一种联合MALDI-TOF MS直接鉴定阳性血培养瓶方法改进及与Sepsityper Kit试剂盒法、SELTERS法和血清分离胶法的比较

目的评价直接使用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)联合Sepsityper Kit试剂盒法(简称试剂盒法)、SELTERS法和血清分离胶法(简称分离胶法)鉴定阳性血培养瓶血中细菌的符合率,并对SELTERS方法进行改进,以缩短样本处理时间。方法对656例临床血培养阳性标本,应用试剂盒法、SELTERS方法或分离胶法处理后,直接使用质谱仪快速鉴定菌株,同时进行传统培养,比较分析二者之间的差异。结果656例血培养阳性标本共分离出626株单种菌感染和30株多种菌感染标本。MALDI-TOF MS联合试剂盒法、SELTERS法或分离胶法可在1 h内快速鉴定血培养阳性标本。在单种细菌感染中,MALDI-TOF MS联合试剂盒法直接鉴定革兰阳性菌的种、属符合率分别是66.8%(141/211)、21.3%(45/211),革兰阴性菌的种、属符合率分别是97.1%(367/378)、0.8%(3/378),真菌的种、属符合率分别是32.4%(12/37)、0.0%(0/37);MALDI-TOF MS联合SELTERS法直接鉴定革兰阳性菌的种、属符合率分别是66.8%(141/211)、21.3%(45/211),革兰阴性菌的种、属符合率分别是96.3%(364/378)、2.4%(9/378),真菌的种、属符合率分别是32.4%(12/37)、2.7%(1/37);MALDI-TOF MS联合分离胶法直接鉴定革兰阳性菌的种、属符合率分别是51.2%(108/211)、20.9%(44/211),革兰阴性菌的种、属符合率分别是93.4%(353/378)、1.6%(6/378),真菌的种、属符合率分别是13.5%(5/37)、2.7%(1/37);MALDI-TOF MS联合改良SELTERS法直接鉴定革兰阳性菌的种、属符合率分别是59.1%(13/22)、18.2%(4/22),革兰阴性菌的种、属符合率分别是88.5%(23/26)、3.8%(1/26),真菌的种、属符合率分别是0.0%(0/2)、50.0%(1/2)。而对于多种菌感染的血培养瓶,3种方法鉴定率均较低。结论MALDI-TOF MS联合试剂盒法、SELTERS法或分离胶直接鉴定阳性血标本中的病原菌,其结果可在1 h内获得,并与传统培养结果相比具有较高的符合率。但是这些方法检测更快速、操作更简便,同时改良SELTERS法样本处理时间缩短,成本降低,且符合率与前3种方法没有区别。这4种方法均能满足临床快速诊断和及时有效抗菌治疗的需求,临床可根据自身情况选择。     

草地干重排序快速监测方法在高寒草甸中的应用

为准确快速监测高寒草甸草产量和植物学组成,本研究借鉴澳大利亚草地干重排序法(dry-weight rank,DWR)与传统样方法(quadrat sampling,QS)在甘肃天祝县高寒草甸实地进行草地监测试验,并在准确性和工作效率进行比较。结果表明,在低、中、高3个牧草高度的样地,DWR估测值与QS实测值没有显著性差异(P0.05);DWR草产量估测值与矫正值的相关系数r分别为0.982(中草区)0.919(低草区)0.859(高草区)(P0.01);DWR法与QS法所监测共同植物干物质成分百分比相关系数r分别为0.975(中草区)0.972(高草区)0.961(低草区)(P0.01)。工作效率方面,相同条件下监测草产量和植物学组成,DWR法所需人力是QS法的1/4,所需时间是QS法的1/9。DWR法保证高准确性同时显著提高工作效率,具有很好推广价值。     

应用磷酸二酯酶定量测定植物钙调素

钙调素(Calmodulin,简称CaM)研究工作中一个重要手段是其定量测定。目前国内外CaM定量方法主要有3类:酶法(如PDE酶、NAD激酶等);免疫学方法(如放射免疫法等)和聚丙烯酰胺凝胶电泳法。其中环核苷酸磷酸二酯酶(Phosphodiesterase简称PDE酶)法因为可以测定活性态CaM,无需特殊设备或试剂,灵敏度虽低于放免法,但高于电泳法,是目前最为普遍应用的CaM定量方法。下面介绍我们在定量测定植物CaM中的做法与体会。     

点免疫结合测定法检测谷氨酸产生菌噬菌体污染

点免疫结合测定法(简称DIBA法)是近几年建立的检测抗原抗体的新方法。关于用该法对照常规双扩法、对流免疫电泳法检测某些动、植物病毒从而表现出很高的灵敏度方面已有一些报道,但尚未见到有关用DIBA法检测噬菌体方面的有关材料。本文仅以谷氨酸产生菌T_(613)噬菌体为抗原,制备特异抗血清;并用DIBA法对照SPA法检测T_(613)菌噬菌体,发现在抗原抗体反应中DIBA法比SPA法具很高的灵敏度。现将结果报道如下。材料与方法一、材料 1、T_(613)菌噬菌体裂解液。 2、T_(613)菌噬菌体抗血清。 3、冻干酶联葡萄球菌A蛋白(HRP     

乙醇对超氧化物歧化酶活性邻联〔二〕茴香胺染色法的影响

超氧化物歧化酶(SOD)活性染色法有硝基四氮唑蓝染色法(又称负染法)和邻联[二]茴香胺染色法(又称正染法)两种,后者是由 Misra 在邻联[二]茴香胺 SOD 活力测定法的基础上建立的。虽然该法具有许多优点,但是普遍认为其染色效果较难掌握,故应用不及负染法广泛,迄今我们仅见一篇应用报道。通     

寡核苷酸芯片法、实时PCR 和测序法进行乙肝病毒 基因分型的比较

目的:比较寡核苷酸芯片法、实时荧光PCR和测序法在对慢性乙肝患者病毒基因分型的比较和方法学评价。方法:对126例不同基因型的慢性乙肝患者的血清样本分别用寡核苷酸芯片法、实时荧光PCR法和测序法进行基因分型,并评价各种方法的临床表现、所需时间和检测成本。结果:寡核苷酸芯片法、实时荧光PCR分别能检测到1%和0.1%比例的基因型。在126例慢性乙肝患者的临床样本中,寡核苷酸芯片法、实时荧光PCR和测序法分别检测出41(33%)、41(33%)和45(36%)例为B型,76(60%)、76(60%)、81(64%)例为C型。寡核苷酸芯片法、实时荧光PCR均检出9例B、C混合基因型。在三种检测方法中实时荧光PCR是最快速和廉价的。结论:寡核苷酸芯片法、实时荧光PCR能检出B、C混合基因型,而测序法只能检测出样本的主导基因型。     

昆虫胆碱酯酶测定方法综述

<正> 胆碱酯酶(Cholinesterase,ChE)可以分成两类:一类是乙酰胆碱酯酶(Acetylcholinesterase,AChE),又称真胆碱酯酶;另一类是丁酰胆碱酯酶(Butyrylcholinesterase,BuChE),又称假胆碱酯酶。在昆虫中主要是AChE,因此这里介绍的测定方法主要是针对AChE。昆虫的AChE测定方法很多,主要有测压法、测pH法、比色法(分光光度法)、荧光法、同位素法和电化学法等。以下就一些常用的方法作一简单介绍。     

几种测定植物叶绿素含量的方法比较

植物叶绿素含量的测定大致可分为分光光度计法和活体叶绿素仪法两大类,目前还有人在研究反射型的活体叶绿素仪。本文就这些测定方法作些简要介绍和比较,以供读者参考。 1.分光光度计法由于所用提取叶绿素的溶剂不同,分光光度计法又有多种测定方法。 (1)丙酮法丙酮法是Mackinney(1941)首先     

脉冲超声多普勒胎心率检测与处理

胎儿心率的检测是胎儿监护的最主要的项目之一。胎心率的变化趋势与胎儿的健全程度(Well-being)、供氧状况、胎儿活力状况密切相关。围产期,特别是妊娠末期和分娩过程中,对胎心率进行监测,可及时发现胎儿在宫内缺氧、窘迫等危重症状,以便采取相应对策,保障新生儿的健康。胎心信号的获取是准确地测定胎心率的前提。胎心信号的获取方法主要有微音器法(FPCG)、胎儿心电法(FECG)和超声多普勒法。微音器法获取的是胎儿心音信号,它易受内外环境声音的干扰。胎儿心电法获取的是胎儿心电信号,可用直接法取得或经母体     

Bioxun微柱凝胶筛查红细胞不规则抗体的研究

目的:探讨Bioxun微柱凝胶法(Bioxun Micro-column Gel anti-globulin Test,BMGT)筛查红细胞不规则抗体的敏感性和特异性。方法:使用盐水介质法(Saline Media Test,SMT)、传统抗人球法(Traditional anti-Globulin Test,TGT)、达亚美凝胶法(DiamedMicro-column Gel Test,DMGT)和Bioxun微柱凝胶法分别检测红细胞不规则抗体,对方法学灵敏度和特异性进行观察比较。结果:Bioxun微柱凝胶法与达亚美凝胶法的结果无显著差异(P>0.05),二者的敏感度和特异性超过盐水介质法和传统抗人球法(P<0.05)。结论:Bioxun微柱凝胶法操作快捷,敏感度高,适宜在临床输血中推广应用。     

控制转基因植物中基因逃逸的分子策略

转基因作物释放可能导致潜在的生态风险性,其中一个重要方面是通过花粉传播,将外源基因(如抗除草剂、抗虫基因)转入野生近缘种或近缘杂草而产生难以控制的“超级杂草”。本文讨论了防止外源基因逃逸的几种分子技术手段,主要包括：(1)母系遗传法(又称细胞质遗传法);(2)雄性不育法：(3)种子不育法;(4)染色体组特异性选择法等。     

人体及动物生理学的教学尝试

人体及动物生理学是研究生物机体功能的科学,是生物科学专业的基础课。笔者结合教学实践,精选教学内容,尝试了5种教学方法:(1)运用多媒体教学、(2)语言形象直观教学、(3)联系实际法、(4)归纳比较法、(5)问题情境法等,取得了良好的教学效果。     

扫描电子显微镜植物材料的一种化学干燥技术

扫描电镜新鲜生物材料的制备,一般都要经过干燥处理,其目的主要是使样品不产生收缩畸变,以使样品的形态结构保持在生活状态,如此获得的样品图像才自然真实。现代广为应用的扫描电镜生物样品的干燥方法是临界点干燥(CPD)法。另外还有莰烯干燥法、乙腈干燥法和叔丁醇干燥法等。Jemes(1983)应用化学试剂六甲基二硅胺烷(nexamthyl disilazane,简称 HMDS),分子式[(CH_3)_3Si]_2对昆虫组织进行干燥处理并     

粪便收集方式对异育银鲫表观消化率测定的影响

消化率的高低是评价饲料营养价值的重要指标,但是粪便的不同收集方式会影响消化率的测定结果。研究观察了异育银鲫摄食后的排粪高峰以及排粪持续时间,探讨了粪便的不同收集方式对异育银鲫(Carassius auratus gibelio)(约100 g)表观消化率(Apparent digestibility coefficient,ADC)测定结果的影响。饲料中加入1%三氧化二铬(Cr2O3)作为指示剂,实验采用3种粪便收集方法(积粪器法、虹吸法和后肠取粪法),并且在积粪器法和虹吸法中设置了不同的收粪时间。结果表明,正常投喂的异育银鲫摄食后的排粪高峰出现在摄食结束后的5—10h;饥饿2d的异育银鲫恢复摄食后的排粪高峰出现在摄食结束后的7—9h;饲料的干物质表观消化率(ADC of dry matter,ADCd)和蛋白表观消化率(ADC of protein,ADCp)在排粪初始阶段较低,随着排粪高峰的出现而升高。粪便的不同收集方法和不同收集时间对ADCd和ADCp的测定结果均存在显著影响(P<0.05)。采用虹吸法收集粪便测得的ADCd与在排粪高峰时段内积粪器法的测定值相当;后肠取粪法收集粪便测得的ADCd低于积粪器法排粪高峰期的测定值。采用虹吸法收集粪便测得的ADCp略低于在排粪高峰时段内积粪器法的测定值;后肠取粪法收集粪便测得的ADCp低于积粪器法各时间段内的测定值。因此,在选择挑选新鲜完整粪便的前提下,在排粪高峰期采用虹吸法收集粪便用于ADC的测定是一种方便可靠的方法,反而后肠取粪法由于操作误差容易带来更大偏差。     

一种快速简便的噬菌体DNA的抽提方法

噬菌体DNA的制备和纯化是分子生物学研究中极为重要的一环,在基因库和eDNA库的建立,以及DNA克隆和筛选等方面都是不可缺少的。噬菌体DNA的制备可以通过噬菌体感染细菌在琼脂板上繁殖(称为平板法),也可以在液体培养液中繁殖(称为液体法)。平板法多用     

酶联免疫法和胶体金法在胃镜检查前检测乙肝表面抗原的结果观察

目的:比较酶联免疫法和胶体金法在胃镜检查前检测乙肝表面抗原的结果,以探讨酶联免疫法和胶体金法在检验与病理科乙肝表面抗原检测中的应用价值。方法:选择2017年1月~2019年12月我院进行胃镜检查的100例上消化道疾病患者,均在胃镜检查前检测乙肝表面抗原,对照组使用胶体金法进行检测,观察组使用酶联免疫法进行检测。比较酶联免疫法和胶体金法在胃镜检查前检测乙肝表面抗原的阳性率、敏感度以及特异度。结果:酶联免疫法和胶体金法在胃镜检查前检测乙肝表面抗原的阳性率分别为35.00%(35/100)和33.00%(33/100),两种方法相比较没有明显的差异(P>0.05);酶联免疫法在胃镜检查前检测乙肝表面抗原的敏感度(97.34%)与特异度(98.12%)均明显高于胶体金法(P<0.05)。结论:酶联免疫法和胶体金法在胃镜检查前对乙肝表面抗原均有比较高的阳性检测率,但是酶联免疫法具有更高的敏感度以及特异度,仍然是现今检测乙肝表面抗原的主要方法,胶体金法由于检测方法更加简便和直观、方便携带、结果更加快捷,而且不需要特殊的仪器设备,更加适用于临床上紧急状态下患者的检测以及感染者初筛等情况。     

超微量荧光抗体膜抗原法(FAMA)测定麻疹抗体

<正>麻疹抗体的测定,现在一般采用红血球凝集抑制法(下称HI法),该法和中和抗体测定法相关,在实践中被广泛使用。但在评价疫苗接种后的抗体效价上,灵敏度存在问题。 灵敏度好的麻疹抗体测定法除中和法(下称NT法)外,还有放射免疫测定法(下称RIA法)、酶联免疫吸附测定法(下称ELISA法)。然而NT法     

水牛腔前卵泡的分离方法

为确定水牛腔前卵泡的有效分离方法 ,作者取用来自屠宰场 31头水牛的 6 1个卵巢 ,先用剪刀去掉髓质部 ,然后分别用梳刮法、剪碎法和显微分离法分离回收腔前卵泡。结果发现 ,使用梳刮法时 ,平均每个水牛卵巢回收所得的腔前卵泡数 (15 2 35± 4 4 81)明显高于剪碎法 (32 6 2± 14 81)和显微分离法 (8 95± 3 4 4 ) ,且其平均每个卵巢的处理时间 (39 0 5± 4 2 7min)明显少于剪碎法 (4 6 4 3± 4 15min)和显微分离法 (4 4 5 5± 7 82min)。梳刮法分离所得的腔前卵泡中 ,以原始卵泡最多 (占 4 1 2 5 % ) ,其次为初级卵泡 (占 38 79% ) ,而次级卵泡最少 (仅占 19 95 % )。用梳刮法获得的腔前卵泡在体外培养 72h后 ,存活率为 5 6 38% ,与剪碎法(4 8 91% )及显微分离法 (5 9 34% )没有显著差异。用梳刮法处理 10头黄牛的 2 0个卵巢 ,平均每个卵巢可分离获得 1195 2 0± 6 85 0 0个腔前卵泡 ,明显多于水牛的 15 2 35± 4 4 81个腔前卵泡。由此可见 ,梳刮法是水牛腔前卵泡的有效分离方法     

纤溶活性蛋白检测方法研究进展

迄今为止,对纤溶活性蛋白(fibrinolytic protein)的检测主要有4种方法:纤维平板法(fibrin plate method)、显色底物法(colorimetric assay using chromogenic substrates)、反相纤维蛋白自显影法(reverse fibrin autography)和纤维蛋白酶谱法(fibrin zymography)。纤维平板法可以用来快速判断样品是否具有纤溶活性,同时,纤维平板法和显色底物法也可以用来对纤溶活性蛋白进行半定量分析。反相自显影法和纤维蛋白酶谱法则是两种较新的技术,主要用来对纤溶活性蛋白进行定性分析。详细阐述了这几种技术的发展过程、原理、优缺点和应用范围。     

广西桉树人工林叶面积指数的估测及其校正

叶面积指数(Leaf area index, LAI)是森林生态系统重要的结构参数,通过遥感技术可反演区域LAI,但其可靠性需要地面准确的实测数据进行验证。选取广西国有高峰林场不同林龄的桉树(Eucalyptus robusta)人工林为对象,以异速生长法(Allometry)为对照,综合利用植物冠层分析仪法(LAI-2200)、跟踪辐射和冠层结构分析仪法(TRAC)、半球摄影法(DHP)以及地基激光雷达法(TLS)等间接法估测样地的LAI,并考虑木质成分以及聚集效应影响,进行相应的校正处理,为地面快速、准确测量桉树人工林LAI提供参考。结果表明：桉树人工林的比叶面积为125.37±13.38 cm~2/g,通过Allometry获得的LAI变化范围在1.65—3.84,平均为2.73,不同林龄间的差异均显著(P<0.05),随着林龄的增加呈现先增加后减少的趋势。在未校正情况下,LAI-2200、TRAC、DHP、TLS估算的LAI存在显著差异(P<0.05)。与对照相比,LAI-2200在幼龄林和过熟林中估算误差最小,TRAC在成熟林中估算误差最小。相对于完全去除法,利用...