电化学发光法检测梅毒螺旋体特异性抗体的应用研究

目的 对罗氏电化学发光免疫法（ECLIA）检测梅毒螺旋体特异性抗体的临床价值进行评估。方法 收集梅毒疑似病例血清标本132份,分别用ECLIA、梅毒螺旋体明胶凝集试验（TPPA）和免疫印迹法（WB）进行检测,以WB为金标准,计算并比较ECLIA和TPPA的灵敏度和特异性,进而比较化学发光免疫法检测低S/CO值和高S/CO值的灵敏度和特异性差异。结果 针对132份血清标本,ECLIA敏感性为100.00%,特异性为83.33%,阳性预测值为96.43%,阴性预测值为100.00%,总符合率为96.97%。TPPA敏感性为93.52%,特异性为87.50%,阳性预测值为97.12%,阴性预测值为75.00%,总符合率为92.42%。ECLIA检测1≤S/CO＜3组与S/CO≥3组的敏感性均为100.00%,特异性分别为86.96%和95.24%,结论 ECLIA检测具有较高的敏感性,适合临床大样本筛查,对S/CO值低的标本应结合TPPA、WB及临床资料确诊。     

乳腺癌的p53免疫组织化学和PCR-SSCP研究

为了明确p53突变与乳腺癌临床特征的关系,研究了50例浸润性乳腺导管癌中p53免疫组织化学检测与临床指标肿瘤大小、淋巴结转移情况及病人年龄的关系,并探讨p53免疫组织化学结果与PCR-SSCP检测结果的关系及意义.发现p53免疫组织化学检测阳性与肿瘤大小及淋巴结转移关系密切(P＜0.05);1例p53免疫组织化学检测阳性病例PCR-SSCP检测为杂合突变,1例p53免疫组织化学检测阴性病例为PCR-SSCP检测p53纯合缺失.我们的结果提示免疫组织化学检测阳性并不一定有p53突变,而阴性则可能有p53基因缺失,临床上结合两种检测可提供更准确的p53状况的参考资料.     

电化学发光法在检测孕产妇乙肝中的应用

背景与目的：探讨电化学发光法（electrochemiluminescence ECL）在检测孕产妇乙肝病毒中的应用价值,从而正确指导乙肝孕产妇产后的喂养方式。方法：用ELISA法和ECL法平行测定孕产妇血清乙肝病毒血清标志物（HBV—M）,并对ELISA法检测表面抗原为阴性而ECL法为低浓度的标本,用荧光定量PCR测定病毒DNA。结果：ECL法表面抗原的检出率（9．66％）明显高于ELISA法（6.54％）,p〈0.05,ELISA法检测为阴性而ECL法为低浓度的标本,病毒DNA均为阳性。结论：ECL法测定HBV—M的敏感性比ELISA法高,可以更灵敏的检出低浓度的表面抗原,从而可以更好的指导孕产妇产后的喂养方式,但HBcAb阳性率过高。     

肿瘤抑制因子p53功能及其抗病毒作用研究进展

肿瘤抑制因子p53 作为基因组的守护者,能通过细胞周期调控和促进细胞凋亡而阻止癌细胞及机体肿瘤的发生,p53还能参与DNA损伤修复、调节机体代谢及调节繁殖生育等功能。除此以外,近年来研究发现,p53能通过促进病毒感染的细胞凋亡而起到抗病毒作用以及p53受IFN的调控和p53作为转录调控因子还能直接转录激活IRF9、IRF5、ISG15和TLR3等抗病毒基因,从而确定了p53在抗病毒反应中起到重要作用。这表明p53可能参与先天性免疫、获得性免疫及炎症反应而起到抗病毒的作用。     

PCR—SSCP检测肺癌细胞p53基因点突变

应用溴化乙锭（ＥＢ）染色的ＰＣＲ－ＳＳＣＰ技术对１０例非小细胞性肺癌组织标本ｐ５３基因外显子５￣８进行分析,其中１例在外显子５￣６;１例在外显子７;２例在外显子８发现异常电泳带。对１例经ＳＳＣＰ检测异常的ｐ５３基因进行核酸序列分析,发现第２８０位密码子ＡＣＡ,其编码的氨基酸由丝氨酸变成半胱氨酸。结果证实：非小细胞性肺癌与ｐ５３基因突变有关;ＥＢ法ＰＣＲ－ＳＳＣＰ技术是一种简便、可靠的点突变检测法。     

电化学发光在基因检测中的应用

电化学发光基因检测是把电化学发光的高灵敏性和传统分子生物学方法的稳定性结合于一体的一种新型的基因检测技术。与传统的基因检测方法相比,它具有无放射性危害、高灵敏度、操作简便等优点。近年被广泛地应用于核酸序列分析,基因突变分析,遗传病、转基因物种、病毒、微生物等的检测。本文概述了电化学发光的基本原理以及传统的基因检测技术,详细地介绍了电化学发光在当前基因检测中的应用现状,并对其前景作了展望。     

光激化学发光法与电化学发光免疫法检测甲胎蛋白的一致性

目的:参照美国国家实验室标准委员会(NCCLS)的EP9-A2文件,对测定血清中甲胎蛋白(AFP)含量的电化学发光免疫法和光激化学发光法进行方法学比对试验,比较二者结果的一致性。方法:收集40例患者血清标本,以罗氏Cobas601电化学发光免疫分析仪为比较仪器(x),博阳LICA光激化学发光免疫分析仪为实验仪器(y),同时检测血清中AFP的含量;分析2种生化仪测定结果之间的相关性和2种方法检测结果的一致性。结果:2种仪器测定的结果相关性良好(r=0.9925),预期偏倚可以接受。结论:在严格按操作规程进行检测的前提下,2种方法测定结果基本一致,其偏差可为临床所接受。当同一实验室同一检验项目存在2种以上检测方法时,应进行方法比对,判断其临床可接受性,以保证检验结果的可比性。     

电化学免疫传感器在传染病快速检测中的应用

传染病的快速检测是传染病预防控制的重要环节,其中现场快速检测对于及时有效控制传染病疫情尤为关键。相比于传统检测方法,电化学免疫传感器具有操作简单、快速、灵敏、准确、设备可小型化等优势,可用于传染病快速检测。简要综述了近年来电化学免疫传感器在传染病快速检测中的应用研究进展,重点阐述了该类传感器在现场检测中的主要贡献和不足之处,以及免疫磁分离技术与电化学传感检测相结合在传染病快速检测方面的优势。     

逆转病毒介导的突变型p53基因增加人肺癌细胞耐药性研究

应用PCR等方法从含有p53基因突变的人肺癌细胞系GL总RNA中扩增并克隆了人突变型p53基因(mt)cDNA.序列分析证实该cDNA含有人p53基因全部编码序列,在codon245出现了G→T突变,导致由甘氨酸变为半胱氨酸.构建了其逆转病毒表达载体(pD53M),并将该载体导入没有p53突变的药物敏感癌细胞系GAO.免疫组织化学证实pD53M转染的GAO细胞有突变型p53蛋白表达,说明重组逆转病毒表达载体pD53M在GAO细胞中可以稳定表达.体内和体外实验表明pD53M转染的GAO细胞对几种抗癌药的耐药性有不同程度的增加,最高增加了4倍.用定量PCR和FCM分析发现转染细胞MDR1基因表达没有增高,Pgp功能没有加强,MRP基因表达轻度增高,Mrp功能稍微加强,这提示突变型p53导致的耐药性可能与MDR1/Pgp无关,而与MRP/Mrp可能有一定关系.     

晚期非小细胞肺癌p53 和ERCC1 表达状态与顺铂为主的 联合方案化疗的近期有效率的相关性研究*

目的:研究晚期非小细胞肺癌不同的p53和ERCC1表达状态与基于顺铂为主的姑息化疗近期有效率的相关性。方法:对经顺铂联合多西他赛或顺铂联合吉西他滨治疗的48例晚期非小细胞肺癌患者进行回顾性分析,利用既往免疫组化资料,观察基于顺铂为主的方案近期有效率(RR)的影响因素及化疗不良反应。结果:全组48例患者均完成至少两周期化疗,并行疗效评价。该组患者化疗的近期有效率为28例(58.3%),RR与不同的转移病灶部位(P=0.042)及病灶数目(P=0.034)有显著差异。该类方案的近期有效率与ERCC1状态(P=0.012)密切相关,而与p53表达状态(P=0.401)无关。毒性反应主要是骨髓抑制、脱发及消化道反应等。结论:晚期非小细胞肺癌ERCC1阴性患者较ERCC1阳性患者运用顺铂为主的联合方案化疗的近期有效率较高。ERCC1可能是顺铂疗效预测的敏感因子。p53的表达状态可能不是该类方案的疗效预测因子。     

应用寡核苷酸微阵列检测肺癌样品中的P53和K-ras基因点突变

对影响寡核苷酸微阵列检测点突变的敏感性和特异性的各种因素,如杂交液,杂交温度,标记引物浓度及其比例等,进行了研究,采用不对称PCR扩增有利于敏感性提高,多重不对称PCR不影响杂交的特异性,且敏感性有所增加,对30例肺癌标本进行寡核苷酸微阵列检测,发现12例标本发生了P53基因来点突变,K-ras突变有5例,与测序结果相比,P53基因突变符合率达到80％,由于检测样本较少且检测位点不完全,因而未得到K－ras和P53基因突变与肿瘤的种类,病期及吸烟之间的明显相关性。     

hNOK抗体的制备及肺癌组织中NOK的表达检测

Novel Oncogene with Kinase-domain (NOK)是一个新的肿瘤相关基因, 其结构上?与受体蛋白相似, 具有一个蛋白激酶结构域。过量表达NOK会导致肿瘤的产生与转移。为了更进一步研究生理状态下NOK的功能, 需要制备NOK特异性的抗体。利用GST融合蛋白制备了人源NOK的多克隆抗体, 并进行了纯化。检测表明所得的抗体具有很高的滴度, 能够特异性检测NOK蛋白的表达。使用该抗体进行了人肺癌组织的免疫组化检测, 发现该抗体能够高效识别组织内源性表达的NOK蛋白, 可为肺癌的诊断提供依据。     

hNOK抗体的制备及肺癌组织中NOK的表达检测

Novel Oncogene with Kinase-domain (NOK)是一个新的肿瘤相关基因, 其结构上?与受体蛋白相似, 具有一个蛋白激酶结构域。过量表达NOK会导致肿瘤的产生与转移。为了更进一步研究生理状态下NOK的功能, 需要制备NOK特异性的抗体。利用GST融合蛋白制备了人源NOK的多克隆抗体, 并进行了纯化。检测表明所得的抗体具有很高的滴度, 能够特异性检测NOK蛋白的表达。使用该抗体进行了人肺癌组织的免疫组化检测, 发现该抗体能够高效识别组织内源性表达的NOK蛋白, 可为肺癌的诊断提供依据。     

大肠癌中p53基因突变的研究

应用聚合酶链反应(PCR)──单链构型多态性(SSCP)结合银染法对14例大肠癌p53基因的第4、第5─6和第7外显子进行了点突变的研究,结果共检测出6例点突变,而且发现各外显子的突变频率存在差异。另外,利用购自ATCC的两个探针 (p53cDNA探针和pYNZ22探针)对大肠癌中p53基因的杂合性失去进行了研究,在14例大肠癌中共检出6例杂合性丢失。将点突变检测结果同杂合性丢失结果进行比较分析, 并着重探讨了大肠癌中p53基因失活导致肿瘤的作用方式。 Abstract:The exons 4-7 of p53 gene were examined in 14 colorectal Cancer patients by using PCR-SSCP-silver staining method.The results showed 6 cases of point mutation and the mutation frequencies of exons were different from each other.p53 cDNA and pYNZ22 VNTR were used as probes to examine LOH(Loss of heterozygosity)of 14 colorectal cancers.6 cases with LOH were found.The results of present research suggest that mutation and LOH of p53 gene are critical events in the progress and development of Cancer.There were different kinds of inactivation model of p53 gene in the process of development of cancer and transformation of cells.     

Antitumor effect of miR-197 targeting in p53 wild-type lung cancer

Lung cancer is the leading cause of tumor-related death. The lack of effective treatments urges the development of new therapeutic approaches able to selectively kill cancer cells. The connection between aberrant microRNA (miRNA – miR) expression and tumor progression suggests a new strategy to fight cancer by interfering with miRNA function. In this regard, LNAs (locked nucleic acids) have proven to be very promising candidates for miRNA neutralization. Here, we employed an LNA-based anti-miR library in a functional screening to identify putative oncogenic miRNAs in non-small-cell lung cancer (NSCLC). By screening NIH-H460 and A549 cells, miR-197 was identified as a new functional oncomiR, whose downregulation induces p53-dependent lung cancer cell apoptosis and impairs the capacity to establish tumor xenografts in immunodeficient mice. We further identified the two BH3-only proteins NOXA and BMF as new miR-197 targets responsible for induction of apoptosis in p53 wild-type cells, delineating miR-197 as a key survival factor in NSCLC. Thus, we propose the inhibition of miR-197 as a novel therapeutic approach against lung cancer.     

ASSP在非小细胞肺癌中的表达及与预后关系

目的:研究ASPP蛋白在非小细胞肺癌中的表达情况,探讨其表达与患者预后之间的关系。方法:选取于我院就诊的86例非小细胞肺癌患者,病理学诊断癌症分型及分期,对所有患者进行随访,并用免疫组化法检测患者组织切片中ASPP2、i ASPP和p53的表达,SPSS软件分析ASPP2、i ASPP表达水平与患者预后的关系。结果:NSCLCⅢ期的患者中ASPP2阳性表达的中位生存期大于阴性患者,i ASPP阴性表达患者的中位生存期大于阳性患者(P0.05);p53野生型Ⅲ期患者ASPP2阳性表达者的中位生存期显著大于阴性表达患者,Ⅰ、Ⅲ期i ASPP阴性表达患者的中位生存期显著大于阳性表达患者义(P0.05)。p53突变型患者Ⅲ期iASPP阴性表达患者的中位生存期显著大于阳性表达患者(P0.05)。ASPP2和i ASPP蛋白的表达水平和治疗方式均为影响患者预后的因素(P0.05)。结论:ASPP2的阳性表达和i ASPP的阴性表达是NSCLC的保护因素,可在一定程度上预测患者的生存期。     

抗人肺癌细胞单克隆抗体的制备及其特性的研究

用人肺鳞癌细胞LTEP-78细胞系免疫Blab/c小鼠获得3株抗人肺癌细胞的单克隆抗体杂交瘤系。其中BLTI-01株经六次克隆化培养,体外传代8个月以上。BLTI-01与白细胞抗原及血型抗原基本上无交叉反应;与骨髓细胞无交叉反应;与癌胚抗原和胎甲球蛋白不相关;与肺鳞癌、肺腺癌细胞系及部分其它肿瘤细胞呈阳性反应。