HIV/AIDS患者抗病毒治疗前HIV-1耐药情况调查及外周血CD8+T细胞CD38表达水平研究

摘要 目的：分析人免疫缺陷病毒/艾滋病（HIV/AIDS）患者抗病毒治疗前HIV-1耐药以及影响因素,探讨HIV/AIDS患者外周血CD₈⁺T细胞CD₃₈表达（CD₈⁺CD₃₈⁺T淋巴细胞百分比）与CD₄⁺T淋巴细胞计数的相关性。方法：选择2016年3月至2019年12月我院接诊的442例HIV/AIDS患者（HIV/AIDS组）和163例同期于我院进行体检的健康志愿者（对照组）,HIV/AIDS组扩增pol基因,进行HIV-1基因耐药分析,检测CD₈⁺CD₃₈⁺T淋巴细胞百分比、CD₄⁺T淋巴细胞计数、CD₈⁺T淋巴细胞计数。分析HIV/AIDS患者HIV-1耐药的影响因素,分析CD₈⁺CD₃₈⁺T淋巴细胞百分比与CD₄⁺T淋巴细胞计数、CD₈⁺T淋巴细胞计数相关性。结果：HIV/AIDS组442例HIV/AIDS患者中376例获得HIV-1 pol基因序列,HIV-1耐药35例,耐药率9.31%（35/376）。单因素分析结果显示耐药组和非耐药组在年龄、文化程度、感染途径、HIV病毒载量方面差异有统计学意义（P＜0.05）。多因素Logistic回归分析结果显示同性性传播、注射吸毒、高HIV病毒载量是HIV/AIDS患者抗病毒治疗前HIV-1耐药的危险因素（P＜0.05）。HIV/AIDS组外周血CD₄⁺T淋巴细胞计数、CD₈⁺T淋巴细胞计数低于对照组（P＜0.05）,CD₈⁺CD₃₈⁺T淋巴细胞百分比高于对照组（P＜0.05）。CD₈⁺CD₃₈⁺T淋巴细胞百分比与CD₄⁺T淋巴细胞计数、CD₈⁺T淋巴细胞计数呈负相关（P＜0.05）。结论：抗病毒治疗前HIV/AIDS患者存在一定HIV-1耐药率,传播途径、HIV-1病毒载量与HIV-1耐药有关。CD₈⁺T细胞表面CD₃₈过表达与HIV/AIDS 患者CD₄⁺T T细胞的过度消耗有关。     

外周血T细胞CD38和HLA-DR的表达水平在儿童传染性单核细胞增多症中的临床意义

摘要 目的：探讨传染性单核细胞增多症（IM）患儿外周血T细胞活化分子CD38和人类白细胞抗原DR（HLA-DR）表达水平的临床意义。方法：采用流式细胞术分别检测45例IM患儿急性期和恢复期的活化分子CD38和HLA-DR在T细胞的表达水平,并与30例健康体检儿童进行对比。分析IM患儿急性期CD38和HLA-DR在T细胞的表达水平与EB病毒载量、肝功能指标、外周血异型淋巴细胞比例、淋巴细胞计数的相关性,并采用ROC曲线分析CD8⁺CD38⁺T和CD8⁺HLA-DR+T细胞百分比的诊断效能。结果：与对照组比较,IM急性期患儿的CD38和HLA-DR在T细胞的表达水平显著升高（P＜0.05）。CD8⁺CD38⁺T、CD8⁺HLA-DR+T细胞百分比分别与EBV-DNA、ALT、AST、LDH、异型淋巴细胞百分比、淋巴细胞计数呈正相关（P＜0.05）,与白蛋白（ALB）呈负相关（P＜0.05）;CD4⁺CD38⁺T、CD4⁺HLA-DR+T细胞百分比与上述指标无显著相关性（P均＞0.05）。IM恢复期CD38和HLA-DR在T细胞的表达水平较急性期明显降低（P＜0.05）。ROC曲线分析CD8⁺CD38⁺T、CD8⁺HLA-DR+T细胞百分比显示诊断儿童IM的AUC值分别为0.931和0.993,特异度均为100%,灵敏度分别为88.89 %和93.33 %。结论：流式法检测CD38和HLA-DR在T细胞的变化有助于判断病情变化。外周血CD8⁺CD38⁺T、CD8⁺HLA-DR+T细胞百分比不仅能反映出IM急性期肝功能损伤严重程度,还可作为儿童IM的流式诊断指标。     

经鼻高流量氧疗联合参芪扶正注射液对COPD合并Ⅱ型呼吸衰竭患者动脉血气、炎性因子及免疫功能的影响

摘要 目的：探讨经鼻高流量氧疗联合参芪扶正注射液对慢性阻塞性肺疾病（COPD）合并Ⅱ型呼吸衰竭患者动脉血气、炎性因子及免疫功能的影响。方法：选择2017年5月-2019年12月我院收治的COPD合并Ⅱ型呼吸衰竭患者104例,随机分为研究组和对照组,每组52例。两组患者均给予了基础治疗,对照组采用经鼻高流量氧疗治疗,研究组采用经鼻高流量氧疗联合参芪扶正注射液治疗。比较两组临床疗效、不良反应发生情况及治疗前后的动脉血气指标[动脉血PH值、动脉血氧分压（PaO2）、动脉血二氧化碳分压（PaCO₂）、血氧饱和度（SaO₂）],血清炎性因子[白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、C反应蛋白（CRP）]水平,外周血CD4⁺T细胞、CD8⁺T细胞水平及CD4⁺/ CD8⁺值、免疫球蛋白A（IgA)、IgM、IgG水平。结果：研究组总有效率为92.31%（48/52）,显著高于对照组78.85%（40/52）（P＜0.05）。治疗后两组患者动脉血pH值、PaO₂、SaO₂、CD4⁺T细胞、CD4⁺/CD8⁺、IgA、IgM、IgG显著升高,PaCO2、IL-6、TNF-α、CRP、CD8⁺显著降低（P＜0.05）,研究组患者动脉血pH值、PaO₂、SaO₂、CD4⁺T细胞、CD4⁺/CD8⁺值、IgA、IgM、IgG显著高于对照组,PaCO₂、IL-6、TNF-α、CRP、CD8⁺T细胞显著低于对照组（P＜0.05）。两组不良反应发生率比较无统计学差异（P>0.05）。结论：经鼻高流量氧疗联合参芪扶正注射液治疗可纠正COPD合并II型呼吸衰竭患者的动脉血气指标,改善免疫功能,缓解机体炎症反应。     

H2O2－Fe3+所致人淋巴细胞DNA双链断裂损伤

采用脉冲电场凝胶电泳法检测H₂O₂－Fe³⁺体系产生的OH^·对人淋巴细胞DNA的双链断裂损伤．H₂O₂－Fe³⁺浓度与DNA双链断裂呈明显量效关系;随OH^·作用时间延长,细胞DNA双链断裂加重;过氧化氢酶对OH^·损伤有明显抑制作用．脉冲电场凝胶电泳法可检测到的H₂O₂和FeCl₃引起细胞DNA双链断裂的最低浓度为0.3 mmol/L和6 μmol/L．     

脓毒症患者外周血T淋巴细胞PD-1表达变化及胸腺肽α-1的免疫调理作用研究

摘要 目的：探讨脓毒症患者外周血T淋巴细胞程序性细胞死亡受体1（PD-1）表达特点,分析胸腺肽?琢-1治疗对患者免疫功能的影响。方法：选择2018年3月至2020年6月我院重症医学科收治的140例脓毒症患者（脓毒症组）和同期于我院进行体检的95例健康志愿者（对照组）,根据急性生理与慢性健康评估Ⅱ（APACHE Ⅱ）、序贯器官衰竭评估（SOFA）评分结果将脓毒症患者分为APACHE Ⅱ 0~10分组（51例）、11~20分组（62例）和＞20分组（27例）;SOFA评分0~5分组（48例）、6~10分组（60例）和＞10分组（32例）。检测外周血CD4⁺T细胞上PD-1表达、CD8⁺T细胞上PD-1表达,比较组间差异性。Pearson秩相关性分析外周血CD4⁺T细胞上PD-1表达、CD8⁺T细胞上PD-1表达与APACHE Ⅱ、SOFA评分相关性。根据治疗方法将脓毒症患者分为A组（60例）和B组（80例）,A组给予常规综合治疗和乌司他丁治疗,B组在A组的基础上联合胸腺肽α-1治疗,比较两组治疗前后外周血T淋巴细胞（CD3⁺、CD4⁺、CD8⁺）、NK细胞（CD3-CD16⁺CD56⁺）差异。结果：脓毒症组外周血CD4⁺T细胞上PD-1表达、CD8⁺T细胞上PD-1表达高于对照组（P＜0.001）,外周血CD4⁺T细胞上PD-1表达、CD8⁺T细胞上PD-1表达随APACHE Ⅱ、SOFA评分的增加而增高,各组间差异显著（P＜0.05）。Pearson秩相关分析结果显示外周血CD4⁺T细胞上PD-1表达、CD8+T细胞上PD-1表达与APACHE Ⅱ评分、SOFA评分呈正相关（r=0.569、0.475;0.653、0.509,P均＜0.05）。B组治疗后CD3⁺、CD4⁺、CD3-CD16⁺CD56⁺高于A组（P＜0.05）,CD8⁺低于A组（P＜0.05）。结论：脓毒症患者外周血CD4⁺、CD8⁺T细胞上PD-1表达均增高,其表达与病情严重程度密切相关。给予胸腺肽α-1治疗可改善患者免疫功能。     

抗CD20嵌合抗体片段Fab′突变体的表达和活性研究

利用PCR方法从抗CD20单链抗体（ScFv）表达载体上扩增抗CD20抗体轻链可变区基因（V^L）、重链可变区基因（V^H）,同时在抗体的可变区引入突变,然后将V^H、V^L基因重组到Fab′表达载体pYZF1中,构建抗CD20嵌合抗体Fab′片段表达载体,并在大肠杆菌16c9中进行高效可溶性分泌表达。经大量的筛选,获得一个产量和活性均有所提高的突变克隆。其突变位点在轻链可变区的CDR1区,即G77→A（Ser→Asn）。突变的抗体的表达量为每克干菌3.8 mg,而未突变抗体的表达量为每克干菌1.3 mg。突变体的亲和力常数K_a为2.2×10⁹ L/mol,约为突变前的2倍。竞争性免疫荧光抑制实验表明,突变的Fab′片段能竞争性抑制鼠源性抗CD20抗体HI₄₇和CD20表达细胞Raji细胞的结合,使HI₄₇的结合阳性率由98%下降至37.55%,体外细胞生长抑制试验亦证明突变的Fab′片段的抑制活性明显高于未突变的抗体。     

手足口病合并脑炎患儿外周血T淋巴细胞亚群、血清VCAM-1及CRP的表达水平及其检测价值分析

摘要 目的：探讨与分析手足口病（HFMD）合并脑炎患儿外周血T淋巴细胞亚群、血清VCAM-1及CRP的表达水平及其检测价值。方法：2017年4月到2020年10月选择在本院诊治的手足口病合并脑炎患儿42例作为合并组,同期选择手足口病不合并脑炎患儿68例作为对照组,检测两组外周血T淋巴细胞亚群、血清血管细胞粘附分子-1（VCAM-）及C-反应蛋白（CRP）表达水平,并判断检测价值与进行相关性分析。结果：合并组的CD4⁺、CD8⁺T淋巴细胞相对比例都明显少于对照组（P<0.05）。合并组的血清VCAM-1及CRP含量明显高于对照组（P<0.05）。在80例患儿中,Spearsman分析显示CD4⁺、CD8⁺T淋巴细胞相对比例和血清VCAM-1、CRP含量都与手足口病合并脑炎的发生存在相关性（P<0.05）。二分类Logistic回归分析显示CD4⁺、CD8⁺T淋巴细胞相对比例和血清VCAM-1、CRP含量都为导致手足口病合并脑炎发生的重要因素（P<0.05）。结论：手足口病合并脑炎患儿多伴随有外周血T淋巴细胞亚群异常与血清VCAM-1、CRP的高表达,CD4⁺、CD8⁺T淋巴细胞相对比例、血清VCAM-1、CRP含量都为导致手足口病合并脑炎发生的重要因素。     

组蛋白去乙酰化酶3对外周CD4+ T细胞分化的影响

目的 探讨组蛋白去乙酰化酶3（HDAC3）对外周CD4⁺ T细胞分化及功能的调控作用。方法 采用CD4cre酶介导Hdac3杂合基因缺失小鼠（Hdac3^fl/flCD4^cre+/-）及其野生型正常对照小鼠（Hdac3^fl/fl，WT），流式细胞术检测HDAC3缺失对外周CD4⁺和CD8⁺ T细胞比例和数量的影响；在体外佛波酯（PMA）和离子霉素（Ionomycin）刺激条件下，流式细胞术检测HDAC3缺失对CD4⁺ T细胞中IFN-γ、IL-4和IL-17A的表达以及Tfh细胞产生的影响；采用ELISA检测HDAC3缺失对小鼠血清IFN-γ、IL-4和IL-17表达的影响；分选Hdac3^fl/flCD4^cre+/-和WT小鼠外周初始CD4⁺ T细胞，分别在Th1和Th2分化条件下培养，细胞内染色检测HDAC3缺失对Th1、Th2以及Th17相关细胞因子及其特异转录因子表达的影响；采用Microarray检测HDAC3缺失对CD4⁺ T细胞分化亚群相关基因表达的影响；采用链脲佐菌素（STZ）处理小鼠构建I型糖尿病（TIDM）疾病模型，检测HDAC3缺失对T1DM发病的影响。结果 与WT小鼠相比，Hdac3^fl/flCD4^cre+/-小鼠外周CD4⁺和CD8⁺ T细胞的比例和数量显著降低。Hdac3^fl/flCD4^cre+/-小鼠CD4⁺ T细胞及血清中IFN-γ的表达显著降低，而IL-4和IL-17A的表达显著增加，Tfh细胞比例也显著增加；HDAC3缺失抑制体外培养CD4⁺ T细胞向Th1分化但促进其向Th2分化；Microarray检测发现HDAC3缺失导致Th1型细胞谱系基因表达降低，而Th2、Th17以及Tfh细胞谱系基因表达增加；在STZ诱导条件下，HDAC3缺失抑制小鼠T1DM的发生和CD4⁺ T细胞向Th1分化。结论 HDAC3促进外周CD4⁺ T细胞向Th1细胞分化并加重T1DM的发生。     

基于免疫性PTR的血小板膜糖蛋白及T/B淋巴细胞表达水平研究

摘要 目的：探究血小板膜糖蛋白及T/B淋巴细胞免疫在免疫性血小板输注无效发生机制中的重要作用。方法：采用血小板特异性抗体检测试剂盒及流式细胞技术检测免疫性PTR患者血小板特异性抗体（抗GPIIb/IIIa、抗GPIa/IIa、抗GPIb/IX、抗GPIV）、血小板膜糖蛋白（CD36、CD61、CD41a）表达情况及外周血T/B淋巴细胞数量,运用SPSS19.0软件及R软件分析免疫性PTR与血小板膜糖蛋白、外周血T/B淋巴细胞的相关性。结果：免疫性PTR与血小板输注有效者比较,血小板特异性抗体的产生无显著差异,血小板膜糖蛋白CD36和CD61的表达具有显著差异,CD36对免疫性PTR发生风险具有极大的预测价值,外周血CD8⁺T细胞比例增高,而CD4⁺T细胞比例减低。结论：免疫性PTR患者产生血小板抗体具体机制不明确,了解患者细胞免疫状态有助于明确免疫性PTR的发生机制,为患者提供更优质的诊疗策略。     

慢阻肺患者运动负荷气道反应性与T细胞亚群的关系

摘要 目的：探讨与分析慢性阻塞性肺疾病（COPD）患者运动负荷气道反应性与T细胞亚群的关系。方法：2020年1月到2022年4月选择在本院诊治的慢阻肺患者88例作为慢阻肺组,同期选择在本院进行健康体检者88例作为健康组,检测两组T细胞亚群含量,判定两组的运动负荷气道反应性情况并进行相关性分析。结果：慢阻肺组的CD8⁺T淋巴细胞比例明显高于健康组,CD3⁺T淋巴细胞、CD4⁺T淋巴细胞比例明显低于健康组（P<0.05）。慢阻肺组的运动负荷气道反应性发生率为20.9 %,明显高于健康组的1.2 %（P<0.05）。在慢阻肺中,Spearsman分析显示运动负荷气道反应性发生率与CD3+T淋巴细胞、CD4⁺T淋巴细胞、CD8⁺T淋巴细胞比例存在相关性（P<0.05）。logistic回归分析显示CD3⁺T淋巴细胞、CD4⁺T淋巴细胞、CD8⁺T淋巴细胞比例都为影响运动负荷气道反应性发生的重要危险因素（P<0.05）。结论：慢阻肺患者多伴随有T细胞亚群异常,也多伴随有运动负荷气道反应性,运动负荷气道反应性与T细胞亚群存在相关性,也表明T细胞亚群紊乱是导致运动负荷气道反应性发生的重要因素。     

The life and death of gene families

One of the unique insights provided by the growing number of fully sequenced genomes is the pervasiveness of gene duplication and gene loss. Indeed, several metrics now suggest that rates of gene birth and death per gene are only 10–40% lower than nucleotide substitutions per site, and that per nucleotide, the consequent lineage‐specific expansion and contraction of gene families may play at least as large a role in adaptation as changes in orthologous sequences. While gene family evolution is pervasive, it may be especially important in our own evolution since it appears that the “revolving door” of gene duplication and loss has undergone multiple accelerations in the lineage leading to humans. In this paper, we review current understanding of gene family evolution including: methods for inferring copy number change, evidence for adaptive expansion and adaptive contraction of gene families, the origins of new families and deaths of previously established ones, and finally we conclude with a perspective on challenges and promising directions for future research.     

真核基因的快速克隆及表达

以细胞间隙连接蛋白基因Cx26作为目的基因,通过T-A载体介导,构建真核表达重组载体pcDNA3.1( ) /Cx26,重组表达载体转染人鼻咽癌细胞株HNE1,表达Cx26间隙连接蛋白。     

成簇基因的时空表达调控

成簇基因具有不同单个基因的特性,同一簇内基因大多有类似的结构,功能以及表达模式,基因之间时空表达模式及表达量高度协调,提示同一簇基因是作为统一整体进行调节的,具有共同的调节机制。基因成簇排列是实现基因时空协调表表达的基础,是遗传信息的一种高级组织形式,具有强大的进化优势,要揭示成簇基因表达调控的基本规律,应从顺式作用元件,反式作用因子,染色质等层次,进行整体的以及多基因相互作用的研究,这些机制的阐     

利用套叠PCR技术进行基因突变和拼接

利用套叠PCR技术（又称重叠区扩增基因拼接法）对hGM-CSF基因内第28位氨基酸处的糖基化位点进行突变和进行人促性腺激素基因,腺苷酸激酶短肽与胰岛素样生长因子－基因三者之间的拼接,结果表明采用该技术能在体外实行有效的基因重组和定点突变,其成功率为100％,这一技术不需要内切酶消化和连接酶处理,技术操作员简单易行,在基因拼接,基因内部突变方面具有良好的应用价值。     

基因功能研究方法浅介

随着人类基因组计划的进展,数据库中积累了越来越多未知功能的基因序列,分析这些基因的功能将成为基因组计划的主要任务。本介绍了几种研究特定基因功能的方法及程序。     

GFP-pl6融合基因表达载体的构建

本文报道了以ＧＦＰ（绿色荧光蛋白）基因为报告基因,ｐｌ６基因为目的基因,将ｐｌ６基因分别插入ＧＦＰ基因的上游和下游,构建成ＧＦＰ－ｐｌ６融合基因表达载体ｐＣｐｌ６Ｇ和ｐＣＧｐ１６,并通过酶切、电泳技术对重组体进行了鉴定。该表达载体的构建成功为开展ｐｌ６转基因动物模型的建立及其特性研究奠定了基础     

BPOZ基因剔除小鼠模型的建立

BPOZ是在卵巢癌等肿瘤组织中表达下调的细胞生长抑制基因,建立BPOZ基因剔除小鼠模型,可以为在体研究BPOZ基因的生物学功能及其与肿瘤发生的关系创造条件.运用生物信息学手段确定小鼠BPOZ基因组序列,设计基因剔除策略,构建完成了基因剔除载体XpPNT-BPOZ.以电穿孔方法将基因剔除载体导入ES细胞,用G418和Ganciclovoir进行正负筛选,获得抵抗克隆,PCR和DNA印迹鉴定出正确同源重组的ES细胞克隆.将同源重组的ES细胞注入小鼠囊胚,获得嵌合体小鼠.嵌合体小鼠与C57BL/6J小鼠交配后获得Aguoti毛色的小鼠30只,其中15只为BPOZ基因剔除杂合子小鼠,阳性率为50%.在雌雄杂合子交配的后代中获得纯合子小鼠.初步的表型观察发现BPOZ基因剔除小鼠发育正常,有繁殖能力,进一步的表型分析工作正在进行之中.     

性别决定基因SRY的研究进展

SRY基因是哺乳动物性别决定过程中的主宰基因,其表达产物SRY蛋白是一种DNA结合蛋白,该蛋白含有一个HMG盒,能够以序列特异性结合到DNA双螺旋链的一侧,起到转录因子的作用。调节或协同下游基因如SOX9、AMH等基因的表达,使胚胎发育向雄性方向发展。     

非病毒基因治疗的研究进展

非病毒基因治疗是相对于病毒性基因治疗而言,指采用非病毒的载体进行的基因治疗。非病毒的基因载体比病毒性基因载体具有高安全性、低免疫原性及易于生产的特点。本文就非病毒基因治疗所采用的主要方法、面蜂的主要问题及发展方向作一概括的介绍。随着人类对疾病发病分子机制的深入研究及人类基因组计划的实施,非病毒基因治疗将在人类疾病的治疗中发挥重要作用。