基于UPLC-Triple TOF-MS/MS技术分析同基源何首乌和首乌藤中差异化学成分

基于超高效液相-串联四极杆飞行时间高分辨质谱法(UPLC-Triple TOF-MS/MS)结合多元统计分析技术分析同基源何首乌和首乌藤中化学成分的差异。何首乌样品用甲醇在室温下超声提取后进样,通过二级串联质谱分析,对采集的图谱进行峰匹配、峰对齐、滤噪处理等进行特征峰提取;用主成分分析(PCA)和偏最小二乘法-判别分析(PLS-DA)进行数据处理;根据一级质谱精确质荷比和二级质谱碎片信息,结合软件数据库搜索及相关文献进行成分鉴定。结果显示,同基源何首乌和首乌藤样品间的化学组成得到明显区分;初步筛选并鉴定出42种同基源何首乌和首乌藤差异显著的化学成分,其中12种为共有差异化学成分,且呈现出不同的变化规律。该结果可为揭示同基源何首乌和首乌藤中次生代谢产物合成积累的差异性提供基础资料,亦为何首乌和首乌藤资源的综合开发利用提供了科学依据。     

何首乌及其同属混伪品的鉴别研究

目的:探讨何首乌属3种药用植物何首乌、毛脉蓼及齿叶蓼根的性状、显微及化学成分的区别,为合理用药提供科学依据。方法:观察何首乌、毛脉蓼及齿叶蓼药材的性状和显微特征,并对3者的LC-ESI/MS图谱进行分析。结果何首乌、毛脉蓼、齿叶蓼根的形态特征、显微结构及化学成分上均存在明显差异:何首乌根断面黄棕色或红棕色,可见"云锦状花纹",韧皮部宽广,可见异常维管束和纤维束,二苯乙烯类成分含量较高。毛脉蓼断面土黄色或黄棕色,韧皮部宽,可见纤维束,主要含有大量的蒽醌类成分;而齿叶蓼断面为红色或紫红色,韧皮部狭窄,细胞多皱缩,未见异常维管束和纤维束,不含有蒽醌及二苯乙烯类成分,主要含有原花青素类成分。结论:何首乌与毛脉蓼在性状及成分类型上具有一定的相似性,只是含量的差异不同,而齿叶蓼则均具有较大的差异性,尤其是不含有何首乌属普遍具有的蒽醌类成分。     

发酵法炮制何首乌的初步研究

为了筛选出可以专一性降解何首乌中蒽醌类成分而不破坏其有效成分二苯乙烯苷的菌种,降低何首乌的毒副作用,我们建立了一种炮制何首乌的新方法.采用HPLC法和UV分光光度计法,对不同菌株发酵的何首乌样品及其发酵前后的化学成分进行比较分析.结果显示:米根霉(Rhizojpus oryzae)、菌株YMS-010(Mucor.sp.)发酵样品的游离型总蒽醌、大黄素、大黄素甲醚的含量均有较大幅度的降低.菌株YMS-006(Aspergillus)、黑曲霉(Aapergillus nigers)、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)三株菌株发酵何首乌样品有未知成分产生,且含量较高.通过筛选发现米根霉、菌株YMS-006具有专一性降解蒽醌类成分而不破坏二苯乙烯苷的能力,获得了具有发酵炮制作用的菌株.     

何首乌不同器官和组织中蒽醌和茋类化合物的分布

目的探讨何首乌(Polygonum multiflorum Thunb.)不同营养器官和组织中蒽醌类和茋类化合物的分布,为合理利用何首乌提供科学依据.方法采用数码显微鉴定和TLC对何首乌的不同器官和组织部位进行了比较研究.结果从器官来看,何首乌藤茎、地下茎和块根中均含有蒽醌(大黄素和大黄素甲醚)和芪类(2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷)而叶和嫩茎则不舍;从组织部位来看,蒽醌类成分主要分布于韧皮部,而茋类成分主要分布于周皮和韧皮部,木质部最少.结论蒽醌类和茋类成分的产生与周皮的形成有一定的关系.蒽醌类化合物的含量可能与韧皮部的发达程度有关,茋类化合物主要产生和贮藏于薄壁细胞中.     

何首乌不同器官和组织中蒽醌和芪类化合物的分布

目的探讨何首乌（Polygonum multiflorumThunb．）不同营养器官和组织中葸醌类和芪类化合物的分布,为合理利用何首乌提供科学依据。方法采用数码显微鉴定和TLC对何首乌的不同器官和组织部位进行了比较研究。结果从器官来看,何首乌藤茎、地下茎和块根中均含有蒽醌（大黄素和大黄素甲醚）和芪类（2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷）而叶和嫩茎则不含;从组织部位来看,蒽醌类成分主要分布于韧皮部,而芪类成分主要分布于周皮和韧皮部,木质部最少。结论蒽醌类和芪类成分的产生与周皮的形成有一定的关系,蒽醌类化合物的含量可能与韧皮部的发达程度有关,芪类化合物主要产生和贮藏于薄壁细胞中。     

微生物发酵炮制何首乌机理的初步研究

为探讨微生物发酵炮制何首乌的机制,采用HPLC考察何首乌微生物发酵前后二苯乙烯苷类和蒽醌类化学成分的变化。何首乌经米根霉发酵后,产生了新的蒽醌类成分大黄素-6-O-β-D-吡喃葡萄糖苷,而二苯乙烯苷类成分无变化。同时药理研究发现,大黄素-6-O-β-D-吡喃葡萄糖苷对家兔肠平滑肌的收缩作用弱于大黄素。由此推断,在何首乌发酵炮制过程中,米根霉可催化大黄素转化为大黄素-6-O-β-D-吡喃葡萄糖苷,从而降低何首乌的泻下作用。实验结果初步验证了微生物发酵炮制何首乌的科学性。     

蝉拟青霉菌丝体与天然蝉花中化学成分的比较分析

以天然蝉花Cordyceps cicadae做对比,对一株蝉拟青霉Paecilomyces cicadae菌株发酵菌丝体的化学成分进行了分析,包括粗成分、生物活性成分、无机元素、氨基酸、脂肪酸等。结果表明:蝉拟青霉菌丝体中虫草多糖的含量为33.2mg/g,甘露醇的含量为78.9mg/g,麦角甾醇的含量为0.6256mg/g,腺苷的含量为1.0620mg/g,钙、铁、锌、硒和锰微量元素的含量分别为5187.59μg/g、207.23μg/g、41.93μg/g、0.087μg/g和28.24μg/g,18种氨基酸齐全,不饱和脂肪酸是优势脂肪酸,以亚麻油酸、油酸为主,其相对含量分别为53.91%和20.63%,与天然蝉花相比,发酵菌丝体中虫草多糖、甘露醇、麦角甾醇、腺苷、氨基酸总量、必需氨基酸总量和不饱和脂肪酸的含量明显高于后者,其它化学成分和天然蝉花中相应成分基本一致。     

葡萄色顶枝瑚菌中矿质元素及氨基酸含量的测定

采用原子吸收分光光度法和FDBN柱前衍生高效液相色谱等方法测定了葡萄色顶枝瑚菌中的矿质元素、氨基酸和蛋白质的含量。矿质元素K、Ca、Mg、Cu、Zn、Fe的含量分别是 :4 2 .5 0 0 0mg/g、0 .90 0 0mg/g、0 .4 1 3 0mg/g、0 .0 1 1 2mg/g、0 .0 64 3mg/g、0 .0 3 1 7mg/g、0 .0 73 7mg/g;蛋白质含量为 2 8.1 7% ;氨基酸总量为 2 2 6.91mg/g,其中七种必需氨基酸含量占氨基酸总量的 4 9.2 5 %     

蝉拟青霉菌丝体与天然蝉花中化学成分的比较分析

以天然蝉花Cordyceps cicadae做对比,对一株蝉拟青霉Paecilomyces cicadae菌株发酵菌丝体的化学成分进行了分析,包括粗成分、生物活性成分、无机元素、氨基酸、脂肪酸等。结果表明:蝉拟青霉菌丝体中虫草多糖的含量为33.2mg/g,甘露醇的含量为78.9mg/g,麦角甾醇的含量为0.6256mg/g,腺苷的含量为1.0620mg/g,钙、铁、锌、硒和锰微量元素的含量分别为5187.59μg/g、207.23μg/g、41.93μg/g、0.087μg/g和28.24μg/g,18种氨基酸齐全,不饱和脂肪酸是优势脂肪酸,以亚麻油酸、油酸为主,其相对含量分别为53.91%和20.63%,与天然蝉花相比,发酵菌丝体中虫草多糖、甘露醇、麦角甾醇、腺苷、氨基酸总量、必需氨基酸总量和不饱和脂肪酸的含量明显高于后者,其它化学成分和天然蝉花中相应成分基本一致。     

何首乌不同部位二苯乙烯苷含量以及芪合酶FM-STS时空表达差异

目的:探究何首乌不同部位主要有效成分二苯乙烯苷含量差异以及相对应部位何首乌芪合酶基因FM-STS表达差并.方法:通过液氮碾磨提取广东德庆同一株何首乌根茎叶中的RNA以及用50％稀乙醇过夜浸提芪合物二苯乙烯苷;使用乙腈和水为流动相(体积比为20∶80),利用高效液相色谱分析其二苯乙烯苷含量差异;采用实时荧光定量PCR分析芪合酶基因Fm-STS表达差异,以β-actin作为内参对照,2-△△CT公式计算各组别中FM-STS的含量.结果:根茎叶中芪合物二苯乙烯苷含量依次为14.62mg/g、1.78mg/g和0.47mg/g(干重),在mRNA水平上检测基因Fm-STS表达量为叶片中最高,根是叶的1/10倍,茎是叶的1/64倍.结论:芪合酶基因FM-STS主要在何首乌叶片中表达,二苯乙烯苷主要在叶片中合成,进而转移到根块中富集.     

武夷山甜槠群落钙、镁的累积和循环

对51年生甜槠群落Ca、Mg含量及其生物循环研究表明,甜槠群落现存量中,Ca、Mg总量分别为1029.96和231.34kg·hm^-2;其中地上部分分别为801.40和159.68kg·hm^-2, 地下部分分别为228.56和71.66kg·hm^-2.该群落Ca、Mg生物循环中,年吸收量分别为63.17和18.68kg·hm^-2, 年存留量分别为31.77和11.41kg·hm^-2, 年归还量分别为31.40和7.27kg·hm^-2;Ca、Mg的富集率分别为1.66和2.14.     

中国被毛孢发酵液的活性成分分析及清除自由基和抗白色假丝酵母活性的研究

测定处于不同生长期的中国被毛孢Hirsutella sinensis菌株RCEF0273胞外多糖含量、发酵液中5种核苷代谢量和氨基酸含量,并对其菌株次生代谢产物清除自由基活性和抑菌效果进行了测定分析,发现:中国被毛孢胞外多糖含量最高可达到1.9480g/L,发酵液中尿苷、鸟苷、肌苷、胸腺嘧啶核苷和腺苷5种核苷含量最高分别为10.4132mg/g、12.1929mg/g、2.2698mg/g、1.1000mg/g和1.8181mg/g,其菌株发酵液冻干粉中氨基酸总量为3.2560mg/g,活性测定结果显示中国被毛孢发酵液的正丁醇相有很强的清除自由基活性和抑菌活性。在10mg/mL的测试浓度下,37℃孵育15min后其自由基清除率可达93.25%,在2mg/mL的测试浓度下,其抗白色假丝酵母Candida albicans的抑菌圈直径达到21.42mm。     

西南地区三种天麻变型巴利森苷类成分含量比较

本文对西南地区三种天麻变型的巴利森苷类成分含量进行了分析。结果表明西南地区不同天麻变型巴利森苷类含量间差异较大,其中四川广元红天麻巴利森苷A、C含量最高,分别为8. 770 mg/g和3. 827 mg/g;四川北川乌天麻巴利森苷B、E含量最高,分别为11. 461 mg/g和21. 010 mg/g,均与其他天麻材料间含量差异极显著;四川地区3种天麻变型巴利森苷B、E含量显著高于云南、贵州地区天麻变型,巴利森苷A、C含量在3地区间差异不显著。综合来看,西南地区天麻变型巴利森苷类含量整体差异较大,其中巴利森苷类含量以四川地区最高,其含量与天麻变型种类无关,总体上以四川北川的乌天麻巴利森苷类成分最高。     

HS-SPME-GC-MS法分析卵孢小奥德蘑子实体不同部位挥发性成分及营养成分分析

采用顶空固相微萃取法结合气相色谱-质谱联用技术,对卵孢小奥德蘑子实体菌盖和菌柄的挥发性成分进行测定。结果表明从卵孢小奥德蘑子实体菌盖和菌柄分别鉴定出101和102种化合物,其中44种为相同物质,占挥发性物质的43%。主要以烷类、酯类和酸类化合物为主,其中十四烷、八甲基环四硅氧烷、己酸、抗坏血酸二棕榈酸酯和芳樟醇相对含量最高。营养成分分析表明,卵孢小奥德蘑子实体含粗纤维1.2%、总糖28.7%、脂肪0.3g/100g、蛋白质3.58g/100g、灰分1.6%;必需氨基酸0.871g/100g,占氨基酸总量（2.783g/100g）的31.30%;1kg子实体含29.2mg Na、4.37×10 ³mg K、115mg Mg、12.6mg Zn、6.19mg Ca、46.5mg Fe、6.93μg B₁、17.9μg B₂、33.6μg B₆。本研究首次对卵孢小奥德蘑营养成分和挥发性成分进行了系统研究,为进一步研究卵孢小奥德蘑中活性物质及完善化合物谱图库提供理论支撑。     

独根草不同部位几种化学成分的分析比较

为评价独根草这一药赏两用植物,对独根草根、茎和叶中粗灰分、粗纤维、粗脂肪、还原糖、部分矿质元素及活性成分(多糖、绿原酸和总黄酮)进行了测定分析.结果表明:独根草叶中粗灰分、粗纤维、粗蛋白、粗脂肪及还原糖的含量分别为10.11％、8.02％ 、9.54％、9.91％和6.53％;Fe、Zn、Cu、Mn、K、Na、Ca和P等矿质元素含量分别为284、132.8、1.07、19.5μg/g、7.01 mg/g、169.38μg/g、221.9 μg/g和300.5 μg/g;还含有2.00％的绿原酸、6.98％的总黄酮,以及3.29％的粗多糖.叶中各成分含量多高于茎和根,证明其主要药用成分在叶;而茎和根均含有多种元素和活性成分,有一定的药用价值,是一种可以全株入药的药赏两用植物.     

辣木籽营养成分含量测定

以辣木籽为研究对象,对其主要营养成分含量进行测定,结果表明：辣木籽粗脂肪含量为40.12%、蛋白质含量为37.8%、总糖含量为9.75%;辣木籽含有17种氨基酸,氨基酸总量为32.53%;辣木籽中大量元素P、K、Mg、Ca和Na含量分别为1 262、1 026、495、106、143mg/kg,且K、P的含量远高于Ca、Mg、Na;辣木籽中微量元素Zn、Fe、Mn、Cr和Se含量分别为69.5、30.8、29.6、8.25、0.395mg/kg,且Fe、Mn、Zn的含量远高于Se;辣木籽As、Pb、Hg和Cd等重金属含量非常低。     

黑加仑果酒花青素测定方法的确定及营养成分分析

利用p H示差法对黑加仑浆果及其果酒花青素的含量进行测定,结果表明花青素的最佳检测条件为:检测波长541 nm,p H 1.0和p H 4.5,平衡时间50 min,样品p H 3.0,此方法精密度和回收率的RSD值分别为1.34%和3.01%,测得果实和果酒中花青素含量分别为2.01 g/L和0.64g/L。通过高效液相色谱和原子吸光光度法对黑加仑果酒的营养成分进行分析,结果表明酒体中共含有17种氨基酸,总量达1 173.45 mg/L,其中7种必需氨基酸,含量占29.2%;并含有人体所必需的矿质元素,其中K、Ca的含量较高,分别为1 865 mg/L和510.5 mg/L,此外,黑加仑果酒的总酚含量为3.87 g/L。     

赣南产中药金沙藤与海金沙中六种微量元素的含量比较

本研究采用微波消解法加浓硝酸消解样品后,用火焰原子吸收光谱法测定赣南产中药金沙藤与海金沙中Fe、Cu、Zn、Mn、Mg、Ca 6种微量元素的含量,发现金沙藤中Fe、Cu、Zn、Ca 4种微量元素的含量分别为169.723~489.222μg/g、9.136~19.162μg/g、23.553~50.998μg/g、1 383.104~6 289.022μg/g,而海金沙中这4种微量元素的含量分别为39.400~247.666μg/g、1.789~3.922μg/g、8.333~16.667μg/g、281.448~485.196μg/g,表明金沙藤中Fe、Cu、Zn、Ca的含量均较海金沙中的要高,而Ca的含量则高出很多;金沙藤中Mn、Mg的含量分别为111.178~485.167μg/g、1 490.673~1 919.45μg/g,海金沙中这两种元素的含量分别为118.05~195.294μg/g、1 086.274~1 502.514μg/g,表明赣南产金沙藤与海金沙中Mn、Mg的含量则较为相似。研究结果表明金沙藤与海金沙中微量元素的含量有较大的差异,金沙藤作为药用比海金沙有更好的物质基础。     

灵芝孢子粉中核苷类成分分析

本文利用高效液相色谱方法（HPLC）同时对灵芝孢子粉中的15种核苷类成分的含量进行测定。采用Ultimate AQ-C₁₈（4.6mm×250mm,5μm）色谱柱,以甲醇和水为流动相进行梯度洗脱,流速1.0mL/min,检测波长259nm,柱温30℃,进样量10μL。方法学考察结果表明,该方法准确度高,稳定性、精密度、重现性好,适用于灵芝孢子粉中核苷类成分的测定分析。运用建立的方法对不同破壁时间、不同采收时期龙泉、奉化、大别山、黄山4个产区的灵芝孢子粉中的15种核苷类成分的含量进行测定。结果表明破壁处理对灵芝孢子粉中核苷类成分提取率的影响不大,不同产地的灵芝孢子粉中核苷类成分的组成和含量具有显著差异,且孢子粉中的核苷含量随着产粉时间的延长有所增加。各待测样品中均含有胞嘧啶、尿苷、腺嘌呤、鸟苷、腺苷等成分,其中尿苷、鸟苷、腺苷3种核苷的含量占总量的比例在待测样品中均达到70%以上,为灵芝孢子粉中的主要核苷类成分。     

虎杖根茎中蒽醌类成分的体外抗氧化活性

采用超声波提取法用体积分数80%乙醇对虎杖(Reynoutriajaponica Houtt.)根茎中的蒽醌类成分进行粗提,并利用D101大孔吸附树脂对粗提液进行纯化.以Vc为阳性对照,采用体外动物实验研究了虎杖根茎中蒽醌类成分对小白鼠肝组织匀浆中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-px)活力及对H2O2诱导的MDA含量和红细胞氧化溶血的影响,并采用化学模拟体系分析了其对DPPH·自由基的清除能力、对Fe3+的还原能力以及与Fe2+的螯合能力.结果表明:虎杖根茎中蒽醌类成分含量丰富,粗提物含量达到55.86 mg·g-1,纯化后含量达到44.77 mg·g-1.质量浓度l0、20、30和40μg·mL-1的蒽醌类成分可显著增强GSH-px活力、降低由H2O2诱导产生的MDA含量,并对H2O2诱导产生的红细胞氧化溶血有较强的抑制作用;质量浓度2、4、6和8μg·mL-1的蒽醌类成分对DPPH·自由基具有良好的清除能力,质量浓度6、8、12和16μg·mL-1蒽醌类成分对Fe3+具有较强的还原能力,而质量浓度5、10、15和20μg·mL-1蒽醌类成分对Fe2+则具有很强的螯合能力.随质量浓度的提高,虎杖蒽醌类成分及阳性对照Vc的各项抗氧化活性指标均逐渐增强,呈现出明显的量效关系,且虎杖根茎中蒽醌类成分的各项抗氧化指标均优于相同质量浓度的Vc.研究结果显示:虎杖根茎中的蒽醌类成分具有较强的抗氧化活性,不仅能够直接清除过量的自由基,也可以通过增强体内的抗氧化系统以抑制自由基的产生.结合他人研究结果,对虎杖资源的开发利用提出了一些建议.