高效检测分析玫瑰黄链霉菌Men-myco-93-63线性质粒

【目的】建立一种高效检测和分析玫瑰黄链霉菌Men-myco-93-63内源质粒的方法。【方法】根据“链霉菌线性质粒5′末端都结合有共价蛋白”这一性质,通过改进琼脂糖包埋块制作方法,发明了一项快速高效检测链霉菌质粒种类、构型及大小的技术,称为“包埋块二次处理法”,该方法还能从正反两方面表明共价蛋白的存在与否。【结果】利用此方法高效检测出了玫瑰黄链霉菌Men-myco-93-63中存在两种线性质粒,双向电泳验证了该方法的正确性,推测质粒大小分别约为 47 kb和53 kb。【结论】利用本研究发明的方法首次成功地检测了玫瑰黄链霉菌Men-myco-93-63中的内源线性质粒。     

淋病奈瑟菌粘附性质粒的研究

从1株临床分离的淋病奈瑟菌(N.gonorrheae,Ng)分别检测出耐氨苄青霉素(AMPr)及四环素(TCr)的2种质粒(R质粒),其分子量分别为25.2 Mu和4.5 Mu.进一步研究发现,编码TCr的质粒也编码普通菌毛,因而与其粘附性有关.消除此R质粒不但细菌的TCr消失,电镜下观察其菌毛几乎全部消失,其粘附性也显著降低,故此R质粒也被确认为是粘附性质粒(Adh质粒).     

用ribozyme抑制增殖细胞核抗原的表达对HeLa细胞增殖的影响

增殖细胞核抗的（ＰＣＮＡ）是ＤＮＡ聚合酶δ的辅助蛋白,它是细胞染色体ＤＮＡ复制所必需的。人工设计的ｒｉｂｏｚｙｍｅ具有可特异地切割ＰＣＮＡｍＲＮＡ的性质,将此ｒｉｂｏｚｙｍｅ的自剪体内表达质粒导入ＨｅＬａ细胞,从细胞决ＲＮＡ中分离相应部分能在体外切割靶ＲＮＡ片段,证明此表达质粒在细胞内能表达出有活性的ｒｉｂｏｚｙｍｅ分子。与对照相比,导入ｒｉｂｏｚｙｍｅ表达质粒的ＨｅＬａ细胞进入Ｓ期的时间从１２ｈ     

第三章 作为克隆载体的质粒

质粒的基本性质 质粒被广泛用作克隆载体。在本文讨论质粒的应用之前,回顾质粒的一些基本性质是合适的。质粒是复制子,能在染色体外稳定地遗传。应该强调的是,染色体外的核酸分子不一定是质粒。因为上面的定义含意是:遗传的同质性、单体的分子大小恒定、有能力独立于染色体而进行复制。因此,在巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)中发现的     

第三章 作为克隆载体的质粒

质粒的基本性质 质粒被广泛用作克隆载体。在本文讨论质粒的应用之前,回顾质粒的一些基本性质是合适的。质粒是复制子,能在染色体外稳定地遗传。应该强调的是,染色体外的核酸分子不一定是质粒。因为上面的定义含意是:遗传的同质性、单体的分子大小恒定、有能力独立于染色体而进行复制。因此,在巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)中发现的     

淋病奈瑟菌的耐药质粒及其转移机制

质粒作为一种染色体外的遗传物质,可以编码很多重要的生物学性状。淋病奈瑟菌（淋球菌）质粒可以分为３种类型：耐药性质粒、隐蔽性质粒和接合性质粒。耐药性质粒包括耐青霉素质粒和耐四环素质粒。质粒在菌株间的转移主要是通过转化和接合两种方式进行。ＤＮＡ片段中的１０ｂｐ特异摄取序列与有效转化密切相关,而转座子在接合中起重要作用。     

用ribozyme抑制增殖细胞核抗原的表达对HaLa细胞增殖的影响

增殖细胞核抗原(PCNA)是DNA聚合酶δ的辅助蛋白,它是细胞染色体DNA复制所必需的。人工设计的ribozyme具有可特异地切割PCNA mRNA的性质,将此ribozyme的自修剪体内表达质粒导入HeLa细胞,从细胞总RNA中分离相应部分能在体外切割靶RNA片段,证明此表达质粒在细胞内能表达出有活性的ribozyme分子。与对照相比,导入ribo-zyme表达质粒的HeLa细胞进入S期的时间从12 h推迟到20 h,而突变ribozyme的对照表明反义抑制对细胞进入S期的影响较小(推迟到15 h)。证明该ribozyme能有效抑制He-La细胞DNA复制,同时亦证明PCNA对于细胞DNA复制及细胞周期进程的重要性。     

改善大分子质粒DNA重组效率的新方法

采用两次连接法对一个质粒载体为7.65 kb,插入子为1.47 kb的片段进行重组连接,使连接效率大大提高.此方法对于大分子的质粒DNA重组是非常有效的.     

线性质粒

在染色体外DNA分子的研究领域中,一支异军正在悄悄突起,这就是线性质粒的研究。 迄今报导的多数质粒都是环状的DNA分子。近年来,人们相继在真核生物中发现了一些线状质粒。例如,玉米线粒体中的SⅠ和SⅡ质粒(1,2)、Sarghum线粒体中质粒(8)、真菌Ascobolus immersus中的质粒。     

简单快速分离无RNA的大肠杆菌质粒DNA的方法

本文介绍一种简单快速分离质粒ＤＮＡ方法。此方法有两个主要步骤。用这种方法分离的质粒ＤＮＡ纯度高、无ＲＮＡ,并可用于酶切、连接等操作。     

超广谱β-内酰胺类抗生素的耐药性与耐药质粒介导

目的：观察超广谱β-内酰胺类抗生素的敏感性与耐药质粒的关系,探讨耐药质粒在细菌之间传递的方式。方法：(1)配制耐药质粒提取试剂;(2)对LB细菌培养液进行耐药质粒的提取与检测;(3)对从12株ESBL细菌中提取的质粒进行质粒转化、质粒接合传递及药敏试验。结果：(1)此12株ESBL细菌中提取的耐药质粒进行电泳显示此质粒较大,约20．0kb。(2)质粒转化后,其转化子对β-内酰胺类抗生素全部耐药,对氨基糖甙类、喹诺酮类和磺胺类全部敏感。质粒结合传递体的耐药谱与以上相同。结论：β-内酰胺类抗生素的敏感性与耐药质粒介导密切相关,耐药质粒能把耐药基因传递给其他细菌,在细菌之间相互传递。     

蛭弧菌BDG-9质粒不稳定性研究

本文建立了研究难于单独连续培养的专性蛭弧菌质粒稳定性的方法体系。应用此方法体系发现并证明了在专性蛭弧菌BDG9中所含的质粒pSTⅠ存在着独特的质粒缺失现象,当蛭弧菌BDG9单独培养时,在通常决定质粒稳定性的复制功能和分配功能都正常的情况之下,随着细胞的传代,质粒pSTⅠ逐渐丢失,蛭弧菌的生长繁殖也逐渐停止,表明质粒pSTⅠ的存在对BDG9细胞单独生长有重要作用。     

甘露聚糖酶基因在毕赤酵母中的表达及酶学性质研究

采用PCR的方法,以枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis基因组 DNA 为模板,克隆出甘露聚糖酶MAN的成熟肽编码序列,将其插入巴斯德毕赤酵母Pichia pastoris表达载体pPIC9K中,并位于α-因子信号肽序列的下游,获得重组质粒pPIC9K-MAN。重组质粒线性化后用聚乙二醇法导入毕赤酵母Pichia pastoris菌株GS115中,经大量筛选,获得高效分泌表达甘露聚糖酶的毕赤酵母工程菌株MAN22。将此菌株在5 L发酵罐中进行高密度发酵,测定酶活最高达1102IU /mL,同时对重组甘露聚糖酶的性质进行了初步研究。     

发根农杆菌Ri质粒及其在植物科学中的应用

阐述了发根农杆菌的性质及Ri质粒的结构和功能,介绍了毛状根的诱导及其鉴定方法,并对Ri质粒在植物基因工程、植物次生代谢产物生产、植物品种改良和植物栽培等方面的应用进行了综述。     

博尔纳病病毒pEGFP-p24基因重组质粒的构建及鉴定

构建博尔纳病病毒pEGFP-p24基因重组表达质粒。通过PCR方法扩增获得博尔纳病痛毒p24基因的完整序列,将此片段定向克隆到pEGFP-N1载体多克隆位点区,筛选重组阳性菌株,提取重组质粒,利用PCR方法和核酸序列测定验证重组质粒构建的正确性。PCR及核酸序列测定证明博尔纳病病毒pEGFP-p24基因重组表达质粒构建成功。构建的重组质粒将为研究博尔纳病病毒p24基因在真核细胞中的功能和作用提供实验依据。     

质粒复制与反义RNA的调控机制

质粒作为基因克隆和表达载体在基因工程和分子生物学研究中被广泛地应用。质粒自身的性质,如复制,质粒不亲和性的分子基础,传代中的分配机制和接合转移诸方面的研究也在深入地开展。这些研究为进一步完善质粒载体的改造提供了理论基础。     

酵母菌基因工程载体——pCN系杂种质粒的构建及其特性的研究

pCN系质粒是利用DNA重组技术,以YRp7和pAT153为原始质粒所构建的酵母菌基因工程载体。pCN系质粒由酵母菌TRPL基因的1．4 kb DNA片段和完整的pAT 153分子组成。根据pAT153质粒中所插入的TRPl DNA片段的方向性,pCN质粒有两种不同的构型。在性质上,pCN系质粒保留了 YRp7高转化能力和pAT153高拷贝水平,同时它在酵母受体中的稳定性比’YPp7明显提高。pCN质粒中尤以pCN60可作为酵母基因工程的载体。     

沙眼衣原体质粒蛋白pgp3的研究进展

沙眼衣原体分泌性蛋白在沙眼衣原体致病过程中起重要作用,质粒编码的蛋白pgp3(即pORF5)是迄今为止发现的唯一由沙眼衣原体质粒编码的分泌性蛋白。pgp3在沙眼衣原体感染早期即可表达,在感染人群中具有很强的免疫原性,且人抗体对pgp3的识别具有高度的结构依赖性,对该蛋白的研究将有助于进一步了解衣原体质粒编码蛋白的作用及衣原体致病机制,以寻找更好的衣原体诊断方法和防治措施。本文就沙眼衣原体质粒编码蛋白pgp3的生物学性质及其致病机制作一简要综述。     

人类泡沫逆转录病毒

根据 pHSRV1 3全基因组图谱和 pBR3 2 2质粒载体上限制酶切位点的性质 ,利用分子克隆技术 ,使 pHSRV1 3质粒上的bel1基因缺失突变并重新构建质粒载体 pHSRV1 3 -BR3 2 2 ,最后克隆到 1株含有目的基因组片段的重组质粒。     

临床分离的宋内志贺氏菌质粒图象作为流行病学工具的局限性

<正> 质粒图象的确定已表明为流行病学研究的一个强有力工具。琼脂糖凝胶电泳的质粒指纹图可被用于鉴别几种在不同菌属间传播的流行株和“流行质粒”。如同具有相同血清型的细菌菌株在地理上相距很远的地方能被发现一样,同一国家相距较远的地区可能发现同一或几乎相同的抗性质粒。与所做的广泛的沙门氏菌属流行病学研究相比,世界各地对志贺氏菌电泳类型的比较工作所做甚少。在最初的工作中,我们注意到从在墨西哥Guadalajara的美国学生中所分离的宋内氏志贺氏菌有完全相同的质粒,此点提示为同一来源。为了确定和比较整个质粒,我们研究了涉及美国、墨西哥、危地马拉、埃及、西非和泰国所分离的75株宋内氏痢疾菌的质粒情况。