胎肝β—族珠蛋白基因中DNaseI超敏感点的定位及其结合…

本文以人３－４个月的胎儿组织为材料，测定了人胎肝中β－族珠蛋白基因上游－２５ｋｂ内的ＤＮａｓｅＩ超敏感点图谱。这些ＤＮａｓｅＩ超敏感点在胎肺、脑组织中不存在，通过凝胶电泳阻抑法实验，发现ＤＮａｓｅＩ超敏感点ＩＩ（ＨＳＩＩ）１．９ｋｂＤＮＡ片段有组织特异性和非组织特异性的结合蛋白。     

胎肝β－族珠蛋白墓因中DNaseI超敏感点的定位及其结合蛋白的研究

本文以人３～４个月的胎儿组织为材料,测定了人胎肝中β－族珠蛋白基因上游－２５ｋｂ内的ＤＮａｓｅＩ超敏感点图谱。这些ＤＮａｓｅＩ超敏感点在胎肺、脑组织中不存在。通过凝胶电泳阻抑法实验,发现ＤＮａｓｅＩ超敏感点ＩＩ（ＨＳＩＩ）１．９ｋｂＤＮＡ片段有组织特异性和非组织特异性的结合蛋白。     

黄鳝二价体上微量DNaseI敏感性和限制性内切酶原位切割分析

采用ＤＮａｓｅＩ超敏感性分析和限制性内切酶介导的原位切口平移技术（ＲｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎＥｎｚｙｍｅＮｉｃｋＴｒａｎｓｌａｔｉｏｎ,ＲＥ－ＮＴ）对黄鳝二价体基因组结构进行了分析研究,已知ＤＮａｓｅＩ超敏感性与潜在活性基因分布密切相关,结果表明：经ＤＮａｓｅＩ介导的原位切口平移处理,在黄鳝二价体上可可展现类Ｄ带带型,而由限制性内切酶介导的原位切口平移结果显示,ＡｌｕＩ和ＭｓｐＩ均在黄鳝二价体上诱导产     

与人体ε-珠蛋白基因5''''旁侧正调控元件(ε-PREI)专一结合的调控因子的初步研究

人体ε－珠蛋白基因５′旁侧ＤＮＡ序列对该基因时空表达与调控起着十分重要的作用。本文运用凝胶电泳阻抑法,ＤＮａｓｅＩ足印法和Ｓｏｕｔｈｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析法发现在胚胎型红白血病细胞株Ｋ５６２细胞中有一个特异的核蛋白因子（简称ε－ＳＳＰ,其分子量大约为８０ｋＤ）,它能专一地与人体ε－珠蛋白基因５′旁侧一个红细胞专一和发育时期特异的正调控元件（ε－ＰＲＥＩＩ,－４４６ｂｐ到－４１９ｂｐ）相结合。竞争实验表明该因子与ε－ＰＲＥＩＩ的结合能被人体ε－珠蛋白基因启动子区ＤＮＡ片段（－１７７ｂｐ到＋１ｂｐ）所竞争;同时也能被人体β－类珠蛋白基因远侧端调控元件ＬＣＲ中的ＤＮａｓｅＩ超敏感点Ｉ核心区ＤＮＡ片段（－１０９６５ｂｐ到－１０６８１ｂｐ）与超敏感点ＩＩ核心区ＤＮＡ片段（－１４９９３ｂｐ到－１４７１８ｂｐ）所竞争。我们的结果提示了ε－ＳＳＰ不仅是一个与红细胞专一性和发育时期特异性相关的反式调控因子,而且它可能介导远侧端调控元件（ＬＣＲ）与近侧端调控元件启动子之间的相互作用,共同调节ε－珠蛋白基因在胚胎期的表达。     

三链DNA的分离纯化

λ－ＤＮＡ Ｈｉｎｄ ＩＩＩ热变性可得到单、双、三链ＤＮＡ等混合物,本文利用ＤＮａｓｅＩ选择性地将其中的单、双链酶解后,经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１５０分离,得到了纯化的三链ＤＮＡ,并对其进行了ＵＶ、荧光光谱、ＣＤ谱及Ｔｍ等性质测定。     

银杏与玉花粉肌动蛋白含量的比较研究

通过免疫印鉴鉴定,证明银杏花粉中存在肌动蛋白。同时对银杏和玉米花粉肌动蛋白含量进行了比较,结果表明,银杏花粉肌动蛋白含量明显少于玉米花粉肌动蛋白含量。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ扫描图谱显示,银杏花粉肌动蛋白含量只有玉米花粉的１／６。两种花粉ＤＮａｓｅＩ活性抑制结果表明,银杏花粉肌动蛋白含量约为玉米花粉的１／７。     

人淋巴细胞CD2基因5‘侧翼序列的克隆和鉴定

本文报告以ＣＤ２ｃＤＮＡ５＇端的片段作探针,从人Ｔ淋巴细胞基因组文库筛选阳性重组克隆,经限制性内切酶降解和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交分析,证明其中一个阳性克隆的插入片段中含ＣＤ２基因５＇侧翼顺序。经插入片段的亚克隆、限制性内切酶图谱及ＤＮＡ序列分析,鉴定出一含转录起始点及其上游序列的４．ｋｂ片段。将此片段中含转录起始点和两个ＤＮａｓｅＩ高敏感位点的２．５ｋｂ片段定向克隆到以虫萤光素酶为报告基因的表达载体     

亚硒酸钠诱发的晶状体上皮细胞DNA损伤及修复

观察了亚硒酸钠（Ｎａ２ＳｅＯ３）在体外作用于大鼠晶状体上皮细胞（ＲＬＥｃｅｌｌｓ）而造成的ＤＮＡ单链断裂（ｓｉｎｇｌｅｓｔｒａｎｄｂｒｅａｋｓ,ＳＳＢ）,并对其ＤＮＡ损伤、修复动力学做了初步研究．发现ＳＳＢ严重程度与亚硒酸钠的浓度呈线性相关,其ＳＳＢ重接修复约在３０～６０ｍｉｎ内完成．还作了有关非程序ＤＮＡ合成（ＵＤＳ）的检测,发现与ＳＳＢ相比,ＵＤＳ发生迟且持续时间更长,提示Ｎａ２ＳｅＯ３可能在体外对大鼠晶状体上皮细胞除造成ＳＳＢ以外,还可能造成其它种类的ＤＮＡ损伤．     

SA脂质体介导DNA转染细胞的进一步研究

ＳＡ脂质体可高效介导ＤＮＡ转染ＣＶ－１细胞,本文进步研究表明,ＳＡ脂质体还可介导ＤＮＡ高效瞬时和稳定地转染ＣＨＯ和ＣＯＳ细胞。ＳＡ脂质体和ＤＮＡ形成复合物可保护ＤＡＮ不被核酸内切酶和ＤＮａｓｅＩ降解。荧光标记和细胞松驰素Ｂ抑制实验分别表明,ＳＡ脂质体易被细胞吸附,主要通过内吞传送ＤＮＡ进入细胞,而Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ主要通过融合传送ＤＮＡ进细胞。     

鸡AChRγ亚基基因远端E盒子与myogenin的相互作用

业已证明,鸡ｎＡｃｈＲγ亚基基因５连接区,－５０９／－３０２,－３２４／＋３６片段可独立激活异源启动子ＳＶ４０的转录活性,γ基因近端两个Ｅ盒子（ＣＡＮＮＴＧ）与生肌调节因子（ｍｙｏｇｅｎｉｎ）的相互作用及转录激活分析表明,近端两个Ｅ盒子是γ启动子活性必不可少的,但却是不充分的,利用胶阻滞和ＤＮａｓｅＩ足级试验观察了鸡ｎＡｃｈＲγ基因远端Ｅ盒子与ＧＳＴ－ｍｙｏｇｅｎｉｎ融合蛋白的相互作用,胶阻滞试验