酵母杂交系统的发展及其应用

近年来,酵母单杂交,双杂交及三杂交系统技术的出现及发展已成为分析鉴定蛋白蛋白,DNA蛋白相互作用及调控的强有力工具。本文简述了酵母杂交系统的发展及潜在的应用价值。     

酵母双杂交系统研究进展

20世纪90年代新兴起的酵母双杂交系统,应用有效的酵母遗传学方法,快速、直接分析已知蛋白之间的相互作用,并能寻找、分离新的与已知蛋白相互作用的配体,发现新基因。在此基础上,相继出现了反向双杂交系统、三杂交系统等多种新技术,为探索蛋白质－蛋白质、蛋白质－核酸作用的奥秘开拓了更为广阔的天地。     

酵母杂交系统的改进与研究进展

蛋白-蛋白相互作用在细胞生命活动中起着关键的作用。后基因组时代主要是研究蛋白的功能,通过研究蛋白的相互作用及其图谱的构建来了解蛋白的功能。研究蛋白-蛋白相互作用的方法很多,酵母杂交是最常用的检测体内蛋白-蛋白相互作用的敏感系统。随着人们对该系统的广泛应用。这一系统得到了不断的完善及改进,并广泛应用于蛋白-蛋白、蛋白质-RNA、蛋白质-DNA以及其他的小分子间相互作用的研究。拟就酵母杂交系统的原理、改进、发展及应用做一综述。     

酵母三杂交系统的应用研究进展

1996年,酵母三杂交技术被研究应用于筛选RNA结合蛋白.本介绍了酵母三杂交系统的原理、应用、前景和存在的不足及局限,并分析其原因,总结了在过去8年中利用此方法所取得的成就.在酵母双杂交基础上发展起来的酵母三杂交系统,其应用范围已扩大到蛋白质-蛋白质、蛋白质-RNA、蛋白质-小分子药物间的相互作用等更加广泛的研究领域.     

双杂交系统：新兴的检测蛋白———蛋白交互作用的有力工具

蛋白－－蛋白交互作用（ｐｒｏｔｅｉｎ－ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ）是生命辞去持续的最基本的根据，细胞内的信号传导也是研究细胞的发育、分化及疾病的生理反应所要了解地最终目标。国际上出现一种直接于细胞内检测蛋白－－蛋白交互作用且灵敏高很高的遗传学新方法，酵母双杂交系统（ｙｅａｓｔ ｔｗｏ－ｈｙｂｒｉｄ ｓｙｓｔｅｍ），可迅速鉴别新的信息传递蛋白。本文综述了双杂交系统的原理、发展概况、应用范     

酵母正反向n-杂交系统研究进展

介绍酵母单杂交、双杂交、三杂交等一系列酵母正向n-杂交系统的原理、研究进展以及应用,同时对在此基础上发展出的酵母反向n-杂交系统的原理、研究进展、应用前景等也进行了综述。     

酵母正反向n-杂交系统研究进展

介绍酵母单杂交、双杂交、三杂交等一系列酵母正向n 杂交系统的原理、研究进展以及应用 ,同时对在此基础上发展出的酵母反向n 杂交系统的原理、研究进展、应用前景等也进行了综述。     

酵母三杂交系统的原理和应用

酵母双杂交系统自出现以来,广泛用于研究蛋白质之间的相互作用,它是一种具有高灵敏度的研究蛋白质之间关系的技术.在酵母双杂交系统基础上发展的酵母三杂交系统将应用范围扩展到蛋白质-蛋白质、蛋白质-RNA、蛋白质-小分子化合物等更广阔的研究领域.本文着重介绍酵母三杂交系统的原理、应用及局限性.     

HAP转录因子与DNA结合的活力受细胞内氧化还原系统的调节

ＨＡＰ转录因子（ＨＡＰ２／ＨＡＰ３／ＨＡＰ４／ＨＡＰ５）是存在于酿酒酵母中的一种异源多聚蛋白,它能与酵母中许多启动子上游的ＣＣＡＡＴ盒（顺式作用元件）专一性结合,以增强基因的转录。在酵母ｈａｐ５突变株的细胞中,用酵母单杂交系统从水稻ｃＤＮＡ－ＧＡＬ４表达文库中筛选出的阳性克隆是编码谷胱甘肽氧还蛋白的ｃＤＮＡ,提示细胞内的氧化还原系统可能作用于ＨＡＰ蛋白,从而对ＣＣＡＡＴ盒的结合活力起调节作用。对Ｈ     

钠碘同向转运体上游增强子序列的特异性结合蛋白文库的构建及初步筛选

目的:构建酵母单杂交文库,筛选出与钠碘同向转运体上游增强子(NUE)特异性结合的蛋白质分子,进一步研究其与NUE相互作用的分子机制。方法:应用酵母单杂交系统,以NUE为酵母单杂交的"诱饵",对甲状腺癌K1细胞的c DNA文库进行初步筛选,采用DNA测序技术及生物信息学技术对筛选的克隆进行进一步功能分析。结果:对文库中的阳性克隆测序,获得53条可读序列,Blast X比对分析及基因功能注释发现其中11条具有DNA结合功能,包括Rho GTP酶激活蛋白35(ARHGAP35)、锌指蛋白394(ZNF394)、上游刺激因子2(USF2)、SOX9等。结论:应用酵母单杂交技术初步筛选出与甲状腺癌K1细胞NUE相互作用的候选蛋白,并对这些蛋白质进行了初步的功能分析。     

双杂交系统:新兴的检测蛋白——蛋白交互作用的有力工具

蛋白--蛋白交互作用（ｐｒｏｔｅｉｎ－ｐｒｏｔｅｉｎｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ）是生命活动持续的最基本的根据,细胞内的信号传导也是研究细胞的发育、分化及疾病的生理反应所要了解的最终目标。国际上出现了一种直接于细胞内检测蛋白--蛋白交互作用且灵敏度很高的遗传学新方法,酵母双杂交系统（ｙｅａｓｔｔｗｏ－ｈｙｂｒｉｄｓｙｓｔｅｍ）,可迅速鉴别新的信息传递蛋白。本文综述了双杂交系统的原理、发展概况、应用范围及需注意的一些问题,并对它将来的发展及应用作了一些展望。     

酵母双杂交衍生系统

酵母双杂交系统是在酵母体内分析蛋白质蛋白质相互作用的基因系统,由Fields等人于1989年首次建立并得到广泛地应用。十余年来,随着酵母双杂交迅速推广,不断涌现出一些衍生系统,其中包括酵母双杂交的二元诱饵系统,逆向双杂交系统,非转录读出特点的双杂交系统(如Sos蛋白招募系统、PI3K介导的靶蛋白识别系统和断裂泛素为基础的双杂交系统)以及转录激活因子与其相关蛋白之间的相互作用的双杂交系统(如以polⅢ为基础的杂交系统和RTA系统)等。它们的建立在很大程度上克服了传统酵母双杂交系统的局限性,扩大了被研究的蛋白质的范围,提高了系统的灵敏度。     

酵母三杂交系统的应用研究进展

介绍了酵母三杂交系统的原理、应用、前景和存在的不足.在酵母双杂交基础上发展起来的酵母三杂交系统,将应用范围扩大到研究蛋白质-蛋白质、蛋白质-RNA、蛋白质-小分子药物间的相互作用.     

一氧化氮信息传递通路中相互作用蛋白研究进展

酵母双杂交和三杂交系统是目前研究细胞内信号转导、蛋白质相互作用比较常用的实验技术体系。该文综述了一氧化氮信息传递通路中相互作用蛋白的研究策略及研究现状,对于揭示一氧化氮的各种病理生理学效应具有重要意义。     

丙型肝炎病毒与宿主细胞蛋白的相互作用及其意义

蛋白－蛋白的结合是病毒与宿主细胞相互作用的分析基础。随着酵母双杂交系统等研究蛋白－蛋白结合新技术的广泛应用,人们对病毒复制的本质及致病机制有了更新的认识,本文综述了丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）核心蛋白Ｃ及非结构蛋白５Ａ（ＮＳ５Ａ）与宿主蛋白相互作用的进展,并讨论了它们在ＨＣＶ致病中的作用。     

LIM蛋白KyoT2与人类紧密连接蛋白2的相互作用

KyoT是一种LIM结构域蛋白,是以RBP－J为诱饵蛋白通过酵母双杂交系统得到的新分子,KyoT2可以抑制RBP－J介导的转录,以KyoT2为诱饵蛋白,通过酵母双杂交筛选得到了人类紧密连接蛋白2（ZO－2）,的一种新的剪接体ZO－2－i3,序列分析表明,新的剪接体有19个外显子,与已发表序列比较,见ZO－2－i3分子的激酶后区发生了改变,为排除酵母双杂交实验的假阳性,实验首先在酵母中验证KyoT2与ZO－2-i3的体外直接相互作用并得到阳性结果,进而在大肠杆菌中原核表达纯化带有His标签的KyoT2蛋白,使用抗His标签的抗体,通过GST pull-down assay验证KyoT2与ZO－2－i3的体外直接相互作用,也获得阳性结果,并通过酵母实验初步确定了其作用位点,即KyoT2通过LIM2结构域与ZO－2-i3相互作用,本实验验证了KyoT2与Z－2－i3的相互作用,并初步确定其相互作用位点,对探讨KyoT的功能具有重要意义。     

应用酵母双杂交系统筛选DAXX相互作用蛋白

应用酵母双杂交系统,以DAXX全长为诱饵,筛选成人肝cDNA文库,寻找能与之发生相互作用的蛋白。利用生物信息学分析,一对一回复性酵母杂交等提供的信息进行验证,筛除假阳性。经过酵母双杂交共获得158个克隆,经过验证分析,最终确定3个无重复性克隆,其中1个为已知的能够与DAXX发生相互作用的蛋白。获得的另2个基因编码的蛋白可能揭示DAXX新的作用机制。     

毕赤酵母表达系统优化策略概述

毕赤酵母(Pichia pastor)表达系统是近年发展起来的一种高效表达外源蛋白的系统,利用该系统表达外源基因具有良好的应用前景。尽管毕赤酵母表达系统具有比较完备的基因表达调控机制和对真核基因表达产物的加工修饰能力,但由于基因本身及表达系统等诸多因素,仍然存在外源蛋白表达产量很低甚至不表达的情况。针对毕赤酵母表达系统这一因素,对表达载体的优化,毕赤酵母菌株优化及发酵条件优化进行了综述,以期为外源基因在毕赤酵母中的高效表达提供理论基础。     

一种快速准确构建酵母单杂交系统报道子的方法

酵母单杂交系统是根据DNA结合蛋白 (即转录因子 )与DNA顺式作用元件结合调控报道基因表达的原理来克隆编码目的转录因子的基因 ,其中构建带有不同DNA顺式作用元件的报道子是该系统的重要环节。目前 ,构建酵母单杂交系统报道子主要采用随机串联的方法 ,由于串联的顺式作用元件的个数和方向不能控制 ,所以筛选报道子费时费力。尝试采用同尾酶定向克隆的方法 ,将顺式作用元件按相同方向和所需的个数串联起来 ,减少了筛选报道子所需的时间和费用。     

毕赤酵母优化表达外源蛋白策略

毕赤酵母(Pichia pastoris)表达系统是一种异源蛋白表达的理想系统,但目前并非所有的外源蛋白都能在毕赤酵母中成功高效表达,不同的蛋白表现为不同表达水平、生物活性及稳定性。从遗传因素和表达条件综述了外源蛋白在毕赤酵母中的优化表达策略。