盐酸雷尼替丁有关物质高效液相检测方法建立及方法学研究

目的:建立盐酸雷尼替丁有关物质高效液相色谱检测方法及方法学研究。方法:采用色谱柱:Agela Venusil ASB C18 4.6×150mm,流动相为0.08mol/L柠檬酸溶液(用三乙胺调节p H至3.5)-乙腈(80∶20),检测波长为314nm。流速为1.0ml/min;柱温为30?C。结果:采用该方法能将杂质与主成分有效分离,专属性良好,耐用性强,10小时内溶液较稳定,经检测限试验证明该方法能有效检出杂质。结论:高效液相方法简便,准确度高,专属性好,建议采用此法测定盐酸雷尼替丁的有关物质。     

HPLC法测定罗氟司特粗品有关物质及新化合物的发现

通过罗氟司特的合成方法及过程分析,推测罗氟司特中可能存在的杂质,并通过高效液相色谱(HPLC)测定其杂质。采用Ultimate Phenyl-Ether色谱柱,0.01 mol/L的KH₂PO₄溶液、乙腈作为流动相。该方法专属性、精密度、回收率及稳定性均良好,用此方法能将罗氟司特的有关物质进行分离,在罗氟司特粗品中检测到的3个杂质,其中IMP4为本研究首次检测到并报道。对检测到的罗氟司特粗品中杂质进行分离定量,发现除检测到的3个杂质以外,本文所用方法还能有效分离另外4种潜在杂质。     

反相高效液相色谱法检测白喉毒素无毒突变体CRM197蛋白纯度

目的 建立反相高效液相色谱法(reverse phase high performance liquid chromatography, RP-HPLC)检测白喉毒素无毒突变体CRM197蛋白纯度。方法 利用Agilent AdvanceBio RP-mAb SB-C8(100 mm×2.1 mm)分析柱和Agilent1260高效液相色谱系统,以含0.1%三氟乙酸水溶液-异丙醇(98∶2)为流动相A,以含0.1%三氟乙酸乙腈溶液为流动相B,进行梯度洗脱,体积流速为0.5 mL/min,检测波长为280 nm,柱温为65℃,进样体积为10μL,采用面积归一法检测CRM197蛋白纯度,并对方法的适用性、专属性、重复性、中间精密度、线性、灵敏度和耐用性指标进行考察。用建立的方法检测CRM197蛋白酸处理供试品溶液、碱处理供试品溶液及3批原液的纯度。结果 建立的方法系统适用性良好;专属性验证表明空白溶液在目标峰积分范围内无干扰峰,热处理CRM197蛋白目标峰与其他杂质峰分离度>1.5;6次重复进样目标峰面积相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)为...     

高效液相色谱法测定多抗原肽MAP4原料药中醋酸和三氟醋酸的含量

目的:测定多抗原肽MAP4原料药中醋酸及三氟乙酸的残留量。方法:采用反相高效液相色谱法,采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的Kromasil(250mm×4.6mm,10μm),200色谱柱;pH3.0磷酸盐缓冲液及甲醇为流动相,进行梯度洗脱;检测波长:210nm;柱温为25℃;流速:0.8ml/min;进样体积:40μl。结果:该方法中醋酸和三氟乙酸的分离度符合要求;醋酸的检测限0.1μg;三氟乙酸的检测限0.1μg;样品中未检出三氟醋酸。醋酸含量为5.7%。结论:该方法快速,准确,专属性强,精密度高,对多抗原肽MAP4原料药的质量控制有一定的意义。     

硫酸瑞格列汀含量测定方法筛选

目的建立硫酸瑞格列汀含量测定方法。方法采用高效液相色谱法,色谱柱为waters(0.15m×3.5mm),以0.01 mol/L磷酸氢二钾溶液(用磷酸调节p H至6.5)∶乙腈=8∶2为流动相A,乙腈为流动相B,A:B为70:30,检测波长为210nm,专属性试验结果表明溶剂不干扰含量测定,准确度回收率为99.2%,相对标准偏差为1.2%,线性试验研究结果表明溶液浓度在0.19mg/ml至0.42 mg/ml的范围内,线性关系良好,重复性及中间精密度试验符合规定,定量限试验结果表明在信噪比约为10:1时溶液的浓度为8.9ug/ml。结果方法学试验符合规定,所建立含量测定方法可用于本品含量测定,系统适用性试验需考察杂质H与主峰分离度。     

高效液相色谱法测定1,25- 二羟基维生素D2纳米乳注射液的含量

目的:建立高效液相色谱法测定1,25-二羟基维生素D_2纳米乳注射液含量。方法:采用C18-STⅡ色谱柱(4.6×250 mm,5μm);流动相为乙腈-水=85:15(V/V);流速:1.5 m L/min;检测波长:274 nm;温度:室温;进样量:200μL。结果:该方法专属性好,平均回收率99.96%(RSD为0.63%,n=9);溶液在冷藏(2~6℃)保存24 h稳定(RSD=0.98%,n=7);在0.06μg/m L~4.0μg/m L范围内线性关系良好,其回归方程为:Y=201098 X-8412.5(R2=0.9998,n=9)。结论:该方法简便、快捷、灵敏度高、专属性强,可用于该注射液的含量测定。     

高效液相色谱法测定注射用盐酸吉西他滨含量测定

目的:建立高效液相色谱法测定注射用盐酸吉西他滨的含量。方法:采用高效液相色谱法,色谱柱:Aglea Venusil XBP C8 4.6×250mm 5um;流动相:以醋酸铵缓冲液(取醋酸铵3.85g加水800ml使溶解,加冰醋酸调p H值至5.7,加水1000ml)-甲醇(90:10)为流动相,检测波长268nm。结果:盐酸吉西他滨线性为y=944.25x+4608.5,r=0.9998,溶液在70.64 ng/ml~131.20ng/ml的浓度范围内线性关系良好;平均回收率为99.89%,RSD为0.53%(n=9),重复性RSD=0.12%(n=6);结论:该方法简便,线性、重复性好、准确度高,采用此方法能准确测定注射用盐酸吉西他滨含量。     

高效液相色谱法分析吡咯喹啉醌

目的:建立一种通过高效液相色谱(HPLC)定量测定吡咯喹啉醌(PQQ)的分析方法。方法:将PQQ标准品及发酵制备的PQQ结晶粉末溶于10 mmol/L Na OH溶液,利用高效液相色谱仪进行测定。采用Waters XBridge C18(4.6 mm×150 mm,5μm)作为分离柱,用甲醇-水(用三氟乙酸调节p H值为1.0)梯度洗脱,流速为1.0 m L/min,于室温下检测PQQ,检测波长为365.8 nm。结果:检测得PQQ标准品的保留时间约为7.8 min,在0.031 25~1 mg/m L范围内线性关系良好,相关系数(r2)在0.9999以上,平均回收率为98.6%。结论:高效液相色谱法分析PQQ的灵敏度和准确度高,是一种可靠的PQQ定量分析方法。     

法罗培南钠片有关物质检查方法的研究

目的:建立法罗培南钠片有关物质检查方法。方法:色谱柱:Agilent-150mm XDB-C18 5μm;流动相:乙腈-磷酸二氢钾缓冲液(20mmol/L磷酸二氢钾水溶液,用10mol/L NaOH溶液调pH值至6.0)(10:90);柱温:30℃;检测波长为256nm;流速:1ml/min;进样量:20μl。结果:辅料不干扰测定,各破坏条件下产生的杂质峰与主峰完全分离;最低检出量:3.175ng;法罗培南钠可与其异构体完全分离。结论:本方法准确、可靠、专属性强,可以更好的控制产品质量。     

苯酚消毒剂中邻苯基苯酚和对叔戊基苯酚的高效液相色谱测定法

目的建立同时测定苯酚消毒剂中的邻苯基苯酚和对叔戊基苯酚2种杀菌有效成分的高效液相色谱法。方法采用安捷伦ZorbaxODS,25cmx4.6mm,粒径5μm的反相色谱柱,流动相为乙腈-1%醋酸溶液(60:40),流速1.5mL/min,检测波长278nm,柱温为25℃下进行检测。结果邻苯基苯酚和对叔戊基苯酚的线性范围为5~150mg/L,相关系数为0.9999,检出限为5mg/L,相对标准偏差小于1.02%,加标回收率为93.6%~98.5%。结论该方法操作简便、快速、灵敏度高,适合消毒剂中的邻苯基苯酚和对叔戊基苯酚的同时测定。     

交联透明质酸凝胶中交联剂的HPLC测定

目的建立交联透明质酸钠凝胶中交联剂二乙烯基砜(DVS)残留量的测定方法。方法用高效液相色谱法测定DVS残留量,色谱条件为:色谱柱为C8(4.6mm×250mm),流动相为25mmol/L磷酸二氢钾溶液(pH3.0)-乙腈(90∶10),检测波长为210nm。结果DVS在1~50μg/g范围内线性关系良好(r=0.9997),平均回收率98.4%,RSD为1.02%。结论用高效液相色谱法测定交联透明质酸钠凝胶中DVS残留量,方法准确、可靠,可用于产品质量控制。     

氢化可的松对奶牛乳腺上皮细胞乳脂肪合成的影响

该研究旨在探讨不同浓度的氢化可的松处理对奶牛乳腺上皮细胞(bovine mammary gland epithelial cells,BMECs)增殖、甘油三酯(triglyceride,TAG)合成、脂滴的形成以及乳脂肪合成相关基因表达的影响。采用单因子随机实验设计,以不添加氢化可的松组为对照组,处理组的氢化可的松浓度分别为1、10、100、1 000 ng/m L。各组细胞处理24 h后,通过四甲基偶氮唑盐(thiazoly blue tetrazolium,MTT)比色法检测细胞活力;利用试剂盒检测胞内TAG的含量;使用油红O染色法检测细胞内乳脂球的合成;采用实时定量PCR法检测乳脂合成相关基因的表达。结果表明,氢化可的松处理对BMECs增殖无显著影响(P0.05);与对照组相比,100 ng/m L氢化可的松组能够显著提高TAG的合成量、增加胞内脂滴的形成以及过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator activated receptorγ,PPARγ)的基因表达(P0.05);10 ng/m L和100 ng/m L氢化可的松组能够显著上调乙酰辅酶A羧化酶(acetyl-Co A carboxylase,ACC)、二酰甘油酰基转移酶(diacylgycerol acyltransferase,DGAT)的基因表达(P0.05);1、10、100 ng/m L氢化可的松组能够显著上调脂肪酸合酶(fatty acid synthase,FASN)基因表达(P0.05),且1 ng/m L的促进效果最明显,而1 000 ng/m L则显著抑制了FASN的表达(P0.05)。该研究结果说明,氢化可的松能够促进BMECs乳脂肪合成,且100 ng/m L的剂量对乳脂合成的促进效果最佳。     

反相高效液相色谱法测定双唑泰软膏中三组分的含量

以C_(18) ODS色谱柱为分析柱,甲醇-水-三乙胺(体积比70:30:0.3,含庚烷磺酸钠10mmol/L,用磷酸调pH 4.0)为流动相,260 nm为检测波长,用反相高效液相色谱法测定了双唑泰软膏中甲硝唑、克霉唑和醋酸氯己定3个组分的含量。测定结果表明:甲硝唑、醋酸氯己定和克霉唑分别在3.92～39.2μg/mL,3.32～33.2μg/mL和1.64～16.4μg/mL质量浓度范围内,与峰面积呈良好的相关性(r=0.999 9、r=0.999 4和r=0.999 1),平均回收率分别为99.95%、101.14%和99.47%(n=9)。该法快速、方便,分离度好,辅料无干扰,适用于该复方制剂中3种成分的同时测定。     

黄花蒿中青蒿素含量的RP-HPLC法测定

建立黄花蒿中青蒿素的高效液相色谱测定方法,采用柱前衍生RP-HPLC法测定黄花蒿中青蒿素的含量,采用ZORBAXXDB-C18(4.6mm×150mm,5μm)色谱柱,甲醇-0.01mol/L醋酸钠-醋酸缓冲液(pH5.8,体积比62∶38)为流动相;检测波长:260nm;流速:0.8mL/min;柱温:30℃。对广西、沈阳、北京、郑州、苏州和杭州等不同产地的野生黄花蒿样品、以及同一产地不同采集时间黄花蒿样品进行检测,结果表明不同地区青蒿素含量差异很大,同一地区不同采集时间黄花蒿样品的青蒿素含量也有差异。该法准确可靠、重现性好,能准确地反映青蒿素含量的检测。     

超高效液相色谱-质谱联用法测定人尿液中5-羟吲哚乙酸浓度方法学验证

目的:采用超高效液相色谱-质谱联用法(UPLC-MS/MS)建立人尿液中5-羟吲哚乙酸(5-HIAA)的检测方法。方法:采用人工尿液UR-N-CONTROL LEVEL 2 NP配制标准曲线,质控样品采用人工尿液和天然尿液配制而成,以5-HIAA的同位素氘标记物5-HIAA-d5为内标,尿液样品采用乙腈进行稀释处理后,采用UPLC-MS/MS检测。色谱柱为Waters HSS T3(100×2.1 mm,1.8μm),流动相A为含0.02%乙酸的2 m M醋酸铵水溶液,B相为:含0.02%乙酸的乙腈溶液,在2.5 min内使用5%的B相至100%的B相进行梯度洗脱,流速为0.5 m L/min,进样量3.0μL,柱温50℃;采用电喷雾负离子模式电离,5-HIAA和5-HIAA-d5内标的监测离子分别为m/z 190.1→146.2和m/z 195.1→151.0。结果:该方法测定的5-HIAA在0.0500至50.0μg/m L范围内线性良好,r≥0.9948,最低定量限(LLOQ)为0.0500μg/m L。5-HIAA批内、批间准确度在89.3%~99.8%之间,精密度(CV)≤8.4%。平均回收率为100.3%~102.3%。结论:该方法专属性强、灵敏度高,快速。人工尿液和天然尿液在定量分析时无差异,适合于人尿液中5-HIAA的浓度测定。     

RP-HPLC测定红丝线提取物中紫蓝素的含量

建立了红丝线提取物中紫蓝素的测定方法。采用反相高效液相色谱法,色谱柱为ZORBAXXDB-C18(4.6mm×150mm,5μm);流动相:V(乙腈):V[75mmol/L乙酸铵+0.5mmol/LEGTA(pH7.0)]=8∶92;流速:1mL/min;检测波长590nm。紫蓝素的线性范围为2.5～50mg/L(r=0.9999),回收率97.9%～101.5%。该法简便、准确,重复性好,适用于测定红丝线提取物中紫蓝素的含量。     

胃灵合剂中黄芩苷的含量测定

目的:对胃灵合剂中黄芩苷的含量运用高效液相色谱(HPLC)法测定分析。方法:采用VP-ODS C18色谱硅胶分析柱为固定相,甲醇-0.3%的磷酸水溶液为流动相,流速为1 ml.min-1,紫外检测波长为280nm。结果:黄芩苷峰与其他杂质峰分离良好,0.3511μg~1.2872μg范围内,线性关系良好R=0.9999。平均回收率为99.04%,RSD=0.54%(n=9)。结论:该方法简便易行,可靠准确,专属性强,重现性好,可用于胃灵合剂的质量控制。     

2-酮基-L-古龙酸的高效液相色谱分析

目的:鉴定发酵液中的产物是2-酮基-L-古龙酸(2-KLG);方法:用高效液相色谱(HPLC)法测定氧化葡萄糖酸杆菌(Gluconobacter oxydans)和蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)混合发酵液中的2-KLG。采用Aminex A 27柱46×250mm;流动相为十二烷基硫酸钠(0.01mol/L)/乙腈(3%)=2/3,流速1.0mL/min,柱温30℃;用L-7420 UV检测器检测。同时还研究了流速对检测的影响。结果:该方法回收率为94.21%,RSD为4.2%。     

高效液相色谱法测定17AA氨基酸注射液中N-乙酰-L-半胱氨酸和N-乙酰-L-酪氨酸

建立了一种用高效液相色谱测定 17AA氨基酸注射液中N 乙酰 L 半胱氨酸和N 乙酰 L 酪氨酸含量的方法。样品经稀释后 ,直接上机测定 ,其色谱条件为 :WatersSymmetryC18色谱柱 ,流动相为 8.5mmol/LNaAc - 5 %CH3 OH (pH =4.0 ) ,柱温36℃ ,流速 1.0ml/min ,检测波长 195nm ,N 乙酰 L 半胱氨酸在 5 .4mg/L到 5 40mg/L、N 乙酰 L 酪氨酸在 4.9mg/L到 490mg/L之间 ,标准曲线呈良好的线性关系 (r2 >0 .9999)。该方法具有良好的重现性 ,日内相对标准偏差小于 3% ,日间相对平均误差小于 7% ,样品回收率在 90 %～ 110 %之间。该方法与测定氨基酸注射液的其它高效液相色谱法相结合 ,能够对 17AA氨基酸注射液中所有氨基酸成分进行全面检测。     

精制左旋多巴中L-多巴含量及主要杂质成分的HPLC检测

L-多巴作(L-dopa)为治疗帕金森氏病的主要药物,可以作为食品添加剂开发针对特殊人群的功能性产品。从食药两用植物猫豆种子中纯化的精制L-多巴中通常会含有少量L-酪氨酸等杂质,从而影响精制品作为药物使用。本文建立了一种高效液相色谱方法,可以有效的检测从猫豆中提取的L-多巴主要杂质成分L-酪氨酸(L-tyr)和L-苯丙氨酸(L-phe)的含量。在紫外检测下(λ=260 nm),液相条件为:色谱柱:Dikma Spursil C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:2%乙酸溶液-甲醇(90∶10);流速:0.8 m L/min;检测波长:260 nm;柱温:室温;能够检测L-多巴和L-苯丙氨酸;在荧光检测下(λex=280 nm,λem=314 nm),液相条件为:色谱柱:Dikma Spursil C18柱(250 mm×4.6mm,5μm);流动相:0.8%甲酸-乙腈(98∶2);进样量:10μL;柱温:室温;能够检测L-多巴与L-酪氨酸。