黑豆乳清多肽抗皮肤光老化作用的研究

以昆明小鼠为对象,研究了黑豆乳清多肽对皮肤光老化的保护作用.试验设空白组(动物不照射紫外线),阳性对照组(脱毛区皮肤涂抹10％ Vc溶液),给药大、小剂量组(分别涂乳清多肽含量为15％和5％的乳液),模型组(涂抹蒸馏水)和基质组(涂抹基质乳液).除空白组外,其余各组小鼠均用长波紫外线照射12周.试验结束后处死动物,取受试部位皮肤进行切片观察和生化指标检测.结果表明,与模型组相比,给药大剂量组动物皮肤中CAT活力水平和HYP含量均显著升高(P＜0.01)、单位面积的皮肤质量和MDA含量显著降低(P＜0.01),皮肤红斑量和受损程度明显减轻.表明黑豆乳清多肽有抗皮肤光老化的作用.     

正交实验优化川陈皮素微乳凝胶剂促渗剂及体外释药评价

本文筛选了川陈皮素微乳凝胶剂的最佳透皮促渗剂并考察了其体外释药机制。采用正交实验设计,对离体家兔鼻粘膜进行体外渗透实验,以川陈皮素的累积渗透量及渗透速率常数为指标,优选最佳处方;采用扩散池法对川陈皮素微乳凝胶剂进行体外释药研究,并用无膜溶出法考察其释药机制。结果表明,不同促渗剂对川陈皮素的累积渗透量及渗透速率常数影响大小为:氮酮冰片丙二醇,且氮酮具有显著性差异(P0.05),微乳凝胶剂12 h的累积释药率为86%,符合Higuchi方程,其溶蚀量较少且与释药率无明显线性相关(r=0.9387)。可见,2%氮酮、2%冰片和1%丙二醇可作为最佳促渗剂处方在川陈皮素微乳凝胶剂中使用,且该制剂体外释药性能良好,有一定的缓释特性。     

葵粕多肽抗皮肤光老化作用的研究

本文以昆明小鼠为研究对象,研究了用葵粕分离蛋白加工的多肽,即葵粕多肽(SMP)对紫外线诱导的小鼠光老化皮肤的保护作用。试验动物分为五组,基础对照组不进行紫外线照射,模型组紫外线照射并涂抹蒸馏水,阳性对照组照射并涂抹Vc,大小剂量组照射并涂抹多肽样品,样品浓度分别为15%和30%。通过对小鼠皮肤组织形态的观察和皮肤生化指标分析,发现模型组小鼠皮肤表面有明显红斑,皮肤粗糙,有粗深的皱纹,葵粕多肽大剂量组小鼠皮肤皱纹已不明显,接近正常组小鼠皮肤;多肽大剂量组可降低皮肤组织中丙二醛的含量和增加羟脯氨酸的含量,差异极显著(P0.01)。研究表明:葵粕多肽有抗氧化和抗皮肤光老化的作用。     

Wnt/β-catenin信号通路在博来霉素诱导的系统性硬化症小鼠模型血管重塑中的作用

系统性硬化症(systemic sclerosis,SSc)是一种慢性可累及全身多脏器的自身免疫性疾病,以广泛的血管病变及皮肤和内脏的纤维化为特征,但其机制迄今尚不明确。已有研究证实,Wnt通路参与了SSc纤维化,但其在血管病变中的病理作用尚未见报道。本研究拟采用博来霉素(bleomycin,BLM)诱导的SSc小鼠模型,探讨Wnt通路在SSc皮肤血管病变中的作用。将18只Balb/C小鼠随机平均分为3组,分别设为对照组(于小鼠背部皮下注射PBS 100 μL/d)、模型组(于小鼠背部皮下注射浓度为 1 mg/mL 博来霉素BLM 100 μL/d)和治疗组(于小鼠背部皮下注射 1 mg/mL BLM 100 μL/d,同时腹腔注射Wnt及β-catenin的抑制剂 iCRT3 5 mg/kg·d),于造模第28 d处死小鼠。小鼠皮肤取材后,通过HE染色及Masson染色观察到经BLM诱导的模型组小鼠背真皮、表皮厚度较对照组皮肤均明显增加(P<0.05),同时模型组的皮脂腺、毛囊等皮肤附属器明显减少,脂肪层厚度变薄并被纤维组织包绕,模型组皮肤胶原沉积较对照组增加;通过免疫组织化学染色在组织学层面鉴定α-SMA表达情况,发现模型组及治疗组α-SMA在皮肤组织中均高表达,α-SMA阳性表达在血管周围较对照组明显增加;通过ELISA方法检测出模型组小鼠血清中IL-6及IL-17表达量较对照组明显升高(P<0.05),治疗组小鼠血清中IL-6及IL-17的表达量较模型组明显下降(P<0.05);提取皮肤微血管片段,通过q-PCR检测到模型组及治疗组小鼠皮肤微血管中β-联蛋白的mRNA基因表达水平较正常组升高;通过Western印迹检测皮肤微血管Wnt5A、β-联蛋白、α-SMA、col1A1的蛋白质表达情况,发现纤维化相关蛋白质α-SMA及col1A1在模型组表达升高,较对照组有统计学差异(P<0.05),治疗组较模型组表达下降(P<0.05),Wnt通路相关蛋白质β-联蛋白及Wnt5A在模型组表达明显升高,较之对照组有统计学差异(P<0.05)。本研究提示,BLM能成功诱导小鼠系统性硬化症皮肤表型,Wnt通路的异常激活参与了BLM诱导的硬皮病小鼠皮肤微血管病变,特异性Wnt通路抑制剂iCRT3可能通过直接或间接的方式下调细胞因子IL-6及IL-17,从而降低BLM诱导的小鼠皮肤微血管中的α-SMA及col1A1蛋白质表达,改善小鼠皮肤微血管病变,干预BLM诱导的小鼠血管病变的进展。     

维生素C对光化学法诱导皮肤光损伤的光保护作用:OCT定量研究

8-甲氧补骨脂素(8-MOP)联合UVA辐射(即光化学疗法PUVA)因诱导皮肤光损伤的副作用,常被用于实验动物皮肤光损伤模型的构建。为研究维生素C(Vc)对皮肤光损伤的保护效应,本研究在Balb/c小鼠背部皮肤涂抹0.1%8-MOP溶液1h后进行UVA辐照(10 J/cn2)。然后分别涂抹7.5%、15%和30%浓度的Vc溶液的进行光保护治疗,利用光学相干层析成像分析皮肤厚度和光信号衰减的变化,从而评估Vc对皮肤的光保护作用。结果显示,相对于溶媒组,Vc治疗组皮肤厚度减小,光衰减系数增加,其中15%效果尤为明显结果表明,局部涂抹Vc溶液具有一定的光损伤保护效应。     

紫外线对荒漠沙蜥皮肤形态、蜕皮、脂质过氧化和抗氧化酶的影响

为了提高体温,荒漠沙蜥喜好晒太阳的同时增加了紫外线对其皮肤的损伤。本实验研究了不同的紫外线强度(110、300、500、800mJ/cm2)对荒漠沙蜥皮肤形态、蜕皮、脂质过氧化和抗氧化酶的影响。结果显示:皮肤损伤和丙二醛含量的最高峰发生在暴露紫外线300、500、800mJ/cm2后的96、48、24h;SOD活性的最低峰发生在暴露紫外线110、300、500、800mJ/cm2后的24、48、12h;CAT活性在暴露紫外线后立即抑制,然后恢复提高。CAT活性的高低往往伴随皮肤的损伤程度和蜕皮的发生,这表明紫外线对皮肤的损伤与皮肤的脂质过氧化密切相关,CAT是一种主要的抗氧化酶。皮肤的角质层对保护皮肤免受紫外线的损伤也有重要作用。     

冬瓜粗提物对小鼠紫外线晒伤皮肤的修复作用

为探讨冬瓜(Benincasa hispida)粗提物对小鼠紫外线晒伤皮肤的修复作用,建立小鼠紫外线晒伤模型。观察冬瓜粗提物对晒伤小鼠内源性血管内皮生长因子(VEGF)及碱性成纤维细胞生长因子(FGF-2)表达的影响。冬瓜提取物组(浓度均为31 mg/m L),药物组(利多卡因氯已定气雾剂),正常对照组和阴性组(生理盐水),每天2次涂药并观察创面,分别在0、1、3、7、14 d处死小鼠,取皮肤组织,做病理切片,取晒伤组织提取蛋白并检测VEGF、FGF-2的表达状况。3~7 d时,阳性对照组和实验组的VEGF和FGF-2的表达明显高于阴性对照组和正常组,且阳性组与实验组VEGF和FGF-2表达水平有显著差异。病理切片显示实验组炎性细胞和血管数量明显多于阴性对照组,且两组间差异明显。即冬瓜粗提物能提高皮肤组织的生长因子VEGF和FGF-2的表达,促进晒伤皮肤的愈合。     

人脐带间充质干细胞上清凝胶加速小鼠皮肤创面愈合

目的:探讨人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)上清凝胶对小鼠皮肤创面修复的作用,为临床皮肤创伤提供新的修复方法奠定基础。方法:从新生儿脐带分离出hUC-MSCs并培养,经流式细胞仪检测细胞表面标志物、成骨成脂细胞分化实验以及RT-PCR检测干性相关基因的表达证明其干细胞特性;收集上清液,进行粗提纯及总蛋白浓度检测,制成凝胶剂,用于小鼠背部损伤模型中创面的治疗;于第2、3、6、8、15 d取样,伤口及正常皮肤组织样品分别用于制备组织病理切片及愈合组织相关因子表达的Q-PCR检测。结果:从新生儿脐带分离出的hUC-MSCs其形态、表面标志物符合干细胞特性,具有成骨和成脂诱导分化潜能。实验小鼠皮肤创伤后3 d开始可见各组创面逐渐缩小,伤后15 d创面基本愈合;第5、7 d高剂量组创面愈合率大于对照组,其差异有统计学意义(P0.05)。病理切片结果显示高剂量组伤口愈合程度最高,低剂量组次之,两者都优于对照组。愈合组织相关因子检测表明,伤后第2 d,高剂量上清处理的小鼠伤口组织TGF-β1和Col1a1基因表达增加,明显多于对照组(P0.05),伤后第3 d,实验组VEGF的表达量均高于对照组(P0.05);高剂量组从第3 d开始,IL-1β这一炎症因子表达水平显著低于空白对照组(P0.05)。结论:hUC-MSCs上清凝胶能够提高小鼠皮肤创面愈合的速度。     

鞘磷脂酶通路与紫外线诱导的细胞凋亡

紫外线是一种重要的环境因素,对人类日常生活起着广泛的影响效应。大量的非保护的日光暴露不仅可以导致皮肤炎症、过度老化甚至皮肤癌症的发生,而且还能够诱导多种细胞凋亡。鞘磷脂酶-神经酰胺信号通路的激活与细胞凋亡关系密切,本文旨在探讨该通路在介导紫外线诱导细胞凋亡中的地位,重点描述了第二信使神经酰胺代谢的研究进展、鞘磷脂酶通路参与紫外线诱导细胞凋亡的机制。深入了解和研究紫外线诱导细胞凋亡的过程及其相关信号转导途径,有助于指导紫外线辐射的防护,开发新的治疗策略。     

重组人源Ⅲ型胶原蛋白对豚鼠紫外线辐射损伤皮肤的修复效果探究

由于大气臭氧层逐渐被破坏,紫外线辐射量大大增加,导致皮肤中的核酸、蛋白质等大分子物质发生化学反应,引起皮肤红斑、色素沉积、晒伤、光老化甚至癌变的发生。以重组人源 Ⅲ型胶原蛋白（recombinant human type Ⅲcollagen,rhCol Ⅲ）为研究对象,探究其对成纤维细胞（L929）的细胞毒性及对豚鼠紫外线辐射光毒性损伤皮肤的修复作用。结果发现,在体外细胞实验中rhCol Ⅲ对L929细胞无潜在的细胞毒性;体内动物实验中rhCol Ⅲ对豚鼠紫外线辐射光毒性损伤皮肤具有明显的修复作用,其可以减少豚鼠皮肤损伤后的皮肤皱纹,改善损伤皮肤组织的表皮增生和真皮层炎症反应,降低波形蛋白（Vimentin）和黑色素瘤单克隆抗体45(human melanoma black 45,HMB45)在损伤皮肤组织中的表达。结果表明,rhCol Ⅲ的安全性良好,在豚鼠紫外线辐射损伤皮肤的修复治疗中,可以明显改善紫外辐射豚鼠皮肤的表皮层增厚和角质化程度,降低真皮层处的炎症反应,有效调节成纤维细胞纤维化程度与黑色素瘤的发病风险。结果表明,rhCol Ⅲ对紫外线辐射造成的光损伤皮肤具有明显的治疗效果...     

NaCl对渗透胁迫下三角叶滨藜光合作用和水分状况的调节

以溶液培养的三角叶滨藜(Atriplex triangularis)为材料, 测定分析了在PEG诱导的渗透胁迫条件下, 适量的NaCl对其光合作用和水分吸收的影响, 以探讨环境溶液中NaCl对植物适应干旱的影响。结果表明, PEG诱导的渗透胁迫导致三角叶滨藜植株吸水困难、叶绿素含量降低、光合系统受损、生长受抑制、生物量减少; 而在PEG渗透胁迫的处理液中添加10–40 mmol·L^–1NaCl可以明显降低植株水势和叶片渗透势, 维持较高的细胞膨压, 减缓PEG渗透胁迫对光合系统的破坏作用, 保证相对较高的光合速率和生长速度, 从而有效增强了三角叶滨藜对渗透胁迫的适应能力。     

还原可降解聚磺酸甜菜碱型纳米水凝胶的制备及载药研究

目的:制备与表征还原可降解的聚磺酸甜菜碱型纳米水凝胶,利用该纳米递药系统包载阿霉素(DOX)并初步评价其抗肿瘤性能。方法:利用回流沉淀聚合的方法合成含二硫键的聚磺酸甜菜碱甲基丙烯酸酯(PSBMA)纳米水凝胶及不含二硫键的PSBMA纳米凝胶(nd-PSBMA);通过粒度仪和透射电镜考察两种纳米水凝胶的粒径、形态以及稳定性;通过考察谷胱甘肽(GSH)对纳米凝胶溶液相对浊度的影响以评价还原环境对两种纳米凝胶的还原可降解性;利用纳米凝胶包载阿霉素(DOX),考察载药凝胶在GSH中的释药行为,并初步评价其对A549肿瘤细胞的杀伤作用。结果:以N, N'-双丙烯酰胱胺为交联剂制备了含二硫键的PSBMA纳米凝胶,其粒径在180～200 nm;同时以N, N'-双丙烯酰胺为交联剂制备了不含二硫键的n-PSBMA纳米凝胶。两种纳米凝胶与小鼠血清共孵育7天水合粒径仍无明显变化,表明磺酸甜菜碱型纳米凝胶具有良好的抗蛋白吸附能力。此外,PSBMA纳米凝胶在GSH溶液中迅速地降解,且降解速度与GSH浓度呈正相关;而nd-PSBMA纳米凝胶在GSH溶液中几乎不降解。载DOX的PSBMA纳米凝胶可在GSH作用下快速的释放药物而载DOX的nd-PSBMA纳米凝胶在GSH作用下缓慢的释放药物;体外细胞实验显示空白纳米凝胶和载药nd-PSBMA对A549细胞无明显毒性作用,但载DOX的PSBMA纳米凝胶可高效地杀死A549肿瘤细胞,其药效与游离DOX相仿。结论:还原可降解的PSBMA纳米水凝胶有望成为智能型控释药物载体。     

丹参素抑制RANKL诱导的破骨细胞分化

目的：研究丹参素对RANKL诱导的破骨细胞分化的影响。方法：运用冲洗法从股骨、胫骨中获得小鼠骨髓源性单核巨噬细 胞用于体外RANKL 诱导的破骨细胞分化,同时,施加不同剂量的丹参素干预,经TRAP染色法在形态学上观察观,蛋白印迹法检 测蛋白水平的变化,实时定量PCR 检测mRNA 水平变化来研究丹参素对RANKL诱导的骨髓源单核巨噬细胞破骨分化的影响。 结果：①不同剂量丹参素干预组与对照组相比,TRAP 阳性破骨细胞数量得到了明显抑制（P<0.05）。②不同剂量丹参素干预组与 对照组相比,磷酸化Akt的上调量被明显的降低。磷酸化p38 MAPK,JNK和ERK 的变化则不明显。③不同剂量丹参素干预组与 对照组相比,c-fos,TRAP,CTSK 等参与破骨细胞分化的重要基因表达减少,NFATc1 变化不明显。结论：丹参素通过下调磷酸化 Akt水平的途径抑制了RANKL诱导的破骨细胞分化。     

紫外处理对酿酒葡萄果皮中白藜芦醇及其二聚体合成的影响

本文研究了紫外线辐射对酿酒葡萄品种蛇龙珠果皮中白藜芦醇及其二聚体合成的影响.研究结果表明,紫外线辐射300 s,在35℃下黑暗中贮存24 h后,可明显提高果皮中白藜芦醇及其二聚体含量.紫外线辐射对不同发育期果皮中白藜芦醇及其二聚体含量的影响并不相同,对白藜芦醇含量来说,果实转色期时紫外诱导效果最好;对白藜芦醇二聚体而言,不同时期的紫外诱导效果差异不显著.紫外线辐射均能提高苯丙氨酸裂解酶和过氧化物酶活性,且苯丙氨酸裂解酶活性与果皮中白藜芦醇的形成之间存在相关性,过氧化物酶活性与果皮中自藜芦醇二聚体的形成存在相关性.     

Rb1、Rg1对肾缺血／再灌注血清诱导HK-2细胞凋亡中Bcl-2、Bax表达的影响

目的：探讨人参皂甙Rb1、Rg1在肾缺血／再灌注血清诱导HK-2细胞凋亡中对Bol-2、Bax表达的影响。方法：制备家兔肾缺血／再灌注血清（SIR）和对照组血清（SC）用于HK-2细胞培养,TUNEL法检测细胞凋亡。实验分组：对照组、缺血／再灌注组、Rb1干预组、Rg1干预组,培养24h后免疫细胞化学法检测Bcl-2、Bax的表达。结果：与缺血／再灌注组比较,Rb1干预组和Rg1干预组Bax的表达明显下降（P〈0．01）,Bcl-2／Bax比值增大。结论：人参皂甙Rb1、Rg1对肾缺血／再灌注血清诱导HK-2细胞凋亡具有保护作用。     

Viscomate NP-800基吲哚美辛水凝胶贴剂的研究

目的:探讨影响ViscomateNP-800基水凝胶强度的处方因素以及氮酮和薄荷脑对吲哚美辛水凝胶贴剂中药物透过小鼠皮肤的促透效果.方法:采用ACM-2LVT型2L-爱工舍混合机制备水凝胶并用SHIMPO数字扭矩仪测定凝胶强度;采用巴布剂涂布装置制备吲哚美辛水凝胶贴剂;采用YB-P6型智能透皮试验仪和紫外分光光度计考察药物透过小鼠皮肤的透过率.结果:按Viseomate NP-800 5%.甘羟铝0.2%.酒石酸0.2%,EDTA 0.3%,水64.3%,甘油30%制备的水凝胶初始凝胶强度较低,随放置时间延长,凝胶强度明显提高;和含有氮酮和薄荷脑的贴剂相比,阴性样品的吲哚美辛皮肤透过率明显较低.结论:以Viscomate NP-800 为高分子骨架的水凝胶基质易于涂布,涂布后有足够的强度,适合用作贴剂的水凝胶基质;含有3%氮酮和0.3%薄荷脑的吲哚美辛水凝胶贴剂中药物透过小鼠皮肤的透过性较好.     

姜黄素对N-甲基亚硝基脲诱发膀胱癌大鼠化学干预作用及机制分析

目的分析姜黄素对N-甲基亚硝基脲(MNU)诱导的膀胱癌大鼠模型的化学干预作用及作用机制。方法将100只SD大鼠随机分为四组,对照组(10只)、模型组(10只)、干预组(40只)和治疗组(40只),对照组等时等量的膀胱灌注生理盐水,其他三组均对大鼠进行膀胱灌注MNU,诱发SD大鼠形成膀胱癌模型(将浓度为1 mg/m L的MNU溶液灌注入膀胱内,MNU灌注时间为第2、4、6和8周,每次2 mg,每2周1次,共4次),模型组在诱发大鼠膀胱癌时膀胱灌注蒸馏水,干预组在膀胱灌注MNU时灌注姜黄素溶液(400μmol/L),即第1、3、5、7和9周膀胱灌注,第10周安乐死大鼠;治疗组在诱发大鼠膀胱癌模型后膀胱灌注姜黄素溶液(400μmol/L),即在第10、12、14、16、18周时间内持续膀胱灌注,在第19周时处死大鼠,获得的膀胱组织依次通过苏木精-伊红(HE)染色,观察病理变化;TUNEL末端标记法测定肿瘤组织中细胞凋亡情况;Western blot检测凋亡相关蛋白表达。结果模型组在第10周时膀胱癌的发生率为90%(9/10),干预组在第10周时大鼠膀胱癌的发生率为12.5%(5/40),治疗组第10周时膀胱癌的发生率为92.5%(37/40),比较干预组与模型组大鼠膀胱癌的发生率差异有显著性(P0.05),说明姜黄素对MUN诱发膀胱癌大鼠有明显的化学干预作用;在治疗组膀胱癌形成后给予姜黄素治疗,第19周膀胱癌发生率为78.4%(30/37),与治疗前的第10周比较说明姜黄素对膀胱癌有治疗作用,可以延缓膀胱癌的恶化。TUNEL实验证实姜黄素显著促进膀胱癌细胞的凋亡,抑制膀胱癌细胞的增殖。Western blot结果发现,姜黄素抑制NF-κB的激活,有效下调NF-κB调节的基因产物的表达。结论姜黄素对MNU诱导的膀胱癌大鼠模型有明显的的化学干预作用,且作用机制可能是通过抑制NF-κB的激活并且有效下调NF-κB调节的基因产物,来调节膀胱癌中相关蛋白的表达机制,即抑制增殖,诱导凋亡,进一步发挥抗癌的化学干预作用以及预防膀胱癌的复发。     

雌激素干扰亚急性MPTP小鼠PD模型黑质纹状体DRP1表达

探究1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)诱导的亚急性帕金森病(PD)模型小鼠黑质纹状体神经元动力相关蛋白1(DRP1)的表达以及在雌激素的干预下所发生的变化,从而进一步探讨雌激素对帕金森病的保护作用以及在线粒体动力学方面的作用机制和原理。本研究将C57/BL小鼠随机分配为4组:模型组(MPTP)、对照组(生理盐水)、干预组(Estrogen+MPTP)、干预对照组(Estrogen),腹腔注射一定浓度的MPTP,造模成功后,灌胃给药戊酸雌二醇,一段时间后观察小鼠行为学变化,采用双标免疫荧光检测各组的DRP1和GFAP在小鼠脑黑质纹状体神经元的表达差异,以及采用免疫组织化学和免疫蛋白印迹法检测PD小鼠黑质纹状体DRP1表达的变化以及给予雌激素干预后对上述变化的影响。研究显示,与对照组相比,模型组(MPTP)小鼠表现出典型的PD症状,脑黑质纹状体神经元DRP1明显增多;经雌激素干预处理后,小鼠PD症状有所减轻,免疫组织化学和免疫蛋白印迹法检测的各组脑黑质纹状体DRP1的表达的变化趋势一致,干预组的DRP1表达量明显低于模型组,高于干预对照组,并且对照组和干预组的DRP1表达量无显著性差异。说明一定浓度的雌激素对正常的小鼠无明显作用,而对患PD的小鼠,雌激素能明显改善其病症,因此,雌激素对帕金森病起着一定的保护作用,其潜在的机制可能与雌激素降低了黑质纹状体神经元DRP1的表达从而减少了线粒体异常分裂有关,但是具体的原理还需要进一步的深入研究。     

中性粒细胞胞外诱捕网在矽肺中的作用研究

目的:通过构建二氧化硅诱导动物矽肺模型,探讨中性粒细胞胞外诱捕网(neutrophil nxtracellular traps,NETs)在矽肺中可能的作用。方法:将C57BL/6J雄性小鼠完全随机分为磷酸盐缓冲液(phosphate buffered solution,PBS)组、脱氧核糖核酸酶Ⅰ(deoxyribonuclease Ⅰ, DNase Ⅰ)组、二氧化硅+PBS组、二氧化硅+DNase Ⅰ组。通过气管内滴注二氧化硅(0.2 g/kg)混悬液构建小鼠矽肺模型,PBS组与DNase Ⅰ组注入等体积的PBS。在二氧化硅(silicon dioxide,SiO_2)混悬液注入后的第0小时、10小时小鼠气管内注入DNase Ⅰ(5 mg/kg),以后DNase Ⅰ持续给药:5 mg/kg/day,直到SiO_2混悬液注入后的28天。二氧化硅(SiO_2)干预28天后,取各组小鼠肺组织与肺泡灌洗液,通过PicoGreen荧光染料检测支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中NETs水平,酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)检测BALF中转化生长因子β1 (transforming growth factor-β1,TGF-β1)与炎症因子白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平,HE染色和Masson染色观察肺组织的病理学变化,Western Blot检测肺组织中NETs特异性组分瓜氨酸化组蛋白3(citrullinated-histone3,Cit-H3)表达。结果:SiO_2干预28天后,与PBS组相比,二氧化硅+PBS组小鼠肺组织炎症损伤加重,BALF中促炎介质IL-1β、IL-6、TNF-α水平上升;肺组织发生纤维化,大量硅结节形成;肺组织中Cit-H3蛋白表达量增加,BALF中NETs水平显著升高。予以NETs抑制剂DNase Ⅰ进行干预后,肺组织NETs水平显著下降,二氧化硅诱导的肺部炎症损伤、纤维化显著减轻。结论:NETs水平升高可能介导了二氧化硅诱导的小鼠矽肺模型肺部炎症损伤与纤维化。     

细胞周期抑制剂对大鼠局灶性脑缺血后神经元的保护作用

目的通过观察选择性细胞周期抑制剂olomoucine对局灶性脑缺血边缘区神经元凋亡的影响,以探讨细胞周期调控与神经元细胞凋亡的关系。方法建立光化学法诱导大鼠局灶性脑缺血模型,随机分为脑缺血组(对照组和干预组)和假手术组,采用HE染色显示梗死灶并测定其面积;应用免疫荧光化学法检测梗死灶周围神经元核心抗原(NeuN)的表达及通过TUNEL方法检测神经元凋亡;免疫印迹(Western blot)观察损伤侧皮层NeuN、周期素蛋白A(cyclin A)和周期素蛋白B1(cyclin B1)蛋白的表达。结果缺血后3d对照组梗死灶面积占脑片面积百分比值的平均值明显大于干预组(P<0.05);缺血后缺血边缘区NeuN表达减弱,对照组NeuN表达明显弱于干预组(P<0.05);缺血后梗死灶周围可见大量TUNEL阳性染色细胞,而且对照组数量明显多于干预组(P<0.05);干预组大鼠NeuN(TUNAL双标阳性表达明显弱于对照组大鼠(P<0.05);NeuN的蛋白量的表达,干预组较对照组明显增加(P<0.05),而对照组cyclin A和cyclin B1蛋白量的表达明显高于干预组(P<0.05)。结论通过对细胞周期的调控,可减少神经元凋亡和脑梗死体积,从而为缺血性脑损伤后的神经元提供一个保护作用。