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相似文献
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1.
文摘     
010 0 2 4基因组研究中全长cDNA克隆的策略 [中 ]/张庆华… //生物工程进展 .- 2 0 0 0 ,2 0 (4) .- 3~ 5全长cDNA的克隆是目前人类基因组研究中的一个重要方面 ,与大规模基因组测序相比较 ,cDNA测序克隆用相对较少费用获得更多的功能基因信息 ,故也是符合我国国情的基因组研究的主要方向。如何更加高效地获得新的全长cDNA ,本文结合作者自己工作中的经验 ,对从全长文库的建立到全长cDNA的测序及克隆方法作了较为详细的介绍。(杨淑培 )0 10 0 2 5细胞培养中的程序性细胞死亡 [中 ]/高红亮… //生物工程进展 .- 2 0 0 0…  相似文献   

2.
基因组研究中全长cDNA克隆的策略   总被引:2,自引:0,他引:2  
全长cDNA的克隆是目前人类基因组研究中的一个重要方面,与大规模基因组测序相比较,cDNA测序克隆用相对较少费用获得更多的功能基因信息,故也是符合我国国情的基因组研究的主要方向。如何更加高效地获得新的全长cDNA,本文结合作者自己工作中的经验,对从全长文库的建立到全长cDNA的测序及克隆方法作了较为详细的介绍。  相似文献   

3.
以人成骨肉瘤细胞株HOS-8603为热休克模型,在利用DDmRNA方法筛选和克隆了一个热休克后表达受抑基因的cDNA片段的基础上,以该片段为探针,筛选HOS-8603细胞的cDNA文库,获得该基因的全长cDNA克隆(HSSG-1);DNA序列测定表明该cDNA全长1456bp,编码276个氨基酸,经计算机辅助分析,该cDNA序列尚未被报道。经RNA斑点杂交证实,该基因的表达于多种组织细胞之中,并且  相似文献   

4.
岸蟹(Carcinus maenas)金属硫蛋白cDNA及其基因的克隆   总被引:3,自引:0,他引:3  
利用已知的C.maenas金属硫蛋白氨基酸序列资料,用全简并的PCR引物,从鳃组织总RNA中扩增出两种金属硫蛋白cDNA片断,并将其克隆到pGEM-T载体中,序列测定表明,其中一种cDNA片断核苷酸序列和推知的C.maenas金属硫蛋白核苷酸序列完全吻合;另一种cDNA片断则在3’端有较大变异。根据前者cDNA片段序列设计特异性引物,扩增并克隆了其编码区全长cDNA和其编码基因,测序结果表明,岸蟹  相似文献   

5.
人基因组表达图谱分析和疾病相关基因搜寻──现状与展望(续前)康毅滨,柴建华(复旦大学遗传学研究所上海200433)二、cDNA随机部分f三、测序及EST的建立以上所讨论的方法均是从基因组DNA出发寻找表达序列,与之恰好相反的另一种构建表达图的思路是随机挑选cDNA文库中的克隆进行测序并在染色体上定位,即cDNA策略。人类基因组计划的一个重要目标是获得人基因组30亿个碱基对的顺序,而以目前的测序技术要在近期内完成这一目标还略显力不从心。  相似文献   

6.
 PCR法在未知cDNA克隆与序列测定中的应用研究邢桂春,贺福初,杨晓明,吴祖泽(北京军事医学科学院放射医学研究所,北京100850)目前,新型蛋白质克隆的最有效途径乃先构建cDNA文库,然后筛选、分离其cDNA再行亚克隆、测序。为克隆人新型肝细胞生长...  相似文献   

7.
从新生儿脐血和成人骨髓中分选出造血干/祖细胞(HSC/HPC),构建成cDNA文库,对其进行大规模表达序列标签(EST)测序,通过生物信息学等手段分析基因表达谱,并进行新基因的全长cDNA克隆。在所测的10512条可分析EST序列中,有9866条来自脐血CD34+细胞,其中4697条(476%)为已知基因,2603条(264%)为已知EST,1415条(143%)代表未知EST。在已知基因中,82%基因与造血相关,227%涉及细胞代谢、结构和迁移,130%与细胞分裂和防御相关,262%与RNA、蛋白质的合成相关,106%和细胞信号传递有关。对一些已知和未知的EST,综合测序、生物信息学等方法,进行全长克隆,已获得23个新基因的全长cDNA。  相似文献   

8.
通过重叠片段的RT-PCR方法,从人胎盘组织克隆了人全长肝细胞生长因子cDNA片段(约2200bp),经酶切证实和测序分析都表明该片段确为人HGFcDNA。本文所用方法解决了扩增较长目的基因片段时,由于RNA酶及反转录酶的RNA酶H活性和mRNA二级结构等多种因素的影响,使获取长片段cDNA难以成功的难点  相似文献   

9.
纯化鸡胚成纤维细胞培养的犬瘟热病毒(CanineDistemperVirus,CDV),获得病毒基因组RNA后,反转录合成双链病毒F基因cDNA。将此双链cDNA平端插入PUC19质粒SamⅠ位点构建重组质粒,进行cDNA克隆。以重组克隆质粒为模板PCR扩增,获得CDV全长F基因。将此F基因插入表达载体PBV220,在大肠杆菌中表达,通过对表达产物的最终鉴定,可确认所获片段为CDV全长F基因.  相似文献   

10.
应用cDNA文库快速构建法克隆高粱肌动蛋白基因   总被引:3,自引:0,他引:3  
取生长一周的高粱嫩叶为材料,按照cDNA库快速构建法,用λgt10为载体成功地获得了含有2×10^06人重组噬菌体的cDNA库。以水稻RAcl cDNA为探针,经噬菌体原位杂交筛选出两个阳性克隆片段,并对其中一个进行了Southern杂交鉴定。然后将重组体中含有的cDNA片段亚克隆至pBluescript SK-载体上测序。  相似文献   

11.
从人胎儿肾中提取总RNA,反转录得cDNA,PCR扩增获得1.3kb的骨形态发生蛋白-7(BMP-7)的全长cDNA。克隆的BMP-7基因编码的氨基酸序列与献报道相同。  相似文献   

12.
“电子”cDNA文库筛选指导基因的全长cDNA克隆   总被引:4,自引:0,他引:4  
“电子”cDNA库筛选主要是指通过采用生物信息学的方法延伸表达序列标签(EST)序列,以获得基因的部分及至全长cDNA序列,避免或部分避免构建与筛选cDNA库等烦琐的实验室工作。该方法具体体现了EST数据库的迅速扩张已导致识别与克隆新基因的策略发生革命性的变化。EST序列ZA73为本实验室克隆到的可能参与辐射致气管上皮细胞恶性转化过程的基因片段,本研究采用“电子”cDNA库筛选的方法对其可能  相似文献   

13.
拟南芥LFYcDNA的克隆及转化菊花的研究   总被引:22,自引:0,他引:22  
以野生型拟南芥(Arabidopsisthaliana(L.)Heynh.)为材料,克隆并测序了Leafy(LFY)基因的全长cDNA;同时构建了LFYcDNA以CaMV35S为启动子的植物表达载体,并转化菊花(Chrysanthemummorifolium(Ramat.)Tzvel.)。该cDNA全长1263bp,共编码420个氨基酸残基,Southern杂交结果表明,LFYcDNA整合到菊花染色体组中。跟正常植株相比,转基因植株中有3株分别提早65、67、70d开花,2株分别推迟78、90d开花。  相似文献   

14.
黄明  郑学勤  邵寒霜   《广西植物》1998,18(2):165-168
以甘薯(Ipomoeabatatas(L.)Poir)叶为材料提取植物总RNA,经反转录后,利用多聚酶链式反应技术,扩增并克隆超氧化物歧化酶基因的cDNA,并进行测序分析。该序列全长482bp,其读码框编码152个氨基酸,与国外文献报道的甘薯块根SOD基因的cDNA序列相比,具有99%的同源性。  相似文献   

15.
鼻咽癌中差异表达基因的分析和克隆   总被引:13,自引:0,他引:13  
为了验证通过CDNA代表性差性分析法(cDNA representational difference analysis,cDNA RDA)分离的CDNA序列在鼻咽癌活给组织中的差异表达,并进一不克隆鼻咽癌差异表达基因,采用RT-PCR方法并结合Notthern杂交确定其转录本的大小,进而充分利用生物信息学对有差异表达CDNA全长进行克隆,并对其基因产物进行了结构和功能预测。结果显示,AF0915  相似文献   

16.
CD40配体(CD40L)是TNF超家族成员,表达于人活化的CD4^+T细胞表面,与存在于B细胞、抗原递呈细胞表面的相就受体CD40分子相互作用,促发并调节机体的体液免疫和细胞免疫应答。用PCR法从CD40L全长cDNA质粒中扩增CD40L胞外段编码cDNA,即可溶性CD40L(sCD40L)编码cDNA,并克隆入pSK质粒;cDNA序列经测序证实后与pPICZαA质粒重组构建成pPICZαA-s  相似文献   

17.
人IL-18 cDNA克隆及其真核表达质粒的构建   总被引:1,自引:0,他引:1  
用RT-PCR技术从健康人外周血单核细胞的总RNA中扩增出编码白细胞介素18的全长cDNA,并将此基因定向克隆入真核表达质粒载体pcDNA3中,通过对转化子的筛选得到了带有IL-18插入片段的阳性克隆,经酶切分析及核苷酸测序表明,克隆到的基因与文献报道的完全一致。把重组质粒pcDNA3/IL-18分别转染人肝癌细胞HepG2和鼠肉瘤细胞S180,在mRNA水平检测到IL-18的表达,但IL-18 的表达未诱导肿瘤细胞产生IFN-γ。  相似文献   

18.
从正常人外周血白细胞中提取基因组DNA,用PCR扩增神经生长因子(NGF)β亚基前体的全长编码区序列,将其克隆到T-vector(原始质粒为pBluescriptⅡSK(+))上,取两个独立的克隆采用自动测序仪进行双链DNA双向测序,结果表明:两个克隆的序列完全相同,该序列与国外报道的NGF序列有一个碱基的差别,从而导致NGF前导肽中一个氨基酸的改变,而成熟的NGF序列没有改变。  相似文献   

19.
肝再生增强因子超家族研究进展   总被引:7,自引:0,他引:7  
从断奶大鼠的肝脏中纯化得到了肝刺激物质(HSS)的有效成份,即肝再生增强因子(ALR)的蛋白质,酶解并对其多肽末端测序,据此推导出简并核苷酸序列,合成探针,对大鼠肝脏来源的cDNA文库进行筛选,首选获得了大鼠ALR的cDNA克隆,随后又分别克隆了人和小鼠的ALR的cDNA。与此同时,从酵母细胞中克隆了与线粒体氧化--磷酸化功能密切相关的ERV1基因,然后克隆了人的ERV1同源基因,从功能上证实人  相似文献   

20.
用PCR方法从产气肠杆菌(Enterobacter aerogenes)中克隆出0.9kb的DNA片段,经DNA测序证明是α-乙酰乳酸脱羧酶(α-acetolactate decarboxylase,α-ALDC)基因。将α-ALDC基因重组到质粒,pBV220后,转化大肠杆菌,经筛选获得的高效表达的重组子菌株。  相似文献   

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