华蟾素诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡

本实验旨在探讨华蟾素诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡的作用及其作用机制。采用不同浓度的华蟾素作用胃癌SGC-7901细胞48 h后,MTT法检测细胞活性;光学、荧光显微镜、流式细胞术检测细胞凋亡情况。Real Time RT-PCR和Western Blot分别检测Bax、Bcl-2基因m RNA和蛋白表达水平。结果显示,华蟾素对胃癌SGC-7901细胞增殖具有抑制作用且呈剂量依赖性关系,华蟾素处理7901细胞48 h的IC50值为35.67μg/m L,凋亡率为(5.01±1.69)%。显微镜下观察细胞呈明显凋亡现象,线粒体膜电位(ΔΨm)显著下降(p0.05),细胞阻滞于G1期;Bcl-2的表达下调,Bax的表达明显增加(p0.05,p0.01)。提示华蟾素可能通过上调Bax基因,下调Bcl-2基因诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡。     

低氘环境对胃癌细胞生长影响的体外实验

目的：研究低氘环境对人胃癌细胞（SGC-7901）增殖的影响并初步探讨其相关机制。方法：用含不同氘浓度的蒸馏水（实验组：25 ppm;对照组：150 ppm）配制的RPMI-1640培养基培养胃癌细胞SGC-7901。分别在不同的时间点对两组细胞的增殖率、细胞周期及凋亡情况进行检测,用Western blot法对两组细胞的增殖细胞核抗原蛋白（PCNA）的表达进行检测。结果：低氘环境下SGC-7901细胞的增殖率比对照组低10%左右。低氘环境对细胞的划痕愈合能力及集落形成能力也有显著抑制作用（P<0.05）。流式细胞术检测结果显示,与对照组相比,低氘组的细胞G1期细胞的比例增加（P<0.01）,而其所处S期细胞的比例下降（P<0.05）,两组细胞间早凋及晚凋比率差异无统计学意义。Western blot的结果显示低氘环境下培养的胃癌细胞的PCNA的表达明显下降。结论：低氘环境能够抑制胃癌细胞的生长,这可能与低氘环境下胃癌细胞阻滞于G1期及下调其PCNA的表达有关。     

抑制JNK通路对胃癌细胞SGC7901增殖、凋亡、迁移和周期的影响

探讨JNK通路抑制剂SP600125对胃癌细胞SGC7901增殖、凋亡、迁移和周期的影响及其机制。以胃癌细胞SGC7901为研究对象,实验分为空白对照组及药物处理组,采用CCK-8法检测不同浓度及不同作用时间SP600125对SGC7901增殖活性的影响,筛选出最佳作用时间与浓度用于后续实验。通过流式细胞术检测SP600125对SGC7901凋亡和周期的影响。Transwell迁移实验检测其对SGC7901迁移能力的影响。Western blotting检测SP600125作用后各组细胞GM130、JNK、p-JNK、c-jun、cleaved caspase-3、bcl-2、MMP-7蛋白水平的变化。研究表明,与空白对照组相比,10μmol/L、20μmol/L、30μmol/L、40μmol/L、50μmol/L浓度均能使SGC7901增殖活性降低,且在40μmol/L水平作用24 h其增殖抑制率最高(p0.05)。在此水平可使细胞凋亡率明显增加(p0.001)。与空白对照组相比,药物处理组细胞处于G2/M期的比例显著增加(p0.01),处于G0/G1期比例减少(p0.01),S期无明显变化,细胞迁移能力也明显下降(p0.01)。Western blotting显示药物处理组与空白对照组相比,蛋白GM130(p0.01)、JNK(p0.01)、P-JNK(p0.01)、c-jun(p0.01)、BCL-2(p0.01)、MMP-7(p0.05)的表达明显下降,cleaved caspase-3表达升高(p0.01)。以上研究表明JNK通路抑制剂SP600125可抑制胃癌细胞SGC7901增殖活性,促进其凋亡,使其周期阻滞于G2/M期,抑制胃癌细胞迁移能力,这可能与其抑制GM130、c-jun、MMP-7等蛋白的表达有关。     

Ndrg2基因表达对胃癌细胞增殖调控及其机理的研究

为研究Ndrg2基因在人类肿瘤发生发展中的作用,以不表达Ndrg2基因的胃癌细胞系HGC-27和表达Ndrg2基因的胃癌细胞系SGC-7901作为对比材料,以Ndrg2基因转染HGC-27胃癌细胞系,以及用Ndrg2的反义寡核苷酸封闭SGC-7901胃癌细胞系中Ndrg2基因的表达.发现Ndrg2可以抑制HGC-27胃癌细胞的软琼脂集落形成,有一定诱导细胞凋亡的作用,对细胞周期蛋白E的表达有明显下调作用.当封闭了SGC-7901胃癌细胞中Ndrg2基因表达的软琼脂集落形成受到抑制,流式细胞仪检测发现此时的SGC-7901细胞周期被阻滞在G1期,细胞周期蛋白D1和E表达下调.Ndrg2基因对两种肿瘤细胞中的细胞外信号调节激酶(ERK)和P38的表达也有不同的影响.     

Ad-IL-24对SGC-7901胃癌细胞生长抑制的体外实验

旨在研究携带人IL-24基因的腺病毒表达载体(Ad-IL-24)对SGC-7901人胃癌细胞的生长抑制作用并分析其分子机制。以不同MOI(感染复数)的Ad空载体腺病毒感染SGC-7901人胃癌细胞,筛选出最佳感染剂量;Ad-IL-24以最佳感染剂量感染SGC-7901胃癌细胞,RT-PCR法和Western blotting法检测腺病毒介导的IL-24基因在SGC-7901胃癌细胞中的转录;MTT法检测Ad-IL-24对SGC-7901胃癌细胞的生长抑制作用,流式细胞仪检测其诱导SGC-7901人胃癌细胞凋亡和细胞周期改变的效应,Hoechst33258染色荧光显微镜检测其诱导胃癌细胞凋亡的核形态改变;RT-PCR半定量法进一步检测SGC-7901胃癌细胞中凋亡相关基因的转录。结果显示,100MOI为感染SGC-7901胃癌细胞的腺病毒最佳感染剂量;Ad-IL-24能成功介导IL-24基因在SGC-7901胃癌细胞中转录性表达;Ad-IL-24感染SGC-7901胃癌细胞后,能明显抑制胃癌细胞生长和诱导凋亡;Ad-IL-24能显著上调SGC-7901胃癌细胞中bax、caspase-3和p53的表达和下调bc...     

胃癌乙酰肝素酶和NF-κB表达及与临床病理特征和血管形成的关系

目的探讨胃癌乙酰肝素酶(heparanase,HPA)和激活的NF-κB表达及与胃癌临床病理特征和血管形成的关系。方法免疫组织化学(IHC)分别检测了138例胃癌、138例配对癌旁胃粘膜(距癌2cm)和138例配对远离胃癌的手术切缘正常胃粘膜组织(距癌5cm以上)HPA蛋白的表达;138例胃癌组织NF-κB、血管内皮生长因子(VEGF)和CD34蛋白的表达,CD34抗体进行血管内皮染色,用于计数胃癌组织微血管密度(MVD);人胃癌细胞系SGC-7901和MGC803中HPA蛋白的表达。逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测了40例胃癌、40例癌旁胃粘膜(距癌2cm)和40例远离胃癌的手术切缘正常胃粘膜组织(距癌5cm以上)以及人胃癌细胞系SGC-7901和MGC803 HPA mRNA的表达结果胃癌HPA蛋白和mRNA阳性表达率(71.0%,72.5%)明显高于癌旁胃粘膜(32.6%,35.0%)和正常胃粘膜(10.0%,8.8%)(P均<0.01),癌旁胃粘膜明显高于正常胃粘膜(P<0.01)。HPA蛋白和mRNA在人胃癌细胞系SGC-7901均为阳性,而在人胃癌细胞系MGC803均为阴性。胃癌HPA和激活的NF-κB蛋白阳性表达率,侵袭至浆膜外、有脉管内瘤栓、有淋巴结转移、有远端转移和临床分期Ⅲ-Ⅳ期者明显高于侵袭至浆膜、无脉管内瘤栓、无淋巴结转移、无远端转移和临床分期I-Ⅱ者(P均<0.05)。胃癌HPA蛋白表达和激活的NF-κB蛋白表达成正相关(rs=0.223,P=0.009)HPA蛋白表达和激活的NF-κB蛋白表达阳性胃癌的MVD明显高于HPA蛋白表达和激活的NF-κB蛋白表达阴性胃癌的MVD(P均<0.01)。胃癌HPA蛋白表达和激活的NF-κB蛋白表达均与VEGF蛋白表达成正相关(rs=0.275,P=0.001;rs=0.527,P=0.000)。结论HPA和激活的NF-κB蛋白表达在胃癌的发展及血管形成中起重要作用;胃癌HPA蛋白表达与激活的NF-κB蛋白表达有关。     

Cetuximab抑制胃癌SGC7901/ADR细胞的增殖并增加其化疗敏感性

目的:探讨EGFR在胃癌耐药细胞中的表达及作用.方法:采用Western blot和免疫组化检测EGFR蛋白在胃癌耐药细胞系及组织标本中的表达,WST-1检测EGFR特异性抗体Cetuximab对胃癌耐药细胞增殖及化疗敏感性的影响.结果:SGC7901/ADR胃癌耐药细胞系中EGFR的表达明显高于亲本细胞,多数化疗后进展的胃癌组织EGFR的表达高于化疗前组织,针对EGFR的单克隆抗体Cetuximab可抑制SGC7901/ADR细胞的增殖,并增加其对部分化疗药物的敏感性.结论:EGFR过表达是胃癌细胞化疗耐药的分子机制之一,Cetuximab可逆转EGFR高表达耐药细胞的耐药表型.     

mirRNA-17-5p抑制物对骨肉瘤细胞系SOSP_9607增殖和凋亡的影响

目的:探讨miR-17-5p抑制物对于骨肉瘤细胞系SOSP_9607细胞增殖和凋亡的影响.方法:四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞增殖,进一步计算抑制率,流式细胞仪测定细胞凋亡.将SOSP_9607细胞分为对照组和实验组,对照组分为阴性对照和正常细胞对照组.实验组采用miR-17-5p抑制物(hsa-miR-17-5p inhibitors)抑制SOSP_9607细胞内miR-17-5p的活性.结果:与对照组相比,实验组显著抑制SOSP_9607细胞的增殖,有明显的剂量依赖性(P<0.01).随着浓度从50 nmol/L逐渐增加至200 nmol/L,抑制率逐渐增高(P<0.01).实验组凋亡率(9.6±1.8)%与阴性对照组凋亡率(3.5±0.4)%相比明显增高(P<0.01).结论:miR-17-5p抑制物通过抑制SOSP_9607细胞中miR-17-5p的活性对SOSP_9607细胞的增殖和凋亡发挥重要作用.     

金雀异黄素合成品诱导人胃癌细胞SGC-7901凋亡的体外研究

目的:探讨金雀异黄素合成品诱导人胃癌细胞SGC-7901凋亡的作用机制。方法:采用2.5mg·L~(-1)、5.0mg·L~(-1)、10.0mg·L~(-1)和20.0mg·L~(-1)的金雀异黄素处理人胃癌细胞SGC-7901后,用流式细胞仪检测细胞凋亡率,电镜下观察细胞形态变化,RT-PCR法检测凋亡相关基因表达。结果:10.0mg·L~(-1),20.0mg·L~(-1)金雀异黄素能诱导胃癌细胞SGC-7901凋亡,凋亡率与剂量正相关(相关系数r=0.9830),10.0mg·L~(-1)金雀异黄素诱导胃癌细胞SGC-7901发生凋亡的形态学改变,2.5mg·L~(-1)、5.0mg·L~(-1)、10.0mg·L~(-1)和20.0mg·L~(-1)金雀异黄素使Bcl-2mRNA表达下调,Fas mRNA表达上调。结论:金雀异黄素能诱导胃癌细胞SGC-7901凋亡,降低Bcl-2 mRNA表达,增加Fas mRNA表达为其诱发SGC-7901细胞凋亡的机制之一。     

槲皮素对结肠癌细胞生长的影响

通过MTT试验观察槲皮素对结肠癌细胞系RKO生长的影响;通过流式细胞仪技术观察槲皮素对细胞周期和细胞凋亡的影响;采用RT-PCR和western印迹技术,确定槲皮素对p21、p27和p53表达的影响.MTT法显示槲皮素加药组生长抑制作用明显,且具有剂量依赖性;流式细胞仪分析结果显示,经5μmol/L槲皮素作用后细胞周期明显阻滞在G0/G1期;5、10、20μmol/L3个剂量组的细胞凋亡率分别为23.4%、24.2%、47.9%,而对照组为13.2%;p21和p27的mRNA及蛋白质表达水平上调,促凋亡蛋白p53表达水平上调.因此,槲皮素对RKO生长有明显的抑制作用,槲皮素可能通过上调p21和p27表达使RKO细胞周期阻滞于G0/G1期,可能通过上调促凋亡蛋白p53表达诱导RKO细胞发生凋亡.     

雌、孕激素对贝美格致痫大鼠大脑皮层、海马Glu和GABA免疫反应细胞的影响

采用免疫细胞化学双PAP法,观察雌二醇（E2）、孕酮（P）对贝美格（Bemegride,Be）腹腔致痫大鼠顶叶大脑皮层、海马CA1、CA3区Glu和GABA免疫反应细胞的影响。图像分析结果显示：Be致痫组皮层、海马Glu免疫反应平均阳性细胞数及光密度较正常组明显增加（P＜0.01）;CABA细胞数及光密度减少（P＜0.01）。给予E2后,Be致痫大鼠大脑皮层、海马Glu阳性细胞数目增多,光密度增高（P＜0.01）,GABA阳性细胞数目减少、光密度降低（P＜0.05,P＜0.01）而给予P后,致痫组GABA阳性细胞数目增多、光密度增高（P＜0.01）,Glu阳性细胞数目减少、光密度减低（P＜0.01）。提示雌、孕激素的致痫、抗痫作用与其调节脑内GABA和Glu系统的兴奋性有关。     

低氧对培养的肺血管周细胞凋亡的影响

为了研究低氧是否影响肺血管周细胞凋亡并参与腺泡内无肌肺动脉的构型重建, 用ＴＵＮＥＬ法和免疫组化方法, 观察低氧（Ｈ） 组和低氧肺动脉内皮细胞条件培养液（ＨＥＣＣＭ） 组对肺血管周细胞凋亡发生率及抑凋亡基因ｂｃｌ２ 蛋白表达的影响。结果表明：Ｈ组和ＨＥＣＣＭ 组的凋亡指数明显较对照组减小。Ｈ 组和ＨＥＣＣＭ 组ｂｃｌ２ 蛋白的表达量分别是ＮＥＣＣＭ 组的１１７ 倍、１１３ 倍, 是Ｎ组的１３３ 倍、１２７ 倍。提示低氧诱导的抑凋亡基因ｂｃｌ２ 的过度表达, 对周细胞凋亡发生的抑制作用和低氧促进的周细胞增生过程可能都参与无肌肺动脉的构型重建, 与肺动脉高压的形成有关。     

人胎前额叶皮质神经肽Y免疫反应阳性神经元的发育

本文用免疫组化方法研究了人胎前额叶皮质中神经肽Ｙ（ＮＰＹ）免疫反应阳性神经元的发育。结果显示,ＮＰＹ阳性神经元最早于１６周出现于前额叶皮质的皮质下板,为未成熟的双极神经元。随着胎儿生长,皮质下板的ＮＰＹ阳性神经元数量逐渐增加,胞体增大,着色加深,突起增多增长。３０周后较少数量的ＮＰＹ阳性神经元也见于皮质的Ⅵ层及白质,皮质其它层阳性神经元数量很少。２８周后皮质内还能见到各种走向的ＮＰＹ阳性神经纤维,其数量随胎儿生长而增加。本研究提示,与其它动物相比,人类大脑皮质ＮＰＹ阳性神经元出现较早,其成熟过程基本上在出生前完成     

天花粉对小鼠子宫肥大细胞超微结构的影响

本研究用雌性中国１号小鼠１２只,分实验组和对照组,实验组分别腹腔注射天花粉后处死,取子宫组织作超薄切片,电镜观察。在天花粉作用下,常见子宫肥大细胞脱颗粒,呈功能活化状态,并与子宫平滑肌细胞紧密相邻。提示肥大细胞可能通过脱颗粒释放组胺促进子宫平滑肌的收缩。同时,也见肥大细胞与子宫结缔组织中的成纤维细胞,淋巴细胞等密切接触,提示成纤维细胞和淋巴细胞与天花粉作用下子宫肥大细胞的数量增多有关。     

小鼠肝脏树突状细胞前体分离培养及影响其成熟因素的初步探讨

本次首次建立了从小鼠肝脏分离、培养、扩增肝树突状细胞（ｈｅｐａｔｉｃｄｅｎｄｒｉｔｉｃｃｅｌ,ＨＤＣ）前体的方法。采用经门静脉插管胶原酶二步循环灌流法及Ｐｅｒｃｏｌ不连续密度梯度离心法分离非肝细胞,得到含ＨＤＣ前体组分,将其分三组培养：第一组加入重组小鼠粒细胞／巨噬细胞集落刺激因子（ＭｒＧＭＣＳＦ）,待培养９天后,将细胞转移至鼠尾胶原上继续培养。第二组加入ＭｒＧＭＣＳＦ培养,但细胞不转移。第三组为对照组,仅加完全培养液。结果显示：第一、二组细胞于培养４天可见有许多细胞集落形成,第一组细胞转移至鼠尾胶原上培养１天后,细胞集落减少,而培养液中ＤＣ密度明显增加,光镜和扫描、透射电镜观察证明培养ＨＤＣ纯度达９５％,第二组则无上述细胞释放现象。实验结果提示,ＨＤＣ前体在体外受细胞因子刺激能大量扩增,但必须在胶原存在下才能分化成熟     

维拉帕米对缺血后大鼠视网膜NOS阳性神经元的影响

实验用 β- NADPH脱氢酶组织化学染色研究维拉帕米对缺血后大鼠视网膜 NOS阳性神经元的影响。结扎双侧颈总动脉使视网膜缺血 ,3小时后松结复流。分别于缺血前 15分钟和再灌流前 1分钟腹腔注射维拉帕米 (5 m g/kg/次 ) ,对照组腹腔注射等量生理盐水。动物存活 3天后取视网膜进行 β- NADPH组化反应。结果表明 :视网膜缺血后 NOS阳性神经元减少 ,并出现 i NOS阳性细胞。在缺血前后应用维拉帕米可使视网膜内 NOS神经元较对照组显著减少 (P<0 .0 1) ,NOS神经元形态良好。说明维拉帕米减少大鼠视网膜缺血后 NOS阳性神经元 ,其相应 NO量减少 ,推测维拉帕米对大鼠缺血后视网膜功能具有保护作用。     

大鼠缺氧预处理心肌酶活性及其ATP酶的电镜细胞化学观察

本实验通过对大鼠反复４次缺氧５ｍｉｎ（常压,氧浓度１０±０．５％）的缺氧预处理与经典的缺血预处理（Ｍｕｒｙ法）的对比观察表明,两者均能明显降低心肌丙二醛含量和肌酸激酶的漏出,提高心肌超氧化物岐化酶,Ｃａ２＋Ｍｇ２＋－ＡＴＰａｓｅ、细胞色素氧化酶、琥珀酸脱氢酶活性及维持细胞超微结构的完整性,提示这种非创伤性缺氧预处理具有与缺血预处理相类似的抗心肌缺血的作用     

前脑生长抑素样神经元对大鼠颈部食管前运动神经元的支配——PRV和SOM荧光双标记法研究

用ＰＲＶ和ＳＯＭ免疫荧光双标记法研究了前脑中ＳＯＭ样神经元对孤束核中食管前运动神经元的支配。当ＰＲＶ注射于大鼠颈部食管后,在大脑皮质前部嗅沟背侧的无颗粒型岛叶皮质后部和嗅沟腹侧的梨状前皮质前部可见较多ＰＲＶ和ＳＯＭ双标记细胞。在终纹床核、内侧视前区、外侧视前区和正中视前区、终板血管器、穹隆下器、以及嗅结节等处也可见少量ＰＲＶ和ＳＯＭ双标记细胞。本文推测脑对颈部食管运动的调节是由广泛的中枢神经系统结构来完成的     

AMPA受体与谷氨酸在大鼠三叉神经尾侧亚核内分布的免疫组织化学研究

本文用免疫组织化学ＡＢＣ法调查了４种ＡＭＰＡ受体亚单位（ＧｌｕＲ１、２／３、４）和谷氨酸（Ｇｌｕ）在大鼠三叉神经尾侧亚核（Ｖｃ）内的分布及其匹配关系。我们发现,ＧｌｕＲ１和２／３免疫阳性胞体和纤维密集分布于Ｖｃ的Ⅱ层和Ⅲ层外侧部,在Ｖｃ的其余各层呈散在性分布。ＧｌｕＲ４免疫阳性胞体和纤维在Ｖｃ各层均无分布。Ｇｌｕ免疫阳性胞体分布于Ｖｃ各层,尤以浅层（Ⅰ、Ⅱ层）密集,Ｇｌｕ免疫阳性纤维及终末结构主要分布于Ｖｃ浅层。结果表明,Ｇｌｕ免疫阳性纤维及终末样结构与ＡＭＰＡ受体免疫阳性胞体和纤维在Ｖｃ浅层的分布总体上是相互匹配的,但ＡＭＰＡ受体各亚单位在Ｖｃ内的分布存在明显的差异。本文提示,Ｖｃ内的Ｇｌｕ可能通过作用于不同的ＡＭＰＡ受体亚单位而发挥其多种生理功能     

丹参对鼠缺血后残肝酶组织化学的影响

研究观察鼠缺血后肝再生时酶组织化学的变化。结果表明缺血后肝再生时肝细胞ＳＤＨ、Ｇ６Ｐａｓｅ和Ｍｇ２＋ＡＴＰａｓｅ活性及ＰＡＳ反应均在不同程度上低于对照组,而ＬＤＨ、ＡＣＰ活性较对照组有不同程度升高。丹参组酶活性及ＰＡＳ反应基本处于缺血组与对照之间,说明丹参对保护某些酶活性,促进肝再生有一定的作用