雷公藤甲素对Con A诱导小鼠急性肝损伤的保护作用及机制

摘要 目的：探究雷公藤甲素（Triptolide）对刀豆蛋白A（Concanavalin, Con A）诱导的小鼠急性肝损伤的保护机制。方法：雄性BALB/c小鼠30只,随机等分为正常对照组、Con A模型组和雷公藤甲素治疗组。通过尾静脉注射Con A构建小鼠急性肝损伤模型。微孔板法检测血清谷丙转氨酶（ALT）和谷草转氨酶（AST）水平,HE染色观察肝组织病理变化,免疫组化、实时荧光定量PCR（RT-qPCR）和酶联免疫吸附试验（ELISA）检测肝组织及血清中细胞因子水平。结果：与正常对照组比较,Con A诱导急性肝损伤小鼠血清ALT、AST水平显著增高（P<0.05）,肝组织呈局灶性炎性浸润、坏死。与Con A模型组比较,雷公藤甲素治疗组小鼠血清ALT、AST水平显著下降（P<0.05）;肝组织病理程度明显减轻;肝组织中CD4⁺T细胞的浸润降低,促炎细胞因子（IFN-γ、TNF-α、IL-1β、IL-2）的水平显著降低（P<0.05）。结论：雷公藤甲素可以通过抑制CD4⁺T细胞向肝脏募集,下调IFN-γ、TNF-α、IL-1β、IL-2的表达,有效防治Con A诱导的急性免疫性肝损伤。     

顺铂联合VEGF抗体对食管癌移植瘤小鼠免疫调节以及癌细胞增殖和肺转移的影响

摘要 目的：研究顺铂联合血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）治疗对食管癌移植瘤小鼠免疫功能、癌细胞增殖以及肺转移的影响。方法：30只BALB/c小鼠通过皮下注射食管癌移植瘤模型。一周后,30只食管癌移植瘤模型小鼠被随机均分为3组,即模型组、顺铂组和联合组。模型组不进行治疗,顺铂组腹腔注顺铂治疗,联合组腹腔注射顺铂联合尾静脉注射VEGF抗体进行治疗,共治疗7周。比较各组小鼠体重,食管癌移植瘤体积和重量,卵巢癌细胞肺组织转移结节数、癌细胞转移面积和转移病灶总数,以及食管癌移植瘤外周血CD4⁺、CD8⁺以及CD4⁺/CD8⁺ T淋巴细胞比例。结果：（1）顺博组和联合组小鼠体重均显著高于对照组,而联合组小鼠体重显著高于顺铂组（P<0.05）;（2）顺铂组和联合组小鼠CD4+和CD8+细胞比例均显著低于对照组（P<0.05）,而CD4⁺/CD8⁺却显著高于对照组（P<0.05）;（3）联合组小鼠CD4⁺和CD8⁺细胞比例均显著高于对照组（P<0.05）,而CD4⁺/CD8⁺却显著低于顺铂组（P<0.05）;（4）顺铂组和联合组小鼠食管癌肿瘤组织体积和重量,肺转移结节数、转移面积和转移病灶数均显著低于对照组（P<0.05）,而联合组小鼠显著低于顺铂组（P<0.05）。结论：VEGF抗体可以显著增强顺铂在体内对食管癌的抗癌特性,并有助于增强食管癌移植瘤小鼠免疫功能、抑制癌细胞体内增殖和肺部转移。     

PARP2表达对肝细胞癌模型小鼠肿瘤生长及化疗敏感性影响及其机制研究

摘要 目的：研究聚[ADP-核糖]聚合酶2（Poly[ADP-ribose]polymerase 2, PAPR2）表达对干细胞癌模型小鼠肿瘤生长和对化疗药物敏感性的影响。方法：未转染的（对照组）、空载质粒转染（空载组）和si-PARP2转染（si-PARP2组）的Huh7细胞作为研究对象,比较体外化疗药物对不同Huh7细胞克隆形成数目和凋亡率。通过腋下皮下注射不同Huh7建立肝细胞癌模型小鼠,采用结晶紫染色观察并计数克隆形成数目;Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒检测Huh7细胞凋亡率;排水法测定肿瘤组织体积;免疫印迹法检测PARP2, B淋巴细胞瘤-2（B-cell lymphoma-2, Bcl2）和Bcl-2-Associated X蛋白（Bcl-2-Associated X, Bax）蛋白表达。结果：在体内外,转染si-PARP2均显著降低肝癌细胞中PARP2蛋白表达（P<0.05）。在体外,对照组和空载组Huh7细胞形成的细胞克隆数目和化疗药物诱导的凋亡率比较无显著差异（P>0.05）;si-PARP2组Huh7细胞形成的细胞克隆数目显著低于对照组和空载组（P<0.05）,而化疗药物引起的细胞凋亡率显著高于空白组和对照组（P<0.05）。在体内,si-PARP2组小鼠肝癌移植瘤重量和体积均显著低于对照组和空载组（P<0.05）。此外,与对照组和空载组相比,肝癌移植瘤组织内细胞经阿霉素治疗后细胞凋亡率、Bax和cleaved-caspase 3蛋白表达水平显著增加（P<0.05）,而Bcl2蛋白表达水平显著降低（P<0.05）。结论：PAPR2基因敲低可以显著抑制肝癌模型肿瘤生长和增强肝癌细胞对化疗药物的敏感性,其机制可能与PAPR2基因敲低促进肝癌细胞凋亡有关。     

Nox2在AngII诱导的H295R细胞醛固酮合成中的作用

摘要 目的：观察Nox2对AngII活化的人肾上腺皮质腺癌细胞（H295R细胞）醛固酮合成的影响。方法：将H295R细胞分为正常对照组、AngII、AngII＋gp91ds-tat（Nox2抑制剂）组、AngII+PEG-Cat（H₂O₂清除剂）组、AngII+Nox2 siRNA组及不同时间的AngII组，采用Q-PCR和western blot检测醛固酮合成酶（CYP11B2）和Nox2基因及蛋白水平；放免法检测细胞上清液醛固酮浓度；应用流式细胞术和酶标仪检测细胞内Nox2来源的ROS和H₂O₂的含量。结果：10 nmol/L AngII以时间依赖性增加H295R细胞内ROS和H₂O₂含量、Nox2和CYP11B2表达、醛固酮合成（P<0.05）。与正常对照组相比，gp91ds-tat和PEG-Cat明显降低AngII诱导的细胞内ROS和H2O2含量（P<0.05），而gp91ds-tat组和PEG-Cat组AngII诱导的细胞内ROS和H₂O₂抑制作用无差别（P>0.05）。10 nmol/L AngII 处理24 h诱导H295R细胞CYP11B2表达（P<0.05），而gp91ds-tat组、PEG-Cat组和Nox2 siRNA组明显抑制AngII诱导H295R细胞CYP11B2表达（P<0.05）。结论：Nox2来源的ROS在AngII诱导的醛固酮合成过程中起主要调控作用。     

miRNA-27a靶向SPRY2对退变椎间盘血管长入生成作用的影响

摘要 目的：探讨miRNA-27a靶向调控 Sprouty 同源物2（Sprouty Homolog 2, SPRY2）对人髓核细胞系（nucleus pulposus cells, NPCs）诱导人微血管内皮细胞（Human microvascular vascular endothelial cells, HMEC-1）血管生成作用的影响。方法：收集脊柱侧弯和椎间盘退变（Intervertebral disc degeneration, IDD）患者的椎间盘组织分别作为对照组和IDD组,通过miRNA芯片筛选差异表达的miRNA。RT-qPCR和荧光原位杂交实验验证组织中miR-27a的表达水平。慢病毒转染细胞,细胞分为Control组（未转染）;NC组（转染慢病毒空载）;sh-miR-27a组（转染 miR-27a抑制慢病毒）;miR-27a组（转染 miR-27a过表达慢病毒）;SPRY2组（转染 SPRY2 过表达慢病毒）及miR-27a +SPRY2组（转染miR-27a和SPRY2 过表达慢病毒）。RT-qPCR检测髓核细胞中miR-27a和SPRY2的表达。双荧光素酶报告基因实验验证miR-27a和SPRY2的靶向关系。将经过不同处理的髓核细胞条件培养基与完全培养基混合培养HMEC-1细胞,Transwell和管腔形成实验检测HMEC-1细胞的侵袭和血管生成能力。免疫荧光和ELISA检测髓核细胞和混合培养基中转化生长因子-β1(Transforming growth factor-β1, TGF-β1)含量。结果：与对照组椎间盘组织相比,IDD组miR-27a表达明显增加。与NC组相比,SPRY2在sh-miR-27a组中表达升高（P<0.05）,miR-27a组中表达降低（P<0.05）。与NC组相比,miR-27a组HMEC-1细胞侵袭和血管生成能力增强（P<0.05）,TGF-β1表达上升（P<0.05）;SPRY2组HMEC-1细胞侵袭数减少（P<0.05）,管腔样结构未形成。与miR-27a组相比,miR-27a+SPRY2组HMEC-1细胞侵袭和血管生成能力下降（P<0.05）,TGF-β1表达下降（P<0.05）。结论：miRNA-27a通过靶向抑制SPRY2的表达促进髓核细胞诱导HMEC-1细胞成血管能力。     

SOX2影响PD-L1表达参与乳腺癌细胞免疫逃逸的机制探讨

摘要 目的：探讨转录因子性别决定区Y框蛋白2（SOX2）基因通过诱导程序性死亡因子配体1（PD-L1）表达,促进乳腺癌细胞免疫逃逸的作用机制。方法：qRT-PCR和Western blot法检测人乳腺癌细胞系MDA-MB-231、SK-BR-3和正常乳腺上皮细胞系MCF10A中SOX2、PD-L1、T细胞免疫球蛋白及粘蛋白结构域分子3（TIM3）和核受体亚家族4 A组成员1（NR4A1）的mRNA表达量及对应蛋白表达量。分别构建SOX2敲减质粒NC和si-SOX2并转染MDA-MB-231,与细胞因子诱导的杀伤细胞构建共培养体系,连续培养48h,MTT法检测细胞增殖率,TUNEL法检测细胞凋亡率,乳酸脱氢酶（LDH）释放实验检测 T细胞杀伤率,ELISA检测T细胞活化标志物IL-2和IFN-γ,qRT-PCR 检测 T 细胞耗竭标志物 PD-1、TIM3和NR4A1 mRNA表达量。结果：与MCF10A相比,MDA-MB-231与SK-BR-3中SOX2、PD-L1、TIM3、NR4A1的mRNA表达量及对应蛋白表达量均显著升高（P＜0.05）。与空白组和NC组相比,si-SOX2组SOX2 mRNA和PD-L1蛋白表达量明显下降,细胞增殖率显著下降,细胞凋亡率增加,T细胞杀伤率增加,IL-2和IFN-γ水平升高,PD-1、TIM3和NR4A1 mRNA表达量降低（P＜0.05）。结论：SOX2基因可能通过诱导PD-L1高表达,进而促使乳腺癌细胞免疫逃逸的能力增强,沉默SOX2表达可以增强T细胞杀伤力,抑制肿瘤增殖,SOX2基因有望成为乳腺癌干预的重要分子靶点。     

齐墩果酸通过调控STAT3通路改善咪喹莫特诱导的银屑病样小鼠皮损表现

摘要 目的：观察齐墩果酸对咪喹莫特诱导的银屑病样小鼠的皮损及STAT3通路的干预作用。方法：72只BALB/c雄性小鼠,按随机数字表法随机分为空白组、模型组、甲氨蝶呤组、齐墩果酸低、中、高剂量组,每组12只,于背部备皮。除空白组外,其余各组小鼠每日于背部备皮区域涂抹5%咪喹莫特乳膏诱导银屑病样皮损;甲氨蝶呤组及齐墩果酸各浓度组每日灌胃对应药物0.2 mL/只;每日观察皮损状态并拍照记录,每日对小鼠皮损面积及严重程度（Psoriasis Area and Severity Index,PASI）进行评分;造模第4、7天取小鼠皮损区域皮肤,免疫印迹法检测皮损中STAT3信号通路中STAT3磷酸化表达情况;第7天称量小鼠体重及脾重,计算脾指数,同时取小鼠皮损区域皮肤;苏木素-伊红（HE）染色观察皮损组织病理学改变,并测量表皮厚度;免疫组织化学法及免疫组织荧光法检测皮损中CD3⁺、CD4⁺、CD8⁺T细胞浸润情况及Ki67表达情况;实时荧光定量PCR法检测皮损中白介素-17（Interleukin-17,IL-17）mRNA相对表达情况。结果：与空白组相比,造模后模型组小鼠背部皮肤出现红斑、鳞屑、浸润性皮损,第4天及第7天PASI评分升高（P<0.01）;第7天模型组表皮厚度明显增加,体重下降,脾指数上升,皮损中Ki67、CD3⁺、CD4+⁺、CD8⁺T细胞表达量升高,皮损中IL-17的mRNA相对表达量升高（均P<0.01）;第4及第7天,模型组小鼠皮损中p-STAT3的表达量均明显升高（P<0.05,P<0.01）;与模型组相比,第4天各治疗组在PASI评分略降低（P>0.05）,第7天各治疗组PASI评分明显降低（均P<0.01）;第7天齐墩果酸各剂量组小鼠体重略有上升（P>0.05）;甲氨蝶呤组小鼠脾指数明显下降（P<0.01）,齐墩果酸低、中剂量组小鼠脾指数略下降（P>0.05）;各治疗组小鼠表皮厚度较模型组明显下降（P<0.01或P<0.05）,小鼠皮肤中Ki-67表达量、CD4⁺、CD8⁺T细胞表达量均明显降低（均P<0.01）;甲氨蝶呤组、齐墩果酸低、中、高剂量组小鼠皮损中CD3⁺T细胞表达量均下降（P<0.05,P>0.05,P<0.01,P<0.01）,其中在齐墩果酸各剂量组中,中剂量组在脾指数下降、表皮厚度变薄、CD3⁺、CD4⁺、CD8⁺T细胞减少方面均略优于低、高剂量组（P>0.05）;甲氨蝶呤组及齐墩果酸中剂量组小鼠皮损中IL-17的mRNA水平较模型组明显下降（P<0.01,P<0.05）;造模给药第4天,甲氨蝶呤组小鼠皮损中p-STAT3水平较模型组明显下降（P<0.05）,齐墩果酸中剂量组略下降（P>0.05）;造模给药第7天,两个治疗组小鼠皮损中p-STAT3水平较模型组均明显下降（均P<0.01）。结论：齐墩果酸低、中、高剂量均可以改善咪喹莫特诱导的小鼠银屑病样皮损的严重程度,减轻炎性细胞浸润,中剂量组疗效较好,其机制可能通过抑制STAT3通路中p-STAT3的表达从而降低了IL-17的含量,且药效随作用时间的延长而逐渐增加。     

五灵胶囊联合富马酸丙酚替诺福韦片对慢性乙型肝炎患者氧化应激、CD4+CD25+调节性T细胞和血清MMP-1、MMP-2、TIMP-1的影响

摘要 目的：探讨五灵胶囊联合富马酸丙酚替诺福韦片对慢性乙型肝炎（CHB）患者氧化应激、CD4⁺CD25⁺调节性T细胞和血清基质金属蛋白酶-1（MMP-1）、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、基质金属蛋白酶组织抑制因子-1（TIMP-1）的影响。方法：纳入苏州大学附属传染病医院2021年6月~2022年12月期间收治的CHB患者122例,采用随机数字表法分为对照组（n=61,富马酸丙酚替诺福韦片）和研究组（n=61,五灵胶囊联合富马酸丙酚替诺福韦片）。对比两组疗效、氧化应激指标、CD4⁺CD25⁺调节性T细胞、肝功能指标[总胆红素（TBIL）、谷丙转氨酶（ALT）、谷氨酰转肽酶（GGT）]、血清MMP-1、MMP-2、TIMP-1水平和不良反应发生情况。结果：研究组的临床总有效率高于对照组（P<0.05）。两组治疗后丙二醛（MDA）下降,且研究组低于对照组同时间点;超氧化物歧化酶（SOD）升高,且研究组高于对照组同时间点（P<0.05）。两组治疗后CD4⁺CD25⁺调节性T细胞下降,且研究组低于对照组同时间点（P<0.05）。两组治疗后MMP-1、MMP-2、TIMP-1下降,且研究组低于对照组同时间点（P<0.05）。两组治疗后TBIL、ALT、GGT下降,且研究组低于对照组同时间点（P<0.05）。两组不良反应总发生率组间对比未见差异（P>0.05）。结论：五灵胶囊联合富马酸丙酚替诺福韦片治疗CHB患者,可有效减轻机体氧化应激,调节CD4⁺CD25⁺调节性T细胞和血清MMP-1、MMP-2、TIMP-1水平。     

丹参多酚酸盐通过调控肿瘤坏死因子促进大鼠心肌修复的机制研究

摘要 目的：探讨丹参多酚酸盐（Sal B）对大鼠损伤后心肌修复的机制。方法：构建新生大鼠心肌细胞H9c2体外缺氧/复氧（H/R）模型,并分组为空白对照组、缺氧/复氧组（模型组）、缺氧/复氧+TNF-α表达质粒组(TNF-α组)和缺氧/复氧+Sal B处理组(Sal B组)。为检测细胞迁移实验,分组为对照组、模型组、H/R+DMSO+Vector组、H/R+Sal B+Vector组、H/R+DMSO+TNF-α组和H/R+Sal B+TNF-α组。通过MTT实验检测各组H9c2细胞活力;免疫荧光检测H9c2心肌细胞中TNF-α细胞表面受体TNFR-1和TNFR-2的表达水平;Western-blot和RT-qPCR检测TNF-α的mRNA和蛋白表达水平以及血管生成蛋白表达水平的影响;Transwell实验检测Sal B对缺氧/复氧处理的H9c2细胞迁移的影响。结果：与对照组相比,模型组H9c2心肌细胞的活力显著下降（P<0.05）;与模型组相比,Sal B组中H9c2心肌细胞的活力显著升高（P<0.05）。免疫荧光检测结果显示,H9c2心肌细胞质膜上TNFR-1和TNFR2均有表达。Western-blot和RT-qPCR结果显示,与模型组相比,Sal B组中H9c2心肌细胞的TNF-α的mRNA和蛋白表达水平均显著升高(P<0.01),TNF-α组H9c2心肌细胞的TNF-α、Ang-2和VEGF-1蛋白的表达水平均显著升高（P<0.01）,Ang-1蛋白表达水平显著降低（P<0.01）。细胞迁移结果显示,与对照组相比,模型组和H/R+DMSO+Vector组H9c2细胞迁移能力显著下降（P<0.01）;与H/R组和H/R+DMSO+Vector组相比,H/R+Sal B+Vector组、H/R+DMSO+TNF-α组和H/R+Sal B+TNF-α组H9c2细胞迁移能力显著升高（P<0.05）。结论：Sal B能够通过上调TNF-α调控血管生成蛋白表达和促进H/R H9c2心肌细胞迁移,从而促进血管生成。     

长链非编码RNA LINC01006对前列腺癌细胞增殖和侵袭的影响

摘要 目的：探究长链非编码RNA LINC01006对前列腺癌（prostate cancer, PCa）细胞增殖和侵袭能力的影响。方法：体外培养人前列腺正常上皮细胞系RWPE-1,人PCa细胞系LNCaP、22Rv1、PC3、C4-2b,应用实时定量PCR（qRT-PCR）技术检测上述细胞LINC01006的表达;分别通过转染小干扰RNA（siRNA）或过表达LINC01006的慢病毒载体,在LNCaP和PC3细胞中敲减LINC01006或稳定过表达LINC01006;应用CCK8、克隆形成实验检测LINC01006对PCa细胞增殖能力的影响;应用Transwell侵袭实验检测LINC01006对PCa细胞侵袭能力的影响;通过网站预测LINC01006的转录调控因子及其结合位点。结果：相较于正常前列腺上皮细胞系RWPE-1,PCa细胞系LNCaP、22Rv1、C4-2b和PC3中LINC01006表达明显升高（P<0.05）。敲减LINC01006后的PCa细胞系LNCaP和PC3的增殖和侵袭能力被显著抑制（P<0.05）,过表达LINC1006则明显促进PCa细胞系LNCaP和PC3的增殖、侵袭能力（P<0.05）。通过PROMO网站预测可见AR是LINC01006的潜在转录调控因子,通过Cistrome DB数据库发现LINC01006上游启动子区域存在AR富集;敲减、抑制AR后LNCaP细胞中LINC01006表达明显升高（P<0.05）。结论：LINC01006在PCa细胞系中呈高表达,促进PCa细胞的增殖和侵袭,其受到AR负向调控,可能在PCa发生发展和去势抵抗形成过程中发挥作用。     

How catalase recognizes H2O2 in a sea of water

Monofunctional heme‐catalases have been studied for many decades but there is still an incomplete understanding of why such a large tetrameric protein with deeply buried active sites is required to accomplish such a simple reaction as H₂O₂ dismutation. Catalase accomplishes this reaction at a high rate although water at 55 M is expected to compete with H₂O₂ for the enzyme's active site. Using molecular dynamics simulations we addressed the question as to how catalase selects H₂O₂ in water. Selection is accomplished through different mechanisms: higher residence time of H₂O₂ in the vicinity of certain prevalent amino acid residues at the protein surface and substrate channel, coordinated motion of the main passage amino acids that is increased in the presence of H₂O₂, a gate valve mechanism consisting of the motion of two contiguous phenylalanine residues that drive water molecules out of the final section of the substrate channel, a hydrophobic barrier before the active site that was crossed more easily by H₂O₂ which kept most of its hydrogen bonds while passing, and finally an increased residence time for H₂O₂ at the active site. These mechanisms, based on the physicochemical differences between H₂O₂ and water, provide an explanation as to why such a large tetrameric protein with deeply buried active sites is required to accomplish efficient H₂O₂ dismutation. Proteins 2014; 82:45–56. © 2013 Wiley Periodicals, Inc.     

Mutational fitness landscape of human influenza H3N2 neuraminidase

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C2H2型锌指蛋白的研究进展

锌指基因家族是人体中最大的基因家族,它参与细胞分化、胚胎发育,并与许多疾病的发生相关．根据半胱氨酸(c)和组氨酸(H)的数目和位置可将锌指蛋白分为c2H2、c2Hc2、c2c2 CHCC2C2、C2C2C2C2等亚类．c2H2型锌指是最普遍的类型,它们作为重要的转录调控因子参与许多的生理过程．c2H2型锌指蛋白包含的锌指数目从1个到30多个不等．依据锌指的数量以及在蛋白中的分布情况,大多数c2H2型锌指蛋白属于下列3类之一：1)含3个c：H：锌指的蛋白(tC2H2);2)含多个锌指的c2H2型锌指结构蛋白(mac2H2);3)锌指成对间隔排列的c2H2型锌指蛋白(spC2H2)、一些c2H2型锌指蛋白能识别并结合特异性RNA或DNA片段．另一些则只能与RNA结合．通常锌指蛋白含锌指数目越多。它选择结合的能力就越强．     

High resolution NMR study of CAP binding site 22mer in H2O solution

High resolution proton NMR were measured for the deoxyoligonucleotide 22mer duplex corresponding to the CAP (catabolite gene activator protein) binding site of lac promotor. The spectra in the lower field region than the water resonance were taken with the time-shared Redfield pulse method by using a JEOL 500 MHz NMR spectrometer. In the imino proton region 18 peaks were separately observed, but the area intensity at 10 degrees C corresponds to 20 protons. By selective irradiation at each peak position NOEs (nuclear Overhauser effects) were observed between the imino and adenine C2H protons and between imino proton themselves. By tracing sequential NOE train carefully, 17 imino proton signals could be unambiguously assigned to each base pair except five AT base pairs at terminals. With the elevation of temperature the peaks showed gradual broadening and disappeared, which indicates the stepwise base pair opening of the duplex. Referring to the above peak assignments it can be concluded that GC20 and AT4 pairs close to terminals relax first and the base pair opening proceeds toward central GC13 and 14.     

Identification and H2O2 sensitivity of the major constitutive MAPK phosphatase from rat brain

The present study examined in subcellular fractions from rat brain the nature and sensitivity to hydrogen peroxide of constitutively expressed mitogen-activated protein kinase (MAPK) phosphatase activity. MAPK phosphatase activity was defined as the activity directed towards a dual-phosphorylated (pT/pY) peptide corresponding to the activation domain of the extracellular-regulated kinase (ERK) subtype of the MAPKs. The use of phosphatase inhibitors and biochemical analyses demonstrate that the MAPK phosphatase activity, which was highest in the microsomal membrane and soluble fractions, was attributable mainly, if not entirely, to protein phosphatase 2A (PP2A). Moreover, hydrogen peroxide (in the absence and presence of reduced glutathione) and glutathione disulfide inhibited the MAPK phosphatase activity by a dithiothreitol-reversible mechanism. These results provide direct support for mounting evidence that PP2A is a major regulator of MAPK phosphorylation in brain and suggest that inhibition of PP2A activity via reversible oxidation of a cysteine thiol(s) may underlie at least in part the activation of MAPKs occurring in response to hydrogen peroxide and oxidative stress.     

人松弛素原样蛋白H2在大肠杆菌中的表达、分离纯化及鉴定

利用聚合酶链式反应方法 ,从含有人前松弛素原cDNA基因的质粒 pMALp2X-hRLXH2上得到人松弛素原H2的编码基因 ,亚克隆到温度诱导型原核表达载体pBV2 2 0上 ,转化大肠杆菌DH5α细胞。经 4 2℃温度诱导 ,获得了目的基因的高效表达。目的蛋白质以包含体的形式存在于大肠杆菌细胞中。菌体经过超声波破碎 ,包含体裂解 ,蛋白质的体外变性还原 ,复性 ,SephadexG 75凝胶过滤层析 ,反相快速蛋白质液相层析等一系列分离纯化过程 ,得到了高纯度的重组Met 人松弛素原样蛋白H2 ,得率约为 2～ 3mg/L。对纯化的目的蛋白质进行了SDS PAGE电泳纯度分析 ,氨基酸组成分析 ,通过基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法测得目的蛋白质的分子量为 183 90 .4 (理论计算值为 183 92 .3 )。