竹叶乙醇提取液和柠檬汁对甘蔗汁保鲜效果的研究

为了延长甘蔗汁的保鲜时间,将甘蔗汁微波灭菌处理后加入竹叶提取物和鲜榨柠檬汁。利用单因素试验考察了微波功率(A)、微波时间(B)、竹叶提取物的量(C)、柠檬汁的量(D)对甘蔗汁保鲜效果的影响,并在此基础上设计了L_9(3~4)正交实验。通过研究甘蔗汁的理化性质(p H值、透光率、糖度、浊度和Vc含量)的变化及其感官评价来确定保鲜效果,同时,利用紫外光谱和红外光谱对样品进行表征。结果表明在室温条件下甘蔗汁保鲜的最佳工艺为微波功率300 W、微波时间9 min、竹叶提取物的量3.0 m L、柠檬汁的量2.0 m L,在此条件下甘蔗汁保鲜8 d内,感官指标和理化指标良好。     

有机溶剂微扰葡萄糖淀粉酶时的紫外、荧光和红外光谱

本文结果表明:(1)酶体系中随有机溶剂含量增加,紫外吸收亦随之增加,表明芳香氨基酸更充分地暴露,分子更趋于伸展;(2)酶的荧光发射随有机溶剂量增加而稍有变化,但当溶剂量达到一定值时[对乙二醇为35％(V/V)],荧光发射强度显著增加,表明酶分子构象受溶剂影响有一个极限值;(3)酶的傅立叶红外光谱表明,有机溶剂侧链的疏水性愈强,微扰后C=O,C—N,O—H等共价键的吸收峰变得愈宽,愈强,肽链愈伸展。     

固定化酶解猪小肠黏膜制备肝素的工艺研究

本文以肝素效价为指标,探索了固定化胰蛋白酶对小肠黏膜的酶解作用。在单因素试验基础上采用Box-Behnken中心组合试验设计和响应面(RSM)分析法,以肝素效价为响应值,通过考察p H值、加酶量、酶解温度及料液比,优化了固定化胰蛋白酶酶解制备肝素的工艺,建立了二次回归方程。结果表明,p H值、酶解温度、加酶量、及料液比均对肝素提取具有显著影响。固定化酶制备肝素最佳工艺条件为:p H为11,加酶质量分数为0.24%,酶解温度为46℃,料液比为1∶3.3(g/m L),酶解时间为5 h,在此条件下获得肝素酶解液效价为15.28 U。     

菓菠萝蛋白酶的分子构象与活力变化的研究

发现CBZ-Lys·pNP能有效地被菓菠萝蛋白酶(Fruit Bromelain E.C.3.4.22.5)作用,测得Km为4.167×10~(-4)mol/L,k_(cat)为742min~(-1)。以荧光和紫外差示光谱为监测手段,对酶分子构象变化进行研究。酶的荧光强度随胍浓度增大而逐渐下降,4mol/L胍变性时,发射峰自332nm红移到353nm,并在310nm处出现新的发射峰。酶的荧光强度都因SDS存在而下降,SDS浓度大于3.47mmol/L有所回升,并出现红移,同时在315nm处出现新的发射肩;紫外差示光谱显示在236nm有一个较显著的员峰,此峰与β-螺旋结构变化有关,278、286和295nm出现三个负峰,260nm有较小正峰,说明酶分子中Tyr、Trp和Phe的微环境发生了明显的变化。测定酶在不同浓度胍和SDS中的变性和失活速度常数,对酶构象变化及催化活力的关系作了比较研究,酶的失活速度均大于变性速度。     

短梗霉细胞内黑色素的分离提取

采用单因素试验和正交试验对短梗霉细胞内的黑色素提取条件进行了优化,结果表明:在pH为2～3、温度为70℃、NaOH浓度为1.5mol/L、发酵液与浸提液之比1:1(V)的条件下黑色素的提取量可达2.2g/L。对提取的黑色素进行了纯化,研究了其紫外和红外光谱学性质,紫外光谱图显示随波长的减少其吸收值增大,在215nm处有特征吸收峰;红外光谱图在3和6μm处有吸收峰,证实短梗霉黑色提取物是一种以芳香环为结构主体的异聚体黑色素。     

化学媒介修饰葡萄糖氧化酶电极

采用四氰对醌(TCNQ)修饰石墨碳电极,葡萄糖氧化酶被吸附固定在电极表面。构成的酶电极以电流法测定底物葡萄糖,其浓度线性响应范围为0—40mmol/L。研究了媒介电极对葡萄糖的响应,TCNQ的电化学性质,温度和pH对酶电极的影响。讨论了氧对媒介修饰电极的竞争作用以及媒介修饰酶电极的稳定性。     

Plackett-Burman和Box-Behnken试验设计优化超声波-酶法提取青钱柳多糖工艺及结构初探

为了开发利用青钱柳多糖(CPP)资源,本文探究了超声波结合复合酶处理提取CPP的工艺条件并对其结构进行了初步分析。首先通过单因素实验获得各因素的最佳范围,利用Plackett-Burman试验设计筛选影响CPP得率的关键因素,再采用Box-Behnken设计对提取工艺进行优化。最后,采用紫外、红外光谱以及气相色谱对CPP结构进行初步分析。结果表明,关键因素为酶解pH、复合酶添加量、酶解时间和超声功率。最佳工艺参数为酶解pH值6.11,复合酶添加量4.81%,酶解时间1.685 h,超声功率96.9 W,料液比1∶20,超声时间30min,CPP得率为7.18%。CPP具有多糖典型的羟基和醛基结构,且单糖组成为鼠李糖∶阿拉伯糖∶甘露糖∶葡萄糖∶半乳糖=1.00∶7.03∶2.06∶2.11∶5.25∶12.06。     

忽地笑中石蒜碱酶法提取及分离工艺研究

对复合酶法提取忽地笑石蒜碱的工艺进行优化,并用阳离子交换树脂分离石蒜碱。以纤维素酶与果胶酶的水溶液为提取溶剂,采用L9(34)正交试验考察了酶解p H、酶加入量、酶解时间和酶解温度等影响因素,以石蒜碱得率为指标,得最优提取工艺为:料液比1∶10,p H 4.5,酶添加量4%,酶解温度50℃,提取时间2.0 h,石蒜碱得率为0.1750%。D-001树脂纯化条件为:上样液p H为2,以3 BV/h流速上样,以含1.5 mol/L氨水的70%乙醇洗脱,流速为3 BV/h,初步分离后石蒜碱含量为15.28%。研究结果可为石蒜碱工业化生产提供参考。     

高原鼢鼠组织中透明质酸提取工艺及分子表征

旨在建立高原鼢鼠组织中透明质酸(Hyaluronic acid,HA)提取工艺。采用单因素试验确定粗提、酶解和除杂等工艺的最佳条件,通过响应面法进一步优化粗提和酶解工艺条件。通过红外分光光度法确定HA的分子结构,Bitter-Muir法确定其葡萄糖醛酸的含量,黏度法和体积排阻色谱法确定透明质酸的分子量。高原鼢鼠最佳粗取工艺∶液料比4 m L/g(水/动物组织,V/W),提取温度26℃,提取时间1.6 h;最佳酶解工艺:酶解温度37℃,p H8.7,加酶量0.7%(1∶250胰蛋白酶/动物组织,W/W);最佳除杂工艺为:氯苯体积20%(氯苯/HA水溶液,V/V),以3倍体积95%乙醇沉淀,以7%活性碳(活性碳/HA水溶液,W/V)除杂,透析时间3 h。在此工艺条件下,每500 g高原鼢鼠组织可得到(144±3.61)mg HA粉末。平均回收率为72.73%。红外图谱显示提取物具有与Sigma公司的HA标准品一致的吸收峰,葡萄糖醛酸的质量分数为45.60%,蛋白质含量为0.11%,其分子量达到3×106 Da。本工艺提取的高原鼢鼠组织来源的HA回收率好,纯度高;高原鼢鼠组织中HA分子量大,含量高。     

利用四甲基氢氧化铵提取小麦秸秆木质素及其结构表征

木质素是植物界中仅次于纤维素的重要的天然高分子化合物,可用作黏合剂、水泥减水剂、沥青乳化添加剂的生产,具有广泛的应用前景。采用四甲基氢氧化铵(TMAH)提取小麦秸秆中的木质素,在单因素试验的基础上,通过正交试验优化后的最佳工艺条件为TMAH质量浓度250 g/L、时间14 h、温度50℃,固液比1∶14 g/mL,木质素的提取率达到79.9%。经凝胶渗透色谱(GPC)、傅里叶变换红外光谱(FT-IR)、紫外可见光谱(UV-Vis)以及核磁氢谱(~1H NMR)分析,结果表明分离木质素含有H-G-S型木质素的结构特征,最大紫外吸收峰位于280 nm处,分离再生过程中木质素功能结构保持较为完整。     

原生质体紫外诱变选育γ-癸内酯高产菌株

为选育γ-癸内酯高产菌株,以毕赤酵母TT009(Pichia guilliermondiiTT009)为出发菌株进行原生质体紫外诱变,确定原生质体形成和诱变的最佳条件为菌龄16 h,酶解浓度1%,酶解时间50 min,酶解温度28℃,15 W紫外灯于30 cm处照射25 min。经初筛和复筛,得到γ-癸内酯高产菌株M6,利用该菌株进行摇瓶发酵,γ-癸内酯产量达到1.25 g/L,比出发菌株提高了28.8%。     

L-抗坏血酸洛芬酯非水相酶促合成的动力学与热力学

对酶法合成L-抗坏血酸洛芬酯(芬维C酯)的反应动力学与热力学进行研究,确定了最有效的酶促反应环境。合成布洛芬维C酯的最优条件:转速200r/min,温度65℃,加酶量5%(以底物的质量分数计),底物浓度1mol/L,平衡所需时间66h,平衡时产物质量分数为19.07%;合成酮洛芬维C酯的最优条件:200r/min,60℃,加酶量7.5%,底物浓度600mmol/L,平衡时间132h,产物质量分数为10.63%;合成氟比洛芬维C酯的最优条件:200r/min,65℃,加酶量5%,底物浓度400mmol/L,平衡时间144h,产物质量分数为6.76%。对底物进行了比较,得到了各自的动力学与热力学参数。布洛芬米氏常数为0.101μmol/L,vmax=32.68μmol/(min.g),热力学平衡常数为0.166;酮洛芬的分别为0.144μmol/L,12.97μmol/(min.g),0.091;氟比洛芬的分别为0.185μmol/L,9.35μmol/(min.g),0.055。     

多倍体罗汉果PCR-RFLP参数的优化与应用

以多倍体罗汉果DNA为材料,采用L16(4~5)正交组合试验和单因素梯度试验,研究Mg~(2+)、dNTP、引物、Taq DNA聚合酶、模板DNA浓度和退火温度、循环次数等对PCR扩增结果以及内切酶量、酶切时间对酶切反应的影响。结果表明,多倍体罗汉果RFLP最优PCR反应体系和扩增参数为:在25μL扩增反应体系中,10×Buffer 2.5μL,MgCl_2 1.5 mmol/L,dNTP 0.2 mmol/L,引物0.1μmol/L,Taq DNA聚合酶2.0 U,模板DNA 60 ng;退火温度为56℃,循环次数为35次。酶切反应体系:内切酶10×Buffer 2.0μL,内切酶5.0U,PCR产物15μL,超纯水补至20μL;酶切时间2 h。     

基于响应面法对香菇原生质体制备条件的优化

香菇Lentinula edodes是我国食用菌年产量最大的单品,优化香菇原生质体的制备条件,获得高质量、高活力的原生质体可以为香菇育种和遗传多样性分析提供技术保障。本研究利用单因素试验对稳渗剂浓度、酶解液类型、酶解时间、酶解温度4个因素的最优作用条件和相关性进行检验和筛选;依据单因素试验的结果,对酶解时间、酶解温度、酶解液种类进行响应面法3因素3水平试验优化分析。单因素试验结果表明,使用2%的溶壁酶+蜗牛酶+纤维素酶混合酶制剂为酶解液、0.6mol/L甘露醇为稳渗剂的效果显著高于其他处理(P<0.05)。经Box-Behnken设计得出香菇原生质体最佳制备条件为酶解时间3.25h,酶解液浓度1.7%,酶解温度30.49℃,获得原生质体产量为14.02×10⁶ CFU/mL,与理论产量(13.862×10⁶ CFU/mL)偏差小,可为后续原生质体融合育种和多样性分析提供重要基础。     

响应面法优化黑根霉胞外多糖脱蛋白工艺研究

采用单因素实验结合Box-Behnken中心组合设计方法,以蛋白质脱除率和综合指数为指标,考察木瓜蛋白酶浓度、酶解温度和酶解时间对黑根霉胞外多糖酶-Sevag法脱蛋白工艺的影响。经过响应面实验优化,确定最优条件为木瓜蛋白酶浓度425 U/mL、酶解温度62℃、酶解时间90 min,经三次重复实验验证,蛋白质脱除率与综合指数均值分别为54.08%和2.07。     

响应曲面法制备蛹虫草子实体酶解液的研究

为了将蛹虫草开发成为便于人们食用的产品形式,本实验以不同的酶对蛹虫草进行水解得到蛹虫草酶解液.以水解度和酶解液中腺苷含量为目标,确定选用木瓜蛋白酶.以水解度为响应指标,应用响应曲面法对蛹虫草酶解条件进行优化,根据Box-Behnken中心组合实验设计原理,选取酶解温度、酶解时间、加酶量三因素三水平进行中心组合实验,响应曲面分析结果表明水解最佳条件为:酶解温度60.92℃,酶解时间11.85 h,加酶量1.02％,此条件下蛹虫草的水解度达到最大.水解度验证值61.27％与预测值60.76％接近,说明建立模型正确.     

降胆固醇活性花生多肽制备工艺的研究

以冷榨花生粕为原料,酶解制备具有降胆固醇活性的花生多肽。以体外结合胆酸盐的能力为指标,考察了酶的种类、温度、pH值、加酶量、酶解时间等因素对花生多肽降胆固醇活性的影响,确定最优蛋白酶为木瓜蛋白酶,通过正交试验的方法,确定了酶解花生粕制备降胆固醇活性花生多肽的最佳工艺条件为：温度50℃、pH 7.0、加酶量4 000 U/g底物、酶解时间4 h。     

一株海洋低温葡萄糖氧化酶菌株的筛选、鉴定及部分酶学性质

【目的】从海洋样品中分离筛选出产葡萄糖氧化酶菌株。【方法】采用双层平板筛选法进行初筛、复筛确定一株酶活较好的菌株,命名为GOD2(Glucose oxidase)。通过形态学、生理生化特征及16S rRNA基因序列分析研究其分类地位,并对其产生的葡萄糖氧化酶进行分离纯化和部分酶学性质的研究。【结果】细菌GOD2为产葡萄糖氧化酶菌株且遗传稳定,初步鉴定该菌株为假单胞杆菌(Pseudomonas migulae),其所产酶最适反应温度为20°C,热稳定性较差,40°C剩余相对酶活80%;超过40°C酶活力迅速下降。【结论】GOD2是一株极具研究价值的产低温葡萄糖氧化酶菌株。目前没有关于利用该菌生产葡萄糖氧化酶的报道。     

酶法提取桑葚多糖的工艺研究

利用纤维素酶从桑葚中提取桑葚多糖,通过单因素实验和L9(34)正交实验研究酶用量、酶解时间、酶解温度对桑葚多糖提取率的影响。实验结果表明:纤维素酶能够显著提高桑椹多糖的提取率,并且提取温度是最重要的影响因素,其次是酶解时间,酶用量在此实验范围内对测定结果的影响最小,提取的最佳工艺条件为:酶解温度45℃,酶解时间150 min,酶用量4.0 mL。     

预处理沙柳酶解液脱毒及其丁醇发酵

为了提高沙柳原料的丁醇发酵效果,考察沙柳原料经过蒸爆、超微粉碎+稀酸和超微粉碎+稀碱预处理后补料酶解的效果,优化了沙柳酶解液活性炭脱毒工艺参数,并对经过脱毒处理的酶解液进行了丁醇发酵研究,结果表明:预处理沙柳原料酶解底物质量浓度为200 g/m L时,3种预处理方法中蒸爆处理法水解效果最好,每克底物的滤纸酶酶加量15 U,酶解96 h后,酶解液总糖质量浓度达到57 g/L。活性炭脱毒处理的最优条件:p H 4.8,碳加量4%(质量分数)、温度70℃、1 h,该条件下的沙柳水解液脱色率达到97.4%、糖损失率3.1%。3种预处理沙柳原料的酶解液经活性炭脱毒后都可以被丁醇梭菌正常利用发酵产丁醇,发酵液总溶剂(ABE)质量浓度约为14 g/L。