补体与红细胞膜的结合作用

被激活的补体3(C_3),能与红细胞膜结合;C_(3b)与红细胞膜形成的复合物,又激活一系列补体(C_5-C_9),使细胞溶解。有些溶血性疾病与此种补体溶血有关。我们实验曾证明,阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)红细胞对补体溶血敏感。为了探讨PNH补体溶血反应的机理,我们曾用对唾液酸专一结合的鲎血凝集素处理PNH红细胞,表明它能降低补体溶血,并证明它与红细胞膜血型糖蛋白结合。看来鲎血凝集素可能影响红细胞膜与C_(3b)的结     

人血清补体3b的提纯与鉴定

据报道红细胞膜上有补体3b(C_(3b))的受体。阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)是属红细胞的膜病变,对补体较为敏感,易产生溶血,可能是因为膜上C_(3b)受体与正常红细胞不同。为了研究C_(3b),与膜上C_(3b)受体结合情况,并进一步分离膜上C_(3b)受体,我们制备了纯的C_(3b)。一、材料与方法 1.C_3的提纯见文献[2] 2.免疫双扩散见文献[3] 3.C_3的垂直板型聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)见献文[2] 4.C_3分子量测定按Pharmacia标准蛋白测分子量法     

天花粉凝集素糖结合专一性Ⅱ.

本文报道一些糖类、糖苷、糖蛋白和几种外源凝集素对标记天花粉凝集素和酸处理交联琼脂糖或胎盘细胞膜结合的影响。在低浓度时,所用的糖类中,乳糖是最强的抑制剂,蜜二糖和棉籽糖的抑制能力和乳糖相仿,而纤维二糖、蔗糖、麦芽糖,则无明显影响。三个所用的糖蛋白,它们的抑制活性以下列顺序递减:猪甲状腺球蛋白,人血清转铁蛋白,鸡卵白蛋白。未标记的天花粉凝集素和蓖麻凝集素,两者都专一地和半乳糖结合,它们都能竞争标记天花粉凝集素,而伴刀豆球蛋白A和半夏凝集素则不能竞争。由此,我们推测天花粉凝集素主要是和半乳糖结合,但与乳糖的结合能力最强,故推测其结合部位能容纳半乳糖和另一个单糖。     

天花粉凝集素糖结合专一性Ⅱ.

本文报道一些糖类、糖苷、糖蛋白和几种外源凝集素对标记天花粉凝集素和酸处理交联琼脂糖或胎盘细胞膜结合的影响。在低浓度时,所用的糖类中,乳糖是最强的抑制剂,蜜二糖和棉籽糖的抑制能力和乳糖相仿,而纤维二糖、蔗糖、麦芽糖,则无明显影响。三个所用的糖蛋白,它们的抑制活性以下列顺序递减:猪甲状腺球蛋白,人血清转铁蛋白,鸡卵白蛋白。未标记的天花粉凝集素和蓖麻凝集素,两者都专一地和半乳糖结合,它们都能竞争标记天花粉凝集素,而伴刀豆球蛋白A和半夏凝集素则不能竞争。由此,我们推测天花粉凝集素主要是和半乳糖结合,但与乳糖的结合能力最强,故推测其结合部位能容纳半乳糖和另一个单糖。     

天花粉凝集素的固定化及其应用

制备了天花粉凝集素ＴＫＬ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ的亲和柱,用来分离其它来源物质中与ＴＫＬ相互作用的糖复合物,发现从兔红细胞的血影细胞的抽提物中可以得到分子量为６２ｋＤ,４０ｋＤ等糖蛋白,这可能就是ＴＫＬ凝集兔红细胞的分子基础。从人及骆驼、绵羊血浆中也能得到与ＴＫＬ结合的、分子量不等的糖蛋白,进一步鉴定人血浆ＴＫＬ结合物中含有α＿１－抗胰蛋白酶等,为从血浆中分离这些糖蛋白提供了较为便利的方法。在寻找天花粉植物体内此凝集素的内源受体时,探讨了它可能的生理功能。     

中华眼镜蛇蛇毒因子(CVF)对补体系统的作用及与人补作C_3和其他蛇毒抗原性关系

中华眼镜蛇蛇毒经DEAE-Sepharose CL-6B。HPLC等多次柱层析分离出有抗补体及溶血活性的眼镜蛇蛇毒因子(Cobra venom factor,CVF),纯化后的CVF在聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱上呈单一区带,分子量为225000—230000,等电点为6.20。用二硫苏糖醇还原经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳得三类亚基,其分子量总和为237,000。 体外抗补体及溶血试验表明,CVF的作用是通过补体旁路途经使总补体活力下降。双向免疫电泳鉴定,发现CVF与人血清作用后,其中补体成分C_3分子的抗原性发生改变,则表明CVF的作用是通过激活补体成分C_3而发挥的。给豚鼠腹腔注射CVF(0.15ug/g体重)后,其血清总补体水平下降到正常值的3％以下,7天后回升,13天后恢复到正常水平。 单相免疫电泳表明,CVF与人补体C_3抗血清间无任何交叉免疫反应,但人血清与CVF抗血清间有微弱的免疫沉淀反应。另外,CVF的氨基酸组成与人补体C_3也较为相似。鉴定还表明眼镜蛇科中四种蛇毒与CVF抗血清有强烈的免疫沉淀反应,蝰蛇毒及海蛇毒也有免疫沉淀反应,但只有眼镜蛇毒具有抗补体活性。     

丙二醛对红细胞的作用

根据我们过去的工作,红细胞在体外与过氧化氢反应后,可产生丙二醛(MDA),它是脂质过氧化的主要产物,可交联磷脂及蛋白质,也可使蛋白质的巯基氧化,从而损伤红细胞膜,使之容易产生溶血。因此,用MDA处理正常红细胞,研究其与溶血的关系,将有助于阐明溶血性贫血的发病机制及寻找治疗溶血的药物。本文用MDA在体外与红细胞作用,观察其对红细胞的溶血作用及对红细胞膜的影响,并观察抗氧化剂抗氧化保护红细胞膜的作用,为寻求有效的抗氧化溶血药物提供依据。一、材料与方法 1.材料红细胞取自正常人静脉血,用生理盐水洗三次,配成红细胞悬液备用。丙二醛     

天花粉凝集素的糖结合专一性

本文对天花粉凝集素的糖结合特性,进行了初步研究。观察到除了半乳糖外,高浓度的葡萄糖也可将天花粉凝集素从酸处理交联琼脂糖亲和吸附柱上洗脱下来。N-乙酰氨基半乳糖对标记天花粉凝集素和酸处理交联琼脂糖的结合的抑制能力和半乳糖相同,甘露糖、葡萄糖、N-乙酰氨基葡萄糖仅在高浓度下才有较强的抑制能力。     

天花粉凝集素的糖结合专一性

本文对天花粉凝集素的糖结合特性,进行了初步研究。观察到除了半乳糖外,高浓度的葡萄糖也可将天花粉凝集素从酸处理交联琼脂糖亲和吸附柱上洗脱下来。N-乙酰氨基半乳糖对标记天花粉凝集素和酸处理交联琼脂糖的结合的抑制能力和半乳糖相同,甘露糖、葡萄糖、N-乙酰氨基葡萄糖仅在高浓度下才有较强的抑制能力。     

牛精细胞表面凝集素受体的研究

外源凝集素能与细胞表面相应的受体特异性的结合,并导致细胞凝集,因而外源凝集素可用作细胞膜结构的探针,用来研究细胞膜的结构与功能。近年应用外源凝集素对精细胞膜上糖蛋白和凝集素受体的数目与功能状态的研究已取得很大进展,采用异硫氰基荧光素(FITC)或辣根过氧化物酶等标记凝集素来测定膜上凝集素受体的定位与分布,研究认为精细胞膜上受体与受精作用有密切关系。本文报道用具有血型专一性或无血型专一性或FITC标记的凝集素研究牛精细胞膜上凝集素受体的分布结果。     

健康人群及某些疾病红细胞C_3d受体活性的观察

近年来,红细胞对机体免疫功能的作用日益受到人们的重视。证明红细胞表面的C_3b受体能与循环系统中的抗原—抗体—补体复合物粘附在一起。这种免疫粘附作用(RCIA)不但可能使循环复合物得到清除。而且T细胞区亦得以依赖反应等。     

麦胚凝集素作用下膜血型糖蛋白A构象变化研究

为进一步验证麦胚凝集素作用下膜血型糖蛋白Ａ空间构象的变化,本文用傅里叶变换红外技术,定量测定了麦胚凝集素作用下,溶液血型糖蛋白Ａ和脂蛋白体膜血型糖蛋白Ａ的二级结构的改变,发现麦胚凝集素结合于血型糖蛋白Ａ导致血型糖蛋白Ａα—螺旋减少,β—结构增加,麦胚凝集素的抑制剂Ｎ—乙酰葡萄糖胺对麦胚凝集素诱导的血型糖蛋白Ａ二级结构的改变有抑制作用。本文同时用扫描隧道显微术直接观察了麦胚凝集素结合前后膜血型糖蛋白Ａ分子形态的变化。     

麦胚凝集素作用下膜血型糖蛋白A构象变化研究

为进一步验证麦胚凝集素作用下膜血型糖蛋白Ａ空间构象的变化,本文用傅里叶变换红外技术,定量测定了麦胚凝集素作用下,溶液血型糖蛋白Ａ和脂蛋白体膜血型糖蛋白Ａ的二级结构的改变,发现麦胚凝集素结合于血型糖蛋白Ａ导致血型糖蛋白Ａα—螺旋减少,β—结构增加,麦胚凝集素的抑制剂Ｎ—乙酰葡萄糖胺对麦胚凝集素诱导的血型糖蛋白Ａ二级结构的改变有抑制作用。本文同时用扫描隧道显微术直接观察了麦胚凝集素结合前后膜血型糖蛋白Ａ分子形态的变化。     

东北虎,云豹,金猫红细胞上C3b受体的测定

本文通过对健康的东北虎、云豹和金猫红细胞上C_(3b)受体和免疫复合物的检测,证实这三种动物的红细胞,除了具有免疫粘附,形成免疫复合物的花环(其花环率分别为7.00、6.50和5.67)外,还可通过其膜上的C_(3b)受体结合免疫复合物,形成C_(3b)受体的花环,其花环率分别为11.50、11.88和11.83。表明东北虎、云豹和金猫的红细胞具有较强的免疫功能。     

肝素的抗补体作用

1929年Ecker和Gross发现了肝素的抗补体作用。当时认为,抗补体作用可能系肝素作用于补体的第三或第四成分(C_3,C_4),使其灭活。随后的报告肯定了这一发现。目前认为,肝素可作用于补体系统的经典途径、替代途径和调控机制,以发挥抗补体作用。一、阻抑经典途径的激活补体系统经典途径的激活是由于C_1活化而启动的。C_1活化通过两种方式进行:(1)抗原抗体复合物形成后,暴露了抗体上的补体结合点(即C_(1q)受体),血清中呈活性状态的     

天花粉蛋白对红细胞损伤作用的AFM研究

目的：利用原子力显微镜（atomic force microscopy,简称AFM）观察红细胞（red blood cells,简称RBC）与天花粉蛋白（trichosanthin,简称TCS）作用后形态上的变化以及细胞膜的损伤情况。方法：将1.2mg/ml的TCS溶液与红细胞的PBS缓冲溶液（pH7.4)按1：4的比例混合,在35℃温度下作用2h后,用原子力显微镜观察受损的红细胞,与正常红细胞进行对比。结果：（1）与正常红细胞相比,与TCS作用后的红细胞的高度明显降低,凹陷部分更加明显。（2）对红细胞上小范围扫描成像的结果显示,受损后的红细胞膜表面结构发生了变化,膜表面颗粒排列的特征依然存在,但颗粒之间开始产生连接。结论：TCS能损伤红细胞膜,改变细胞膜的微结构,引起红细胞的溶血作用。     

几种植物生殖细胞质膜表面的凝集素受体荧光标记

为进一步探讨从生殖细胞到精子的发育过程中细胞质膜表面凝集素受体的可能变化,及其与两类对凝集素标记有不同结果的精子的关系,用异硫氰酸荧光素标记的伴刀豆凝集素(Con A)、麦芽凝集素(WGA)和大豆凝集素(SBA)对蚕豆(Vicia faba L．)、鸢尾(Iris tectorium Maxim．)和朱顶红(Hippeastrum vittatum Herb．)的生殖细胞质膜表面的凝集素受体进行标记。结果显示：在不同植物中均有部分生殖细胞不能被凝集素探针标记,且在保持尾状形态的生殖细胞的表面发现有凝集素受体的极性分布。这可能是导致部分精子表面不能被同种凝集素标记的重要原因。此外,同一种凝集素受体在不同物种的生殖细胞上分布不一致,不同的凝集素受体在同一种植物的生殖细胞上的分布模式亦有不同。在蚕豆和鸢尾的生殖细胞表面均有这三种凝集素的受体。在朱顶红生殖细胞的表面有前两种凝集素的受体,分布比较均一,但是没有大豆凝集素的受体。此外,在具尾生殖细胞表面发现有凝集素受体极性分布的现象,为探讨精细胞功能及其表面糖蛋白分布的可能差异提供了重要启示。     

凝集素抑制林蛙卵裂沟新膜外露的作用

剥去受精膜的林蛙卵分裂时,分裂沟中的新膜会暴露出来。林蛙老膜上有大量均匀分布的麦胚和大豆凝集素受体。卵裂前,将剥去受精膜的蛙卵浸于上述的凝集素溶液中,新膜的外露就被抑制。凝集素愈浓,浸泡时间愈长,抑制愈大。在这些卵的表面可看到一层较厚的由凝集素引起的外被。碱处理过的受精卵表面,凝集素受体减少,凝集素抑制新膜外露的作用亦减弱,由凝集素引起的外被亦薄。凝集素是多价的,会在细胞表面产生交链,形成“外骨骼”,抑制新膜外露。凝集素也可通过受体,影响微丝,产生作用。     

棕尾别麻蝇(Sarcophaga peregrina)幼虫与蛹血淋巴凝集素的纯化与特性

用亲和层析法纯化了棕尾别麻蝇幼虫和蛹血淋巴凝集素。以兔红细胞吸附幼虫血淋巴凝集素为抗原制备的抗体、球球蛋白和甲状腺蛋白等三种亲和层析吸附剂纯化得到的幼虫凝集素是相同的,其分子量73kD左右。用甲状腺球蛋白为亲和配基纯化的蛹血淋巴凝集素由二种亚基组成,其分子量分别为30和32kD。幼虫和蛹血淋巴凝集素活性的抑制糖明显不同：乳糖、岩藻糖和N－乙酰半乳糖胺对幼虫血淋巴凝集素活性有抑制作用;而甘露糖胺、半乳糖胺和葡萄糖胺则对蛹血淋巴集素有一定抑制。而且,用兔红细胞吸附幼虫血淋巴凝集素为抗原制备的抗血清对蛹的凝集素活性无交叉反应,表明这两种凝集素是不相同的。虽然本文所纯化的麻蝇蛹血淋巴凝集素的分子量和Komano等报道的麻蝇蛹以及幼虫体壁 伤害诱导的凝集素SPL相同,但其糖的抑制特性有明显差异。     

几种植物生殖细胞质膜表面的凝集素受体荧光标记

为进一步探讨从生殖细胞到精子的发育过程中细胞质膜表面凝集素受体的可能变化,及其与两类对凝集素标记有不同结果的精子的关系,用异硫氰酸荧光素标记的伴刀豆凝集素(Con A)、麦芽凝集素(WGA)和大豆凝集素(SBA)对蚕豆(Vicia faba L.)、鸢尾(Iris tectorium Maxim.)和朱顶红(Hippeastrum vittatum Herb.)的生殖细胞质膜表面的凝集素受体进行标记.结果显示:在不同植物中均有部分生殖细胞不能被凝集素探针标记,且在保持尾状形态的生殖细胞的表面发现有凝集素受体的极性分布.这可能是导致部分精子表面不能被同种凝集素标记的重要原因.此外,同一种凝集素受体在不同物种的生殖细胞上分布不一致,不同的凝集素受体在同一种植物的生殖细胞上的分布模式亦有不同.在蚕豆和鸢尾的生殖细胞表面均有这三种凝集素的受体.在朱顶红生殖细胞的表面有前两种凝集素的受体,分布比较均一,但是没有大豆凝集素的受体.此外,在具尾生殖细胞表面发现有凝集素受体极性分布的现象,为探讨精细胞功能及其表面糖蛋白分布的可能差异提供了重要启示.