山药中的致痒物质及致痒机制研究

山药是一种传统中药,对人体有许多益处,如抗腹泻、抗炎、抗糖尿病、低胆固醇血症、抗氧化、抗肿瘤和免疫调节.山药黏液接触皮肤,常引起严重瘙痒.而山药中存在的致痒物质成分尚不清楚.我们采用乙醇提取、膜过滤、离子交换色谱、悬浮液滴法从新鲜山药中提取尿囊素晶体.从河南焦作山药中提取的尿囊素含量约为3.567 mg/g.活性实验结果表明,尿囊素引起的小鼠抓挠反应次数显著地高于对照组.尿囊素直接激活背根神经节神经元,诱导钙流入,还可以诱导神经元内向电流产生.我们首次在细胞水平证明尿囊素能够激活神经细胞,诱导痒觉信号传导.     

正交实验研究白刺种子尿囊素提取工艺

利用高效液相色谱法测定尿囊素的含量,本文采用正交实验,对白刺种子尿囊素的提取工艺进行了优化.结果表明各因素对尿囊素的提取效果的影响程度为乙醇浓度＞温度＞料液比＞提取时间＞提取次数.从而确定白刺种子中尿囊素的最佳提取工艺为乙醇浓度为60%,料液比为1∶12(W/V),提取温度为80℃,提取时间为1 h,重复提取3次.     

Rottlerin 通过抑制 PKCδ-ERK1/2 通路减轻6-羟基多巴胺所致多巴胺能细胞凋亡

近来发现新的蛋白激酶C δ亚型（PKCδ）的磷酸化激活与帕金森病（PD）中神经元的缺失有关.我们的前期研究发现, PKCδ 磷酸化参与6-羟基多巴胺引起的多巴胺能细胞的毒性作用,但其具体机制尚不清楚.本研究以TUNEL检测发现,6-羟基多巴胺引起较显著的细胞凋亡,PKC δ 抑制剂 Rottlerin 可减轻6-羟基多巴胺诱导的凋亡,总PKC抑制剂Bis、钙依赖性PKC（α和β）抑制剂Go6976对6-羟基多巴胺诱导的凋亡无影响.采用Western免疫印迹杂交实验发现,6-羟基多巴胺持续性激活 ERK 1/2 和PKC δ, Rottlerin既可抑制PKCδ的磷酸化激活,又可抑制ERK的磷酸化激活,而 MEK 抑制剂 U0126 仅能抑制 ERK 1/2 磷酸化激活,对 PKC δ 磷酸化却无显著影响.这说明 PKCδ 是6-羟基多巴胺持续性激活 ERK 1/2 的上游激酶.本研究结果提示,在凋亡过程中PKCδ仍然是ERK1/2激活的上游激酶,阻断PKCδ磷酸化可阻断ERK1/2持续激活.Rottlerin正是由于阻断PKCδ的激活,进一步阻断ERK1/2持续激活,减轻多巴胺能细胞的凋亡.因此, Rottlerin 可能对防治帕金森病患者神经元缺失有一定作用.     

Ghrelin对大鼠摄食的影响及orexins信号通路的调控

目的:探究Ghrelin对大鼠摄食的影响及orexins信号通路的调控作用。方法:采用免疫组织化学染色的方法观察Ghrelin免疫阳性神经元轴突末梢与orexin神经元的突触联系以及下丘脑外侧区(LHA)内c-fos的表达。侧脑室注射抗-orexin-A IgG和抗-orexin-B IgG混合液、抗-黑色素浓集激素(MCH)IgG、NPY-1受体拮抗剂后测量大鼠摄食量,观察其对ghrelin诱导摄食的影响。结果:Ghrelin免疫阳性神经元轴突末梢与orexin神经元的突触相接触。侧脑室注射ghrelin可诱导orexin神经元内c-fos表达,但是没有引起MCH神经元内c-fos的表达。预先注射抗-NPY IgG抗体,ghrelin仍然可诱导orexin神经元内c-fos表达。侧脑室预先注射抗-orexin-A IgG和抗-orexin-B IgG抗体可减弱ghrelin促摄食作用,但是预先注射抗-MCH IgG抗体对ghrelin诱导的摄食作用没有明显影响。注射NPY受体拮抗剂可进一步加强抗-orexin-A IgG抗体和抗-orexin-B IgG抗体对ghrelin诱导摄食的抑制效应。结论:ghrelin可能与orexin系统相互作用共同参与摄食和能量平衡的调控。     

肠道病毒71型致神经元病变的机制研究进展

中枢神经系统感染是由病原体侵犯中枢神经系统引起的一类具有较高的发病率和死亡率的疾病。病毒是引起中枢神经系统感染的重要病原体之一,其中肠道病毒71型在继发神经系统症状的重症手足口病患儿中较为常见。EV71致神经元病变是其感染中枢神经系统的基础,阐明肠道病毒71型致神经元病变的机制,不仅可以促进基础病毒学研究,也能为抗病毒药物的开发提供思路,对临床肠道病毒71型致中枢神经系统感染的治疗提供支持。本文主要从肠道病毒71型侵入神经元的受体途径、损伤神经元的线粒体途径、诱导凋亡与自噬、感染胶质细胞后对神经元的旁观者效应、免疫病理机制以及病毒自身因素等多个方面,对肠道病毒71型致神经元病变机制展开综述。     

酒精诱导突触发生期神经元凋亡的分子机理

在突触发生时期,酒精诱导的神经元凋亡可能是胎儿酒精综合征产生的原因之一。酒精可能通过增加自由基的产生,影响神经递质受体的功能、干扰神经营养因子信号通路、激活内源性的细胞凋亡信号途径等分子机制,促进发育过程中的神经元凋亡。酒精影响发育的另一个重要机制是抑制蛋白质合成。新近的研究显示,双链RNA激活的蛋白激酶介导酒精引起的蛋白翻译受阻和神经元死亡。     

钾通道在培养大鼠海马神经元凋亡性容积减少中的作用

为探讨钾通道参与神经元凋亡的可能机制,在星形孢菌素（STS)诱导的培养海马神经元凋亡模型上,研究了凋亡时神经细胞容积的动态变化及钾通道在其中的作用.实验结果显示,钾通道阻断剂四乙铵或升高细胞外K⁺均能够明显抑制STS诱导的神经元凋亡,并且大电导钙激活钾通道（BK）选择性阻断剂iberiotoxin和paxilline具有同样程度的抗细胞凋亡作用,表明钾通道（可能主要是BK通道）参与了STS诱导的培养海马神经元凋亡.在STS诱导神经元凋亡的早期就出现了细胞容积的显著减少,而钾通道阻断剂或升高细胞外K⁺均可阻断该细胞容积减少.研究结果提示细胞内钾离子的外流可能参与了凋亡性细胞容积减少,这也可能是钾通道介导细胞凋亡的重要机制之一.     

NMDA受体激活引起的突触活动对Wnt非经典通路的影响

目的探讨NMDA受体激活引起的突触活动诱导Wnt非经典通路的活化。方法构建C57BL/6J胎鼠大脑皮层神经元原代培养体系,用NMDA处理神经元细胞,并结合Western blotting、双免疫荧光染色等技术,检测神经元细胞内Wnt非经典通路的相关蛋白的变化。结果免疫荧光染色显示成功建立了C57BL/6J胎鼠大脑皮层神经元体外培养体系,原代神经元细胞在体外培养10d生长良好,且纯度达90%;体外培养的神经元细胞内存在Wnt5a神经递质,经NMDA的刺激,发现Wnt非经典通路的两个标志性蛋白CaMKII和JNK的磷酸化水平显著增加,且Wnt非经典通路的一种受体Frizzled-5的蛋白表达水平也显著增加。进一步的研究显示,用NMDA竞争性抑制剂DAP5能够阻断NMDA引起的CaMKII和JNK蛋白的磷酸化水平的提高。结论 NMDA受体的激活会诱导Wnt非经典通路的活化。     

水杨酸诱导植物抗性的研究进展

水杨酸是一种重要的内源信号分子,能够激活一系列植物抗性防卫反应.为了研究这种抗性反应,对水杨酸诱导植物抗病性、抗旱性、抗盐性及与乙烯作用的新进展作了概述,并从水杨酸与过氧化氢及其代谢酶类相互作用的角度探讨了水杨酸诱导植物抗性生理的分子机理.     

硒对铅暴露致神经损伤的拮抗作用研究

目的:研究铅暴露诱导的神经毒性损伤作用,明确铅暴露引发神经毒性损伤的部分机制以及硒的保护作用。方法:通过哺乳期染铅及补充硒建立铅暴露动物模型;通过TUNEL实验确定铅暴露引发的神经损伤;通过Western blot实验检测Bax、Bcl-2、Caspase-3水平确定铅暴露对凋亡途径的启动;并确证补硒在铅神经毒性作用下对机体的保护作用。结果:1.哺乳期铅暴露能够引起仔鼠海马神经细胞凋亡的发生;2.铅暴露能够诱导Bax/Bcl-2水平改变,激活Caspase-3。3.同时给予硒干预后,机体抗铅神经毒性能力显著增加。结论:1.铅暴露能够诱导海马部位神经毒性损伤,损伤可能通过启动凋亡途径而发生,2.补硒能够通过拮抗凋亡发生从而拮抗铅的神经毒性,产生保护作用。     

神经元对于高频电刺激的动态响应

深部脑刺激(deep brain stimulation,DBS)在许多神经系统疾病的临床治疗上都展现出良好的应用前景,然而,其作用机制尚不明确.常规DBS采用高频刺激(high frequency stimulation,HFS)的脉冲序列,这种窄脉冲最容易激活神经元结构中的轴突部分,通过轴突的投射,将HFS的作用传播至下游神经元.因此,为了探讨DBS的作用机制,并鉴于海马脑区是治疗癫痫和痴呆症等疾病的重要靶点,我们研究了海马区轴突HFS对于下游神经元的作用.对麻醉大鼠的海马CA1区传入神经通路Schaffer侧支施加1 min的100 Hz高频刺激,记录并提取下游CA1区锥体神经元和中间神经元的单元锋电位.计算锋电位的发放率,以及它们与刺激脉冲之间的锁相值(phase-locking value,PLV)和潜伏期,以定量分析HFS期间神经元动作电位发放的变化趋势.结果显示,在传入轴突上施加HFS时,初期会诱发下游神经元群体同步产生动作电位(即群峰电位).在HFS后期(群峰电位消失之后),两类神经元的单元锋电位发放仍然持续,并且发放率较稳定.但是,锋电位与刺激脉冲之间的锁相性逐渐减弱、潜伏期逐渐延长.而且,与中间神经元相比较,锥体神经元锋电位的锁相性更弱、潜伏期更长.这些结果表明,持续的轴突HFS可以诱导下游神经元产生非同步的活动,高频脉冲刺激引起的不完全轴突传导阻滞可能是导致该现象产生的主要原因.本文的研究为揭示脑刺激的作用机制提供了重要信息.     

江浙产蝮蛇毒提取的抗凝成份激活人血浆蛋白C的作用（摘要）

江浙产蝮蛇毒提取的抗凝成份激活人血浆蛋白Ｃ的作用（摘要）瞿国伟,顾肃敏,黄美华,任彤,邵慧珍１．浙江医科大学２．上海市瑞金医院本文从江浙产蝮蛇粗毒中提取到的抗凝成份（ＳＶＰＡ）,具有激活人血浆蛋白Ｃ活性,利用被激活的蛋白Ｃ特异性地分解生色底物而生成颜...     

PKC对原代培养神经元NF-кB表达的影响

用蛋白激酶C（PKC）刺激剂佛波醇酯（PMA）和PKC抑制剂Rottlerin处理培养神经元,RT—PCR法检测神经元NF—xBp65 mRNA的表达;用PMA和NF—κB抑制剂TPCK处理培养神经元,流式细胞术AnnexinV／PI法检测细胞早期凋亡率。观察PKC对原代培养神经元核转录因子kappaB（NF～KB）表达的影响,探讨PKC参与缺血性神经元损伤的可能机制。结果显示PKC可促进NF—κB的表达;NF—κB可诱导培养神经元的早期凋亡。由此可以得出PKC激活参与神经元的损伤可能是通过引起神经元内NF—κB的表达而实现的.     

国产日本薯蓣主要化学成分含量和药理实验测定

我国野生日本薯蓣（DioscoreajaponicaThunb.）的多糖及尿囊素含量与薯蓣（DoppositaThunb,药材名山药）非常相近,药理实验结果表明,日本薯蓣具有极显著的降血糖和降血脂功能,与山药类药材具有相同的作用,证明国产日本薯蓣具备了开发的可能性。     

腺苷和睡眠觉醒调节

腺苷作为神经调质,调节多种神经生物学功能.随觉醒时间延长,动物脑内腺苷水平逐渐增高,在睡眠期显著降低.因此,腺苷被认为是调节睡眠的内稳态因子之一.腺苷受体(receptor,R)有A1R、A2AR、A2BR和A3R四种亚型,其中A1R和A2AR与诱导睡眠相关.激活A1R可抑制促觉醒神经元诱导睡眠,也可抑制促眠神经元导致...     

β-淀粉样肽诱导小胶质细胞培养上清致海马神经元损伤模型的建立

目的：建立β淀粉样肽（Aβ1-40）诱导激活小胶质细胞的上清致海马神经元损伤的细胞模型,并初步研究神经元损伤的机制。方法：用不同浓度的可溶性Aβ1-40诱导激活小胶质细胞,光镜下观察不同时间点的细胞形态,ELISA检测其分泌的肿瘤坏死因子仪;用激活后的小胶质细胞条件培养基刺激海马神经元,光镜下观察细胞形态,Western blot检测刺激后海马神经元内诱导型一氧化氮合酶（iNOS）和硝基酪氨酸（NT）的表达水平,ELISA检测海马神经元内胱冬蛋白酶-3（caspase-3）活性来评价神经元的损伤程度。结果：终浓度为10μmol／L的Aβ1-40与小胶质细胞孵育24h后,取上清液加到培养的海马神经元,孵育24-72h,海马神经元较对照组形态有明显变化;经Western blot检测,神经元内iNOS、NT表达明显增加;ELISA检测神经元内caspase-3活性明显增高。结论：小胶质细胞被Aβ1-40激活后,其释放物有明显的致神经元损伤效应,表明建立了神经元损伤模型。     

大黄素通过抑制FOXO1活性减轻NO对神经细胞的损伤

氧化应激所产生的活性氧和一氧化氮(nitric oxide,NO)自由基在心脑血管疾病、神经退行性疾病中发挥着重要作用,过量的NO可以导致自由基损伤,并诱导神经元的凋亡.大黄作为中医传统药物具有重要的药用价值,临床应用非常广泛.近年研究表明,大黄素具有抗氧化、免疫调节、抗菌、抗炎等功能,被广泛应用于肠道疾病、肾病、心血管疾病、胰腺炎等病症的治疗.Forkhead转录因子1(FOXO1)是Forkhead转录因子家族的一个重要成员,FOXO1对于胰岛素信号通路、DNA修复、清除活性氧损伤、细胞周期和凋亡的调控非常重要.而NO自由基对FOXO1的调控作用还不清楚,我们研究发现,NO的供体GSNO(亚硝基谷胱甘肽)或者L-Arg(L-精氨酸)可显著提高FOXO1的转录活性并促进其下游促凋亡基因Fas L、Bim的转录表达,进而诱导神经元死亡.我们进一步研究发现,大黄素可以通过降低FOXO1的转录水平以及蛋白质水平,缓解NO所诱导的神经元凋亡.该研究揭示了NO自由基诱导神经元损伤的新机制,同时也为了解大黄素的抗氧化作用提供了新的实验依据,对大黄素等中药有效成分的临床应用提供了重要参考.     

IL-1β在缺血致脑损伤中的主要作用机制

中枢白细胞介素-1β（IL-1β）在缺血引起的脑损伤过程中发挥十分重要的作用,但其作用机制尚不十分明确,本文主要就近年来的研究进展,从其对诱导粘附分子表达,激活内皮细胞产生多种活性物质,促进脑内兴奋性氨基酸和自由基等神经毒性物质的产生和释放等角度,简要概括其在缺血引起的脑损伤过程中的作用机制。     

躯体传入冲动对丘脑腹后外侧核单位电活动的影响

实验在筒箭毒制动和人工呼吸维持下的清醒家兔上进行.用玻璃微电极在丘脑腹后外侧核(VPL)记录正中神经和腓神经刺激所引起的单位反应。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ类纤维的传入冲动能特异地分别激活VPL内不同的神经元;这四类纤维的传入冲动能非特异地激活另一些神经元—R神经元。能被Ⅱ类纤维激活的14个βγ神经元和R神经元的活动不受对侧同名神经Ⅱ和Ⅳ类纤维条件刺激的影响;但对侧同名神经Ⅱ和Ⅳ类纤维的条件刺激对那些能被Ⅳ类纤维激活的C神经元和R神经元的活动有显著的抑制作用,使其长潜伏期的第二串放电的频率和时程减低。     

高糖通过线粒体途径诱导成骨细胞凋亡

线粒体途径是细胞凋亡的重要途径之一. 在特定的刺激下,例如高糖条件,可以通过caspase依赖性和非依赖性两种途径诱导多种细胞凋亡.但线粒体凋亡途径在高糖引起成骨细胞凋亡中所起的作用,目前尚不清楚.本研究证明,高糖可以通过线粒体凋亡途径诱导成骨细胞凋亡.Annexin V-FITC/PI流式细胞学检测显示,高糖可诱导MC3T3-E1细胞凋亡.Western印迹检测发现,不同浓度D-葡萄糖（11,22,33 mmol/L）可以引起线粒体中Bax蛋白表达的增加,使Bax蛋白由细胞质中易位到线粒体,激活了线粒体凋亡途径.JC-1荧光探针检测证实,高糖处理成骨细胞后,线粒体膜电位明显降低,表明线粒体途径被激活.而细胞质中的细胞色素c、凋亡诱导因子（AIF）表达增加,细胞色素c和AIF从线粒体中释放到细胞质中,释放到细胞质中的细胞色素c使caspase-3、caspase-9剪切活化,从而激活了caspase依赖性凋亡途径.因此,线粒体凋亡途径可能是高糖诱导成骨细胞凋亡过程中一个重要的途径.