滞及诱导细胞凋亡作用。从滇重楼地上茎叶提取总皂苷,配制成浓度为10μg/m L、20μg/m L、40μg/m L、80μg/m L和160μg/m L的总皂苷提取物处理HepG2细胞。总皂苷提取物对细胞增殖的抑制作用采用MTT法检测;对细胞周期阻滞作用采用流式细胞术检测;诱导细胞凋亡的作用采用细胞核荧光染色、流式细胞术和caspase-3活性试剂盒检测。结果表明,滇重楼茎叶总皂苷提取物能显著抑制细胞增殖,且具有时间、剂量依赖效应,能阻滞细胞周期于S期,并能诱导细胞凋亡。但其诱导凋亡作用仅高剂量组(≥80μg/m L)效果显著,低剂量组(80μg/m L)不显著。     

土槿乙酸对白假丝酵母菌生物膜的抑制作用

目的探讨土槿乙酸(pseudolaric acid B,PAB)对体外白假丝酵母菌生物膜的影响。方法甲基四氮盐(XTT)法检测不同浓度PAB和AMB(两性霉素B)对白假丝酵母菌生物膜的抑制作用。血清芽管试验检测不同浓度PAB对芽管生成的影响。结果 PAB对白假丝酵母菌生物膜的SMIC50(抑制生物膜50%的药物浓度)为256~512μg/m L;1024和512μg/m L PAB对早期2 h生物膜的抑制率分别为(99.5±0.28)%和(97.1±0.38)%;512μg/m L PAB对早期(2 h)、中期(8 h)及成熟期(24 h)生物膜的抑制率分别为(97.1±0.38)%、(90.4±0.32)%和(80.1±0.67)%;不同浓度PAB的血清芽管试验显示,64μg/m L PAB可以完全抑制白假丝酵母菌的出芽生长,16μg/m L PAB可以抑制83.5%的白假丝酵母菌出芽生长。结论 PAB对体外白假丝酵母菌生物膜有抑制作用,对白假丝酵母菌的出芽生长过程抑制作用显著。     

麻花艽不同部位抗氧化活性研究

本文分别采用DPPH法和铜离子还原能力法(CUPRAC)测定麻花艽花、茎叶和根的抗氧化活性,并比较其不同部位的抗氧化活性。抗氧化活性分析结果表明麻花艽花、茎叶、根的DPPH自由基清除能力均低于没食子酸,其清除DPPH自由基的半数有效量(IC_(50))分别为260、341.3和2920.6μg/m L;麻花艽花、茎叶和根的Cu2+的还原能力Trolox当量(TEAC值)分别为0.127、0.108和0.019μg/m L。结果表明,麻花艽花、茎叶和根均具有抗氧化活性,其抗氧化能力的强弱顺序为花茎叶根。     

茶色素对人肺鳞癌细胞株SK-MES-1 细胞生长及凋亡的影响

目的:探讨茶色素对人肺鳞癌细胞株SK-MES-1细胞生长及凋亡的影响。方法:以超声细胞破碎法提取茶色素并计算得率。常规培养SK-MES-1细胞株,采用噻唑蓝溴化四唑(MTT)比色法观察不同浓度(5、2.5、1.25、0.625、0.3125 mg/m L)茶色素作用24、48 h对SK-MES-1细胞株生长的抑制作用,计算生长抑制率及IC_(50);以流式细胞术(FCM)荧光双染法(Annexin V/PI)观察茶色素对SK-MES-1细胞株凋亡的影响。结果:茶色素提取得率为7.35%。MTT实验结果显示随茶色素浓度增高和培养时间延长,其对细胞的生长抑制率也相应升高,即呈现剂量-时间依赖性,24 h和48 h处理的IC_(50)分别为2.353 mg/m L和1.494 mg/m L。流式细胞术检测作用24 h细胞凋亡,空白对照、0.625 mg/m L和1.25 mg/m L剂量组的SK-MES-1细胞凋亡率分别为7.7%、20.37%和25.25%。结论:茶色素可促进SK-MES-1细胞凋亡并抑制其增殖。     

乳酸杆菌发酵滤液对人宫颈癌细胞株Hela细胞的抑制作用

目的观察乳酸杆菌DM9811发酵滤液及其主要成分对宫颈癌细胞株Hela细胞的体外增殖的影响,探索乳酸杆菌发酵滤液对宫颈癌细胞是否有抑制作用及解析作用的有效成分。方法用MTr法研究不同浓度乳酸杆菌DM9811发酵滤液在不同时间对Hela细胞的抑制作用,在此基础上研究脂肪酸、菌体核酸在不同时间对Hela细胞的抑制作用。结果不同浓度乳酸杆菌DM9811发酵滤液及相关物质在不同时间对Hela细胞的抑制作用显示：（1）乳酸杆菌DM9811发酵滤液各浓度组对Hela细胞的生长均有抑制作用,且这种抑制作用呈剂量-时间依赖方式。24、48、72h达到半数抑制率的发酵滤液浓度分别为8．9％、5．3％、3．8％。（2）乳酸杆菌DM9811发酵滤液脂肪酸对Hela细胞的生长有一定抑制作用,抑制率在7．0％～34．0％。（3）乳酸杆菌DM9811菌体核酸对Hela细胞的生长有抑制作用,抑制率为9．7％-53．4％,呈剂量一时间依赖方式。72h达到半数抑制率核酸的浓度为5．5μg/ml。结论乳酸杆菌DM9811发酵滤液对Hela细胞的生长具有显著的抑制作用,其中脂肪酸组分是有效成分之一。     

柚皮中的有效成分对人子宫颈癌Hela细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨柚皮素或柚皮苷对人子宫颈癌Hela细胞增殖及凋亡的影响。方法柚皮素或柚皮苷(0.250、0.125、0.063g/L)作用于人子宫颈癌Hela细胞后,MTT比色法检测Hela细胞增殖活性和半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50);流式细胞术检测柚皮素对Hela细胞凋亡的影响。结果柚皮素能抑制Hela细胞增殖,且呈剂量和时间依赖性,24、48和72hIC50值分别为0.24、0.11和0.07g/L;柚皮苷无抑制Hela细胞增殖的作用。柚皮素组(0.22g/L、0.11g/L、0.05g/L,作用48h)人子宫颈癌Hela细胞凋亡率高于对照组,差异有统计学意义(P=0.000239681,P=0.00012746,P=5.09328E-05,P0.01)。结论柚皮中黄酮类提取物具有抑制人子宫颈癌Hela细胞增殖作用,其中柚皮素作用明显,部分作用机制与诱导肿瘤细胞凋亡有关。柚皮苷无抗人子宫颈癌作用。     

蟾酥脂溶性提取物的分离分析及其镇痛、抗肿瘤作用研究

分析了中药蟾酥脂溶性提取物,研究其镇痛作用和对体外培养的T淋巴瘤细胞及Hela细胞生长的抑制作用。蟾酥的氯仿提取物用薄层层析定性,利用小鼠醋酸扭体法和热板法实验,判定药物镇痛作用的强弱。在倒置显微镜下,应用台盼兰染色法观察蟾酥氯仿提取物对T淋巴瘤细胞及Hela细胞的生长抑制作用。结果,与阴性对照相比,蟾酥氯仿提取物能显著降低小鼠扭体次数,显著提高小鼠热板痛阈值,明显抑制T淋巴瘤细胞及Hela细胞的生长,明显诱导T淋巴瘤细胞及Hela细胞的凋亡,凋亡率呈剂量和时间依赖性。     

蟾酥脂溶性提取物的分离分析及其镇痛、抗肿瘤作用研究

分析了中药蟾酥脂溶性提取物,研究其镇痛作用和对体外培养的T淋巴瘤细胞及Hela细胞生长的抑制作用。蟾酥的氯仿提取物用薄层层析定性,利用小鼠醋酸扭体法和热板法实验,判定药物镇痛作用的强弱。在倒置显微镜下,应用台盼兰染色法观察蟾酥氯仿提取物对T淋巴瘤细胞及Hela细胞的生长抑制作用。结果,与阴性对照相比,蟾酥氯仿提取物能显著降低小鼠扭体次数,显著提高小鼠热板痛阈值,明显抑制T淋巴瘤细胞及Hela细胞的生长,明显诱导T淋巴瘤细胞及Hela细胞的凋亡,凋亡率呈剂量和时间依赖性。     

吴茱萸碱抑制人结肠癌HCT-116细胞体外增殖和迁移

吴茱萸碱(Evodiamine,Evo)对人结肠癌HCT-116细胞体外增殖和转移的影响及其可能机制初探。体外培养人结肠癌HCT-116细胞株,加入Evo1.5μmol/L、3μmol/L、6μmol/L、12μmol/L、24μmol/L、48μmol/L、96μmol/L继续培养48 h,CCK-8法检测Evo对HCT-116细胞生存活性的影响;Transwell法和划痕法检测STF-118804、Evo对HCT-116细胞体外迁移的影响;RT-PCR和Western blotting检测不同浓度的Evo(0μmol/L,1.5μmol/L,3μmol/L,6μmol/L)和STF-118804(10μg/L)诱导HCT-116细胞48 h后,细胞中SIRT1、NF-кB、MMP-9蛋白的表达情况。不同浓度的Evo(1.5μmol/L,3μmol/L,6μmol/L,12μmol/L,24μmol/L,48μmol/L,96μmol/L)作用于HCT-116细胞48 h后,细胞的增殖均受到明显抑制(p0.05),且在一定范围内呈浓度依赖性;且Evo能抑制HCT-116细胞的迁移。Evo可明显下调HCT-116细胞内SIRT1、MMP-9 m RNA和蛋白的表达,上调NF-кB m RNA和蛋白的表达。体外实验表明,Evo对结肠癌细胞增殖和迁移的抑制作用是通过抑制SIRT1的表达,激活NF-кB信号通路,进而抑制MMP-9来实现的。     

板桥党参多糖提取工艺优化及对肝癌细胞HepG 2的抑制

本文采用星点设计—效应面优化法和正交设计优化板桥党参多糖的提取工艺,并对两种工艺进行比较,同时初步考察了板党多糖对肝癌细胞Hep G2细胞的细胞毒作用。本实验的两种方法均以粗多糖得率为因变量,以液料比、提取时间、提取温度为自变量对提取工艺进行系统考察。星点设计优选的最佳工艺为提取时间154.6 min,料液比1∶12.3(m/v),提取温度91.5℃,板党多糖得率为(18.67±1.23)%;正交设计优选的最佳工艺为料液比1∶12(m/v),提取时间3.0 h,提取次数2次,板党多糖提取率为(15.49±1.36)%;板党多糖对Hep G2细胞细胞毒作用采用噻唑蓝(MTT)法进行检测,结果 24 h抑制Hep G2细胞的IC_(50)值为346.322μg/m L,48 h IC_(50)值为325.609μg/m L。同时检测了板党多糖对Hep G2细胞的凋亡诱导作用,结果显示浓度为400μg/m L时对细胞的凋亡诱导作用最强。实验结果表明两种实验设计方法所优化工艺条件基本相近,但是星点设计—效应面优化法精度更高,可用于指导制剂生产;细胞毒作用的结果表明板党多糖具有抑制Hep G2细胞增殖的能力。     

板栗总苞总黄酮对三种不同肿瘤细胞的抑制作用

探讨板栗总苞总黄酮对MG-63、MCF-7、SMMC-7721三种不同肿瘤细胞的抑制作用。分别培养人骨肉瘤MG-63细胞、人乳腺癌MCF-7细胞、人肝癌SMMC-7721细胞,加入不同浓度板栗总苞总黄酮,并分别设置不含药物的对照组。采用倒置相差显微镜观察细胞形态,CCK-8法测定药物对细胞增殖的影响,荧光显微镜观察细胞凋亡状态,RT-PCR检测Bcl-2、Caspase-3、P21 mRNA表达。结果提示,三种肿瘤细胞在药物作用后,增殖均受明显抑制,并呈现凋亡形态改变;其24 h后半数抑制浓度(IC50)分别305.58、739.22、4499.44μg/m L,48 h的IC50分别为:147.18、254.42、488.40μg/m L;荧光显微镜观察染色后细胞呈现不同程度的凋亡,并以晚期凋亡为主;RT-PCR结果提示各细胞实验组Caspase-3和P21 mRNA表达明显上调、Bcl-2表达明显下调。上述改变中,MG-63细胞改变最明显,其次为MCF-7细胞,改变最弱的为SMMC-7721。板栗总苞总黄酮能明显抑制MG-63、MCF-7、SMMC-7721细胞增殖并诱导其凋亡,其药效作用为MG-63MCF-7SMMC-7721。     

两面针生物碱不同提取方法的比较

复合酶预处理两面针药材后,以氯化两面针碱、总生物碱得率和干膏收率为指标,采用正交试验和动态过程优化半仿生-超声法、渗漉法和回流法提取工艺,对其提取效果进行比较。各以4倍量枸橼酸-三乙胺60%乙醇缓冲液(p H 2.0、7.5和8.3)为溶剂,依次超声(250 W)提取15、12和9 min,氯化两面针碱得率2.52‰,总生物碱得率2.15%,干膏收率16.14%。以60%乙醇(5 g/L盐酸)为溶剂,浸润10 min后以10mL/min流速渗漉16倍量溶剂,氯化两面针碱得率2.30‰,总生物碱得率2.18%,干膏收率14.86%。分别用6、5和4倍量60%乙醇(5 g/L盐酸)依次回流15、12和9 min,氯化两面针碱得率2.46‰,总生物碱得率2.36%,干膏收率15.37%。半仿生-超声法和渗漉法比回流法经济,可为工业生产提供参考依据。