热应激心肌细胞损伤的线粒体机制探讨

目的：观察热应激对大鼠凡肌细胞线粒体氧化磷酸化和钙代谢功能的影响、研究线粒体膜渗透性转移（ＰＴ）的变化及其病理学意义、探索热应激心肌细胞损伤发生机制。方法：用Ｋｌａｒｋ氧电极极谱法测定线粒体呼吸功能,用生物发光法主肌ＡＴＰ含量及线粒体Ｃａ＾２＋。ＡＴＰ酶活性;用电感耦合等离子－原子发射光谱仪测定线粒体内Ｃａ＾２＋含量,用分光光度法测定线粒体膜ＰＴ。结果：热应激大鼠心肌细胞线粒体的呼吸控制率（ＲＣＰ     

bcl-2基因转染对热应激心肌细胞保护作用的机制探讨

目的 :探讨bcl 2基因转染对热应激心肌细胞保护作用的机制。方法 :分离、培养乳鼠心肌细胞 ,用脂质体转染法将bcl 2基因转染入心肌细胞 ,进行热应激。用化学发光法测定bcl 2基因转染对热应激心肌细胞线粒体H ATPase合成活力的影响 ,用荧光分光光度法测定bcl 2基因转染对热应激心肌细胞Caspase3活性的影响。 结果 :bcl 2基因转染可以使 4 1℃和 4 3℃热应激心肌细胞线粒体H ATPase合成活力与转染前相比显著升高 (P <0 .0 1) ,可以使 4 1℃和 4 3℃热应激心肌细胞Caspase3活性与转染前相比显著降低 (P <0 .0 1)。结论 :bcl 2基因转染对热应激心肌细胞凋亡的保护作用可能与其保护心肌细胞线粒体H ATPase合成活力 ,并最终阻抑Caspase3活化有关     

猪胚胎热应激后耐低温性的变化

手术或屠宰采取措囊胚（Ｂ）、扩张囊胚（ＥＢ）。孵出囊胚（ＨＢ）,置于含１０％ＦＣＳ的ＧＩＴ液中进行４２℃水浴１０分钟的热应激和－７℃酒精糟１０分钟的低温感受试验。结果,热应激对猪胚的存活率及发育率均无影响（Ｐ＞０．０５）;而热应激提高了猪胚对低温的耐受程度,热应激的胚胎再经低温感受试验后,培养２４小时的ＥＢ（φ＜５０）、ＥＢ（φ≥５０）和ＨＢ的活细胞数分别较相应的对照组提高３５．５％、４１．３％和５１．１％,差异显著（Ｐ＜０．０５）,但在热应激处理液中添加了蛋白合成抑制剂者没有产生这一效果,此结果证明,热应激很可能诱发猪胚内产生抗低温的应激蛋白质,这为进一步研究猪胚胎冷冻和改进猪胚冷冻前处理提供了依据和可能途径。     

caspase抑制剂z-VAD-fmk对阿霉素损伤乳鼠心肌细胞calumenin、caspase-3、GRP78及GRP94表达的影响

目的：研究细胞凋亡限速酶caspase广谱抑制剂z-VAD-fmk对阿霉素损伤心肌细胞calumenin、caspase-3、GRP78及GRP94表达的影响,探讨心肌细胞网腔钙结合蛋白与内质网应激及心肌细胞凋亡是否存在相互调控关系。方法：原代培养乳鼠心肌细胞实验分为3组：对照组（正常细胞）、阿霉素组（3 mg/L阿霉素+心肌细胞）、Z-VAD-fmk组（3 mg/L阿霉素+ 0.1μmol/L Z-VAD-fmk +心肌细胞）,每组细胞设3个复孔,分别处理后置37℃、CO₂培养箱中培养24 h阿霉素组、z-VAD-fmk组。采用免疫组化方法检测培养乳鼠心室肌细胞α-SMA蛋白。采用Westernblot技术检测各组心肌细胞Calumenin、内质网应激伴侣蛋白GRP78、GRP94及caspase-3表达。结果：与对照组相比较,阿霉素组心肌细胞calumenin表达明显减少（P < 0.01）,GRP78、GRP94及caspase-3表达增加（P < 0.01）。与阿霉素组相比较,z-VAD-fmk组心肌细胞calumenin表达增加（P < 0.01）,而GRP7,GRP94及caspase-3减少（P < 0.01）。结论：caspase广谱抑制剂z-VAD-fmk增加阿霉素损伤心肌细胞calumenin表达进而缓解内质网应激。     

银杏叶提取物和槲皮素对心肌细胞肥大的防治作用及其机制

目的：探讨银杏叶提取物（EGb）及其单体槲皮素（Que）对心肌细胞肥大的防治作用及其机制。方法：采用血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导新生大鼠心肌细胞肥大模型;分别在培养液中加入EGb（40／μg／ml）或Que（4／μg／m1）,观察Lowry法测定心肌细胞蛋白质含量的变化;测定SOD活性和MDA含量观察心肌细胞氧自由基代谢的变化;Western blot方法检测心肌细胞p-ERK1／2、p-JNK和p-P38蛋白表达;应用RT-PCR法检测心肌细胞c-fos mRNA表达。结果：①EGb和Que能明显抑制AngⅡ引起的心肌细胞总蛋白质含量的增加;②EGb和Que可显著提高SOD活性,降低MDA含量;③AngⅡ诱导的心肌细胞p-ERK1／2、p-JNK和p-P38表达均明显增强,Que能明显抑制AngⅡ诱导的p-JNK表达;④EGb、Que、可降低AngⅡ诱导心肌细胞c-fos mRNA表达的上调水平。结论：EGb和Que对AngⅡ诱导的心肌细胞肥大有明显的防治作用,Que的作用机制可能与ROS／JNK／c-fos信号通路有关。氧化应激参与了心肌肥大的发生发展过程。     

大鼠冷束缚应激时胃粘膜损伤与外周β—内啡肽关系的实验研究

目的：探讨冷束缚应激大鼠血浆及胃黏膜中β－内啡肽（β－endorphine)的变化及作用。方法：制作大鼠冷束缚应激模型,以放免法测定应激0,1／4,2,8h血浆及胃黏膜中β－内啡肽的含量,同时测定胃液pH,胃黏膜溃疡指数（UI）,另设两预处理组,分别于应激前15分钟用纳洛酮（1．6mg/kg)和等容量生理盐水颈静脉注射,测定其UI及胃液pH,结果：整个应激过程中血浆及胃黏膜中β－内啡肽的含量无显著变化（P＞0．05）,应激各组胃黏膜UI均显著高于未应激组（P＜0．01）,应激15分钟组胃液pH显著高于未应激组（P＜0．01）,临终前（应激8h组）胃液pH显著高于对照组（P＜0．05）,阻断阴UI及胃液pH较对照组均无显著变化（P＞0．05）,结论：应激过程中血浆及胃黏膜β－内啡肽含量稳定,阻断β－内啡肽不影响胃液pH及UI,外周β－内啡肽变化对应激所致胃黏膜损伤可能不起重要作用。     

热应激对齐口裂腹鱼非特异性免疫功能及细胞凋亡的影响

为研究热应激及恢复对齐口裂腹鱼（Schizothorax prenanti）机体损伤、非特异性免疫功能和细胞凋亡的影响,测定了热应激前（19℃,对照组）、热应激（27℃,0、2h、4h、8h、12h,实验组）及恢复适温6h后（19℃,恢复组）的非特异性免疫相关生理生化指标及细胞凋亡率。结果表明,超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase,SOD）在应激0、4h、8h、12h后活性上升,应激0和12h与应激前差异极显著（P<0.01）;髓过氧化物酶（Myeloper oxidase,MPO）在热应激4h达到最大值;谷草转氨酶（Glutamic-oxalacetic transaminase,GOT）的活性实验组与对照组差异不显著,恢复6h后GOT活性极显著高于对照组（P<0.01）;谷丙转氨酶（Glutamic-pyruvic transaminase,GPT）在应激0、4h、12h和恢复到适温6h后的活性极显著高于对照组（P<0.01）;丙二醛（Malondialdehyde,MDA）含量在热应激2h、4h和12h时极显著高于对照组（P<0.01）,8h时显著高于应激前（P<0.05）,应激12h MDA含量达到最大值,恢复6h后MDA含量恢复至应激前水平（P<0.05）;补体3（Complement 3,C3）含量升高,在热应激12h时显著高于对照组（P<0.05）,恢复6h C3含量下降,与对照组差异不显著（P>0.05）。持续27℃热应激不同时间后,各实验组的细胞凋亡率都显著高于对照组（P<0.05）,且在处理4h时细胞凋亡率达到最高值（52.42%）,恢复19℃ 6h后细胞凋亡率显著降低（P<0.05）。研究表明,持续27℃热应激改变了机体非特异性免疫力,导致鱼体出现炎症,损伤细胞,恢复到适温后,鱼体各项机能逐渐恢复。研究结果可为深入研究齐口裂腹鱼高温适应调控机理提供基础数据,也为齐口裂腹鱼养殖、运输等过程中的温度控制提供科学依据。     

衣霉素诱导大鼠心肌细胞内质网应激凋亡模型的构建

目的：通过衣霉素诱导内质网应激建立新生大鼠心肌细胞凋亡模型。方法：不同浓度、不同时间的衣霉素作用于原代培养乳鼠心肌细胞,通过MTT实验和流式细胞术测定心肌细胞的存活率和凋亡率,Western blot检测内质网应激蛋白GRP78,CHOP表达水平。结果：①与阴性对照组相比,衣霉素具有损伤心肌细胞的作用,并呈现剂量与时间依赖关系（P〈0.05,n=12）。②通过流式细胞术判断心肌细胞死亡的性质,当衣霉素浓度为100ng/ml,作用72h时,心肌细胞存活率和凋亡率分别为57.4±3.2%（n=12）,25.9±5.8%（n=3）。提示衣霉素损伤细胞的形式主要为凋亡性死亡。③内质网应激蛋白GRP78和CHOP表达于6h开始增加,24h达到峰值,随后呈下降趋势。结论：应用衣霉素成功诱导SD乳鼠心肌细胞内质网应激凋亡模型,衣霉素的最佳诱导浓度为100ng/ml,作用时间为72h。     

miRNA378*表达对柯萨奇B3病毒感染乳鼠心肌细胞凋亡、网腔钙结合蛋白、内质网应激伴侣蛋白表达的影响

目的：研究沉默miRNA378^*表达对柯萨奇B3病毒（CVB3）感染心肌细胞凋亡、内质网应激、网腔钙结合蛋白（calumenin）影响。方法：原代培养乳鼠心肌细胞分为：对照组（正常细胞）、柯萨奇病毒感染组（正常细胞+柯萨奇B3病毒）、miRNA378^*沉默对照组（正常细胞+柯萨奇B3病毒+转染miRNA378^*空质粒）、miRNA378^*沉默组（正常细胞+柯萨奇B3病毒+转染miRNA378^*沉默质粒）,各组细胞分别转染和感染处理后置37℃、CO₂培养箱中培养3 d。检测细胞α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、细胞凋亡率、网腔钙结合蛋白、葡萄糖调节蛋白78（GRP78）及内质网应激信号通路因子激活转录因子6（ATF6）、转录因子C/EBP同源蛋白（CHOP）的表达。结果：通过检测ɑ-SMA蛋白,证实分离乳鼠细胞为心室肌细胞。TUNEL法检测不同组心室细胞凋亡情况发现,柯萨奇病毒感染组心室肌细胞凋亡明显,与柯萨奇病毒感染组心肌细胞相比较,miRNA378^*沉默组心肌细胞凋亡细胞量明显减少。与柯萨奇病毒感染组比较,Calumenin表达减少（P<0.01）,而GRP78、ATF6、CHOP表达增加（P<0.01）。结论：CVB3病毒感染心肌细胞作用与miRNA378^*,引发内质网应激并激活信号通路因子,心肌细胞凋亡增加。     

热应激大鼠心肌钙代谢的变化及其机理探索

心肌细胞内钙离子对心功能的调节有着极其重要的作用。本研究观察了不同热应激强度下大鼠心肌细胞内质网、线粒体中钙含量,Ｃａ２＋－ＡＴＰ酶活力,内质网Ｃａ２＋主动转运速率及心肌ＡＴＰ含量的变化。研究结果表明,热应激大鼠心肌细胞内质网、线粒体钙含量随肛温升高显著下降;大鼠肛温达４２℃时,其钙含量分别较对照下降３２．２％和４６．５％;心肌细胞内质网和线粒体Ｃａ２＋－ＡＴＰ酶活力亦明显降低,线粒体Ｃａ２＋－ＡＴＰ酶活力下降幅度更为激烈。热应激大鼠心肌内质网Ｃａ２＋主动转运速率和Ｃａ２＋－ＡＴＰ酶活力变化趋势相同,且两者呈密切相关关系。热应激大鼠心肌ＡＴＰ含量亦随肛温升高大幅度降低,当动物肛温超过４２℃时,其可降至对照动物的３７．５％;热应激大鼠心肌ＡＴＰ含量的变化与内质网Ｃａ２＋－ＡＴＰ酶活力关系密切。实验结果提示：热应激心肌细胞质膜受损所致细胞Ｃａ２＋主动转运功能紊乱及心肌能量代谢障碍是心肌钙稳态失调的主要原因;心肌细胞钙代谢紊乱是诱导心肌细胞严重受损,导致热应激机体心血管功能失调,甚至心功能衰竭的重要机制     

Recent advances in the study of Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus replication and pathogenesis

It has now been over twenty years since a novel herpesviral genome was identified in Kaposi's sarcoma biopsies. Since then, the cumulative research effort by molecular biologists, virologists, clinicians, and epidemiologists alike has led to the extensive characterization of this tumor virus, Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus(KSHV; also known as human herpesvirus 8(HHV-8)), and its associated diseases. Here we review the current knowledge of KSHV biology and pathogenesis, with a particular emphasis on new and exciting advances in the field of epigenetics. We also discuss the development and practicality of various cell culture and animal model systems to study KSHV replication and pathogenesis.     

The structure, reproduction and taxonomy of Vidalia and Osmundaria (Rhodophyta, Rhodomelaceae)

Comprises species occurring mostly in subtidal habitats in tropical, subtropical and warm-temperate areas of the world. An analysis of the type species, V. spiralis (Sonder) Lamouroux ex J. Agardh, a species from Australia, establishes basic characters for distinguishing species in the genus. These characters are (1) branching patterns of thalli, (2) flat blades that may be spiralled on their axis, (3) width of the blade, (4) primary or secondary derivation of sterile and fertile branchlets and (5) position of sterile and fertile branchlets on the thalli. Application of the latter two characters provides an important basic method for separation of species into three major groups. Osmundaria , a genus known only in southern Australia, was studied in relation to Vidalia , and its separation from the Vidalia assemblage is not accepted. Species of Vidalia therefore are transferred to the older genus name, Osmundaria. Two new species, Osmundaria papenfussii and Osmundaria oliveae are described from Natal. Confusion in the usage of the epithet, Vidalia fimbriala Brown ex Turner has been clarified, and Vidalia gregaria Falkenberg, described as an epiphyte on Osmundaria pro/ifera Lamouroux, is revealed to be young branches of the host, Osmundaria prolifera.     

New or rare chromosome counts in Artemisia L. (Asteraceae, Anthemideae) and related genera from Kazakhstan

Fifteen chromosome counts of six Artemisia taxa and one species of each of the genera Brachanthemum, Hippolytia, Kaschgaria, Lepidolopsis and Turaniphytum are reported from Kazakhstan. Three of them are new reports, two are not consistent with previous counts and the remainder are confirmations of very scarce (one to four) earlier records. All the populations studied have the same basic chromosome number, x = 9, with ploidy levels ranging from 2x to 6x. Some correlations between ploidy level, morphological characters and distribution are noted.     

肝癌中HBV和HCV基因和抗原的分布及意义

采用原位分子杂交方法检测HCV RNA及HBV X基因;采用免疫组织化学方法研究HCV核心抗原,非结构区C33c抗原及HBxAg在肝细胞肝癌中的定位及分布.结果表明(1)HCV RNA、HBV X基因在肝细胞肝癌组织检出率分别为40%(55/136)和82%(112/136).HCV RNA定位于癌细胞的胞浆内,阳性细胞呈散在、灶状及弥漫分布三种形式;HBV X基因在肝癌细胞中的分布呈胞浆型、核型及核浆型,阳性细胞也呈上述三种分布形式;(2)HCV C33c抗原、核心抗原在肝细胞肝癌中的阳性率为81%(133/164)及86%(141/164).C33c抗原定位于癌细胞及肝细胞的胞浆内;核心抗原既定位于癌细胞核中,又可定位于胞浆中.C33c抗原阳性细胞以灶状分布为主;而核心抗原阳性细     

Selection with two alleles and complete dominance

For a plant selection model with frequency-independent viabilities, fertilities and selfing rates, it is shown that apart from global fixation, for certain parameter combinations a protected polymorphism and facultative fixation (either allele may become fixed according to initial frequencies) may both occur. Facultative fixation requires different selling rates for the dominant and recessive type. Protection of the polymorphism requires resource allocation for male and female function. In this connection the problem of purely genetically caused population extinction is discussed.
For general frequency dependence and regular segregation, the chances for establishment of a completely recessive gene are compared to those of a completely dominant gene. It is proven that the process of establishment of the recessive gene, despite a fitness advantage, may be considerably endangered by drift effects if random mating prevails. The recessive gene may reach the same effectivity in establishment as a dominant gene, only if the recessive homozygote mates exclusively with its own type during the period of establishment.