RAPD分析在绢丝昆虫亲缘关系研究中的应用Ⅱ.柞蚕品种间的遗传差异

采用RAPD技术,对5个柞蚕品种的遗传差异进行比较研究.结果表明,所采用的40个随机引物中,有27个引物扩增谱带清晰且重复性较好,扩增总片段数253条,单个引物的扩增片段数在4～16之间,片段大小在0.33～3.0kb之间.不同柞蚕品种间的遗传差异较小,遗传距离(D)在0.066～0.1659之间,根据D值,由UPGMA聚类分析软件绘制了它们的分子进化树。Abstract:Random amplified Polymorphic DNA (RAPD) was used to analyze the genetic diversity among Antheraea pernyi.The genetic variance of five Antheraea pernyi was studied.The result showed that:27 of 40 arbitrary primers could amplify clear and repeating bands.A total of 262 fragments were obtained.Each primer gave 4~16 bands and the average was 9.7.The length of the band was 0.33~3.0kb.The D value between different breeds of Antheraea pernyi was 0.066~0.1659.The D value was used to construct a dendrogram by UPGMA.     

RAPD分析在绢丝昆虫亲缘关系研究中的应用Ⅰ.蓖麻蚕品种间的遗传差异

用RAPD技术对蓖麻蚕基因组DNA进行多态性研究，分析了5个蓖麻蚕品种间的遗传差异。结果表明，所采用的40个随机引物中，有27个引物扩增谱带清晰且重复性较好，扩增总片段数达243个，单个引物的扩增片段数在4～17之间，平均为9条，片段大小在033～30kb之间。不同蓖麻蚕品种间的遗传距离(Ｄ)在00683～01603之间，根据Ｄ值，由UPGMA聚类分析软件绘制了它们的聚类分子树。     

RAPD分析在绢丝昆虫亲缘关系研究中的应用I.蓖麻蚕品种间的遗传差异

用RAPD技术对蓖麻蚕基因组DNA进行多态性研究,分析了5个蓖麻蚕品种间的遗传差异。结果表明,所采用的40个随机引物中,有27个引物扩增谱带清晰且重复性较好,扩增总片段数达243个,单个引物的扩增片段数在4～17之间,平均为9条,片段大小在0.33～3.0kb之间。不同蓖麻蚕品种间的遗传距离(D)在0.0683～0.1603之间,根据D值,由UPGMA聚类分析软件绘制了它们的聚类分子树。Abstract：Random amplified Polymorphic DNA (RAPD) was used to analyze the genetic diversity among eri sickworm. The genetic variance of five erisickworm was studied. The result showed that: 27 of 40 arbitrary primers could amplify clearly with repeatable bands.243 fragments were obtained.Each primer gave 4～17 bands and the average was 9.The length of the band was 0.33～3.0kb. The genetic distance (D) value between different breeds of Eri Silkworm was 0.0683～0.1603. The D value was used to construct a dendrogram by UPGMA.     

樱桃品种资源间遗传差异的RAPD分析

以来自欧洲甜樱桃（Prunus avium）和中国樱桃（Prunus pseudocerasus）的11份品种资源为试材,用34个随机引物对这些种质间的RAPD多态性进行了分析。除了S1090外,几乎所有的引物均能将欧洲甜樱桃品种和中国樱桃品种区分开来。用11个能在甜樱桃品种间表现多态性的引物所产生的101个位点进行相似系数的计算和聚类分析,结果将供试种质划分为两大组群：中国樱桃组群和甜樱桃组群,其中甜樱桃组群又可分为两个亚组。这一研究结果对了解这些种质的遗传差异程度．从而有目的地拓宽育种材料的遗传背景和在育种过程中创造出较大幅度的遗传变异有重要意义。     

利用RAPD研究桂林桂花品种间的亲缘关系

采用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术,从100个随机引物中筛选出扩增效果较好的20个引物,分 析桂林市23个桂花品种的基因组多态性。20个随机引物共检测到193个位点,其中多态位点114个,占 59.1%。并进行了聚类分析,构建出树状聚类图,将这些品种划分为4个品种群,与传统分类学结果一致。结 果表明,以基因型而不是以表现型为基础,分析桂花品种间的区别是可能的。该技术为解决桂林市的桂花品 种分类问题提供了重要依据。     

利用RAPD对稻蝗属昆虫亲缘关系的研究

通过20个随机引物的PCR扩增,得到了日本主要稻蝗的随机扩增多态性DNA（RAPD）图谱,根据扩增结果,计算了种间相似系数和遗传距离,建立了UPGMA系统树。结果表明,分布没有重叠、种间容易交配、能产生杂种的中华稻蝗台湾亚种与小翅稻蝗的亲缘关系最近;分布重叠的日本稻蝗与中华稻蝗台湾亚种、日本稻蝗和小翅稻蝗的亲缘关系较近。小稻蝗与其它3种稻蝗的亲缘关系较远。     

西瓜种质资源遗传亲缘关系的RAPD分析

利用RAPD技术对国内外32份西瓜主栽品种与其骨干亲本及野生类型的遗传亲缘关系进行了研究。从720个随机引物（10bp)中筛选出15个能产生稳定多态性的引物用于RAPD反应,共扩增出104条DNA带,其中多态性DNA条带43条,占41．35％,平均每个引物扩增的DNA条带的数目为7．0条。聚类分析将供试材料分为6个类群：1个东亚生态型类群、1个美国生态型类群、2个中间生态型类群和2个非洲野生型类群,与传统的西瓜生态型分类基本吻合。每个生态型类群都有其特有的扩增（缺失）条带,同时分析了同一生态型中各个品种之间的亲缘关系及其品种的特异条带。本实验结果不仅从分子水平验证了西瓜是遗传基础狭窄的作用,而且在分子水平对西瓜传统分类与地理生态型分类进行了分析。     

石蒜属种间亲缘关系RAPD分析

采用RAPD标记构建了石蒜属Lycoris植物13个种的指纹图谱。从520个随机引物中筛选出清晰且多态性高的41个引物,共产生了350条DNA片段,分子量在0.3-3.0kh之间,其中253条谱带具有遗传多态性,约占72．3％,平均每个引物扩增的DNA片段数为6．2条。采用TFPGA数据分析软件,计算Nei氏相似性系数和遗传距离,建立了UPGMA聚类图。结果表明：石蒜属13个种明显聚为两大类,即具有单型核型结构（I型）,染色体基数为x=11的5个物种：玫瑰石蒜L.rosea,红蓝石蒜.L.haywardii,稻草石蒜L.straminea,换锦花L.sprengeri和石蒜L.radiata聚为一类;具有两型核型结构（V型和I型）8个物种即江苏石蒜L.houdyshelii,乳白石蒜L.albiflora,中国石蒜L.chinensis,长筒石蒜L.longituba,安徽石蒜Lanhuiensis,夏水仙L.squmigera,短蕊石蒜L.caldwellii和忽地笑L.aurea聚为一类。其中玫瑰石蒜和红蓝石蒜的亲缘关系最近,石蒜和忽地笑的亲缘关系较远,与细胞学的研究结果相吻合。通过RAPD分析,对玫瑰石蒜,红蓝石蒜和稻草石蒜是否天然杂交起源以及乳白石蒜,稻草石蒜和江苏石蒜的分类地位进行了探讨。     

香蕉炭疽菌菌株亲缘关系的RAPD分析

应用筛选的8个Operon随机引物对供试菌株的DNA进行扩增,所产生的RAPD图谱揭示了长时期蕉炭疽菌具有丰富的种内遗传多样性,UPGMA聚类分析的结果表明：26个香蕉炭疽菌被分为两个与地理来源相关的RAPD聚类群,它们分别由广东菌株和海南菌株为主组成,在两个香蕉菌群的外侧,两个胶胞炭疽菌菌株聚为一个小的外群,这些结果表明香蕉炭疽菌存在有与地域相关的种下类群分化。     

新疆石榴品种的RAPD分析

利用RAPD技术对23个石榴品种进行亲缘关系鉴定和品种分类研究.从50条10 bp随机引物中筛选出7条扩增效果较好的引物进行扩增,共扩增出88条带,其中多态性带为61条,多态率达69%.根据扩增结果进行UPGMA聚类分析,聚类结果将23个品种分为5大类群,第1类包括库尔勒市甜石榴与喀什市大籽甜石榴等甜石榴品种;第2类是阿图什市酸石榴;第3类包括喀什市阿奇克阿娜尔、叶城酸石榴等酸石榴品种;第4类包括吐鲁番市甜石榴、库车酸甜石榴等种间杂交和来源不详品种;第5类包括皮亚曼石榴和策勒1号等新疆优质石榴品种.研究结果表明:石榴品种间的遗传多态性有明显差异,即使父母本相同的品种也能区别.     

Compliant film of regenerated Antheraea pernyi silk fibroin by chemical crosslinking

A compliant film was prepared by chemical crosslinking of fibroin from silk fiber of wild silkworm, Antheraea pernyi. The silk fiber was dissolved in concentrated aqueous lithium thiocyanate and desalinated by dialysis. The film was cast from the regenerated aqueous solution, and crosslinked by polyethylene glycol diglycidyl ether (PEG-DE). This film showed high water resistively while maintaining random coil and -helix structure, unlike films prepared by organic solvent treatment that causes β-sheet formation. The films containing about 20 wt.% crosslinker were remarkably compliant and tenacious. These features, combined with the living-cell affinity of the wild silkworm fibroin, are expected to be useful in biomedical applications.     

柞蚕Septin基因的克隆及表达分析

Septin蛋白参与了细胞分裂、细胞内物质转运、细胞周期调控及细胞凋亡等生理反应,并且发现与肿瘤发生、神经功能障碍和病原物侵染的过程直接相关。研究克隆了柞蚕septin基因全长,序列分析表明septin基因全长1904 bp,开放阅读框长度为1137 bp,编码378个氨基酸。多重序列比对分析表明柞蚕septin与家蚕及黑脉金斑蝶septin相似性最高,聚为一类。实时定量PCR结果表明柞蚕septin基因在各个组织中都有表达,但在血细胞中表达量最高,其次是表皮,而在丝腺中表达量最低。通过构建原核表达载体,柞蚕septin蛋白在大肠杆菌中成功诱导表达。     

柞蚕Dsx基因的体外扩增

依据已测知的天蚕卵黄原基因5’端调控区序列设计特异性引物以柞蚕基因组DNA为模板对柞蚕卵黄原基因5’端调控区序列进行克隆并测序,成功获得了柞蚕卵黄原基因5’端调控区部分序列并在其中找到了柞蚕Bm dsx性别决定位点(ACATTGT)及CdxA,CREB,和GATA等昆虫基因调控元件。     

柞蚕核型多角体病毒PstI-B、C片段克隆及序列分析

克隆并测序分析了柞蚕核型多角体病毒(Antheraea pernyinucleopolyhedrovirus,ApNPV)PstI-B和C片段。结果表明:ApNPVPstI-B片段长7406bp,编码7个开放阅读框(open readingframes,orf),包括p87、he65、pnk/pnl、odv-ec43基因及黄杉毒蛾核型多角体病毒(Orgyiapseudotsugatamulticapsid nucleopolyhedrovirus,OpMNPV)orf107、orf108同源区。ApNPVPstⅠ-C长6663bp,编码11个orf,包括pk-1、orf1629、polh、lef-2、ptp-2、ctl-1、ptp-1基因及OpMNPVorf5、orf7、orf8和orf11同源区。在鉴定的18个杆状病毒基因中,he65和orf1629基因分化较大;polh和lef-2基因较保守。ApNPV是已知的第3个编码pnk/pnl基因、第4个同时编码ptp-1和ptp-2两个基因的杆状病毒。     

AProteinase Responsible for Degrading Yolk Proteins in Tussah（Antheraea pernyi）

ＡＰｒｏｔｅｉｎａｓｅＲｅｓｐｏｎｓｉｂｌｅｆｏｒＤｅｇｒａｄｉｎｇＹｏｌｋＰｒｏｔｅｉｎｓｉｎＴｕｓｓａｈ（Ａｎｔｈｅｒａｅａｐｅｒｎｙｉ）ＺＨＡＯＸｉａｏ－ｆａｎ;（赵小凡）ＷＡＮＧＪｉｎ－ｘｉｎｇ（王金星）（ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＢｉｏｌｏｇ...     

柞蚕核型多角体病毒(AnpeNPV)三地理株的全基因组比较分析揭示其遗传多样性

[目的]柞蚕核型多角体病毒(Antheraea pernyi nucleopolyhedroviruses,AnpeNPV)能引起柞蚕脓病大面积暴发.尽管之前已完成了两株核型多角体病毒的基因组测序,但基于比较基因组的方法调查AnpeNPV间的遗传变异研究则相对较少.[方法]为了研究AnpeNPV不同地理株系间的遗传多样性,我们测序了1株从中国河南省分离的柞蚕NPV(AnpeNPV-H)基因组,并和之前从辽宁省分离的2株柞蚕NPV(AnpeNPV-L和AnpeNPV-Z)进行了比较基因组学分析.[结果]AnpeNPV-H的全基因组大小为125 605 bp,总共预测了146个开放阅读框(ORF),包括95个功能注释蛋白和51个假定蛋白.我们发现这3株AnpeNPV间的基因组成非常相似.在这3个AnpeNPV株系间,有6个开放阅读框存在碱基变异而导致基因的变短.并鉴定超过200个单核苷酸多态性(single nucleotide variations,SNVs),其中85％位于蛋白编码区.同时,odv-e56,p94-like和egt3个基因的非同义突变较高,表明这3个蛋白质编码基因可能经历了正向选择或纯化选择.我们发现在这3株AnpeNPV间一些基因的氨基酸发生变异,例如编码膜蛋白的基因、抑制凋亡和蜕皮的基因及与DNA复制相关的DNA聚合酶和解旋酶等基因.最后,展示了3株AnpeNPV间遗传重组的证据.[结论]本研究揭示了AnpeNPV种内水平的变异和株系内基因组的动态结构.     

Structure and properties of regenerated Antheraea pernyi silk fibroin in aqueous solution

Antheraea pernyi silk fibroin fibers were dissolved by aqueous lithium thiocyanate to obtain regenerated A. pernyi silk fibroin solution. By means of circular dichroism, ¹³C NMR and Raman spectroscopy, the molecular conformation of regenerated A. pernyi silk fibroin in aqueous solution was investigated. The relationship of environmental factors and sol–gel transformation behavior of regenerated A. pernyi silk fibroin was also studied. The molecular conformations of regenerated A. pernyi silk fibroin mainly were -helix and random coil in solution. There also existed a little β-sheet conformation. It was obviously different with Bombyx mori silk fibroin, whose molecular conformation in solution was only random coil but no -helix existence. With the increase of temperature and solution concentration and with the decrease of solution pH value, the gelation velocity of regenerated A. pernyi silk fibroin solution increased. Especially, it showed that A. pernyi silk fibroin was more sensitive to temperature than B. mori silk fibroin during the sol–gel transformation. The velocity increased obviously when the temperature was above 30 °C. During the sol–gel transformation, the molecular conformation of regenerated A. pernyi silk fibroin changed from random coil to β-sheet structure. The results of these studies provided important insight into the preparation of new biomaterials by silk fibroin protein.     

柞蚕14-3-3基因的鉴定及表达分析

14-3-3蛋白是一种可以改变其结合蛋白构象的酸性蛋白质.柞蚕14-3-3 cDNA序列全长1 220 bp,包括一个126 bp的5'非编码区和一个350 bp的3'非编码区.该基因的开放读码框长度为744 bp,编码247个氨基酸.序列比对结果表明,柞蚕14-3-3蛋白与家蚕的14-3-3蛋白具有高度同源性.此外对柞蚕14-3-3基因进行了原核表达和重组蛋白纯化.SDS-PAGE和免疫印迹结果表明,分子量大小约32 kD的重组蛋白在大肠杆菌中得到了成功表达.     

微量添食对柞蚕蚁蚕抗逆性的影响

通过卵面微量添食葡萄糖、有益微生物 (EM)及CaCl2 3种物质 ,以半数致死时间 (LT50 )为指标 ,研究添食不同物质对柞蚕初孵蚁蚕抗逆性的影响。结果表明 ,卵面添食这 3种物质均能增强蚁蚕的抗低温能力 ,延长其在低温条件下的半数致死时间 (LT50 )。添食葡萄糖能显著延长蚁蚕对饥饿的LT50 ;添食EM能极显著延长蚁蚕对饥饿的LT50 ;添食CaCl2 对蚁蚕耐饥饿能力的影响不显著。各种添食物质对蚁蚕抗逆性的影响均存在浓度效应     

柞蚕小热休克蛋白20.1的基因鉴定及免疫功能研究

热休克蛋白(HSP)是一类广泛存在于各类生物中的具有分子伴侣功能的蛋白质。近年来研究发现HSP与机体许多功能如免疫、凋亡、衰老等密切相关。柞蚕(Antheraea pernyi)小热休克蛋白20.1(Aphsp20.1)基因的开放读码框长度为534bp,编码178个氨基酸。序列比对结果表明,柞蚕小热休克蛋白20.1属于HSP20家族。组织定量显示这Aphsp20.1在中肠和脂肪体分布较高。此外用大肠杆菌Escherichia coli及Micrococcus luteus病原微生物注射入5龄3天柞蚕幼虫后,发现Aphsp20.1的基因表达菌明显上调。另外体外抑菌试验结果发现纯化后的蛋白也具有一定的抑菌作用。该研究表明ApHSP20.1在柞蚕的免疫功能中具有重要作用,该研究不仅为我们进一步了解更加复杂的高等生物天然免疫反应提供一些相关的研究线索;而且对柞蚕天然免疫的研究有利于更好地理解昆虫自身的免疫系统,为保护益虫防治害虫提供重要依据。