Oligo(dT)-纤维素与Oligo(U)-纤维素的合成及其应用

Oligo(dT)-纤维素与Oligo(U)-纤维素具有分离信使RNA(mRNA)的功能。这是由于大多数的mRNA 分子的3’-末端含有多聚腺嘌呤核苷酸的片段(亦有例外,如一类组蛋白的mRNA),在低温与高离子强度的条件下,此片段能与多聚脱氧胸腺嘧啶核苷酸或多聚尿嘧啶核苷酸形成互补的碱基配对,而核糖核蛋白体RNA(rRNA)与转移RNA(tRNA)缺少多聚腺嘌呤核苷酸的片段,不能被该树脂吸附,利用这一特性可将mRNA与其它RNA分离开来。     

甲胎蛋白(AFP)信息核糖核酸的纯化——Ⅱ.人胚肝和正常大鼠肝信息核糖核酸(mRNA)的制备

应用寡聚胸腺嘧啶纤维素(简称OdC)柱层析从哺乳动物RNA样品中提取mRNA已被人们普遍采纳。这一方法首先需要用改良的酚-氯仿法提取总RNA,然后再经OdC柱层析分离得到mRNA(下称此法为间接法)。近年来,有人用0.5％十二烷基磺酸纳(SDS)解聚多聚核糖核蛋白体(简称多聚核糖体)后,直接经OdC柱层析分离某些mRNA获得成功。据报道这一方法(下称直接法)具有条件温和、产率较高及不影响翻译活力等特点。     

从短锯鲉分离和鉴定抗冻多肽mRNA

短锯鲉在冬季产生抗冻多肽,此多肽能降低血液的冻结温度。本实验用11月份捕获的短锯鲉肝脏做标本,提取抗冻多肽mRNA,经寡聚脱氧胸腺嘧啶核苷酸纤维素亲合层析和蔗糖梯度密度离心提纯。抗冻多肽mRNA的长度经含羟甲基汞的琼脂糖凝胶电泳测定为580硷基对,其在无细胞翻译系统中初级翻译产物的分子量经SDS-PAGE估计为15000。     

8-氧化咖啡因和嘧啶类生物碱在普洱熟茶中的存在

应用柱层析分离技术,从普洱熟茶中首次分离到8-氧化咖啡因,嘧啶类生物碱(胸腺嘧啶脱氧核苷、胸腺嘧啶和尿嘧啶) ,黄酮类配糖体(黄杞甙) ,以及简单酚类化合物(1 ,2 ,4-苯三酚、1 ,3-苯二酚和4-甲基-1 ,2-二苯酚)。由于普洱熟茶是由大叶茶经微生物后发酵生产的, 8-氧化咖啡因显然是茶叶中的咖啡因在微生物作用下形成的转化产物。胸腺嘧啶脱氧核苷亦可能是茶叶中的嘧啶类生物碱与微生物中的核苷类化合物在后发酵过程中缩合形成的。二者均为新发现的普洱熟茶的特征性成分。     

从小牛胸腺分离纯化末端脱氧核苷酸转移酶

本文采用Okamura氏的寡聚脱氧胸苷酸(oligo-dT)-纤维素柱层析法分离纯化小牛胸腺末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)。包括下列主要步骤:制备酶粗提液、磷酸纤维素柱层析、二乙基氨基乙基纤维素柱层析、葡聚糖凝胶过滤、oligo dT-纤维素亲和层析。经过上述几步分离纯化,从500克小牛胸腺中获得6,564单位TdT,比活性达5,199单位/毫克蛋白,聚丙烯酰胺凝胶电泳呈一条带,不含脱氧核糖核酸(DNA)多聚酶Ⅰ。     

遗传饰变的微生物及其制备和使用方法(续)

5.按本发现方法而遗传饰变的微生物的应用: 1.实变体衍生菌的分离: 大家都知道,经受最低培养中缺DAP死亡而存活下来的dap细胞,相对于不能在该培养基生长而不能经受缺DAP死亡的突变体来说,是富集的。大家还知道,能经受最低培养基中缺胸腺嘧啶死亡而存活下来的thyA细胞,相对于不能生长在该培养基因而不能经受缺胸腺嘧啶死亡的突变体来说,也是富集的。     

粉防己碱对血管平滑肌细胞增殖及癌基因表达的影响

采用血管紧张素Ⅱ建立了培养的血管平滑肌细胞增殖模型。用H3-胸腺嘧啶核苷掺入法、流式细胞术、免疫细胞化学及Northernblot方法．观察了粉防已碱对血管平滑肌细胞增殖的作用及对原癌基因和抑癌基因的影响。结果发现：粉防己碱能逆转血管紧张素Ⅱ所致的H3-胸腺嘧啶核苷掺入量增多,阻止血管平滑肌细胞由静止期进入DNA合成期和有丝分裂期,能使c－fos、c—myc、c－sis原癌基因相关抗原及mRNA表达减弱,使P53抑癌基因相关抗原及mRNA表达增强。本文提示：粉防己碱有抑制血管平滑肌细胞增殖作用,同时能影响癌基因表达。     

细胞培养中的支原体污染问题(续)

6.放射性同位素自显影方法可用~(?)H标记的胸腺嘧啶脱氧核苷或尿嘧啶核苷自显影实验检查支原体的污染。此法的简单原理是:无污染的正常细胞在S期(DNA合成期)可摄取大量的胸腺嘧啶脱氧核苷到细胞核中。而当细胞被污染后,培养液的胸腺嘧啶脱氧核苷被支原体的嘌呤嘧啶核苷磷酸化酶     

4-硫代胸腺嘧和4-硫胸腺嘧啶脱氧核苷结构的光谱研究

采用拉曼和 UV 光谱研究了抗癌药物4-硫代胸腺嘧和4-硫胸腺嘧啶脱氧核苷的特征结构,确定了药物在酸性、中性和碱性环境下的结构变化。研究结果表明,在酸性和中性溶液中,4-硫代胸腺嘧和4-硫胸腺嘧啶脱氧核苷被强烈质子化,而在碱性环境中则是去质子化,同时,4-硫胸腺嘧啶脱氧核苷的质子化和去质子化比4-硫代胸腺嘧弱,说明氢键的结合对4-硫代胸腺嘧的 NH 质子和溶液分子之间的相互作用具有重要影响。     

4-硫代胸腺嘧和4-硫胸腺嘧啶脱氧核苷结构的光谱研究（英文）

采用拉曼和UV光谱研究了抗癌药物4-硫代胸腺嘧和4-硫胸腺嘧啶脱氧核苷的特征结构,确定了药物在酸性、中性和碱性环境下的结构变化。研究结果表明,在酸性和中性溶液中,4-硫代胸腺嘧和4-硫胸腺嘧啶脱氧核苷被强烈质子化,而在碱性环境中则是去质子化,同时,4-硫胸腺嘧啶脱氧核苷的质子化和去质子化比4-硫代胸腺嘧弱,说明氢键的结合对4-硫代胸腺嘧的NH质子和溶液分子之间的相互作用具有重要影响。     

猪胸腺末端脱氧核苷酰转移酶的分离纯化及性质的研究

 本文报道了一种较简便的从猪胸腺中分离纯化末端脱氧核苷酰转移酶(TdT)的方法。经一次磷酸纤维素柱层析,使TdT与DNA聚合酶分离;经三次柱层析,可获得SDS-电泳纯,分子量约60K的产品。其酶学性质与牛胸腺TdT相似。     

南海海绵Pachychalinasp.化学成份的研究

从中国南海海绵Pachychalina sp.正丁醇可溶部分获得了5个化合物,通过UV,IR,~1H-NMR,~(13)C-NMR,MS,~1H-~1HDQFCOSY等实验确定了它们的结构分别是:对羟基苯醋酸甲酯(1),胸腺嘧啶(2),尿嘧啶(3),胸腺嘧啶脱氧核苷(4)和尿嘧啶脱氧核苷(5)。其中化合物(1)是首次从我国南海海洋生物中获得;化合物(5)则是首次从海绵中分离得到的天然产物。     

单疱疹1型病毒胸腺嘧啶核苷激酶基因在大肠杆菌中的表达

含有编码胸腺嘧啶核苷激酶序列的单疱疹Ⅰ型病毒DNA片段,以三个可能的读码结构(reading frame)被融合到大肠杆菌LacZ基因的开始部位。当胸腺嘧啶核苷激酶基因处在能从Lac启动子转录的方向时,那么在所有三种情况下,在Lac控制下都可在大肠杆菌中产生具有功能活性的病毒原的胸腺嘧啶核苷激酶。序列分析的结果指出,在胸腺嘧啶核苷激酶基因的5’端,子终止信号之后翻译又重新开始,而在这同一区域发现有二段富A T序列,此序列可能是真核启动子部分。     

单疱疹1型病毒胸腺嘧啶核苷激酶基因在大肠杆菌中的表达

含有编码胸腺嘧啶核苷激酶序列的单疱疹Ⅰ型病毒DNA片段,以三个可能的读码结构(reading frame)被融合到大肠杆菌LacZ基因的开始部位。当胸腺嘧啶核苷激酶基因处在能从Lac启动子转录的方向时,那么在所有三种情况下,在Lac控制下都可在大肠杆菌中产生具有功能活性的病毒原的胸腺嘧啶核苷激酶。序列分析的结果指出,在胸腺嘧啶核苷激酶基因的5’端,子终止信号之后翻译又重新开始,而在这同一区域发现有二段富A+T序列,此序列可能是真核启动子部分。     

一种用于检测5′-核苷酸磷酸二脂酶的荧光底物合成方法

本文利用间苯二酚为原料合成4-甲基伞形酮,继而经过磷酸酯化,缩合等反应过程合成4-甲基伞形酮-5′-胸腺嘧啶核苷磷酸二酯。反应过程中对胸腺嘧啶核苷的3′位羟基未加任何保护,缩合反应特异地发生在核苷的5′位羟基上。产品经过DEAE-葡聚糖凝胶柱层析分离纯化。利用纸层析、吸收光谱和酶学反应特征鉴定都证明合成的产品对于5′-核苷酸磷酸二酯酶具有专一性,可以用于5′-核苷酸磷酸二酯酶活性测定以及其同工酶谱分析。     

用Tip column法分离纯化mRNA

鉴于大多数真核生物的mRNA具有3′端poly(A)的特征,目前,分离mRNA广泛采田oligo(dT)纤维素层析法。尽管这一方法成熟可行,但存在以下问题;流速较慢;柱床易发生堵塞;操作费时;洗脱体积较大。常需先沉淀浓缩后才能进行后续实验(如cDNA合成);在制备少量mRNA时,回收率较低等。据此,我们对mRNA分离方法作了改良,利用oligo(dT)纤维素吸附mRNA容量大的特点,尽可能缩小层析柱床     

刺柳珊瑚Echinogorgia sp.中几个含氮化合物

从南海硇洲岛海域采集的刺柳珊瑚(Echinogorgia sp.)中分离到6个含氮化合物,经MS、NMR等光谱技术和比较文献,确定其结构分别鉴定为N-2-(1,3-二羟基-4,8-十八二烯基)-十六酰胺(1)、(E)-N-2-(1,3-二羟基-4-十八烯基)-十六酰胺(2)、尿嘧啶(3)、胸腺嘧啶脱氧核苷(4)、尿嘧啶脱氧核苷(5)、胸腺嘧啶(6)。这些化合物均为首次从该属柳珊瑚中的分离得到。     

用高压液相色谱法测定人尿中胸腺嘧啶乙二醇及胸苷乙二醇

 胸腺嘧啶乙二醇是一种DNA氧化产物。我们利用HPLC方法测定了尿中游离的胸腺嘧啶乙二醇和胸苷乙二醇。结果表明:人尿中胸腺嘧啶乙二醇和胸苷乙二醇的含量分别是0.44±0.05,及0.16±0.03nmol/kg体重/天。一个中国人每天排泄这两种乙二醇产物大约36nmol。在男性和女性之间无显著差异。     

耐辐射奇球菌代谢产物中的化学成分

通过甲醇提取、硅胶柱色谱、重结晶分离纯化,从耐辐射奇球菌(Deinococcus radiodurans)代谢产物中分离得到五个化合物,根据光谱数据鉴定为:腺嘌呤(1),胸腺嘧啶(2),尿嘧啶(3),腺苷(4)和L-丙氨酸(5)。所有成分均为首次从该细菌的代谢产物中得到。     

南海中华小尖柳珊瑚中嘌呤和嘧啶类化合物的研究

对采自海南三亚的中华小尖柳珊瑚Muricella flexuosa的化学成分进行研究,采用反复硅胶柱色谱法、Sephadex LH-20柱色谱法及重结晶等手段对化合物进行分离和纯化,通过理化性质及光谱分析并结合文献对照,鉴定得到11个嘌呤、嘧啶类化合物:咖啡碱(1),1,7-二甲基次黄嘌呤(2),1-甲基次黄嘌呤(3),7,9-二甲基-6-氮甲基嘌呤-8-酮(4),7-甲基腺嘌呤(5),1,7-二甲基嘌呤-6,8-二酮(6),尿嘧啶(7),胸腺嘧啶(8)2,’-脱氧尿嘧啶核苷(9)2,’-脱氧胸腺嘧啶核苷(10),3-乙基-2’-脱氧尿嘧啶核苷(11)。其中化合物2～61,1为首次从该属中分离得到,化合物4和11为新的天然产物。