一种快速观察四膜虫纤毛的方法

器材与药品离心机,三用水箱,天平,染色缸。席夫试剂(schiff reagent),漂白液,乙醇二甲苯,磷酸缓冲液(PH7.2)。亮绿(溶剂是95％的乙醇) 步骤 1.取四膜虫浮液3—5ml,离心5分钟(800—1000转/分),去上清液,留沉淀物0.3—0.5ml。 2.用PH7.2磷酸缓冲液洗涤,离心5分钟(800—1000转/分),去上清液,留沉淀物0.3—0.5ml。 3.涂片。用甲醇固定液固定。 4.水解处理。室温下先在1NHCl中处理1分钟,后移至1NHCl(60℃)中处理7—9分钟(水解     

一种用于染色体观察的改良绒毛细胞直接制备法

为弥补羊水检查时间过晚之不足,1984年 Simoni利用绒毛标本直接制备法观察染色体获 得成功,此后,即日益为人们所注目。我们改良 了绒毛细胞直接制备方法,以胶原酶代替乙酸 处理,对绒毛细胞直接制备法（简称乙酸法）和 改良法（简称胶原酶法）进行了比较。大致过程 如下： 取妊娠6-7周人流绒毛组织50mg左 右,严格挑选后,生理盐水洗净,移人含最终浓 度0.5,ug/ ml秋水仙素的RPMI 1640培养液中 孵育1小时（pH7.2, 370C),然后分成两份。一 份按乙酸处理法进行制片：(1)去除培养液,加 3m11.5外拘椽酸钠溶液低渗15分钟;(2）加人 数滴3:1的甲醇：冰乙酸预固定10分钟;(3）吸 弃固定液,重复固定巧分钟;(4)吸弃固定液, 加入1m160并乙酸水溶液,处理2分钟,即追加 纯甲醇2ml; (5)吸取细胞悬液于离心管内离心 (1500-1800rpm); (6）冰水滴片,风干,Giemsa 染色。另一份按改良的胶原酶法制备染色体,大 致如下：(1)弃培养液加人15ng/ml胶原酶4ml, 孵育15-20分钟（370C); (2）加人4m1生理盐 水,离心（1000rpm),分钟,弃上清液,经0.75% 氯化钾4 ml低渗20分钟（370C),用甲醇冰醋 酸固定液lml预固定后,依上法离心,弃上清 液;(3）甲醇冰醋酸（3:1)重复固定15分钟,混 匀后自然沉降,吸上层细胞悬液离心,如此重复 二次后,再固定15分钟,气干法制片。28例实 验结果见表1,无论是可数分裂相,还是完整分 裂相出现率,胶原酶法均比乙酸法为高,二者间 有显著差异。     

蝗虫性细胞减数分裂制片方法的改良

最近,我室采用分离、滴片方法观察蝗虫性细胞减数分裂,取得良好效果。现介绍如下。 1.取材在麦熟和稻熟季节采集蝗虫。取其精巢固定于卡诺液中0.5—1小时。去固定液,用95％酒精洗3次,移于70％酒精中,置于低温下可长期保存。 2.制片方法 (1)用眼科镊把精巢取出,装入瓶中,加入碎玻璃反复振荡,使组织捣碎。 (2)用吸管吸取捣碎液放入离心管内,以1000转/分的速度离心3—5分钟。去上清液,     

羟基磷灰石柱层析纯化小鼠腹水中抗结肠癌单克隆抗体

 <正> 我们在Stanker工作的基础上研究了抗结肠癌单克隆抗体H b3(IgM)Ga_3(Ig G_2a)的分离纯化,均获得较满意的结果。 材料与方法 HAp层析柱:HAp经0.01mol/L磷酸缓冲液(PB)pH6.8,含0.02％NaN_3浸泡过夜,用自然沉降法装柱,经上述PB液平衡后,即可进行层析。 小鼠腹水予处理:取小鼠腹水数毫升,用水稀释(1:5),在4℃下,经4000r/min离心机离心30分钟,弃去沉淀物。     

应用~3H-胸腺嘧啶核苷测定血淋巴细胞转化的方法

本文介绍了应用微量血液测定DNA合成的方法:0.1毫升肝素抗凝血液灌入3毫升含PHA的Fagle’s生长培养液中,培养54小时后注入~3H-TdR 0.6微居里,再培养16小时,吸弃上清液,沉淀用生理盐水洗涤两次,5％三氯醋酸洗一次。然后沉淀加0.5毫升5％三氯醋酸置90℃水浴15分钟,离心后吸取上清液0.2毫升加到5毫升闪烁液中进行测量。闪烁液配方:PPO 3克,POPOP 0.4萘克、110克、二氧六环1000毫升。10例健康人血平均~3H-TdR掺入率为10.8％。     

猪白细胞干扰素制备与检定方法

<正>Soloviev等人,连续发表了4篇文章,报导有关猪白细胞干扰素的试验结果,现综述如下: 一、猪白细胞干扰素制备方法 1.制备方法 分离猪白细胞:采血后2～4小时内,加2～3倍容积的0.83％氯化铔溶液、摇匀,4℃静置10分钟。取出,离心沉淀1000转/分10分钟。倒掉上清液(血浆和血红素等)。白细胞用199营养液(其中加10％牛     

在维生素A的定性实验中，对氯仿的简化处理

在维生素Ａ的定性实验中,对氯仿的简化处理（河北省保定师专生物系,０７１０５１）王金萍在维生素卜的定性实验中,对氛仿的简化处理维生素Ａ的定性实验是一个简单的试管反应。即取干燥洁净的试管一支,加入两滴鱼肝油,再加０．５毫升级仿和ｌ—２滴醋酸研,摇匀,再加...     

小鼠骨髓细胞的染色体制备

在实验教学中,我们借鉴有关方法,经过多次实践,证明用小鼠骨髓细胞作动物染色体的制备实验,方法简便可靠,结果明显.现介绍如下,供高等院校或中学生物学实验参考. 1.前处理实验用小白鼠(重25克左右),腹腔注射0.1毫升0.1％的秋水仙素溶液. 2.取材注射后2.5—3小时,用乙醚将小鼠麻醉(或直接处死小鼠),立即取出股骨,剔净肌肉. 3.低渗用剪刀将股骨两端剪开,用注射器吸入1毫升0.05M氯化钾低渗液,插入一端,冲洗出骨髓细胞,滴于培养皿中的载玻片上(载玻片置于二根玻棒之上).再加入适量的低渗液,并用滴管展开.盖上培养皿,在37℃下低渗处理20分钟. 4.固定低渗后,往培养皿中缓缓注入甲醇、冰醋酸固定液(3:1),盖上培养皿,固定100分钟.换入无     

超速离心技术

超速离心是生物学研究中的一项重要技术,用于细胞、亚细胞组分和生物大分子(如蛋白质、核酸等)的分离与分析。习惯上把每分钟4,000转的离心机称为低速离心机;每分钟20,000转的离心机称为高速离心     

花背蟾蜍的染色体组型及核仁形成区硝酸银特异性染色

花背蟾蜍隶属于蟾蜍科 (Bufonidae) ,蟾蜍属(Bufo) ,是常见种之一 ,在安徽及以北各省均有分布。本文研究其染色体组型和 Ag- NORs,以期了解该物种的细胞遗传学特征 ,以及对整个蟾蜍属的分类、进化提供一些资料。1　材料和方法花背蟾蜍 (4♀ 2♂ )取自安徽淮北市郊。　　实验时按 1～ 3mg秋水仙素 / kg体重 ,肌肉注射0 .0 1%秋水仙素 ,8～ 12 h后处死动物取大腿骨。用0 .6 5% Na Cl冲洗骨髓细胞于离心管 ,10 0 0 r/ min离心10 min,弃上清液 ,加 8ml 0 .4 % KCl,混匀 ,于室温下低渗 30 min加 8滴固定液 (甲醇∶冰乙醇 =3∶ 1) ,轻轻打匀 ,…     

用减压法固定处理草履虫

在制作草履虫玻片标本时,在常压下对草履虫进行固定处理,虫体容易收缩变形,效果不佳。采用抽真空减压的方法,对草履虫进行固定处理,可避免上述缺点,效果比较好。制作过程简述如下: 1.离心浓缩把含有草履虫的培养液,用2000—3000转离心5—10分钟,制取出浓缩的草履虫液备用。 2.分装处置取浓缩的草履虫液50—100毫升,倒入大培养皿(直径100—150毫米)内,并将皿放到真空干燥器内。另用指管或安瓶装满40％甲醛或     

乌鳢鱼肌肉细胞线粒体DNA的纯化及电镜观察

有关乌鳢鱼(Ophiocephalusargus)线粒体DNA的研究国内尚未见报道。我们用肌肉细胞为材料,对鱼类线粒体DNA进行了研究,现介绍于下。材料与方法一、线粒体的制备(参考曹新文等,1985)取乌鳢鱼肌肉100克,用缓冲液A[0.25M蔗糖—0.15MKCl—10mMTris-HC1(pH7.5)—1mMEDTA]洗涤三次,剪碎后加10倍体积的缓冲液A用组织捣碎机捣碎,每次30秒,共捣六次,用单层纱布过滤。以上操作均在冰浴中进行。滤液于1,000×g离心20分钟(4℃),弃去沉淀,上清液于20,000×g离心20分钟(4℃)。沉淀用20倍体积的缓冲液B(0.25M蔗糖-10mMTris-HCl(pH7.5)-lmMEDTA…     

一种半永久玻片标本的制备方法

这里介绍一种用蔗糖液制备半永久玻片标本的方法。用这种蔗糖液制备半永久玻片标本研究染色体是很方便的和有实际意义的。这种用蔗糖液制备的半永久玻片标本,可以保存较长时间(一年或更长)。蔗糖液的制备方法取40克蔗糖(化学纯)溶解在60毫升水中,并加热至沸,直至溶液总体积减少了1/4时为止。为避免蔗糖液冷却后出现结晶,要向蔗糖液滴入2—3滴香柏油,细心搅匀,然后再加0.2克苯酚结晶,该糖液可保存一个月以上。花药制片方法 1.从经卡诺固定剂(95％酒精:冰醋酸3:1)固定的保存在70％酒精中的花序上取出一些花药,用醋酸地衣红色液(醋酸洋红、醋酸间     

胞间连丝玻片的制备

将柿子或黑枣的种子浸于温水中24小时,剥去种皮,将胚乳切成薄切片并于I—KI溶液(I 1克,KI 1.25克,蒸馏水100毫升)中固定3—5分钟,移入5％H_2SO_4溶液中3—5分钟。将切片置载片中央滴一滴结晶紫染色,3分钟后用50％酒精洗1—2     

两栖动物酒精标本DNA模板的快速提取

本文以中国角蟾属4个种的蝌蚪酒精固定标本为材料,取尾部肌肉组织0．1g,滤纸吸干组织块表面的酒精,在研钵中用剪刀剪碎,液氮研磨成粉(必要时可加少量石英砂),转入1．5ml离心管,加入1．0ml提取缓冲液(0．5％SDS,10mmol/L Tris-HCl,100mmol/L EDTA,pH8.0),37℃温浴h,5000r/min离心10min,取上清转入另一1.5ml离心管,氯仿/异戊醇(24：1)抽提两次,上清液加2倍体积预冷(-20℃)的无水乙醇沉淀DNA,12000r/min离心3min,无菌条件下风干后,50μl TE溶解,4℃保存备用。以通用引物PCR扩增12S rRNA和16S rRNA基因部分片段并测序。本文不采用蛋白酶K提取酒精保存标本的DNA模板,全部流程只需3个小时,可同时提取数十个乃至数百个标本,并且所提取的DNA模板适合短片段PCR扩增。     

单纯疱疹病毒空斑形成影响因素的研究

使用pH 7.0的2％小牛血清Hanks氏液稀释Ⅰ型单纯疱疹病毒(冰盒存放6天内),接种原代人胚肌皮单层细胞瓶0.5ml,37℃静止吸附120分钟,弃去液体,不经洗涤或换塞,再加入2％小牛血清、0.5％水解乳蛋白与1个单位抗血清的维持液,培养4—6天后,分别取1％石碳酸复红与龙胆紫-甲醇进行二次染色,形成的空斑用肉眼清晰可见。同型抗血清可抑制空斑产生,表明本法具有特异性。本工作已用于抗病毒药物的筛选。     

苏芸金杆菌以色列变种灭蚊的有效成份

苏芸金杆菌以色列变种(Bacillus thuringiensis var. israelensis)对双翅目的蚊幼虫具有较高的毒杀力,而对鳞翅目昆虫无效。为探讨其毒杀机理及其与其它苏芸金杆菌的差异,我们做了如下一些试验。一、菌液上清液与沉淀物的毒效比较苏芸金杆菌以色列变种1897菌株(引自中国科学院动物研究所),以含糖肉汤培养基摇瓶培养,将培养24及48小时的菌液,离心(3000转/分)20分钟。分出上清液及沉淀物。上清液用     

草履虫的纤毛染色方法

(一)杀死固定 1.固定液配制酒精95％5毫升,苦味酸(饱和液)15毫升,冰醋酸20毫升,甲醛60毫升,蒸馏水100毫升。将上面四种药物混合后,再加等量的蒸馏水稀释,即成200毫升的固定液。如要少配或多配,可依次按1∶3∶4∶12∶20的比例进行。此固定液可长期保存,效果不变,也适应其他原生动物和动物组织的固定。 2.固定的方法用吸管吸取培养草履虫的烧杯边缘的培养液,可得到高浓度的草履虫,投入离心管中,然后以9∶1的比例加入固定液(即草履虫培养液9份,固定液1     

果蝇唾液腺染色体试材准备及观察方法的改进

果蝇唾液腺观察实验中大量活体试材的准备与学生剖取腺体的操作是该实验的难点,用甲醇(或乙醇):醋酸=3:1的固定液将果蝇幼虫杀死,变活体解剖为固定后解剖,降低了实验操作的难度;将固定的幼虫置30%的甘油中,放入-20℃冰箱保存,有效地解决了大量优质试材的供给问题,提高了实验教学的效果。     

用哈栖木霉(Trichoderma harzianum)的细胞壁分解酶从指状青霉(Penicillium digitatum)的菌丝中制备原生质体

用哈栖木霉ATCC48131的细胞溶壁酶从指状青霉的菌丝体中制备原生质体。将指状青霉ATCC10030于27℃培养在马铃薯右旋糖液体培养基中,静止培养24小时,菌丝用Whatman 1号滤纸过滤收集,然后用0.6％的氯化钠冲洗3次。原生质体是从0.8克分子甘露糖醇溶液(pH5.5～6.0)的菌丝悬液(50～100毫克/毫升)中,用5～7％(W/V)对哈栖木霉中得到的细胞壁溶解酶,在每分钟100转的往复式摇床上,30℃下,摇4小时浸提。采用二相梯度离心,从剩余菌丝体碎片中分离出原生质体。1毫升1M硫酸镁同1毫升粗制原生质悬