冠窦伪尾柱虫接合过程中小核的形态发生作用

为查明有性生殖期间小核对形态发生的影响程度和范围,我们利用蛋白银染色对冠突伪尾柱虫不同交配型无小核体之间 的接合过程进行了跟踪观察。结果表明：无小核细胞的交配反应能力明显下降;接合双方第一次皮膜形态发生如常进行,但纤毛器原基分化往往出现异常;接合后体照常进入拟包囊阶段,但原有纤毛器多不从皮膜上消失。由于没有新核器形成,均不能启动第二次形态发生并于拟包囊早期解体死亡。因此,小核对于纤维接合早期及第一次皮膜改组的正常进行具有某些明显作用,其衍生的大核原基对于启动后续的发育则是绝对必要的。     

冠突伪尾柱虫接合过程中小核的形态发生作用

为查明有性生殖期间小核对形态发生的影响程度和范围 ,我们利用蛋白银染色对冠突伪尾柱虫不同交配型无小核体之间的接合过程进行了跟踪观察。结果表明 :无小核细胞的交配反应能力明显下降 ;接合双方第一次皮膜形态发生如常进行 ,但纤毛器原基分化往往出现异常 ;接合后体照常进入拟包囊阶段 ,但原有纤毛器多不从皮膜上消失 ;由于没有新核器形成 ,均不能启动第二次形态发生并于拟包囊早期解体死亡。因此 ,小核对于维持接合早期及第一次皮膜改组的正常进行具有某些明显作用 ,其衍生的大核原基对于启动后续的发育则是绝对必要的     

冠突伪尾柱虫小核对胞口结构稳定性的影响

在通过显微手术所建立的冠突伪尾柱虫（Pseudourostyla cristata)无小核系中,部分细胞因口围带翻领部小膜出现不同程度的缺损而导致畸形;在细胞生长静止期的群体中,口围带畸形率高达50％以上;对无小核系600多个刚完成二分裂的前,后仔虫及1000多个生理改组末期的虫体进行蛋白银染色观察,除发现4个二分裂仔虫和3个生理改组后虫体的口围带异常外,绝大多数经过形态发生后的细胞都具有正常的胞口结构。另一方面,选择性培养实验进一步证明,口围带畸形产生于非形态发生期。由此可见,失去小核的细胞,同时也失去了胞口结构的稳定性。     

冠突伪尾柱虫（Pseudourostyla cristata）实验再生研究

冠突伪尾柱虫(Pseudvurostyla cristata) 含约70枚大核。我们用显微手术横切G1期细胞,得前后两块相等断片;分别培养。60小时后,断片再生完成。在再生过程中,随细胞体积增大,大核数目也增加。大核的数目和细胞体积存在着一定的均衡关系。在细胞无性分裂过程中,许多大核改组后,融合成一个融合大核。这个融合大核具两个仔虫的大核数目和DNA量。我们用显微手术得到含融合大核的后断片。在后断片再生后恢复的虫体内,我们发现本应分配到两个仔虫中去的大核数目,被限制在一个虫体的大核数目上。这说明了细胞质可以影响和调节大核的数目。并还证明了这种虫体大核DNA量较正常虫的大核DNA量约多一倍。其中大部分虫体分裂时,大核不经改组就开始融合和分裂;从而使DNA量回复正常。同讨还发现小部分虫体通过排出大核多余核物质方式来调节大核DNA量。这些现象说明了细胞核质之间存在着一种调节相对平衡和相互协调的机制。     

营养期和休眠期冠突伪尾柱虫的类中间纤维-核纤层-核骨架体系

近年来的研究表明 ,尽管不同类群的纤毛虫形成包囊过程中 ,细胞经历了不同程度的分化 ,形成不同类型的包囊 ,但是其休眠包囊生命活动中对细胞内物质的消化、能量利用和代谢等都具有共同的特征 (顾福康等 ,1995 ,1999;李恭楚等 ,1999;陈灵等 ,2 0 0 0 )。这一现象提示 ,纤毛虫在休眠条件下的生命活动可能具有一些相同的物质和结构基础。由于在高等真核细胞中普遍存在的中间纤维-核纤层 -核骨架体系对细胞生命活动起到多方面的重要作用 ,并且尽管目前仅对极少数原生动物观察到该结构体系 ,但它却预示了在这一原始的单细胞类群中以中间纤维为基…     

冠突伪尾柱虫生理改组中口器发生及口围带调节重建的研究

在冠突伪尾柱虫生理改组过程中,口器发生分波动膜形成和口围带重建两方面独立进行。前者发生包容了旧波动膜解聚、胞咽壁新产生和左列腹棘毛解体等三个部位的毛基粒;后者重建则由口围带原基新分化的小膜、经过裁剪修饰后的旧翻领部和邻部三者拼接整合而成。新小膜的添加与旧小膜的减少二者之间的所达致的平衡保证了生理改组后口围带结构的稳定性。     

冠突伪尾柱虫营养期和形成包囊期间细胞的超微结构

冠突伪尾柱虫营养细胞中含有轴杆样结构。细胞形成包囊期间,胞质内发生自噬作用,并产生由这聚集在一起组成的高尔基体,在高尔基体内其分泌物质聚集成高电子密度的嗜锇晶体。细胞分化的结果形成含膜粒层,内层壁和外层壁的“尾柱虫类包囊”。     

冠突伪尾柱虫(Pseudourostyla cristata)接合生殖的研究 Ⅰ.核器演化

在25℃条件下,冠突伪尾柱虫接合生殖全程历时10天左右。接合生殖过程中的核器演化包括:①数十枚老的大核逐步瓦解。电镜观察表明,老的大核是以一种类似于食物泡消化的方式被吸收的,并在此过程中伴有大量溶酶体出现。②仅8枚左右小核中的一枚参与新核器的发生。首先,位于胞口后部的一枚小核膨大并进行一次预备分裂,接着发生三次成熟分裂。每一接合体内形成一枚雄原核和一枚雌原核。雄原核互向对方迁移并与其雌原核融合成为合子核。合子核分裂两次,四枚子核之一发育为大核原基,另一枚发育为小核原基,其余两枚退化。预备分裂和前两次成熟分裂各自产生的两枚子核中,仅一枚进入下一次分裂,另一枚解体消失。在第一次成熟分裂前期,“降落伞”的形成和发展经历着复杂的结构变化,持续一小时以上。③大核原基经过长时间的发育,伴有多线染色体的形成和解体等一系列变化,方达成熟状态。成熟的大核原基以伸长断裂、分叉断裂和哑铃形缢缩三种方式进行分裂,小核原基亦随之分裂,逐步形成具60枚左右大核、8枚左右小核的正常营养体。其后,大核融合,开始配后第一次无性分裂。值得注意的是,大核原基发育到将成熟时,最初的迹象是染色质向大核原基中央集结成团,染色质团与核膜之间充满着匀质的核液。当中央染色质团伸长时,又将     

冠突伪尾柱虫的腹皮层纤毛器微管胞器及其形态发生

应用荧光紫杉醇直接荧光标记和抗α-微管蛋白抗体免疫荧光标记方法,显示冠突伪尾柱虫腹皮层纤毛器微管胞器由口围带、波动膜、额腹横棘毛和左右缘棘毛等纤毛器微管、纤毛器基部附属微管等组成。口围带基部含小膜托架及与托架相联系的肋壁微管,其中领部小膜托架间由"∧"形微管相联接;额腹横棘毛基部含前纵微管束、后纵微管束、横微管束和周围微管束,其微管在不同棘毛基部的发达程度不一,其中两列中腹棘毛基部微管紧密联系成一条粗绳索样结构,且左、右中腹棘毛基部的横微管束定向相反;左、右缘棘毛基部含前纵微管束、后纵微管束和横微管束,其中横微管束不发达。与目前已知的腹毛目纤毛虫例如贻贝棘尾虫、魏氏拟尾柱虫的纤毛器基部微管相比较,冠突伪尾柱虫腹皮层纤毛器基部微管除具有腹毛目纤毛虫纤毛器基部微管的基本特征外,也具有一些特殊的组成模式。皮层纤毛器微管形态发生中,前仔虫口围带并非全部是由老口围带更新而来的,其老口围带只有翻领部发生更新,且翻领部与领部接续处有一小段老的翻领部小膜保留,领部的小膜保留,结果其领部小膜、接续处保留的小膜与更新的翻领部小膜三部分共同组成前仔虫的新口围带。在后仔虫口原基发生的位置,其邻近的老横棘毛没有变化,此时老的横棘毛或许能起到"参照点"或定位作用;各类纤毛器发生、分化过程中,处于非原基区的老额棘毛、横棘毛及左右缘棘毛在较长时间内均未见明显的变化。它们可能是在新结构形成时仍然起到运动作用继而逐渐失去功能而退化瓦解的。     

筛选冠突伪尾柱虫有小核细胞系和无小核细胞系饥饿期差异表达的ESTs

利用显微切割的方法建立大型腹毛目纤毛虫---冠突伪尾柱虫(Pseudourostyla cristata)的无小核细胞系,分别提取有小核和无小核细胞系的总RNA,用SMART-PCR方法直接合成dscDNA,进而运用抑制性消减杂交技术(Sup-pression subtractive hybridization,SSH)对冠突伪尾柱虫去小核前后的差异表达基因进行研究,构建了有与无小核细胞系在饥饿期差异表达基因的消减文库,随机挑取了284个克隆,应用cDNA阵列技术鉴定阳性克隆。将鉴定出的17个阳性克隆进行Blastx分析,结果表明17个EST(Expressed sequence tag)均可能与小核体功能密切相关,此为进一步阐明小核的遗传机理奠定了基础。       

三种纤毛虫细胞内酸性磷酸酶的定位观察

利用电镜酶细胞化学方法,对大尾柱虫(Urostylagrandis)、冠突伪尾柱虫(Pseudourostylacristata)、魏氏拟尾柱虫(Paraurostylaweissei)三种纤毛虫细胞内的酸性磷酸酶(ACPase)进行了定位观察。发现在它们体内ACPase的阳性反应颗粒除分布在消化腔隙内独立的泡状结构上和被消化的食物组织中外,在细胞质中的小圆泡内也有分布。所得结果证实了消化腔隙和小圆泡都具有消化功能。作者推测消化腔隙主要消化食物,小圆泡则可能与自身物质(如衰老胞器等)的消化有关;并推测这种消化腔隙与小圆泡共存是纤毛虫消化胞器由食物泡演化为消化腔隙系统的中间形式。此外,在大尾柱虫纤毛内部观察到非溶酶体性的ACPase。     

The Somatic Function of the Germ Nucleus in Pseudourostyla cris tat a: Asexual Reproduction and Stomatogenesis

The micronuclei of the ciliated protozoan Pseudourostyla cristata were eliminated by amputation shortly before binary fusion. The amicronucleate cell lines derived from regenerants were maintained for more than a year. They exhibited a lower viability and reduced vigor in asexual propagation. There was some improvement in the growth of the cell lines 1 mo after operation, but the growth rate remained subnormal even up to 1 yr of culture. The exact cause of the poor growth and survival in the first 3 wk after operation, whether the loss of the micronucleus or operational damage, remains to be determined. It is nevertheless clear that the micronucleus is important for subsequent asexual propagation. The amicronucleate cell lines were permanently crippled in morphogenesis, unlike the situation in Paramecium amicronucleates in which stomatogenesis returned to near-normal during asexual propagation. They always included some cells with a characteristically defective adoral zone of membranelles, reduced number of frontal-ventral-transverse cirri, and reduced body length. They were also reluctant to encyst. It is evident that the micronucleus is important for maintaining normality of the oral apparatus. It is postulated that the permanent stomatogenic crippling of amicronucleates might be related to genomic reduction in the developing macronucleus in sexual reproduction, as exhibited by other hypotrichs. The morphological defects associated with the adoral zone of membranelles may be rationalized as arising from the spreading of a zone of degeneration in the cortex affecting the left edge of the membranelles.     

念珠伪角毛虫小核体功能初步研究

为了研究念珠伪角毛虫的小核是否具有及具有怎样的体功能,采用显微切割手术去小核并建立无小核细胞系。经蛋白银染色鉴定,无小核细胞系群体中大多数细胞的形态结构存在缺陷：口围带的部分小膜缺损或排列紊乱,大核的数目和形态也不正常。这表明,念珠伪角毛虫的小核对于保持口围带结构的完整性以及大核的数目和形态结构的稳定性起着明确的作用。     

新伪尾柱虫腹皮层纤毛器微管胞器的形态和形态发生

应用荧光紫杉醇直接荧光标记法显示,腹毛目纤毛虫新伪尾柱虫(Pseudourostyla nova)腹皮层纤毛器微管胞器由口围带、波动膜、额腹横棘毛和左右缘棘毛等纤毛器微管及纤毛器基部附属微管组成.口围带基部含小膜托架及与托架相联系的肋壁微管,其中领部小膜托架间由"Λ"形微管相联接;额腹横棘毛基部含前纵微管束、后纵微管束、横微管束和周围微管束,其微管在不同棘毛基部的发达程度不一;缘棘毛基部含前纵微管束、后纵微管束.同时,对新伪尾柱虫纤毛器微管胞器的形态发生和生理改组过程进行了详细的追踪研究,并对细胞皮层的额腹棘毛定位及组成特征进行了补充报道.此外,发现形态发生末期新纤毛器微管形成时,残存部分老额棘毛、横棘毛和缘棘毛,此后老结构逐渐被吸收.结果表明,新伪尾柱虫的纤毛器基部微管具有其种的特异性,新纤毛器微管分化过程中老结构可能具有定位和物质贡献作用.     

Conjugation Rescue of Exocytosis Mutants in Tetrahymena thermophila Indicates the Presence of Functional Intermediates in the Regulated Secretory Pathway

ABSTRACT. Tetrahymena thermophila possesses a regulated secretory pathway in which mucin proteins are stored in dense-core granules, called mucocysts. Exocytosis-defective mutants exist that fail to secrete mucin in response to secretagogues. Four of the mutants (SB281, SB283, SB285 and SB715) appear to be blocked at different steps of the regulated secretory pathway. SB281 and SB285 accumulate mucin proteins in heterogeneous cytoplasmic organelles which have not yet been identified; SB283 makes mucocyst-like structures but they contain no immunologically identifiable 80-kDa or 50-kDa mucin proteins; and SB715 has more than normal amounts of immature and undocked mucocysts. The organelles that accumulate in exocytosis-defective mutants could be either normal intermediates in the biosynthetic pathway or aberrant structures that form as a result of the mutations. We have used conjugation rescue to analyze steps in the biogenesis of exocytosis-competent mucocysts and to identify functional intermediates. The cytoplasmic organelles that accumulate in SB281 appear to be unidentified biosynthetic intermediates, and the defect is in a cytosolic protein essential for mucocyst maturation. The organelles which accumulate in the other mutants are likely biosynthetic, but their mutations are in proteins which are labile or not free to diffuse into the mutant conjugant.     

高空气球搭载实验对鸡冠花黄酮类化合物成分的影响

利用高空气球搭载了2个品种鸡冠花（Celosia cristataL.)的种子,进行空间诱变处理,飞行高度为40.112km,飞行时间近4h,回收后播种栽培,采收子一代（SP1）花序,将各组样品花序的乙醇提取物与Mg HCl,Zn HCl,1?Cl3-乙醇液,2%AlCl3-乙醇液,1%NaOH进行显色反应,呈现黄酮类化合物性质特征颜色,又以槲皮素,山柰酚,异鼠李素为对照品,采用HPLC法测定分析了各搭载组花序中黄酮醇的含是,并与地面对照组比较,结果表明,2个品种鸡冠花搭载组花序黄酮醇总量分别为0.859%,0.864%,比对照组分别提高90.04%,142.02%。高空环境诱变处理对鸡冠花花序中黄酮类化合物合成产生了显著效应。     

若干因子对鸡冠花悬浮培养中花色素苷积累的影响

本文研究几种植物生长调节剂和蔗糖浓度对鸡冠花细胞悬浮培养中花色素苷积累的影响。结果表明,细胞分裂素KT使花色素苷积累明显高于6-BA,且KT在2 μmol/L时积累量最高;2,4-D在2 μmol/L时对花色素苷积累效果明显,其它浓度的2,4-D和NAA对花色素苷积累效果不明显。高浓度蔗糖有利于花色素苷积累;MS+2,4-D(2 μmol/L)+KT(2 μmol/L)+蔗糖(292 mmol/L)为鸡冠花悬浮细胞培养生产花色素苷的最佳培养基。研究中还发现,在黑暗条件培养下无花色素苷积累,推断光是诱导花色素苷积累的主要因素。随着继代次数的增加,花色素苷含量明显增高,但到第4代时基本稳定。