血源性乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒和艾滋病病毒核酸筛查系统的 建立与应用

摘要目的：建立同时实现乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)、丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)、艾滋病病毒(human Immunodeficiency Virus,HIV)检测的多重核酸筛查系统。方法：以HBV、HCV、HIV 的保守序列为模板设计特异性引物和探针,通 过核酸自动提取系统结合一步法RT-PCR技术平台,优化相关反应体系和条件,建立多重多色实时荧光PCR检测血源性传播病 毒的核酸筛查系统。将该系统用于101387 例血浆样本的筛查。结果：本研究建立的核酸筛查系统特异性好,HBV灵敏度可以达到 20IU/ml,HCV 灵敏度可以达到100IU/ml,HIV 灵敏度可以达到50IU/mL。结论：本研究建立的核酸筛查系统具有高度自动化、高 灵敏度、低成本等特点,适合我国血站系统推广使用。     

荧光定量PCR检测土拨鼠肝炎病毒核酸方法的建立

目的建立土拨鼠肝炎病毒（woodchuck hepatitis virus,WHV）核酸的荧光定量PCR（Real-time PCR）检测方法,应用于土拨鼠肝炎病毒模型的研究。方法分别根据土拨鼠肝炎病毒核心抗原（WHcAg）和表面抗原（WHsAg）的DNA序列设计13对扩增引物,从中筛选无非特异性扩增及引物二聚体且灵敏度高的引物,用于土拨鼠血清中WHV DNA的Real-time PCR检测。建立感染土拨鼠肝炎病毒的土拨鼠血清中WHV核酸的Real-timePCR检测方法。结果根据WHsAg基因的5＇端设计的一对引物WHVSF1与WHVSR1,检测灵敏度可达1×101拷贝/μL,病毒拷贝数与Real-time PCR Ct值的标准曲线的R2值为0.997,且电泳未见明显非特异性条带及引物二聚体。结论建立了土拨鼠血清中WHV DNA的Real-time PCR检测方法,该方法为进一步研究土拨鼠肝炎病毒模型奠定了基础。     

血源性乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒和艾滋病病毒核酸筛查系统的建立与应用

目的：建立同时实现乙型肝炎病毒（hepatitisBvirus,HBV）、丙型肝炎病毒（hepatitisCvirus,HCV）、艾滋病病毒（humanImmunodeficiencyVirus,HIV）检测的多重核酸筛查系统。方法：以HBV、HCV、HIV的保守序列为模板设计特异性引物和探针,通过核酸自动提取系统结合一步法RT-PCR技术平台,优化相关反应体系和条件,建立多重多色实时荧光PCR检测血源性传播病毒的核酸筛查系统。将该系统用于101387例血浆样本的筛查。结果：本研究建立的核酸筛查系统特异性好,HBV灵敏度可以达到20IU／ml,HCV灵敏度可以达到100IU／ml,HIV灵敏度可以达到50IU／mL。结论：本研究建立的核酸筛查系统具有高度自动化、高灵敏度、低成本等特点,适合我国血站系统推广使用。     

天然来源的乙型和丙型肝炎病毒抑制剂的研究进展

慢性病毒性肝炎是威胁人类健康的主要流行病之一,目前全球约有 4 亿慢性乙型和丙型肝炎患者,现有临床药物仍不能很好地治愈 病毒性肝炎。作为药物发现的重要来源,天然产物提供了许多能强效抑制乙型肝炎病毒 (hepatitis B virus, HBV) 和丙型肝炎病毒（hepatitis C virus, HCV）的抑制剂。综述近 10 年来国内外报道的抗 HBV 和 HCV 的活性中药成分和天然产物的研究进展。     

丙型肝炎病毒多表位DNA疫苗的研究进展

丙型肝炎病毒（hepatitis C virus,HCV）是非甲非乙型肝炎的主要病原,目前还没有有效的预防和治疗手段。多表位DNA疫苗(multi-epitope DNA vaccine, minigenes/epigenes)是指通过筛选与组合优势抗原表位(包括T细胞、B细胞表位)基因,以能产生高效细胞、体液免疫应答进而清除HCV病毒为目的的新型核酸疫苗。其优势在于通过选择最具免疫保护潜力的表位以覆盖尽量多的病毒亚型和诱导全面的机体抗病毒免疫应答,并尽量减少无关、干扰和抑制序列可能产生的负面影响。本文介绍近年来国内外在丙型肝炎多表位DNA疫苗方面的研究进展,并展望了其发展方向。     

面临血液不足的危机 新技术陆续登场

为了应付血液制剂中可能存在的病原体,日本引进了”NAT”技术,这种技术的灵敏度很高,即使几个拷贝的病毒也能够被检测出来,也可以用来进行艾滋病病毒（HIV）、丙型肝炎病毒（HCV）和乙型肝炎病毒（HBV）的检查。由于NAT的威力强大．使得日本近几年来由于输血引起的感染事故大大减少,只发生了十几起。     

江西千烟洲人工针叶林下狗脊蕨群落生物量

 根据野外调查和实验分析研究了江西省千烟洲人工针叶林下狗脊蕨（Woodwardia japonica）群落的生物量、细根生物量、净初级生产力(Net primary productivity, NPP)、 比叶面积（Specific leaf area, SLA） 和叶面积指数（Leaf area index, LAI）等。通过叶片参数和地上生 物量的相关关系建立了狗脊蕨单株地上生物量估算模型,分别 为W1=0.021H^1.545（R²=0.790）和W1=2.518（D²H）^{0 .616}（R²=0.894;H为株高 ,D为地径）。人工针叶林下灌草层地上生物量为367.8 g&;#8226;m^－2（52～932 g&;#8226;m^－2）,凋落物为1 631 g&;#8226;m^－2（672～2 763 g&;#8226;m^－2）,分别占 乔木层地上生物量的4.7%（1.55%～13.2%）和20.7%（7.6%～32.1%）。狗脊蕨群落地上生物量和NPP分别为266.6 g&;#8226;m^－2和88.67 g&;#8226;m^－2&;#8226;a ^-1 ,其中狗脊蕨种群占73.7%;地下生物量为212.6 g&;#8226;m^－2。狗脊蕨的SLA和叶干物质含量（Leaves day mutter content, LDMC）分别为144.0 cm²&;#8226;g^-1和31.99%,二者之间呈显著负相关;最佳叶面积估算模型为S=21.922 6-0.152L²+0.000 9L³（9.0≤L（叶片长度）≤23.5;1.4≤W （ 叶片宽度）≤5.9）。狗脊蕨种群的LAI为1.8。土壤含水量对狗脊蕨生物量有显著影响。群落生物量与土壤有机质和全氮含量正相关     

CRL4在增殖的肝细胞系中上调乙型肝炎病毒抗原的分泌表达

乙型肝炎病毒（hepatitis B virus,HBV）编码的X蛋白（hepatitis B virus X protein,HBx）对HBV感染的起始和维持至关重要。HBx可能作为病毒来源的接头分子,介导Cullin-RING E3泛素连接酶4（cullin-RING ubiquitin E3 ligase 4,CRL4）复合物对染色体外DNA限制因子SMC5/6的降解。最近研究发现CRL4接头分子DNA损伤结合蛋白1（DNA damage-binding protein 1,DDB1）可不依赖与HBx的相互作用而直接上调病毒的表达和复制。本研究基于HBx基因删除（X-null）的HBV重组cccDNA（recombinant covalently closed circular DNA,rcccDNA）模型系统,在多种体外培养肝细胞系中证实上述发现。有意思的是,CRL4刺激rcccDNA^X-null转染细胞抗原分泌表达的效应能被血清饥饿实验抵消。应用尾静脉高压注射小鼠模型,同样发现CRL4并不上调rcccDNA^X-null在非增殖小鼠肝脏细胞中的表达。以上结果提示,细胞增殖特征与CRL4不依赖HBx上调病毒抗原表达的效应密切相关,有助于HBx生物学意义的准确分析和理解。     

RNAi技术靶向HBV相关宿主因子治疗慢性乙肝的研究进展

乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)是一种嗜肝性DNA病毒.HBV慢性感染是导致肝炎、肝硬化以及肝癌的一个重要原因.早期抗HBV研究策略一般是靶向HBV自身进行干预,包括核酸药物、干扰素药物等.然而,由于病毒易突变,且易发生耐药,近年研究者将治疗靶点逐渐转向与HBV入侵、复制及组装等相关的宿主蛋白,这为抗慢性HBV感染治疗带来了新的视野和思路.因此,基于RNAi技术并靶向宿主蛋白抗HBV的策略受到研究者的青睐,并且取得良好的治疗效果.本文将对这一研究领域的最新进展作一综述.